人结肠癌细胞系绿色荧光蛋白裸鼠移植瘤模型的建立与观察

目的建立绿色荧光蛋白（GFP）裸鼠结肠癌肿瘤模型,并与普通裸鼠结肠癌肿瘤模型进行比较,观察其在肿瘤形态学、生物学特性及病理学之间的差异。方法将处于对数生长期的KM12SM人结肠癌细胞分别接种于10只GFP裸鼠和10只裸鼠的右侧腋窝皮下,观察成瘤时间,肿瘤体积及病理形态等情况。结果GFP裸鼠平均成瘤时间约为4～5d,裸鼠约为6～8d;接种第20天,裸鼠组测得体积约为（3463．434±341．39）mm^3,GFP裸鼠组肿瘤体积约为（4923．46±521．72）mm^3,存在显著差异。镜下见肿瘤细胞生长活跃,大小较为均匀,部分区域可见腺腔形成。结论经比较研究,GFP裸鼠在结肠癌肿瘤模型的成瘤时间,肿瘤质量等方面较裸鼠具有一定的优势,可为结肠癌转移的机制探讨和诊断治疗研究提供更为理想的动物模型。     

绿色荧光蛋白标记的人卵巢癌裸鼠原位移植模型的建立

目的 应用绿色荧光蛋(GFP)基因标记人卵巢癌细胞株H08910,建立新型裸鼠原位移植瘤模型.方法 将处于对数生长期的人卵巢癌细胞株H08910/GFP 2×106个细胞注射于裸鼠腋下,收集瘤块后接种于左侧卵巢包膜下,共6只.术后利用荧光体视显微镜连续观察肿瘤生长情况,4周后处死荷瘤鼠,观察肿瘤生长及转移情况.结果 种植的原位移植瘤成瘤率100%,移植后2周可观察到左侧肋脊角处绿色荧光团,并逐渐增大,4周后,可见肿瘤侵及腹膜、网膜、肠管、脾脏、肝脏、子宫、盆腔淋巴结,转移率达66.7%.结论 成功建立新型裸鼠原位人卵巢癌的动物模型.     

GFP在绿色荧光裸鼠不同组织中的表达及分析

摘要：目的：研究外源绿色荧光蛋白（Green Fluorescence Protein,简称GFP）基因在BALB/c绿色荧光裸鼠主要器官组织中的表达及其差异。方法：小动物成像系统以及RT-PCR方法检测GFP的组织分布以及荧光表达水平情况。结果：经活体荧光影像系统观察及PCR方法检测发现GFP可以在裸鼠多个器官组织中表达,其中在胰腺、心脏、全脑、皮肤、睾丸中表达量较高。结论：外源绿色荧光蛋白可以在模型动物体内成功表达且稳定遗传,其中在胰腺组织中高表达。     

人结肠腺癌细胞HCT－8绿色荧光标记肿瘤模型的建立

目的 筛选表达绿色荧光蛋白基因的人的单克隆结肠腺癌细胞系,为体内监测肿瘤的早期生长建立一种新的肿瘤动物模型.方法 以脂质体2000介导chicken β-actin-GF-P-NEO转染人结肠腺癌细胞HCT-8,经梯度浓度G418筛选获得稳定表达绿色荧光蛋白的细胞克隆并扩大培养.BALB/CA-nu裸鼠皮下接种1×106个发光细胞使其成瘤,活体荧光成像系统观察肿瘤的生长情况.结果获得了稳定表达GFP的人结肠腺癌细胞株,将其接种到裸鼠体内可成瘤,利用活体成像系统观察了肿瘤的生长过程.肿瘤的发光随着观察时间的延长而增加.结论 绿色荧光蛋白能够在人结肠腺癌细胞HCT-8中长期稳定表达,用绿色荧光蛋白标记的人结肠腺癌细胞HCT-8建立的裸鼠肿瘤模型为进一步研究结肠肿瘤和相应的药物筛选提供了一种简便、可行的新方法 .     

荧光素酶标记的肺癌细胞系的建立及动物模型验证

目的 建立一株稳定表达萤火虫荧光素酶的人肺癌细胞系并通过裸鼠成瘤模型进行验证.方法 酶切并连接萤火虫荧光素酶基因到真核表达载体pRc/CMV2上构建pRc/CMV2-1uc重组质粒,脂质体2000转染到肺癌细胞株A549,经G418筛选得到抗性克隆,荧光素酶活性检测筛选出荧光素酶活性最高的稳定细胞克隆.小动物活体影像系统检测确定稳定细胞克隆生物发光能力和细胞数量的关系,建立裸鼠皮下成瘤模型并分析移植瘤的发光强度和肿瘤生长的相关性.结果 重组质粒pRc/CMV2-1uc转染A549细胞后,经G418筛选的抗性克隆传代至40代时,确定3株荧光素酶活性较高的阳性克隆,最高的9号克隆,1×105个细胞的RLU值为9.44×105.小动物活体影像系统检测发现阳性克隆的发光强度与细胞数量呈正相关(R2=0.99);9号克隆皮下接种裸鼠形成接种瘤,其发光强度与肿瘤的生长正相关.结论 成功构建了稳定表达萤火虫荧光素酶的A549细胞系,该细胞系可在小鼠活体水平动态监测其发生、发展.     

裸鼠人绿色荧光子宫内膜异位症模型的构建

【目的】 探索建立人子宫内膜异位症荧光体外与在体模型的具体方法｡【方法】 采用增强型绿色荧光蛋白腺病毒(Ad-eGFP)分别转染原代培养人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞(细胞转染注射法,即方法1)和子宫内膜组织块(组织转染注射法,即方法2),比较两种体外转染的差异;然后采用方法1将绿色荧光腺病毒转染后的腺上皮细胞和基质细胞注入裸鼠皮下形成荧光病灶,并且与方法2相比较,观察直至建模后25 d,计算病灶荧光成模率与病灶荧光存在时间,并给予组织鉴定｡【结果】 方法1与2建模后5 d两种方法病灶荧光阳性率分别达88.9%和22.2%, P = 0.015;病灶体外荧光存在时间分别为(12 ± 8) d与(7 ± 4) d｡病理组织学HE染色和免疫荧光共同鉴定显示病灶来源于人子宫内膜｡ 【结论】 应用Ad-eGFP 转染后人子宫内膜腺上皮细胞和基质细胞混悬液注射可成功建立裸鼠皮下人子宫内膜异位症活体荧光观察模型,同时方法成模率高,体外荧光存在时间较长｡     

工程化人胃癌裸鼠原位模型的建立及其活体荧光成像观察

目的建立工程化人胃癌裸鼠原位模型,并利用活体荧光成像技术进行观察。方法以胶原为支架材料,表达绿色荧光的人
胃癌BGC823-EGFP细胞为种子细胞,建立人胃癌体外模型;倒置显微镜观察肿瘤细胞生长状态;通过注射将体外模型移植到裸
鼠体内;活体荧光成像评估胃癌原位模型的建立;解剖观察原位肿瘤的移植成功率,生长及转移情况;冰冻切片及HE染色进行
组织学观察。结果工程化人胃癌体外模型中肿瘤细胞呈立体生长;原位肿瘤成瘤率100%,可见腹腔重要脏器转移;组织学特征
呈典型低分化腺癌;活体荧光观察可见原位肿瘤形成,但效果不理想。结论建立了工程化人胃癌裸鼠原位模型;绿色荧光成像
效果较差,活体荧光成像观察应选用穿透力较强的荧光。
     

小干扰RNA特异性抑制肺肿瘤细胞A549中绿色荧光蛋白基因表达

目的：探讨绿色荧光蛋白(green fluorescence protein，GFP)特异的小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)对肺肿瘤细胞A549中的GFP基因表达的抑制作用，建立以真核表达载体释放生成特异基因siRNA的方法。方法：构建mU6启动子驱动的含有GFP特异siRNA的真核表达质粒，转染A549肺肿瘤细胞，观察共转染时不同剂量siRNA对GFP的抑制效应。结果：针对GFP核酸序列设计的特异性siRNA GFP-siRNA可有效抑制其表达，并当比例为1：1时效果最佳，而空质粒载体及无关RNAi无此效应。结论：以mU6为启动子的含特异RNAi的质粒可作为抑制特异基因表达的一种新的技术手段，并且为研究基因功能的一条有效途径。     

人涎腺癌原位转移裸鼠模型的建立

光学成像技术与基因标记技术结合的非侵入性在体分子荧光成像可以实时监测肿瘤的发生发展过程。本研究利用绿色荧光蛋白（GFP）转染人涎腺癌细胞ACC-M，建立了GFP标记肿瘤原位转移模型，并对模型进行了整体荧光成像的初步研究。实验结果表明光学成像可以从时间和空间上反映肿瘤转移的过程，因而这种模型同在体光学成像的结合为研究肿瘤治疗药物的筛选提供了一种很好的平台。     

绿色荧光转基因大鼠模型的建立

目的随着干细胞研究的推进,大鼠干细胞的研究日趋迫切。本研究旨在为活体荧光影像系统、干细胞归巢、细胞移植体内示踪研究,提供绿色荧光蛋白EGFP转基因大鼠模型。方法通过显微注射方式获得EGFP转基因大鼠,采用活体荧光影像系统、激光共聚焦显微镜,对EGFP转基因大鼠各个组织的荧光表达水平进行比较;采用流式细胞术检测转基因大鼠血液和骨髓细胞、骨髓干细胞的荧光标记率,筛选骨髓干细胞高效标记绿色荧光的转基因大鼠。结果建立了心脏、肝脏、肌肉、肺、胰腺、脑、膀胱、胃、肾脏、肠和脾脏组织中,系统性表达EGFP的SD-TgN(ACT-EGFP-1)ZLFILAS转基因大鼠;流式细胞术检测表明,该品系血液细胞绿色荧光标记率为94.4%,骨髓干细胞绿色荧光标记率为97.8%。结论建立了多组织系统性高表达绿色荧光,骨髓干细胞荧光标记率高达95%以上的转基因大鼠,为影像分析,造血干细胞的归巢等研究提供了大鼠模型。     

制滴菌素A治疗人肺腺癌细胞A549裸鼠移植瘤的实验研究

目的　探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂制滴菌素A (trichostatinA ,TSA)对人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠移植瘤的治疗作用。方法　建立人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型 ,瘤内注射TSA和 0 9%生理盐水 (NS) ,对治疗前后的裸鼠进行瘤重量、瘤体积、细胞形态和凋亡的观察。结果　在实验组和对照组之间 ,瘤重量差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;TSA治疗 1周和 2周后瘤体积与治疗前瘤体积相比 ,差异无显著性 (P >0 0 5 )。NS治疗 1周后瘤体积与治疗前相比差异无显著性 ,而治疗 2周后瘤体积与治疗前相比 ,差异有显著性 (P <0 0 5 )。电镜下可见肿瘤细胞的凋亡现象经TSA干预后明显增多。结论　TSA治疗人肺腺癌细胞A5 4 9裸鼠模型有效。     

裸小鼠诸器官及血清蛋白的双向电泳图

用微型双向电泳技术研究裸小鼠血清以及脑、心、肝、肺、脾、肾、胃、肠和肌肉等9种器官的可溶性蛋白组成。结果表明裸小鼠9种器官水溶性蛋白的双向电泳图互不相同。比较裸鼠、人及小白鼠三者血清蛋白的双向电泳图,发现裸小鼠血清中免疫球蛋白的含量较人及小白鼠少,提示裸小鼠不仅有细胞免疫缺陷,而且体液免疫亦可能较低下。     

临床医用1.5T MR成像仪对鼻咽癌裸鼠移植瘤模型磁共振成像图像质量的探讨

目的运用临床医用1.5T MR成像仪对荷人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行磁共振成像,对其质子密度加权(PD)和弥散加权(DWI)磁共振成像图像质量的可行性与准确性探讨。方法选取正常饲养3-4周的免疫功能缺陷型Balb/c,于裸鼠前肢腋部皮下作为致瘤接种点,进行移植荷人鼻咽癌细胞株的培育、成瘤。两周后肿瘤平均体积达700mm3以上,采用临床医用1.5T超导型MR成像仪及其医用的三英寸表面线圈,对荷人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行MR-PD、MR-DWI成像扫描。结果共有60只裸鼠,除去12只用于预实验时采用的是8通道头正交线圈,其图像变形外。其余48只均采用的是临床医用三英寸表面线圈进行MR成像扫描。其中,有8只因麻醉过浅,中途清醒晃动,扫描成像图像受到影响外,其余40只均能获得清晰的肿瘤成像图像,采用临床医用三英寸表面线圈进行MR成像扫描的成像率达40/48(83.3%)。结论采用临床医用1.5T MR成像仪和临床医用三英寸表面线圈,对荷人鼻咽癌裸鼠移植瘤模型进行磁共振成像扫描,同样能获得较高MR-PD、MR-DWI成像图像的质量。     

T和NK细胞联合免疫功能缺陷型——PBI/2 beige裸鼠的培育及其在癌生物学研究中的初步应用

将PBI/1裸鼠(即615/PBI裸鼠)的裸基因(nu)导入NK细胞缺陷的615/PBI beige鼠,育成二联合缺陷型PBI/2 beige裸鼠(即615.B_6/PBI beige裸鼠)。经遗传和表型特征以及免疫特性等方面检查,证实该PBI/2 beige裸鼠具有T和NK细胞联合免疫功能缺陷特性,并已初步应用于肿瘤异质性,肿瘤转移因素,肿瘤转移遗传机理,肿瘤免疫研究以及难移植成功的人类肿瘤异种移植模型的建立.     

实验动物准备对裸鼠移植瘤模型microPET显像的影响

目的 探讨实验动物准备条件对¹⁸F-FDG microPET裸鼠移植瘤模型显像的影响,以选择最佳的实验动物准备条件。方法 36只人表皮样癌细胞A431裸鼠皮下移植瘤模型。随机分为6组（6只/组）;A组：无禁食、室温（20 ～22）℃、无麻醉（注射¹⁸F-FDG后60 min清醒状态）、尾静脉注射¹⁸F-FDG;B组：禁食（6～8）h、加温（30～32）℃、麻醉（吸入2%异氟烷麻醉）、尾静脉注射¹⁸F-FDG;C组：无禁食、加温、麻醉、尾静脉注射¹⁸F-FDG;D组：禁食、室温、麻醉、尾静脉注射¹⁸F-FDG;E组：禁食、加温、无麻醉、尾静脉注射¹⁸F-FDG;F组：禁食、加温、麻醉、腹腔注射¹⁸F-FDG。注射¹⁸F-FDG约1 h后,行microPET显像,测量皮下移植瘤、颈部肌肉、棕色脂肪、脑、肝脏、肾脏、心脏、哈氏腺最大每克组织摄取率（%ID/g_max）。扫描前裸鼠均测血糖。结果 （1）B组、C组、F组裸鼠的血糖水平与肿瘤摄取之间均呈直线负相关。（2）棕色脂肪：A组摄取最高（8.03±1.29）,B组摄取降低71.98%（P=0.000）。颈部肌肉：A组摄取最高（16.07±5.20）,B组摄取降低最多达81.84%（P=0.000）。各组脑、心脏、肝脏、肾脏、哈氏腺摄取差异无统计学意义。（3）A组皮下移植瘤/组织或器官的摄取率最低。B组移植瘤/颈部肌肉,移植瘤/肝脏,移植瘤/棕色脂肪的摄取率较A组分别升高6.50倍、1.29倍、4.76倍（P均<0.05）,肿瘤与组织或器官的图像对比度明显改善。（4）第1次microPET显像,尾静脉注射与腹腔注射皮下移植瘤摄取值差别无统计学意义（P=0.364）。第2次microPET显像,腹腔注射腹腔可见不同程度显像剂浓聚,其他正常组织、器官及皮下移植瘤的摄取均减低。腹腔注射方式,两次皮下移植瘤的摄取值差异有统计学意义（P=0.025）。结论 实验动物准备明显影响¹⁸F-FDG在裸鼠正常组织的分布及皮下移植瘤的摄取。禁食、加温、麻醉及尾静脉注射方式,可以改善肿瘤对¹⁸F-FDG的摄取,保证图像有较好的稳定性及可重复性。     

蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响

目的：探讨蟾毒灵诱导人胰腺癌细胞凋亡及其对Survivin基因表达的影响。方法：建立裸鼠人胰腺癌模型,随机分为4组：对照组（NS）、5-氟尿嘧啶组（5-Fu）、蟾毒灵组（Bu）、蟾毒灵加5-氟尿嘧啶组（Bu／5-Fu）。分别腹腔注射生理盐水（NS）20ml／kg、5-Fu24mg／kg、Bu1mg/kg、Bu1mg／kg＋5-Fu24mg／kg。用药后第7天处死,计算肿瘤生长抑制率,TUNEL法检测瘤体凋亡指数,免疫组化S-P法检测Survivin蛋白的表达,RT-PCR法检测Survivin mRNA的表达。结果：与NS组相比,各药物干预组瘤体体积均显著缩小（P〈0．05）,凋亡指数明显增高（P〈0．01）,Survivin蛋白的表达显著降低（P〈0．01）。其中Bu／5-Fu组瘤体体积明显小于Bu组、5-Fu组（P〈0．05）;Bu／5-Fu组凋亡指数明显高于Bu组、5-Fu组（P〈0．01）;Bu／5-Fu组Survivin蛋白的表达明显低于Bu组、5-u组（P〈0．01）。结论：蟾毒灵能够抑制胰腺癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,联合5-Fu可起到增效的作用。其作用机制可能与抑制Survivin基因表达有关。     

人子宫内膜异位症裸鼠模型的建立及雌、孕激素受体的表达

目的　为子宫内膜异位症 (EM)的临床研究提供实验动物模型。方法　实验组 :取EM和正常育龄妇女分泌晚期子宫内膜 ,剪碎 ,随机置入裸鼠盆腹腔 ,实验Ⅰ组切除卵巢 ,实验Ⅱ组不切除卵巢 ;对照组 :同法置入人大网膜。术后给雌激素支持。各组裸鼠分别于 5、10、15、2 0、2 5、3 0d脱颈椎处死 ,观察异位病灶生长情况。免疫组化SP法检测异位病灶雌、孕激素受体表达。结果　子宫内膜种植 5d即见异位病灶牢固粘附 ,主要发生在腹壁(56% )、膀胱旁脂肪 (2 1% )等部位 ,可见腺体细胞及散在间质细胞 ,时间越长 ,病灶与裸鼠组织融合越明显 ,盆腹腔粘连越重。用EM患者和正常育龄妇女内膜移植的异位病灶无差别 ,实验Ⅰ组和实验Ⅱ组的裸鼠所形成的异位病灶亦无差别 ,它们的雌、孕激素受体表达未显示差别 ,多数呈弱表达。结论　裸鼠做为EM早期动物模型科学、简便、可行。     

人增生性瘢痕裸鼠模型的建立

目的：建立人增生性瘢痕裸鼠模型，为瘢痕研究提供新途径。方法：将人增生性瘢痕组织块植入裸鼠皮下，术后第21d、第35d与术前比较，用光、电镜观察组织和细胞形态学变化，用全自动图像分析仪测量组织中胶原和酸性粘多糖含量。结果：植入物的组织学结构特征及胶原和酸性粘多糖含量未发生改变。结论：瘢痕裸鼠模型明瘢痕研究的可靠动物模型。     

人脑实体瘤及其裸鼠移植瘤模型的细胞遗传学研究

报道用人脑胶质瘤裸鼠模型NHG—1直接制片法(OP),并用改良的DP 分析22例人脑瘤和4种人脑瘤模型(NHG—1、NHE—2、NHC—3、NHA—5)共72只移植瘤的染色体研究。结果提示;(1)瘤组织取材中,已阻断血供的时间为影响成功率的主要因素。(2)4种模型均起源于人,并在传代过程中维持恒定。(3)11例胶质瘤中未见有特异的结构异常的染色体,4例有标志克隆起源的异常染色体,1例有HSR。(4)3例转移癌中1例有标志克隆起源的异常染色体。(5)1例脑膜瘤和1例胚生殖细胞瘤中见到异常染色体;另1例脑膜瘤和1例神经鞘瘤则未见异常染色体。(6)所有标本均以异常核型为主。本文并总结G—带标本上各类肿瘤染色体数目畸变特征。