不同浓度醋或酱油对旋毛虫肌幼虫感染力和生殖力的影响

目的 通过比较经不同浓度食用醋或食用酱油分别浸泡不同时间的肉块,其所含旋毛虫肌幼虫对小鼠的感染力和生殖力的影响.方法 84只昆明小鼠分为21组,分别喂食经不同浓度的食用醋(总酸浓度分别为3.5 g/100 ml、4.5 g/100 ml、6 g/100 ml)或食用酱油(氨基酸态氮浓度分别为0.4g/100 ml、0....     

成囊前旋毛虫幼虫对宿主的感染力与强度

为了研究旋毛虫幼虫成囊前的感染能力及其感染强度,取成囊前不同日龄的幼虫感染小白鼠,经35d剖杀观察,显示发育至10d龄及其以前的幼虫无感染力;11d龄及其以后的幼虫具有感染力,且随着时间延长感染力也愈强,至囊包形成时最强。     

人工消化法检验旋毛虫效果及其对肌幼虫的影响

目的观察人工消化法检验旋毛虫的效果及对肌幼虫活性、感染性的影响。方法将小鼠感染100条肌幼虫后30 d剖杀,分别应用3组消化法检验,即：消化2 h组（磁力搅拌法）、消化12 h组、消化20 h组,每组取肉样10份,每份含300个囊包,消化后分别计数每份肉样的幼虫数;同时对幼虫活性进行观察。40只昆明小鼠随机分为对照组和3个消化组（消化2、12、20 h组）,共4组,每组10只。对照组：每鼠感染100个囊包;消化组：将3组方法收集的幼虫分别感染小鼠,每鼠经口感染100条幼虫。感染后30 d剖杀,取膈肌压片镜检,并用磁力搅拌法收集幼虫、计数。结果消化2、12、20 h组的幼虫检出率分别为78.47%、76.73%、68.63%,死亡率分别为0.59%、4.60%、7.43%。3组收集的幼虫分别感染小鼠,30 d后剖杀,与对照组相比,消化2、12、20 h组的减虫率分别为60.56%、61.94%、73.07%。结论磁力搅拌法（消化2 h）在幼虫检出率、幼虫活性、幼虫感染性等方面均优于消化12、20 h实验组,为进行旋毛虫检验和动物实验,优先选择的方法。     

旋毛虫肌幼虫冰冻切片保存不同时间后抗原性的观察

目的观察旋毛虫肌幼虫冰冻切片保存不同时间后的抗原性方法对-20℃保存5年、8 年及12年的旋毛虫肌幼虫冰冻切片抗原应用间接荧光抗体试验(IFAT)对旋毛虫病(37例)、囊虫病(12例)、包虫病(10例)、肺吸虫病(16例)患者及健康人(15例)血清进行检测。结果用保存不同时间的抗原片37例旋毛虫病患者血清全部呈阳性反应,各批抗原片的荧光亮度亦无明显区别;囊虫病、包虫病及健康人血清均为阴性反应;16例肺吸虫病患者血清中有2例出现假阳性反应。结论旋毛虫肌幼虫冰冻切片在-20℃可保存12年而不丧失其抗原性。     

旋毛虫肌幼虫体外生存状况实验研究

目的观察旋毛虫肌幼虫在干燥和生理盐水环境中的生存状况。方法90只昆明小鼠被随机分为正常对照组、生理盐水组和干燥组,生理盐水组和干燥组分别再分为4组,共9组,每组10只。正常对照组每鼠经口感染200条收集的肌幼虫。生理盐水组分为4组：①肌幼虫0℃放置10 d,②肌幼虫20℃放置10 d,③肌幼虫0℃放置20 d,④肌幼虫20℃放置20 d;干燥组分组与生理盐水组相同。然后将8组小鼠每鼠经口感染200条处理的肌幼虫。感染后30 d处死小鼠,取膈肌压片镜检,并将全部肌肉人工消化后计数幼虫数。结果在生理盐水和干燥环境中放置10 d的肌幼虫分别感染小鼠后,压片法和人工消化法镜检,感染小鼠的幼虫检出率均为100%;在生理盐水和干燥环境中放置20 d的肌幼虫分别感染小鼠后,两种方法镜检,感染小鼠均未检出幼虫。结论在生理盐水和干燥环境中,肌幼虫能生存较长时间,但不超过20 d。     

旋毛虫与伪旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE和双向电泳分析

目的鉴定旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)与伪旋毛虫(T.pseudospiralis,T4)肌幼虫的差异蛋白。方法应用SDS-PAGE和双向电泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)对T1、T4肌幼虫的可溶性抗原与培养24h的ES抗原的蛋白组分进行分析。结果SDS-PAGE显示,T1肌幼虫可溶性抗原有22条蛋白带(221.62kDa～14.88kDa),其中6条为T1特异性蛋白带(59.72、44.37、23.66、22.36、18.26、16.34kDa);T4可溶性抗原蛋白有18条带(185.28kDa～14.27kDa),其中4条为T4特异性蛋白带(132.60、119.30、35.26、31.02kDa)。T1的ES抗原有10条蛋白带(113.21kDa～14.37kDa),T4的ES抗原有9条蛋白带(104.71kDa～14.51kDa),T1、T4肌幼虫ES抗原的蛋白带均不相同。2-DE显示,T1可溶性抗原有193±12个蛋白点,分子量主要为11kDa～22kDa、25kDa～64kDa及100kDa～144kDa,所对应的等电点(pI)分别为4.7～8.2、4.5～6.5及5～7;T4可溶性抗原有175±9个蛋白点,分子量主要为12kDa～21kDa及25kDa～90kDa,所对应的pI分别为4～9.5与4.5～9.6。T1的ES抗原具有82±6个蛋白点,分子量主要为13kDa～16kDa、18kDa～22kDa及40kDa～55kDa,所对应的pI分别为4～7、3.8～6.2及5～9;T4的ES抗原具有69±5个蛋白点,分子量主要为10kDa～15kDa、17kDa～25kDa及29kDa～55kDa,所对应的pI分别为4.7～6.5、4.6～6及5～7。结论旋毛虫肌幼虫可溶性抗原及ES抗原的蛋白组分与伪旋毛虫的明显不同。     

食醋、酱油和乙醇对旋毛虫肌幼虫活力影响

目的观察食醋、酱油及乙醇两两混合溶液1∶1(v/v)对旋毛虫肌幼虫活力的影响。方法将200条旋毛虫肌幼虫分别置于食醋(总酸浓度4.5%)和酱油(含19.3%NaCl)、酱油和乙醇(体积分数为40%)、醋和乙醇混合溶液及生理盐水中处理不同时间,观察其活力。结果肌幼虫经醋和乙醇的混合溶液处理30、60、90、120、150和180 min的死亡率分别为7.4%、12.5%、18.6%、40.3%、72.6%和100%;乙醇和酱油处理组及醋和酱油处理组肌幼虫全部死亡所需的时间分别为24 h和72 h。结论乙醇和醋混合液对旋毛虫肌幼虫的杀伤作用较强,乙醇和酱油混合液杀伤作用次之,醋和酱油混合液的杀伤作用较弱。     

旋毛虫肌幼虫囊包标本的复染制作方法

本研究采用单染和复染两种方法对旋毛虫肌幼虫囊包标本进行染色。单染方法:制片经甲醛、乙醇和冰醋酸溶液固定,用乙醇硼砂卡红染色液(4%硼砂水溶液100 ml,卡红1 g,70%乙醇100 ml)染色。复染方法:制片经甲醛、乙醇和冰醋酸溶液固定,用乙醇硼砂卡红染色液和固绿染色液(固绿0.1 g,95%乙醇100 ml)染色。结果显示,单染标本,囊包与周围肌细胞着色无明显差别,结构不清晰,不易观察,囊内幼虫可辨认。复染标本,囊包结构清晰;囊内幼虫、囊包和肌细胞呈不同的颜色,囊包梭形显著,囊内幼虫特征典型。与单染标本相比,复染标本着色适度,染色效果好,易于观察。     

食用醋或酱油对旋毛虫肌幼虫感染性和生殖力的影响

目的观察食用醋或酱油对旋毛虫肌幼虫感染性和生殖力的影响。方法140只雄性昆明小鼠随机均分为14组,分别喂饲经食用醋(总酸浓度4.5%,pH3.05)、食用酱油(含19.3%NaCl)和生理盐水浸泡不同时间的含有300条旋毛虫肌幼虫的小鼠肌肉(重约0.02g),于喂饲后第7天和第42天每组各剖杀5只小鼠,分别观察肠道成虫、肌幼虫的数量和生殖力指数(RCI)。结果小鼠喂饲经食用醋处理3、6、12和24h的旋毛虫肌幼虫后,其肠道成虫数分别为77、41、0和0条,RCI分别为52.48、18.45、0和0,均显著低于生理盐水对照组肠道成虫数(分别为121、121、116和101条)和RCI(分别为159.10、124.56、73.63和42.17)(P0.05)。小鼠喂饲经食用酱油处理12、24、36和48h的旋毛虫肌幼虫后,肠道成虫数(分别为79、39、3和0条)和RCI(分别为48.75、20.80、1.87和0)亦均明显低于对照组(116、101、95和89条,73.63、42.17、21.53和4.13)(P0.05)。感染小鼠的肠道成虫数和RCI均随醋或酱油处理时间的延长而降低(P0.05)。结论含旋毛虫肌幼虫的肌肉经食用醋或酱油处理后,肌幼虫的感染力和生殖力均明显下降。     

乙醇对旋毛虫幼虫活力及感染性的影响

目的观察不同体积分数的乙醇溶液对旋毛虫幼虫活力及感染性的影响。方法在体外模拟胃内环境条件下,将100条旋毛虫用不同体积分数的乙醇溶液处理,美蓝-伊红-硼砂（M.E.B）染液鉴定幼虫的活力。64只昆明小鼠随机分为8组（每组8只）,6组小鼠分别经口接种或喂饲500条用不同体积分数的乙醇溶液处理不同时间后的幼虫或含500条幼虫的肌肉,另2组分别为生理盐水处理幼虫与含幼虫肌肉的对照组,感染后7 d与40 d每组各剖杀4只小鼠,分别观察肠道雌虫数与肌幼虫数。结果肌幼虫用体积分数为0.20和0.25的乙醇溶液处理240 min,死亡率分别为0和1.4%;在体积分数为0.30、0.35、0.40、0.45、0.50、0.55和0.60的乙醇溶液处理组幼虫全部死亡所需时间分别为180、90、45、30、30、20和20 min;肌幼虫用体积分数为0.65的乙醇溶液处理1和6 min的死亡率分别为44.4%和100%。旋毛虫幼虫经不同体积分数乙醇溶液处理不同时间后的死亡率差异有统计学意义（P〈0.05）。趋势性分析结果表明,在体积分数为0.25～0.60的乙醇处理组,幼虫的死亡率随乙醇体积分数的增加及处理时间的延长而升高（P〈0．05）。不同体积分数的乙醇溶液处理不同时间的幼虫接种小鼠后7d和40d,未发现肠道成虫与肌幼虫。结论乙醇对旋毛虫幼虫有较强的杀伤作用,幼虫用体积分数≥0．35的乙醇溶液处理30min其感染性及生殖力完全丧失。     

Studies on the responsiveness of spleen cells to various polyclonal T and B cell activators during Trichinella spiralis infection

Summary Spleen cells from mice infected with Trichinella spiralis 1, 2, 3 and 8 weeks before the assay, were stimulated with various polyclonal T and B cell activators. It was observed that T. spiralis infection was accompanied by increased spontaneous DNA synthesis which probably reflects lymphocyte activation in vivo . The infection also caused a depressed T cell reactivity during the intestinal stage (1 week after infection) and enhanced DxS response during the late muscular stage (8 weeks after infection). The depression of T cell reactivity seems to reflect qualitative rather than quantitive changes, presumably associated with the regulation of the host's specific immune response to the parasitic antigen. The increased response to DxS may partially be associated with increased macrophage activity. Attempts to evaluate the effects of infection on the reactivity of the cells to PHA and Con A during the migration stage and onwards, to PPD and LPS during the whole observation period and to DxS before the late muscular stage gave conflicting results.     

Effects of immune serum and cells on newborn larvae of Trichinella spiralis

Serum and cells, collected from mice immunized by infection either with newborn larvae (NBL) or per os with infective larvae of Trichinella spiralis, were passively transferred to mice which were challenged with NBL. Serum always gave very strong protection if given before challenge but not if given within 2 h after challenge. Cells from mice immunized with NBL also gave good protection, whereas those from mice immunized per os did not. If NBL were incubated in serum from immunized mice their infectivity was reduced, but if the serum was pre-absorbed with NBL this effect was lost. Such absorbed serum did not confer immunity on recipient mice.     

Comparative dynamics and phenotype of the murine immune response to Trichinella spiralis and Trichinella pseudospiralis

Infection of NIH mice with Trichinella spiralis and Trichinella pseudospiralis results in qualitatively comparable immune responses. Antigen-specific proliferation by mesenteric lymph node cells was transient and temporally associated with intestinal infection, but in contrast was sustained throughout infection by splenocytes. Early cytokine production by mesenteric lymph node cells was dominated by interleukin 10, but also IL-5 and IL-4, with rapid resolution following parasite expulsion from the gut. Splenocytes showed a mixed profile of cytokine production, although again dominated by IL-10 and sustained over 60 days of infection. All antibody classes were evident, with early production of IgA and IgG1, and subsequent secretion of other subclasses including IgG2a. Granulocytic infiltration of the spleen was significantly greater in T. spiralis infection. The concentration of serum corticosterone generally remained within normal boundaries, although was raised by day 60 in T. spiralis-infected mice. We conclude that the systemic suppression of inflammation reported for T. pseudospiralis does not result from selective induction of regulatory cytokines, or a major difference in the immune response to infection with T. spiralis.     

T lymphocyte dependent enteropathy in murine Trichinella spiralis infection

Mice infected with Trichinella spiralis developed significant enteropathy, comprising villus atrophy, crypt hyperplasia, goblet cell hyperplasia and a decrease in intra-epithelial lymphocyte numbers by 10 days post-infection, when most of the parasites had been expelled from the gut. However, worm expulsion was prevented by treatment with cyclosporin A and, despite a continued parasite burden, cyclosporin A treated animals had no villus atrophy or changes in inflammatory cell numbers. These results confirm that the expulsion of T. spiralis from the mouse gut is accompanied by a significant intestinal lesion and that both of these phenomena are T-cell mediated.     

旋毛虫成囊前期幼虫的收集

目的 探索旋毛虫成囊前期幼虫的收集时间与方法.方法 20只成年大鼠,每只大鼠经口感染3000条旋毛虫脱囊幼虫,分别于第14、15、16、17、18、19、20天将大鼠处死,用人工胃蛋白酶消化肌肉收集旋毛虫.结果 感染后第14、15、16大膈肌均未见旋毛虫,第17、18、19、20天膈肌有旋毛虫的侵入并逐渐增多;第14、15、16天均未收集到旋毛虫,第17、18、19、20天平均每只大鼠分别收集5000、8000、10000、30000条旋毛虫.结论 旋毛虫在感染后第20天是旋毛虫成囊前期幼虫收集的最佳时期.人工胃蛋白酶消化肌肉可以收集成囊前期幼虫.     

环孢素A对感染旋毛虫小鼠的免疫调节作用

目的观察环孢素A(CsA)对感染旋毛虫小鼠免疫功能的影响。方法小鼠腹腔注射环孢素A感染旋毛虫后,分别采用ELISA和流式细胞仪检测小鼠不同时期外周血中IL-2含量、CD4+及CD8+T淋巴细胞的百分率。结果(1)单纯感染旋毛虫小鼠感染后1~5周IL-2的含量较正常组明显增加;注射CsA组小鼠感染后1周IL-2的含量较单纯感染组明显降低,感染后2~4周IL-2的含量与单纯感染组相比无明显差异,但仍高于正常组。(2)单纯感染旋毛虫小鼠感染后1~4周,CD4+T淋巴细胞较正常组明显减少,CD8+T淋巴细胞明显增多,CD4+/CD8+比值明显下降;注射CsA组小鼠CD4+T淋巴细胞细胞较单纯感染组明显减少,而CD8+T淋巴细胞无明显变化。结论CsA对感染旋毛虫小鼠具有一定的免疫调节作用。     

树突细胞在旋毛虫感染免疫中作用的研究进展

旋毛虫病是一种常见的人兽共患寄生虫病,也是一种重要的食源性寄生虫病,严重危害着人体的健康.树突状细胞是固有性免疫细胞的一种,也是宿主肠道黏膜免疫系统最重要的一种抗原呈递细胞,与宿主肠道免疫系统关系密切.近年来有关树突状细胞在寄生虫感染与宿主免疫应答中的作用,尤其在旋毛虫感染与免疫的作用,备受人们的关注.该文就目前国内有关旋毛虫感染后,宿主树突状细胞参与肠黏膜的一系列免疫应答反应和发挥作用的研究进展做一综述.     

旋毛虫肌幼虫囊包染色标本制作方法的改进

目的探讨旋毛虫肌幼虫囊包染色标本的制作方法。方法采用醋酸卡红染色法制作旋毛虫肌幼虫囊包标本。结果醋酸卡红染色的标本,囊包轮廓清晰,囊内幼虫透明度及清晰度高,体态自然,立体感较强。结论醋酸卡红染色可用于旋毛虫肌幼虫囊包永久标本的制作。     

抗旋毛虫副肌球蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

目的利用杂交瘤技术制备分泌抗重组旋毛虫副肌球蛋白N端抗原（rTsP3）的单克隆抗体（McAb）并进行鉴定。方法以rTsP3免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水并进行纯化,采用间接ELISA法测定培养细胞上清液及腹水中的McAb滴度、相对亲和力及抗体亚类,Western blot法鉴定抗体对抗原识别的特异性。结果获得了2株稳定分泌抗旋毛虫rTsP3的McAb杂交瘤细胞株,分泌的McAb分别为IgG2b亚类κ型和IgG1亚类κ型,亲和力常数分别为8.98×108mol/L和9.7×10^8mol/L,Western blot显示2株单抗均能识别旋毛虫成虫匀浆蛋白、rTsP3及重组副肌球蛋白（rTsPmy）。结论成功制备了抗旋毛虫rTsP3单克隆抗体,该单抗能识别旋毛虫副肌球蛋白抗原。