安宫牛黄丸对大鼠自发性脑出血模型血肿周围脑组织氨基酸表达及超微结构的影响研究

目的:自发性脑内出血发病率高,现代医学不论是外科治疗还是内科治疗效果均不理想.由于血肿形成后的原发性组织损害已无法恢复,继发性的脑损害预防才是治疗的关键.近期对继发性脑损害的研究重点集中在:血肿周围脑组织血流及代谢改变及其调控因素,继发性脑水肿的发生机制,早期血肿扩大的原理和预防,铁离子超载理论的临床证实及治疗,兴奋性氨基酸理论等方面,并取得了很大的进展.但关于脑保护的实验室工作和临床实践不多,应用于临床的成熟技术、方法更少.安宫牛黄丸主治"瘟毒热盛,神昏谵语,狂躁不安,痰浊内闭痉厥抽动,不省人事",所以具有清热解毒、豁痰开窍的功效,主治热病,邪入心包、高热惊厥、神昏谵语;安宫牛黄丸针对病人高烧、神志昏迷、烦躁而乱语及惊厥抽搐等症,属中医临床治疗急症之要药.广泛应用于临床治疗脑血管疾病,但机制不详,本文对大鼠脑出血模型氨基酸变化和超微结构的改变加以研究.方法:成年雄性SD大鼠75只,正常对照组(SD)5只,假手术组(NO)10只,模型组(N)20只,全方组 (A)20只,简方组(a)20只;除正常对照组外,试验大鼠均以北京同仁堂制药厂提供的安宫牛黄丸粉剂预处理;安宫牛黄丸分全方和简方两种,简方缺少朱砂和雄黄;灌胃一周,每日一次,最后一次灌胃后两小时造模;造模采用尾动脉切开取血法,用微量注射器在立体定向仪下缓慢(5min)注入右侧内囊(中线旁3mm,前囟前0.5mm,深5mm) 100μl自体非抗凝血,留针10min,制成ICH大鼠模型.造模成功后4h、24h处死取脑,采用不同方法检测血肿边缘脑组织损害性改变.①氨基酸测定:冰盒上操作,取血肿周边1mm脑组织100mg(必须＞80mg,无血,位置一致,快速),电子天平精确称重,分别放入离心管中,标记后迅速置液氮罐中快速冷冻,后置-70℃冰箱保存,成批检测.采用高效液相色谱分析法(high performance liquid chromatograph,HPLC)检测不同实验组动物血肿周边脑组织兴奋性氨基酸( excit atoryamino acids, EAA) 谷氨酸( glutamic acid, Glu) 和天冬氨酸( aspartic acid, Asp)以及抑制性氨基酸甘氨酸(glycine acid, Gly)、λ-氨基丁酸(λ-aminobutyric acid, GABA)、谷氨酰胺(Glutamine,Gln)的变化规律.②电镜观察:取血肿周围脑组织,切分为1mm3置于盛有4%多聚甲醛-2.5%戊二醛固定液中固定2h;PBS液冲洗3次,每次10min,环氧树脂包埋,超薄切片铅铀染色.切片片厚50nm,组织经锇化,梯度酒精脱水,Epon812包埋,LKB超薄切片,经醋酸铀-枸橼酸铅双重染色,EM208s型透射电镜观察照相.观察神经细胞及细胞器形态、血管形态、髓鞘改变等超微结构.按相同放大倍数摄片.结果:氨基酸变化:①与对照组相比,模型组4h及24h标本内兴奋性氨基酸Glu、Asp以及抑制性氨基酸GABA增高有显著性意义,且差异十分显著;抑制性氨基酸Gln在假手术组增高有显著性意义(P＜0.01);Gly变化不明显.②在4h标本中,与模型组相比,全方祖内兴奋性氨基酸Glu、Asp下降有显著性意义(P＜0.01);GABA、Gly变化不明显.简方组兴奋性氨基酸及抑制性氨基酸均变化不显著.③在24h标本中,与模型组相比,全方祖内兴奋性氨基酸Glu、Asp下降有显著性意义,抑制性氨基酸Gln增高有显著性意义(P＜0.01);GABA、Gly变化不明显.简方组仅兴奋性氨基酸Glu下降有显著性意义(P＜0.01).超微结构变化:在双盲状态下,分组观察,半薄切片观察组织病理形态,超薄切片观察细胞器、血脑屏障、神经纤维丝的变化.①模型组造模后4h即已出现较假手术组明显的神经细胞、血管损伤性变化.②假手术组、模型组、简方组造模后4h、24h均出现严重血管损伤,致管腔变形狭窄.③全方组在造模后4h、24h均表现为神经元、胶质细胞核膜完整清晰,无水肿,细胞器结构正常;血管周边轻度水肿,可见部分内皮细胞核增大.④全组标本神经纤维未见明显损伤.结论:①安宫牛黄丸全方可能通过影响兴奋性氨基酸的表达实现脑组织继发性损害的保护作用.②安宫牛黄丸全方干预的大鼠自发性脑出血后脑损害轻微.③安宫牛黄丸简方效果不明显.     

大鼠高血压性脑出血血肿周围组织NF-κB的表达

①目的　观察大鼠高血压性脑出血血肿周围组织在不同时间点核因子 κB(NF κB)的表达情况。②方法　 72只Wistar大鼠随机分为对照组和出血组 ,大鼠高血压性脑出血模型采用双侧肾动脉前支部分热凝 ,立体定位仪下自体血脑内注入法建立。各组在相应时间点用SABC染色法检测血肿周围组织NF κB的表达。③结果大鼠高血压性脑出血后 2h后即开始表达 ,8h达到高峰 ,持续至 5d开始下降 (F =84 .397,q =5 .5 8～ 8.37,P <0 .0 1)。④结论　高血压性脑出血后早期即有NF κB的表达 ,并参与了出血后周围脑组织的继发性损伤过程。     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后血肿周围脑组织含水量的影响

目的研究安宫牛黄丸对大鼠脑出血后脑组织的保护作用。方法将SD大鼠随机分为安宫牛黄丸治疗组(治疗组)、脑出血组(ICH组)、假手术组、正常对照组。每组分为6h、12h、24h、48h、72h等5个时点,每个时点5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察各组的神经功能状态、血肿周围脑组织含水量及形态学的变化。结果治疗组12h~72h各时点神经功能障碍评分均低于ICH组(P<0.05)。治疗组12h~72h各时点脑组织含水量均低于ICH组(P<0.01)。结论安宫牛黄丸能明显降低大鼠脑出血后脑含水量,同时神经功能障碍明显改善,提示安宫牛黄丸对治疗脑出血后脑水肿有一定的作用,其作用机制有待进一步探讨。     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后TNF-α表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（intracerebral hemorrhage,ICH）后肿瘤坏死因子（TNF-α）表达的影响。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,HE染色计数各组48h血肿周围炎性细胞个数,RT-PCR分析各组TNF-αmRNA的表达,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组TNF-α蛋白的表达变化。结果安宫牛黄丸治疗明显减少大鼠实验性脑出血后血肿周围炎性细胞个数,抑制脑出血后TNF-αmRNA,TNF-α蛋白的表达。结论安宫牛黄丸能够有效降低大鼠脑出血后TNF-α的表达,对脑出血后的炎症反应具有抑制作用。     

尼膜同对脑出血大鼠血肿周围核转录因子-κB表达的影响

目的：研究尼膜同对大鼠脑出血后核转录因子．KB（NF-κB）表达的影响。方法：将SD大鼠随机分成正常组、假手术组、脑出血模型组、尼膜同治疗组。采用Ⅶ型胶原酶注入到大鼠右侧苍白球制备脑出血模型，每组分别在术后6、24、48、96h4个时间点收取脑组织标本．免疫组化检测NF-κBP65蛋白表达，同时测量脑组织含水量。结果：与正常组和假手术组比较，大鼠脑出血后脑组织NF-κB P65表达以及脑组织含水量显著增高（P〈0．01）；与脑出血模型组比较，尼膜同治疗组NF-κB P65水平及脑组织含水量均显著降低（6h，P〈0．05；24、48、96h，P〈0．01）。结论：屉莫通可以抑制脑出血后NF-κB表达，这可能是尼膜同减轻脑出血后脑水肿的机制之一。     

心理应激对大鼠牙周炎组织NF-κB表达的影响

目的 探讨心理应激状态下大鼠牙周炎组织中NF-κB表达的变化。方法 40只SD雄性大鼠随机分为对照组(A组)、实验性牙周炎组(B组)、心理应激组(C组)、实验性牙周炎+心理应激组(D组)以及实验性牙周炎+心理应激+氟西汀组(E组),每组8只动物。采用 CUMS 法建立心理应激模型,采用丝线结扎法建立实验性牙周炎模型。实验4周结束后,旷场实验观察大鼠行为学变化,ELASA 法测定大鼠血清中应激激素水平变化,并通过Western blot法检测动物牙龈组织中IκBα、p-IκBα、p65和p-NF-κB p65 的蛋白表达水平。结果 与对照组比较,心理应激可以引起动物皮质醇和肾上腺皮质激素的含量升高(P<0.05)以及旷场中央区停留时间和移动距离的改变(P<0.05)。同时,牙周炎组动物牙龈组织中p-IκBα和p-NF-κB p65的蛋白表达增多(P<0.05)、IκBα的蛋白表达减少(P<0.05),牙周炎合并心理应激后,p-IκBα和p-NF-κB p65的蛋白高表达更加明显(P<0.05)、IκBα蛋白含量则持续减少(P<0.05)。当给予心理应激拮抗后,动物的行为学和血清学变化恢复正常(P>0.05);且与实验性牙周炎+心理应激组动物比较,药物组的p-IκBα和p-NF-κB p65蛋白表达量有所下降(P<0.05),IκBα的表达逐渐升高(P<0.05)。结论 核转录因子-κB(NF-κB)过表达可能参与心理应激加重牙周炎这一过程。     

银杏叶提取物对胶质瘤细胞NF-κB表达和NO生成的调控

目的 研究银杏叶提取物(EGb761)对C6胶质瘤细胞核转录因子-κB(NF-κB)表达和可诱导型一氧化氮合酶(iNOs)、一氧化氮(NO)生成的影响。方法 以脂多糖(LPS)和佛波酯(PMA)诱导体外培养的C6胶质瘤细胞表达可诱导型一氧化氮合酶、产生大量NO，应用激光共聚焦成像系统和NO荧光探针监测细胞内NO浓度变化，逆转录基因扩增技术和蛋白质印迹技术检测EGb761对C6胶质瘤细胞中iNOs基因表达的影响，并探讨这一调控作用的分子机制。结果 EGb761能明显降低C6胶质瘤细胞中iNOs mRNA和蛋白的表达、减少NO的生成，抑制IκB-α的降解和阻止p65／RelA进入细胞核。结论 结果提示EGb761可通过NF-κB信号通路对C6胶质瘤细胞iNOs基因表达和NO的生成进行调控。     

安宫牛黄丸对大鼠脑出血后MMP-9表达的影响

目的探讨安宫牛黄丸对大鼠脑出血（Intracerebral Hemorrhage,ICH）后脑组织基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达的影响。方法将sD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、脑出血组、安宫牛黄丸治疗组,每组5只大鼠。采用自体股动脉血注入尾状核建立大鼠脑出血模型,观察48h时点各组大鼠血脑屏障通透性变化,RT．PCR分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9mRNA表达的影响,WesternBlot分析安宫牛黄丸对脑出血后MMP-9蛋白表达的影响。结果大鼠实验性脑出血后48hMMP-9阳性细胞数及伊文思蓝渗出量增多,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达增加;安宫牛黄丸处理后,MMP-9阳性细胞数减少（P〈0．01）,伊文思蓝渗出量降低（P〈0．01）,MMP-9mRNA及MMP-9蛋白表达下降。结论脑出血后MMP-9表达与血脑屏障通透性密切相关,安宫牛黄丸能够有效抑制大鼠脑出血后MMP-9表达,减轻脑水肿。     

安宫牛黄丸对脑出血大鼠脑组织超微结构的影响

目的：研究安宫牛黄丸对大鼠脑出血模型血肿周边脑组织超微结构的影响。方法：实验大鼠分为正常对照组、假手术组、模型组、全方干预组、简方干预组，采用立体定位技术制作脑出血模型，分别于造模后4h、24h取标本，透射电镜观察血肿周边组织超微结构。结果：模型组造模后4h即已出现明显的神经细胞、血管损伤性变化；假手术组、模型组、简方组造模后4h、24h均出现严重血管损伤；安宫牛黄丸全方干预组在造模后4h、24h均表现为受损细胞、血管少见；全组标本神经纤维出现明显损伤少见。结论：安宫牛黄丸全方干预的大鼠自发性脑出血后脑损害轻微，安宫牛黄丸简方效果不明显。     

三七对酒精性肝病大鼠肝组织NF-κB/IκB表达的影响

目的 观察三七时酒精性大鼠肝组织的防治及时NF-κB/IκB表达的影响.方法 SD雄性大鼠随机分为正常组,模型组、三七高、低剂量组和硫普罗宁组,连续14周建立酒精性肝病模型.在模型制备同时,每天下午分别灌服给药,连续14周.ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF-α).常规HE及Masson染色,光镜观察肝组织的脂肪变、炎症及纤维化程度;免疫组化法检测肝组织中NF-κBp65/IκBα蛋白的表达.结果 酒精性肝病模型组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度计分、血清TNF-α水平明显增高(P＜0.01).三七高、低剂量组,硫普罗宁组大鼠肝组织脂肪变及炎症程度、血清TNF-α水平较模型组明显减轻(P＜0.01,P＜0.05).酒精性肝病模型组大鼠肝组织NF-κBp65和IκBα均较正常组明显升高(P＜0.01);三七高、低剂量组大鼠肝组织NF-κBp65/IκBα表达较模型组明显降低(P＜0.01,P＜0.05).相关分析显示,肝组织NF-κBp65表达与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.63,P＜0.01),与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.43,P＜0.01);肝组织IκBα表达与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.36,P＜0.05),与血清TNF-α水平呈正相关(r=0.44,P＜0.01);血清TNF-α水平与与肝组织炎症程度计分呈正相关(r=0.60,P＜0.01).结论 用白酒-玉米油-吡唑混合液灌服大鼠14周可成功制作ALD模型.三七可明显减轻酒精性肝病大鼠肝组织脂肪变和炎症程度.三七能显著抑制肝组织中NF-κBp65/IκBα的过度表达,降低血清TNF-α水平,这可能是其有效防治酒精性肝病的发生发展的重要机制之一.     

大黄素对角膜炎大鼠角膜组织NF-κB活化表达的影响及意义

目的：观察大黄素对角膜炎大鼠角膜组织核因子-κB （NF-κB ）活化表达的影响及意义。方法制备角膜炎动物模型。模型制备前30 min,分别于治疗组和炎症组大鼠结膜下注射大黄素及溶剂。裂隙灯显微镜观察大鼠眼部变化;Western blotting检测评价角膜组织NF-κB 活化表达;免疫组织化学法检测角膜组织细胞间黏附分子-1（ICAM-1）蛋白的表达。结果成功制备了角膜炎大鼠模型,大黄素可改善角膜炎大鼠的眼部炎症反应,减少角膜组织炎细胞浸润。治疗组κB抑制蛋白α（IκBα）在脂多糖（LPS ）刺激后各时点的表达均高于同时点炎症组表达（P＜0．01）。LPS刺激可促进ICAM-1在角膜组织的阳性表达,该作用可被大黄素部分抑制。结论大黄素可部分抑制角膜炎大鼠角膜组织中NF-κB活化,有效减轻角膜炎症的损伤。     

大鼠脑出血后血肿周围脑水肿及其与NF-κB和IL-6表达的关系

目的探讨大鼠脑出血(ICH)后核因子-κB(NF-κB)和白介素-6(IL-6)动态表达情况与血肿周围脑水肿的相互关系。方法 120只SD大鼠随机分为1个假手术组和5个ICH模型组,每组20只。采用右侧脑纹状体内注射新鲜自体不凝血建立大鼠脑出血模型。干/湿重法测定脑组织含水量(BWC),尼氏染色显微镜下观察脑组织病理学变化,免疫荧光检测NF-κB和IL-6蛋白的表达部位,免疫组织化学方法检测NF-κB和IL-6蛋白的表达变化。结果 ICH模型组神经细胞内尼氏体丢失明显,脑组织血肿周围NF-κB和IL-6在脑出血后6 h开始表达,随时间延长蛋白表达增加,3 d达到高峰。各ICH模型组与假手术组之间有统计学差异(P<0.05);脑出血后NF-κB、IL-6表达量与脑水肿周围含水量呈正相关(P<0.05)。结论脑出血后NF-κB高表达,说明活化的NF-κB可进一步诱导细胞因子IL-6表达,加重炎症反应,参与出血性脑水肿的病理过程。     

安宫牛黄丸对实验性脑出血大鼠血肿周围组织中MMP-9和AQP-4蛋白表达的影响

目的 研究安宫牛黄丸对实验性脑出血大鼠血肿周围组织中基质金属蛋白酶(MMP-9)和水通道蛋白-4( AQP-4)表达的影响.方法 采用大鼠尾状核内注入胶原酶诱发脑出血模型,术后3 h灌胃给予安宫牛黄丸(0.2、0.4g/kg)1次,术后连给3 d,每天给药1次,3 d后采用心脏灌流多聚甲醛固定后取脑,制作石蜡切片,应用...     

环磷酰胺对大鼠脑出血血肿周围组织炎症反应的影响

目的研究环磷酰胺对大鼠脑出血血肿周围组织NF-κB表达和白细胞浸润的影响。方法健康雄性SD大鼠125只,随机分成3组：假手术组（25只）、对照组（50只）、治疗组（50只）,采用Fredrik建立的自体股动脉取血并向大鼠尾壳核注射方法复制脑出血模型。各组按术后6,24,48,72h及5d分为5个时间点,经尾壳核行冠状切片,分别按干湿重法测脑含水量,免疫组织化学法测定NF—κB的表达,HE染色测定血肿周围组织白细胞浸润。结果假手术组各时间点NF-κB表达及白细胞浸润无明显变化。治疗组除6h、24h外,各时间点血肿周围脑组织含水量、白细胞浸润及NF-κB表达均低于对照组（P〈0．05）。NF-κB表达与白细胞浸润呈现同步性,而且NF-κB的表达高峰时间先于血肿周围组织白细胞浸润。结论环磷酰胺具有减低NF-κB活性．抑制脑出血血肿周围组织的炎症反应起到神经僳护作用．     

大鼠脑出血后血肿周围核因子-KB的表达和意义

目的研究大鼠实验性脑出血后血肿周围脑组织核因子-kB（NF-kB）的表达及其在继发性脑损伤中的作用。方法采用自体不凝血注入大鼠尾状核制备脑出血模型，免疫组化染色法检测脑组织NF-kB、细胞间粘附分子-1（ICAM-1）的表达。结果脑出血后6h血肿周围脑组织NF-kB开始表达，48h达高峰，ICAM-1 12h开始表达，72h达高峰；各组与假手术组之间有显著差异（均P〈0．01）；脑出血后NF-kB与ICAM-1呈正相关关系（7=0．868，P〈0．05），NF-kB表达从开始到高峰均早于ICAM-1。结论脑出血后NF-kB表达增加，并通过ICAM-1参与了脑出血继发性脑组织损伤。     

急性肺损伤小鼠NF-κB的表达

目的：研究核转录因子-κB(nuclearflactor-κB，NF-κB)在急性肺损伤的动态改变，以期找到NF-κB在肺损伤中的作用。方法：25只雄性小鼠随机分为5组，正常对照及不同时间点致伤组，致伤组腹腔注射脂多糖形成急性肺损伤模型，采用免疫印迹和免疫组化法检测正常鼠及致伤鼠肺组织中NF-κB的表达。结果：脂多糖注射后1hNF-κB即开始增高，3h达高峰，随后开始下降。结论：NF-κB可能是急性肺损伤发病中的一个关键性因子。     

鼠大脑内出血后脑组织MMP-9、NF-κB表达的实验研究

目的 研究大鼠实验性大脑内出血后脑组织基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及核转录因子-κB(NF-κB)的表达及变化规律.方法 采用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备不同时间段的大脑内出血模型,用免疫组化染色法检测不同出血时间周围脑组织MMP-9及NF-κB的表达.结果 MMP-9的阳性细胞表达数在出血后3h出现第一个表达高峰,之后递减,出血后1d再次升高并于出血后2d达到最高峰,之后又下降.NF-κB在出血后12h上升,2d达高峰,之后下降.MMP-9与NF-κB呈低度相关.结论 MMP-9在大脑内出血后显著表达并与脑水肿的发生发展有关,NF-κB对MMP-9的表达进行调节.     

安宫牛黄丸对重症脑出血的临床疗效观察

目的 分析探究安宫牛黄丸对重症脑出血的临床治疗作用.方法 选择40例重症脑出血患者,随机分为观察组和对照组,各20例.对照组患者给予常规性西医治疗,在对照组患者的基础上,给予观察组患者安宫牛黄丸治疗,1粒/次,2次/d.疗程为6周.观察比较2组患者临床治疗效果.结果 观察组总有效率为85.0%.明显高于对照组的55.0%(P<0.05);并发症发生率为15.0%,明显低于对照组的45.0%(P<0.05).结论 对重症脑出血患者,在常规西医治疗的基础上给予安宫牛黄丸口服,能够有效的提高临床疗效,值得推广应用.     

阻断NF-κB通路对梗阻性黄疸大鼠肝细胞凋亡的影响

目的:探讨梗阻性黄疸时肝组织核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达与细胞凋亡的变化,并观察NF-κB特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯(PDTC)对肝脏损伤的保护作用。方法:将雄性SD大鼠72只随机分成胆总管结扎组(BDL组)、胆总管结扎+PDTC干预组(PDTC组)、假手术组(Sham组)。分别于术后第3天、第7天、第14天处死大鼠,观察肝组织细胞凋亡和NF-κB p65蛋白的表达。结果:BDL组和PDTC组NF-κB p65表达及细胞凋亡数明显增加,但在PDTC组明显低于BDL组。结论:NF-κB的活化可能是梗阻性黄疸时介导肝脏功能损害的重要因素。     

依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织 NF-κB p65 蛋白表达的影响

目的 探讨依达拉奉对脑出血大鼠血肿周围组织NF—κB p65蛋白表达的影响。方法 108只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常组、假手术组、脑出血组和依达拉奉治疗组,其中脑出血组和依达拉奉治疗组又分为3h、6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d8个亚组,每组6只。采用大鼠尾动脉自体不凝血50μL注入尾状核区建立脑出血模型。依达拉奉治疗组于模型制作成功后2h开始腹腔内注射3mg／kg依达拉奉。1次,d。免疫组化法检测NF—κB p65蛋白表达变化。结果 与脑出血组相比,依达拉奉治疗组于出血后6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d血肿周围组织NF—κB p65蛋白表达均减少（P〈0．05或P〈0．01）。结论 依达拉奉对脑出血后血肿周围脑组织损伤有保护作用．可能与其抑制NF—κB p65蛋白表达有关。