姜黄素对β-淀粉样肽（25-35）诱导去血清培养PC12

目的：探讨姜黄素（Cur）对β-淀粉样肽(25-35)（βamyloid peptide-25-35，Aβ25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞周期异常与凋亡的影响。方法：PC12细胞用常用的去血清培养使细胞同步于G0期，用MTT比色法分析细胞存活率，流式细胞仪检测分析细胞周期与凋亡，Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变，RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21基因的变化。结果：用不同终浓度(0，1.25，2.5，5，10，20 μmol&#8226;L-1)Cur预处理去血清培养的PC12细胞1 h，再用Aβ25-35处理24 h，细胞存活率增加；Aβ25-35引起的S期细胞百分率明显减少，凋亡率明显降低(P<0.01)，亚二倍体峰消失；核固缩、碎裂减少； p21 mRNA表达和P21 蛋白表达增加。结论：Cur可以影响Aβ25-35诱导的去血清培养PC12细胞周期分布及减少凋亡，可能与上调p21的表达有关。     

姜黄素影响Aβ_(25-35)诱导PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制

目的探讨姜黄素(curcum in,Cur)对β-淀粉样肽(25-35)[β-amyloidpeptide-(25-35),Aβ25-35]诱导体外血清饥饿培养的PC12细胞周期异常与凋亡保护作用的可能机制。方法5μmol.L-1Cur预处理同步于G0期的PC12细胞,加入终浓度为25μmol.L-1Aβ25-35处理0～20h,用RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、CDK4、E2F1、bax的表达。结果与Aβ25-35诱导组比较,Cur保护组p21mRNA和p21蛋白的表达增加;CDK4、E2F1、baxmRNA和CDK4、Bax蛋白的表达降低。结论Cur可能通过上调p21的表达,下调CDK4、E2F1、bax的表达,对Aβ25-35诱导的PC12细胞周期异常与凋亡起保护作用。     

姜黄素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞p53、p21基因表达的影响

目的：在β-淀粉样肽（25—35）[βamyloid peptide-（25—35），Aβ25—35]诱导去血清培养PC12细胞周期异常模型的基础上．研究姜黄素（Curcumin，Cur）对Ap25-35诱导体外去血清培养的PC12细胞p53、p21基因表达的影响；方法：种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期，每次实验分对照组（0）、诱导组和保护组，通过RT—PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p53、p2l基因表达水平的变化.结果用5μmol／LCur预处理细胞1h，再加入终浓度为25μmol／L Aβ25-35处理0～20h，与Aβ25-35诱导组比较，     

姜黄素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞周期变化与凋亡的影响

目的：探讨姜黄素（Curcumin，Cur）对β-淀粉样肽（25—35）[βamyloid peptide-（25-35），Aβ25-35]诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化与细胞凋亡的影响。方法：种人培养瓶或板的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期，用MTT比色法分析细胞存活率；流式细胞仪检测分析细胞周期的改变与凋亡的时间关系，Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变；DNA电泳观察细胞凋亡时特异性梯状条带（DNA—Ladder）；结果（1）用终浓度分别为0～20μmol／L的姜黄素（Cur）处理去血清培养PC12细胞24h，     

姜黄素影响Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞周期变化与细胞凋亡的可能机制

目的：探讨姜黄素（Curcumin，Cur）对Aβ25—35诱导体外去血清培养PC12细胞周期异常与细胞凋亡的可能影响机制。方法种人培养瓶或板的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期，每次实验分对照组（0）、诱导组和保护组；流式细胞仪检测分析细胞周期的改变与凋亡的时间关系；通过RT-PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测cyclin D1、cdk4、pRb、E2F1、bax等基因表达水平的变化。结果：（1）去血清培养24h．PC12细胞大约90％同步于G0／G1期；（2）25μmoL／L Aβ25-35处理8、16h。     

原花青素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞细胞周期相关基因表达变化的影响

目的探讨原花青素（Proanthocyanidins，PAC）对β-淀粉样肽（25—35）[βamyloid peptide-（25—35），Aβ25-35]诱导体外去血清培养PC12细胞周期相关基因p21、CDK4、磷酸化pRb、E2F1表达异常的影响。方法种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于C0期，分为0对照组、Aβ25-35诱导组、PAC保护组，按实验需要分别在不同时间加入药物并收集细胞，通过RT—PCR和Western blot从mRNA及蛋白水平检测p21、cdk4、pRb、E2F1基因表达水平的变化。     

原花青素对Aβ_(25-35)诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制的研究

目的　探讨原花青素(Procyanidins,PC)对β淀粉样肽25~35(βamyloidpeptide25 -35, Aβ25-35 )诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制。方法　采用MTT比色法分析细胞存活率, Hoechst33258 PI荧光染色法检测凋亡, RT PCR检测P53和bcl 2基因mRNA表达,Westernblot检测P53和Bcl 2蛋白表达。结果　不同剂量PC预处理PC12细胞 1h可剂量依赖性对抗Aβ25-35引起的凋亡,提高细胞的存活率,减少Aβ25-35引起的核固缩,凝聚和碎裂,降低P53mRNA表达以及P53蛋白表达,增加bcl 2mRNA表达以及Bcl 2蛋白表达。结论　PC可剂量依赖性对抗Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用,其机制可能与下调凋亡基因P53和上调抗凋亡基因bcl 2表达有关。     

地塞米松和淀粉样β蛋白片段25-35对PC12细胞损伤和凋亡的影响

目的探讨地塞米松(DEX)和淀粉样β蛋白片段25-35(Aβ25-35)联合作用对PC12细胞损伤和凋亡的影响。方法采用单独或联合应用DEX 0.1～10μmol.L-1和Aβ25-35 1～5μmol.L-1作用PC12细胞24 h,MTT法测定细胞活力;膜联蛋白-Ⅴ,PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡率,PI单染流式细胞仪检测细胞凋亡峰;逆转录-PCR检测胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平。结果 MTT结果显示,与正常对照组相比,DEX 5和10μmol.L-1,Aβ25-35 1,5和10μmol.L-1,DEX 5+Aβ25-35 1,5和10μmol.L-1及DEX 10+Aβ25-35 5,10μmol.L-1组均可明显降低PC12细胞存活率,而DEX联合Aβ25-35能明显减少PC12细胞数(P<0.01)。流式细胞仪结果显示,DEX 5μmol.L-1和Aβ25-35 1μmol.L-1单独作用对PC12细胞凋亡率和亚二倍体凋亡峰有一定的增加作用(P<0.05),两者联合作用能明显增加PC12细胞早期和中晚期凋亡率,增加亚二倍体凋亡峰(P<0.01);RT-PCR结果显示,DEX 5μmol.L-1和Aβ25-35 1μmol.L-1单独作用对PC12细胞胱天蛋白酶3 mRNA的表达水平没有明显影响,它们联合作用能明显增加PC12细胞胱天蛋白酶3mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 DEX和Aβ25-35联合作用能明显增加对PC12细胞的损伤,促进胱天蛋白酶3 mRNA表达,诱导PC12细胞凋亡。     

原花青素对Aβ25-35诱导去血清培养PC12细胞CyclinD1、CDK4、E2F1基因表达的影响

目的：探讨原花青素（Proanthocyanidins,PAC）对β-淀粉样肽（25—35）[βamyloidpeptide-（25．35）,Aβ25-35]诱导体外去血清培养PC12细胞CyclinD1、CDK4和E2F1基因表达的影响。方法：种入培养瓶的PC12细胞贴壁后用常用的去血清培养法使细胞同步于G0期,分为0对照组、Aβ25-35诱导组、PAC保护组,按实验需要分别在不同时间加入药物并收集细胞,通过RT-PCR和Westernblot从mRNA及蛋白水平检测CyclinD1、CDK4和E2F1基因表达水平的变化。结果：本课题组在前面的研究中发现PAC对Aβ25-35诱导体外去血清培养PCl2细胞周期变化有逆转作用,但具体机制尚未清。     

五味子乙素保护神经细胞作用及其可能机制

目的探讨五味子乙素对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导褐家鼠肾上腺嗜铬瘤PC12细胞损伤的保护作用及可能机制。方法 20μmol.L-1Aβ25-35诱导PC12细胞损伤,加入5,10,25μmol.L-1五味子乙素,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测细胞存活率,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR法)检测PC12细胞β淀粉样前体蛋白(APP)基因及空泡分选蛋白35(VPS35)基因在mRNA水平的表达,免疫细胞化学法测定APP及VPS35在蛋白水平的表达。结果 MTT结果显示,5,10,25μmol.L-1五味子乙素组PC12细胞存活率较Aβ25-35组高(P<0.05);RT-PCR、免疫细胞化学染色结果显示,Aβ25-35组较正常对照组APP、VPS35 mRNA和蛋白表达均上调(P<0.05);不同浓度五味子乙素组APP及VPS35 mRNA和蛋白表达较Aβ25-35组减少(P<0.05),VPS35与APP变化趋势一致。结论 5,10,25μmol.L-1五味子乙素可降低Aβ25-35对PC12细胞的损伤,该作用呈浓度依赖性,其机制可能与降低VPS35表达、减少sorLA含量、延长APP运输时间相关。     

染料木素通过JNK调控Fas通路的抗Aβ诱导的PC12细胞凋亡机制研究

目的探讨染料木素(genistein,GEN)通过激活JNK调控Fas通路抑制Aβ(25-35)诱导的PC12细胞损伤凋亡的作用及分子机制。方法建立Aβ(25-35)诱导的PC12细胞模型,MTT法和流式细胞仪法测定细胞活力和凋亡率,荧光定量PCR检测Fas凋亡通路相关基因Fas、Fas L、caspase-3和caspase-8 mRNA相对表达情况,分光光度法检测caspase-3和caspase-8酶活性,Western blot检测JNK和pJNK蛋白表达水平变化。结果 GEN下调Aβ(25-35)诱导引起的Fas、Fas L、caspase-3和caspase-8 mRNA水平的增加,抑制Aβ(25-35)诱导的caspase-3和caspase-8酶活性,且明显降低Aβ(25-35)诱导的JNK磷酸化水平。结论GEN通过降低Aβ(25-35)诱导的JNK磷酸化激活,调控JNK依赖的Fas凋亡通路,从而抑制Aβ(25-35)诱导的PC12细胞凋亡,发挥神经保护作用。     

开心散对Aβ25-35诱导损伤SH-N-K神经细胞的保护作用及机制

目的观察开心散对神经毒性物质β-淀粉样肽(Aβ25-35)诱导损伤的SK-N-SH细胞的保护作用。方法用Aβ25-35处理人神经母细胞瘤细胞(SK-N-SH细胞),模拟阿尔茨海默病(AD)病人脑内神经元病理损伤,并以含开心散(KXS)药物血清拮抗其作用。以MTT法测定细胞存活率,酶反应法检测细胞内超氧化物歧化酶SOD水平变化,流式细胞技术检测细胞凋亡率。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测淀粉样肽蛋白前体(APP)基因、Aβ降解酶NEP基因的表达情况,Westernblots法检测APP蛋白表达。结果试验显示暴露Aβ25-35后培养SK-N-SH细胞存活率明显下降,凋亡细胞比例增加。而含开心散药物血清处理能显著提高Aβ25-35损伤细胞的存活率,减少细胞凋亡率,同时提高细胞内SOD的活力(P<0.01)。RT-PCR结果显示开心散可降低Aβ代谢相关的APP基因的表达并提高NEP基因的表达,APP蛋白表达显著减少。结论AD病理相关的Aβ25-35能造成神经元细胞损伤死亡,开心散对毒性Aβ25-35诱导的神经细胞损伤具有一定保护作用,其作用机制可能与开心散能增加抗氧化酶SOD活力,同时下调内源性APP基因表达,上调NEP基因表达,减少内源Aβ产生,从而抑制细胞死亡有关。     

积雪草苷对Aβ25～35诱导PC12细胞凋亡的影响

目的:探讨积雪草苷对Aβ25～35诱导PC12细胞凋亡的影响。方法:Aβ25～35 20μmol.L-1刺激PC12细胞,同时分别给予积雪草苷160,80,40,20μg.mL-1,CCK-8法检测细胞活力,Annexin-V/FITC双染后流式细胞仪检测细胞凋亡率,荧光显微镜观察细胞形态,Western blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2的表达。结果:与模型组比较,积雪草苷剂量依赖性地提高Aβ25～35诱导的PC12细胞存活率,增加Bcl-2的表达,降低PC12细胞的凋亡率,差异有统计学显著性(P<0.05)。结论:积雪草苷对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡有保护效应,可能与增加Bcl-2表达有关。     

红参水提物对Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用

目的 探讨红参水提物对Aβ25-35诱导人神经瘤母细胞SH-SY5Y细胞凋亡的保护作用.方法 用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,模拟阿尔茨海默病患者脑内神经元的病理损伤模型,以不同浓度的红参水提物进行干预;用倒置显微镜观察其形态学的变化;MTT法测定细胞的存活率;流式细胞技术检测细胞的凋亡率以及线粒体膜电位的变化.结果 50 μmol·L-1Aβ25-35诱导SH-SY5Y细胞72 h后,细胞变圆、聚集,其存活率为39.26%土3.16%、凋亡率为37.30%±0.69%,线粒体红绿荧光强度比值为0.45±0.10;而Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞与不同浓度(1、5、10 mg·ml-1)红参水提物同时孵育后,明显减少了细胞损伤,升高了细胞存活率、降低了凋亡率,并升高了线粒体红绿荧光强度比值.结论 红参水提物对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡有显著的保护作用.     

芍药苷对6羟基多巴胺致PC12细胞损伤的保护作用

目的:探讨芍药苷对6羟基多巴胺(6-OHDA)致大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12)的细胞损伤保护作用及其可能机制.方法:体外培养PC12细胞,用6-OHDA建立细胞损伤模型.MTT和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定存活率;RT-PCR检测Bcl-2、Bax的mRNA表达,Hochest33342/PI双染检测细胞凋亡率.结果:25、50、100 μmol·L-1芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,降低LDH漏出率,增加Bcl-2 mRNA和减少Bax mRNA表达.结论:芍药苷可显著减少6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡,其作用机制可能与调节Bax、Bcl-2表达有关.     

白果内酯对抗淀粉样β-肽25-35所致PC12细胞毒作用(英文)

目的:观察白果内酯对β-淀粉样蛋白片段25-35(Aβ25-35)所致PC12细胞毒性的影响。方法:用噻唑兰(MTF)及乳酸脱氢酶法检测PC12细胞的存活率;硫代巴比妥酸法测定细胞脂质过氧化;并同时检测了细胞内抗氧化酶活性。结果:白果内酯(25-100)μmol·L~(-1)剂量依赖性地抑制Aβ25-35(100 μmol·L~(-1))引起的细胞存活率下降,脂质过氧化及抗氧化酶活性下降。结论:白果内酯具有对抗Aβ25-35引起的PC12细胞毒性的作用。     

MCI-186对β-淀粉样肽诱导SH-SY5Y细胞凋亡及p38MAPK蛋白表达的影响

目的研究依达拉奉(MCI-186)对阿尔茨海默病(AD)细胞损伤的保护作用及其机制。方法将人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞分为五组:空白对照组、溶剂对照组、β淀粉样肽(Aβ)组、Aβ+溶剂对照组和Aβ+药物处理组。用Aβ25-35处理SH-SY5Y细胞,建立AD细胞模型。采用DAPI荧光染色法计数凋亡细胞,Western blot法检测磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达。结果 Aβ25-35引起时间和剂量依赖性的SH-SY5Y细胞凋亡,并使p-p38MAPK表达增加(P<0.05)。MCI-186与p38MAPK抑制剂SB239063均抑制Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡及p-p38MAPK表达(P<0.05)。结论 MCI-186通过抑制p38MAPK磷酸化,对Aβ25-35诱导的SH-SY5Y细胞凋亡起到保护作用。     

阿魏酸钠对抗Aβ25-35诱导的鼠神经元凋亡作用研究

目的 探讨阿魏酸钠对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)通过谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡的影响.方法 培养的皮层神经元分别与谷氨酸(20μmol/L)、Aβ25-35(5μmol/L)、Aβ25-35(5μmol/L)+谷氨酸(20μmol/L)孵育,采用Hoechst 33258荧光染色法分析神经细胞凋亡;然后用谷氨酸( 50μmol/L)诱导神经元凋亡,采用荧光染色法和Westem blot观察阿魏酸钠的保护作用.结果 单独应用Aβ25-35(5μmol/L)和单独加入谷氮酸(20μmol/L)引起的皮层神经元凋亡率与对照组无明显差异;Aβ25-35与皮层神经元共同孵育5天,接着用谷氨酸处理24h,细胞凋亡率从正常的9.2%+1.5%增加到43%±8%:阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞凋亡百分比至21%±5%,并对抗谷氨酸引起的Bcl-2蛋白表达的降低.结论 阿魏酸钠能够减弱Aβ25-35提高谷氨酸毒性诱导的鼠皮层神经元凋亡.     

吡格列酮对Aβ_(25-35)引起的皮层神经元损伤保护作用部分机制的研究

目的研究吡格列酮对抗淀粉样β蛋白片段25-35(Amyloid-β,Aβ25-35)所致培养皮层神经元损伤作用的机制。方法取培养7d大鼠乳鼠大脑皮层神经元,Aβ组加入Aβ25-35(20μmol.L-1)作用24h;吡格列酮组和各种阻断剂组,先加入吡格列酮(0.1、1、10μmol.L-1)或各种阻断剂作用1h,然后加入Aβ25-35(20μmol.L-1)作用24h;正常对照组加入等量培养基。MTT法测定细胞存活率;免疫荧光染色法测定活性的caspase-3细胞内定位;Westernblot检测活性的caspase-3表达水平;Griess法测定培养细胞上清液中一氧化氮(NO)含量。结果神经元经NSE和NF200免疫荧光鉴定,其阳性率可达90%以上。Aβ25-35(20μmol.L-1)可使神经元细胞存活率下降、caspase-3表达明显增加,同时神经元培养液中的NO含量也明显增加。吡格列酮可明显抑制Aβ25-35诱导的神经元细胞存活率下降、抑制caspase-3表达的增加,吡格列酮还可明显抑制Aβ25-35诱导的神经元培养液中NO含量增加,且呈浓度依赖性。GW9662(10μmol.L-1)能明显对抗吡格列酮对Aβ25-35诱导的神经元细胞存活率下降、活性的caspase-3表达增加、NO增加的抑制作用。SP600125(5μmol.L-1)、SB203580(20μmol.L-1)和SMT(1mmol.L-1)可明显对抗Aβ25-35诱导的神经元细胞存活率下降及培养液中NO含量增加。结论吡格列酮能够明显的抑制Aβ25-35引起的皮层神经元损伤作用,这种作用可能与激活PPARγ受体、抑制JNK信号传导通路和p38MAPK信号传导通路有关。     

蛇毒神经生长因子对PC12细胞凋亡的保护作用

目的 建立β-淀粉样蛋白诱导大鼠嗜铬瘤PC12细胞凋亡的体外AD细胞模型,研究蛇毒神经生长因子(NGF)的保护作用.方法 以荧光显微镜观察细胞形态变化,四唑氮蓝(MTT)法,乳酸脱氢酶(LDH)释放法,流式细胞术等检测凝聚态β-淀粉样蛋白毒性片断Aβ25-35诱导的PC12凋亡,同时检测蛇毒NGF的干预作用.结果 MTT法、LDH释放率显示凝聚态Aβ25-35对PC12细胞的毒性作用呈剂量依赖,20μmol·L-1 Aβ25-35作用组细胞LDH释放率随NGF作用的浓度增高而降低;荧光显微镜观察20μmol·L-1 Aβ25-35作用于PC12细胞出现凋亡改变,NGF预处理细胞的形态明显改善;流式细胞仪分析,Aβ25-35作用PC12细胞凋亡率具有剂量依赖关系,100ng*mL-1NGF预处理的细胞凋亡率降低(P＜0.05).结论 凝聚态Aβ25-35对PC12 细胞具有毒性作用;蛇毒NGF有对抗Aβ25-35致PC12细胞凋亡的作用.