中国人端粒逆转录酶(TERT)基因多态与高血压的关联关系

目的高血压等心血管疾病可能与端粒长度和端粒酶活性相关。本研究在中国汉族人群中探索TERT基因启动子区域单核苷酸多态性与高血压的关联关系。方法在1317名高血压患者和1269名经地区、性别和年龄匹配的健康对照样本中对TERT基因启动子区2个多态位点rs2736109和rs2735940采用PCR-RFLP方法进行基因型鉴定。结果 rs2736109和rs2735940的基因型分布在高血压病例和对照中差异均无显著性(rs2736109:P=0.794;rs2735940:P=0.390)。单体型分析显示在调整其他环境因素后单体型AC携带者发生高血压的危险性比GC携带者显著降低(OR=0.79,95%CI0.78-0.80,P<0.0001)。结论本研究结果提示TERT基因启动子区rs2736109和rs2735940多态位点构成的AC单体型的携带者患高血压的风险相对较低,不易患高血压。该研究结果还需在前瞻性队列研究中证实。     

人端粒酶逆转录酶基因5＇调控区单核苷酸多态性与肺癌易感性的相关性研究

目的 探讨人端粒酶逆转录酶（hTERT）基因5＇调控区单核苷酸多态性（SNP）与肺癌发生易感性的关系.方法 选取2011年1月至2012年12月兰州大学第二医院病理组织学确诊的新发肺癌患者154例,男116例,女38例;平均年龄（57.3±11.6）岁;其中腺癌45例（29.2％）,鳞癌55例（35.7％）,小细胞癌54例（35.1％）.选择同期在该院体检中心性别、年龄匹配的健康体检者222名作为对照,男174名,女48名,平均年龄（56.4±8.4）岁.采用ABI Prism SNaPshot方法,检测hTERT基因8个SNP位点（rs2735846、rs2735948、rs62329683、rs2736106、rs3888705、rs2736108、rs2736109和rs2735940）基因型,对SNP位点进行Hardy-Weiberg平衡检验,并计算各SNP位点等位基因频率及OR值.结果 除rs2736106外,7个hTERT基因5＇SNP位点的基因型分布均符合Hardy-Weiberg平衡.其中rs2735846位点CG＋CC基因型与GG基因型（即显性遗传模式）在病例组和对照组中具有显著的统计学差异（P ＜0.05）.结论 hTERT基因rs2735846多态性与肺癌易感性有显著相关性,其等位基因C是肺癌的易感基因.     

载脂蛋白CⅡ基因启动子区-190T→A突变对其转录的影响

为探讨载脂蛋白CⅡ基因启动子区-190bp处的碱基突变(T→A)对载脂蛋白CⅡ基因转录的影响，及其与血浆载脂蛋白CⅡ浓度降低的关系。通过定点诱变技术构建带有一190bp处T→A突变的载脂蛋白CⅡ启动子的荧光素酶表达载体pGL3应用脂质体介导的基因转染技术，将带有正常的载脂蛋白CⅡ启动子的表达质粒和构建的突变质粒分别与内参照质粒pRL-TK共转染HepG2细胞，瞬时表达；利用双荧光素酶测试系统检测荧光素酶活性。结果发现，带有启动子区-190T→A突变的载脂蛋白CⅡ启动子的荧光素酶表达活性比正常的载脂蛋白CⅡ启动子的表达活性低18．56％。结果提示，载脂蛋白CⅡ基因启动子区-190bp处的碱基由T突变为A降低了载脂蛋白CⅡ启动子的转录活性。     

乙型肝炎病毒基因组C区启动子肝富集转录因子结合位点突变对HBx增强乙型肝炎病毒复制的影响

目的:构建乙型肝炎病毒（HBV）C启动子近端肝富集转录因子结合位点突变的重组HBV复制型质粒,以期阐明其在HBx增强HBV复制中的作用。方法:利用定点突变技术在野生型HBV复制型质粒和HBx表达缺失的HBV复制型质粒基础上构建HBV C启动子近端肝富集转录因子结合位点突变的重组质粒。随后在HBV肝癌细胞复制模型和小鼠复...     

PDZK1基因启动子区rs12129861位点基因多态性与新疆汉族男性人群痛风发病的关系

目的 了解PDZ蛋白激酶1(PDZK1)基因启动子区rs12129861(A/G)位点的基因型和基因频率与新疆地区汉族男性人群痛风发病的关系。方法 收集汉族男性痛风患者(痛风组)和同时期体检健康者(对照组)的血样，采用多重荧光PCR技术检测PDZK1基因启动子区rs12129861(A/G)位点的基因型。比较两组rs12129861(A/G)位点的基因型分布及基因频率以及不同rs12129861(A/G)位点的基因型人群血清尿酸浓度。选择KpnI、XhoI双酶切位点，构建含rs12129861(A/G)位点的pGL3-promotor荧光素酶表达载体，采用双荧光素酶报告基因实验证实启动子区rs12129861(A/G)位点是否影响荧光素酶基因的表达。结果 PDZK1基因启动子区rs12129861(A/G)位点基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡性检验(P>0.05)，该位点稳定遗传具有群体代表性。痛风组和对照组PDZK1基因启动子区rs12129861(A/G)位点AA、GA、GG基因型分布频率差异有统计学意义(χ²=14.633,P<0....     

特发性矮小症患者SHOX基因启动子突变的功能分析

目的 研究矮身材同源盒基因(SHOX)启动子-372G→A突变对其转录活性的影响及机制.方法 构建含SHOX基因启动子野生型-372G和-372A纯合突变的荧光素酶报告基因载体,在鸡的软骨细胞中检测其转录活性;PCR扩增产生-372G及-372A转录活性的双链DNA探针,凝胶电泳迁移率(EMSA)榆测结合在-400/-290片段的转录因子.结果 报告基因结果 显示SHOX基因启动子-372A转录活性高于-372G 30%(P相似文献   

载脂蛋白M基因启动子区域－778C→T置换对其表达的影响

目的构建含载脂蛋白M(ApoM)基因启动子区的荧光素酶报告基因的真核表达载体,探讨ApoM基因启动子区域-778C→T置换对ApoM表达的影响。方法采用PCR法扩增人染色体中含ApoM基因-1316 bp至+73 bp的DNA片段,筛选出含ApoM-778TT基因型(-778 bp无变异)及ApoM-778CT/CC基因型(-778bp变异)的DNA片段,构建含以上两个基因片段的PGL3重组载体。并采用阳离子脂质体转染法将携带萤火虫荧光素酶报告基因的重组质粒转染HepG2细胞,经48 h培养,检测荧光素酶的活性,以反映ApoM的表达水平。结果荧光素酶报告基因活性显示,ApoM-778C基因型携带者引起荧光素酶相对活性明显低于ApoM-778T基因型者。结论 ApoM基因启动子-778C→T对ApoM转录活性起抑制作用,它可能是影响ApoM基因表达的重要因素。     

c-myc 调节人端粒酶逆转录酶启动子活性的体外研究

目的研究c-myc对人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子的调节作用.方法采用Lipofect脂质体转染法将DNA质粒分别转染至肿瘤细胞、猴肾COS-7细胞和NIH3T3细胞,孵育48 h后,分别检测其报告基因萤虫素酶活性.结果载有hTERT 800 bp启动子的质粒TERTLuc(800)在肿瘤细胞HepG2中活性显著增强,比对照质粒pXP高11.7倍,而在正常细胞3T3中未见表达.外源性转录因子c-myc可显著上调hTERT启动子的表达,其激活作用与剂量呈正相关.人工突变c-myc结合位点明显降低hTERT启动子的活性,下调作用达46%;外源性c-myc对其结合位点突变的hTERT启动子无明显上调作用.结论 c-myc可直接激活hTERT启动子的表达,是调节端粒酶活性的重要转录因子.     

色素上皮衍生因子启动子区基因多态性与糖尿病微血管病变的关系

目的观察色素上皮衍生因子（PEDF）启动子区单核苷酸多态性（SNP）与糖尿病微血管病变的关系。方法将271例T2DM患者分为无糖尿病微血管病变组105例,合并糖尿病微血管并发症组166例,分析PEDF基因启动子区rs12150053T／C及rs12948385G／A的基因型和等位基因频率。结果两个SNPs位点等位基因频率均有统计学差异（P〈0．05）,rs12948385位点基因型频率也有统计学差异（P〈0．05）。结论PEDF启动子区多态性位点可能是我国北方汉族人群糖尿病微血管病变发病的危险因素之一。     

丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A上调硫氧还蛋白还原酶1基因表达的研究

目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白NS5A对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用.方法以我室构建的丙型肝炎病毒非结构蛋白NS5A反式调节基因的cDNA文库抑制性消减杂交(SSH)筛选结果及基因表达谱芯片结果为基础,利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)扩增TXNRD1p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与pcDNA3.1(-)-NS5A共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果pCAT3-TXNRD1p和pcDNA3.1(-)-NS5A瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的9.6倍,pCAT3-TXNRD1p的2.1倍.本实验进一步验证了我室利用SSH技术及基因表达谱技术发现的HCV NS5A蛋白反式激活TXNRD1基因转录作用的结果.结论我室克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HCV的NS5A蛋白具有对TXNRD1基因启动子的反式激活作用.     

乙型肝炎病毒X蛋白上调硫氧还蛋白还原酶1基因表达的研究

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白(HBxAg)对硫氧还蛋白还原酶1(TXNRD1)启动子转录的激活作用.方法利用生物信息学技术确定TXNRD1的启动子区域(TXNRD1p),聚合酶链反应(PCR)技术扩增TXNRD1p,克隆至真核报告载体pCAT3-Basic中,构建pCAT3-TXNRD1p报告载体;以该质粒转染肝癌细胞系HepG2,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测报告基因氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性;并与HBxAg真核表达载体pcDNA3.1(-)-X共转染HepG2细胞系,用ELISA法检测CAT的表达活性.结果结果表明,pCAT3-TXNRD1p和pcDNA3.1(-)-X瞬时转染的HepG2细胞的CAT表达活性是pCAT3-Basic空载体的19.3倍,pCAT3-TXNRD1p的3.9倍.结论克隆的TXNRD1启动子有顺式激活下游基因的活性;HBxAg具有对TXNRDl的反式激活作用.     

CpG island methylation of the hTERT promoter is associated with lower telomerase activity in B-cell lymphocytic leukemia

OBJECTIVE: Expression of the catalytic subunit of the telomerase enzyme hTERT is essential for prolonging the replicative lifespan and is the rate-limiting step in cellular immortalization and carcinogenesis. Because hTERT expression is positively correlated with telomerase activity, its regulation is suggested as the major determinant of enzymatic activity. The hTERT promoter region contains two CpG islands, which are known to be target sites for de novo DNA methylation. To elucidate the impact of this epigenetic mechanism on telomerase activity, we analyzed the degree of hTERT promoter methylation in 30 patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia. MATERIALS AND METHODS: hTERT promoter methylation was assessed using a methylation-specific competitive polymerase chain reaction assay. The assay is based on digestion of genomic DNA with a methylation-sensitive restriction enzyme before amplification with an internal standard. RESULTS: Patients exhibiting high telomerase activity showed significantly less methylation of the hTERT promoter core domain than patients with low enzyme activity. In addition, telomerase activity was significantly associated with telomere length and overall survival. CONCLUSIONS: Our data show that the degree of CpG island methylation of the hTERT promoter exhibits an impact on telomerase activity in a subgroup of patients with B-cell chronic lymphocytic leukemia and therefore is assumed to play a role in regulating hTERT gene expression in these patients.