免疫BALB/c小鼠获得大量抗体的方法

仅管小白鼠有饲养方便,价格低廉等优点,但由于小白鼠血清数量很少,所以,一般不采用免疫小鼠的方法制备抗体。本篇简要介绍一种对免疫后的小鼠诱生腹水的方法,通过这种方法我们在BALB/c小鼠体内获得了较多数量的抗人血清白蛋白和抗人血清高密度载脂蛋白A_1的抗体。 其方法是:在6—8周龄小鼠腹腔内预先注入灭菌石蜡油0.5ml,首次免疫采用5μg人血清白蛋白或5μg人血清高密度载脂蛋白A_1,加等量福氏完全佐剂。一周后用同样剂量的抗原加福氏不完全佐剂加强免疫,四周后于每只小鼠腹腔内注入SP_2/O小     

BALB/c小鼠黑素瘤模型的建立

ＢＡＬＢ／ｃ小鼠黑素瘤模型的建立陶惠红杨耀琴朴文姬杨虎川（上海铁道大学医学院组胚教研室）接种Ｂ１６小鼠黑素瘤细胞悬液于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠足部、腹腔和尾静脉，用于建立移植瘤模型和肺部转移瘤模型，以观察Ｂ１６实体瘤的形态学特点、接种细胞数与肿瘤生成的关系及...     

BALB/c与C3H杂交一代小鼠诱生腹水产生McAb的观察

在淋巴细胞杂交瘤技术中,单克隆抗体(McAb)的制备在采用腹腔接种法时,大多采用和骨髓瘤细胞同种系的小鼠进行腹腔注射杂交瘤细胞,由此引起的腹水每只小鼠可达3～5 ml,并含有大量的McAb。而应用杂交小鼠诱生腹水产生McAb的报道却很少。BALB/c纯系小鼠是此项技术中最常用的动物。此种小鼠毛色白,性情温顺,体质娇弱,抵抗力低。1992年初,北京实验动物中鼠痘病毒流行,致使BALB/c小鼠大批死亡,有的实验动物室甚至绝种,影响了研究工作的进行。我院饲养的BALB/c小鼠当时亦供不应求.C3H纯系小鼠为毛色油     

用BALB/c F_1小鼠诱生单克隆抗体

<正> 小鼠单克隆抗体(McAb)现已成为临床免疫检验和免疫学研究的重要试剂,其来源多用杂交瘤细胞接种BALB╱c小鼠,诱生含相应抗体的腹水。但BALB/c小鼠为近交系,繁殖性能差,生长缓慢,饲养难度高,以致相应的售价也较贵。为能增加McAb     

BALB/c小鼠肥大细胞瘤/白血病模型的建立

目的研究建立BALB/c小鼠肥大细胞瘤/白血病模型。方法 BALB/c小鼠尾静脉注入小鼠肥大细胞瘤P815细胞,实验按每只小鼠接种细胞数量分为1×10^7/只组、5×10^6/只组、2.5×10^6/只组、1×10^6/只组、5×10^5/只组、1×105/只组和溶剂（RPMI1640培养液）对照组。观察小鼠的生存状态、体重及肝肺脾（重量、形态、病理）、染色体、血涂片、骨髓涂片、白细胞及血小板计数。结果注入P815细胞≥1×106/只的所有组小鼠均死亡,〈1×10^6/只的所有组生存良好,且死亡小鼠的生存时间与注入细胞数量呈负向依赖关系（P〈0.05）。死亡组小鼠体重较注射前相当或减轻、肝肺脾重较对照组及未死亡组显著增加（P〈0.05）;肝质地变硬,表面可见大量大小不一的白色结节突起,部分脾肺可见出血梗死灶,病理示肝脾有大量异形肥大细胞瘤细胞浸润;脾细胞染色体分析可见肥大细胞瘤细胞的非正常染色体核型;白细胞和血小板计数较对照组降低（P〈0.01）,血涂片可见少量肥大细胞瘤细胞,骨髓涂片示骨髓原始细胞比例增高。结论 P815细胞通过静脉注射能使BALB/c小鼠形成肥大细胞瘤/白血病,可作为肿瘤实验研究的一种模型构建方法。     

基因枪注射BALB/c小鼠制备Graves病模型

目的:探讨基因枪注射和普通质粒肌肉注射两种不同方法对甲亢动物模型的差异.方法:将45只小鼠随机分成4组,分别用基因枪金颗粒包裹质粒免疫、普通质粒肌肉注射免疫.加强免疫后第4周后处死小鼠,RIA法测定血清FT3、FT4、TSH水平.RIA法测定血清与hTSHR-CHO孵育后上清cAMP浓度以计算TRAb活性,RIA法测定脾脏培养后IL-4的浓度,ELISA法测定血清TSAb浓度,取甲状腺做石蜡HE切片观察组织学变化.结果:基因枪免疫组(GGI)动物4周后血清FT4(0.34±0.11)pg/ml高于质粒肌肉注射组(PLS)(0.21±0.06)pg/ml和基因枪免疫空质粒组(GG0)(0.17±0.08)pg/ml(F=14.34,P=0.002).GGI组TRAb活性(167.27±117.37)%高于PLS组(113.81±65.50)%和GG0组(98.27±14.80)%(Hc=35.198,P＝0.007).GGI组脾脏培养上清液IL-4产量(0.244±0.092)pmol/L明显高于PLS组(0.173±0.039)pmol/L和GG0组(0.151±0.041)pmol/L(F=7.040 3,P＝0.005).GGI组TRAb浓度(29.3±1.2)U/L明显高于GG0组(13.3±0.2)U/L(F=9.02,P<0.001),但和PLS组(24.3±0.9)U/L比无显著性差异(q＝-1.32,P＝0.423).HE切片观察造模成功小鼠甲状腺滤泡细胞高柱状排列,未出现甲状腺细胞破坏甲状腺炎的嗜酸性变.结论:基因枪免疫雌性BALB/c鼠是一种可行的复制Graves动物模型,在免疫第2～4周可以观察到FT4升高和自身抗体改变等理想的免疫效果.     

幽门螺杆菌感染BALB/c小鼠模型的研究

随着对幽门螺杆菌 (Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ)疫苗、致病机理、药物筛选等方面研究的深入 ,人们越来越多地需用动物模型。我们用含有ｃａｇＡ和ｖａｇＡ基因阳性的Ｈｐ株ｓｙｄ ｎｅｙｓｔｒａｉｎ1 (ＳＳ1 )感染ＢＡＬＢ ｃ小鼠 ,作Ｈｐ慢性感染小鼠的动物模型 ,试验用空肠弯曲菌琼脂基础培养基培养 ,微需氧条件下 37℃培养 3～ 5ｄ。ＳＰＦ级ＢＡＬＢ ｃ小鼠 40只 ,雌性 ,7～ 8周龄 ,重 17～ 2 0克 ,分实验组、对照组。实验组动物模型灌喂Ｈ .ｐｙｌｏｒｉ菌液 ,0 4ｍｌ 只 (每ｍｌ约含Ｈｐ 10 9条 ) ,连续 5次 ,10ｄ完成 ,对照组动物则不作相应…     

BALB/c小鼠巨细胞病毒性心肌炎模型的特征

目的：探讨BALB/c小鼠巨细胞病毒(MCMV)性心肌炎模型的特征。方法:60只4周龄BALB/c小鼠随机分成2组：实验组(36只，MCMV腹腔注射)和对照组(24只，3T3细胞裂解液腹腔注射)。在注射后3、7、14、21、28、35、42、49、56、63和70 d，记录心电图，测血清抗心肌β1受体抗体，分批处死小鼠行心肌病理、免疫组化和MCMV DNA检测。结果:实验组心肌炎累积发病25只(25/36，69.4%)，死亡4只(4/36，11.1%)；心肌炎急性期心肌呈现弥漫性炎性细胞浸润和灶性心肌细胞变性坏死，慢性期心肌间质散在炎性细胞浸润，急慢性期心肌炎病理积分均在2分或以下；免疫组化示急性期心肌IL-1β和TNF-α蛋白强阳性表达。实验组心律失常累计发生率达50.0%，可出现各种心律失常，急性期以窦性、房性心律失常和传导阻滞为主，慢性期以室性和房性心律失常为主。实验组3-7 d时心肌组织可检测到MCMV DNA片段，14-70 d时则不能检测到。实验组前5周血清抗β1受体抗体滴度为0，第6-10周明显升高；对照组前7周该抗体滴度为0，第8-10周轻微升高。结论:MCMV心肌炎并不严重，心肌细胞变性坏死具有局灶性和散在性特点，可出现各种心律失常；心肌炎早期病变和心律失常的发生可能与病毒感染直接损伤有关，慢性期病变和心律失常的发生则可能与抗β1受体抗体的作用有关。     

抑制miR-21减轻BALB/c小鼠病毒性心肌炎

目的:探讨抑制mi R-21可否减轻CVB3诱导的BALB/c小鼠心脏微血管损伤,阻断致病因子向靶器官迁移,从而减轻靶器官组织病变。方法:3~4周龄雄性BALB/c小鼠CVB3腹腔注射后饲养1周诱导急性病毒性心肌炎(VMC)模型;BALB/c小鼠每月腹腔注射CVB3 1次共饲养3个月,诱导为慢性VMC模型。注射CVB3同时尾静脉注射抗mi R-21质粒以敲低mi R-21表达。结果:急性VMC小鼠外周血mi R-21表达增加,心肌Bcl-2和CVB3-VP1表达增加。小鼠体内注射anti-mi R-21质粒后,外周血mi R-21表达降低,心肌caspase-3活性和CVB3-VP1表达下降,Bcl-2表达增加,HE染色心肌组织及心脏微血管病变减轻,TUNEL染色心肌细胞凋亡减少。慢性VMC小鼠心肌胶原表达增加,微血管密度减少,心功能下降。敲低mi R-21增加慢性VMC小鼠心肌微血管密度,减少胶原沉积,改善小鼠心功能。体外过表达mi R-21诱导CMVECs凋亡,减少心脏微血管新生。结论:靶向抑制mi R-21可能通过抑制CMVECs凋亡,阻断致病因子向靶器官迁移,降低心肌病毒载量、减轻心肌炎心肌病变。慢性VMC小鼠中,可能是通过减少胶原沉积、减轻心肌纤维化,增加微血管新生,改善心功能。因此,mi R-21可能是治疗病毒性心肌炎的新靶点。     

杨树花粉过敏BALB / c 小鼠动物模型的建立

目的:建立杨树花粉粗提物致敏激发的小鼠过敏模型。方法:将60 只BALB/ c 小鼠随机均分为正常组、卵清蛋白(OVA)阳性对照组和模型组,每隔5 d 经腹腔注射致敏1 次,共4 次,末次致敏后第5 天滴鼻激发。观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎症细胞变化情况;PAS 染色观察气道黏液分泌情况;HE 染色观察鼻黏膜、肺炎症情况;免疫组化法检测肺组织中IL-4 及IFN-α阳性细胞平均光密度值;酶联免疫吸附试验检测血清中的总IgE 水平。结果:与正常组比较,模型组诱导鼻黏膜、肺组织出现明显的变应性炎症且气道黏液分泌明显增加;BALF 涂片显示明显的炎症细胞(嗜酸性粒细胞、中性粒细胞)增多;肺组织中IL-4 阳性细胞平均光密度值均高于正常组,IFN-α阳性细胞平均光密度值均低于正常组;血清中总IgE 高于正常组。结论:杨树花粉粗提物能够成功建立小鼠过敏模型。该模型的建立有利于过敏性疾病机制的研究。     

BALB／c小鼠胸腺的发生

用ＨＥ和Ｇｉｅｍｓａ染色的鼠胚连续切片观察ＢＡＬＢ／ｃ小鼠胸腺的发生。１１ｄ鼠胚第３对咽囊内胚层与第３对鳃沟外胚层相互紧贴，组成胸腺原基，并可见淋巴细胞样细胞迁入胸腺原基。１２ｄ鼠胚鳃沟外胚层包绕咽囊内胚层。１３ｄ胚胸腺原基已形成一个实体的细胞团。原基内淋巴母细胞样细胞增多，达细胞总数的１０％左右。１５ｄ胚胸腺皮、髓质已可大致辨认，皮质内淋巴母细胞样细胞明显多于髓质。１７～１９ｄ胚胸腺的皮、髓质分     

禽流感H5N1亚型病毒感染BALB/c小鼠的免疫应答

目的 研究禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠后对宿主细胞免疫功能和细胞因子水平变化的影响,探讨禽流感H5N1病毒感染哺乳动物的免疫发病机制.方法 选用鹅源禽流感H5N1病毒感染BALB/c小鼠,采用流式细胞仪检测血液和脾脏T淋巴细胞及其亚群的变化,采用ELISA检测血液中细胞岗子(IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-18、IL-10、IL-2)及禽流感H5N1病毒特异性抗体的变化.结果 禽流感H5N1病毒感染可引起对宿主短暂的、可恢复的细胞免疫功能损伤:血液CD3+、CD4+、CD8+ T淋巴细胞数量于染毒后第2～4天下降(第4天为最低值),脾脏T淋巴细胞数最于染毒后第5～8天下降(第6天为最低值),然后均逐渐恢复到正常水平.染毒后血液细胞因子变化表现为:血清IFN-γ、TNF-α水平下降,IL-4、IL-18、IL-10水平上升,IL-2水平无明显变化.从感染第7天开始检测H5N1禽流感特异性抗体为阳性,抗体水平逐渐升高至实验结束的感染第14天.结论 H5N1禽流感病毒感染可引起宿主T细胞免疫功能低下是其主要的免疫病理改变之一,细胞因子表达失平衡或过多的表达都可能对宿主产生免疫病理损伤.

Abstract：

Objective To study the cell immunity and eytokines responses to avian influenza A H5N1 virus infections in a BALB/c model to better understand the pathogenesis of H5N1 avian influenza disease. Methods Two hundred and twenty BALB/c mice of the infected group were inoculated with 0.1 ml (10-4.875 TCID50) of A/Goose/Guangdong/NH/2003 ( H5N1 ) virus intra-nasally. Fifty control mice received noninfectious allantoic fluid and another fifty control mice received normal sodium. Blood and spleen samples were collected from the live mice every 24 h during the 14 d post-infection. The changes of CD3 + T cells , CD4 + T cells, CD8 + T cells for cell immunity in blood circulation and spleen were detected by flow cytometry. And the cytokines and antibody responses in blood circulation were detected by ELISA. Necropsy was performed on mice that died during the experiment and those euthanized at end of study. Results Avian influenza A( H5N1) virus infections can make damages to the cell immune system transiently. The CD3 + T cells, CD4 + T cells, CDS + T cells declined at 24 days post infection in blood circulation and declined at 5-8 days in spleen, then recovered to the normal level gradually. The eytokines responses to the infections can be detected: the level of IFN-γ,TNF-α declined, IL-4, IL-18, IL-10 increased, and IL-2 changed little. The antibody increased rapidly from day 7 post infection until the end of the study (day 14 post infection). Conclusion Collectively, avian influenza A(H5N1) virus can cause cell immunity deficiency and an imbalance in the level of eytokines, which may contribute to the unusual severity of disease caused by the H5N1 avian influenza virus.     

普鲁卡因酰胺等诱导BALB／c小鼠产生抗核抗体

为了建立药物诱导狼疮（DIL）的动物模型,用普鲁卡因酰胺（Pca)、盐酸肼苯哒嗪（Hyd)和2,2-偶氮-双（3-乙苯基-噻唑啉-6-硫酸）（ABTS）对不同品系小鼠腹腔给药,用ELISA和间接免疫荧光法检测抗核抗体。三种药物都能够诱导小鼠产生抗核抗体,Pca诱导小鼠产生核抗体的阳性率为25%,而Hyd、ABTS诱导的阳性率均为12.5%。Pca、Hyd和ABTS都能诱导BALB/c小鼠而不是C57BL/6小鼠产生抗核抗体,其中DNA特异的抗体主要是IgG,而对组蛋白特异的抗体主要是IgM。结果表明在人体导致DIL的药物Pca、Hyd和ABTS能诱导昆明鼠及BALB/c小鼠产生抗核抗体,提示DIL的发生受遗传背景的影响。     

MGd_1-KLH加佐剂免疫同系BALB/c小鼠制备抗独特型抗体的免疫效果评价

ＭＧｄ１－ＫＬＨ加佐剂免疫同系ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备抗独特型抗体的免疫效果评价＊刘宪玲樊代明（第四军医大学西京医院消化病研究所，西安７１００３２）抗独特型抗体（ａｎｔｉ－Ｉｄ）是针对抗体分子可变区高变区的抗原决定簇（又称独特位）的抗体。依其针对的独特位...     

BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒在BALB/c小鼠肌肉表达分析

检测BCR-ABL-pIRES-SEA重组基因疫苗在小鼠肌肉中的表达。用已构建BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒免疫BALB/c小鼠一侧后肢骨骼肌,每两周一次,每次注射200μg,第七周取材用RT-PCR及免疫组织化学染色法检测目的基因在注射部位肌肉中转录和表达。结果发现:实验小鼠骨骼肌内检测到BCR-ABL和金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因的转录,以及BCR-ABL蛋白的表达,证明所构建的BCR-ABL-pIRES-SEA重组质粒在小鼠体内可以有效地表达基因产物。     

BCR-ABL-SEA DNA疫苗诱导BALB/c小鼠的免疫应答

目的: 了解BCR-ABL-SEA双表达DNA疫苗诱导BALB/c小鼠特异性细胞和体液免疫应答效应。方法: 用已成功构建的重组双表达BCR-ABL 多肽和 SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES-SEA (B-P-S)免疫小鼠,间隔14 d共3次。相同方法用单表达BCR-ABL 多肽或 SEA多肽的质粒BCR-ABL-pIRES 和SEA-pIRES免疫小鼠作对照。利用CCK-8 比色法检测小鼠脾脏T 细胞对K562细胞株的杀伤活性;流式细胞术测定小鼠脾脏CD4⁺与CD8⁺T细胞表达情况;ELISA法检测小鼠血清中干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)生成情况;间接免疫荧光法检测血清中抗BCR-ABL抗体。结果: 免疫后第7周时,双表达重组质粒B-P-S组小鼠脾脏CTL细胞针对K562杀伤率、血清中INF-γ含量均明显高于单表达BCR-ABL-pIRES组和SEA-pIRES组(P<0.05);CD4⁺/CD8⁺T细胞比值、血清中IL-4含量各组之间无明显差异(P>0.05);荧光显微镜检测到血清中有抗BCR-ABL抗体。结论: 所构建的BCR-ABL-SEA重组双表达质粒可诱导小鼠产生特异性细胞和体液免疫应答效应。     

乙型肝炎表面抗原对BALB/c小鼠细胞免疫应答的影响

目的研究不同来源乙肝表面抗原(HBsAg)对BALB/c小鼠的某些细胞免疫应答的影响.方法采用血源、CHO和酵母HBsAg分别免疫BALB/c小鼠,于免疫后不同时间制备脾脏单个核细胞(MNC),测定MNC对刀豆蛋白(ConA)和细菌脂多糖(LPS)的增殖反应性;采用绵羊红细胞(SRBC)作为致敏原,测定不同HBsAg免疫小鼠后迟发性超敏反应(DTH)的发生程度.结果不同来源HBsAg对ConA或LPS刺激的反应指数(SI)表现出不同的时间曲线,一般于免疫20?d和25?d时显著升高,其中血源HBsAg较高,酵母较低.H.M.-HBsAg在免疫5?d时即显出较高的SI值.CHO-HBsAg对SRBC诱导的DTH反应具有显著的抑制作用(P＜0.05).结论不同来源HBsAg诱导细胞免疫反应的类型和程度存在差异,CHO细胞来源的HBsAg对TH1细胞介导的DTH反应有抑制作用.     

BALB/c小鼠胸腺巨噬细胞不同亚群特性研究

目的研究小鼠胸腺巨噬细胞组成、分布、形态、功能。方法糖皮质激素诱导小鼠胸腺细胞凋亡,采用免疫荧光染色法,免疫组织化学和酸性磷酸酶(ACP)双重染色方法,发现小鼠胸腺巨噬细胞的不同表型。结果发现小鼠胸腺巨噬细胞存在四种表型:树状突起型细胞:可被Mac-2,F4/80单克隆抗体标记,数量最多,分布于整个胸腺实质且有吞噬作用;扁平型细胞:可被F4/80单克隆抗体标记,分布于皮质被膜下方;小卵圆型细胞:可被Mac-2单克隆抗体标记,分布于胸腺髓质和皮髓交界(CMR),此类细胞未见吞噬现象。ED1~+细胞:细胞形态不规则,主要分布于皮髓质交界区。以上不同的巨噬细胞亚群均可显示酸性磷酸酶活性。结论小鼠胸腺巨噬细胞存在不同亚群,表现在其组成、形态、分布、特点及功能差异等方面。     

BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫漂移的实验研究

目的：动态分析BALB/c小鼠感染弓形虫后Th1/Th2免疫失衡及免疫漂移特点,并探讨转录因子T-bet和GA-TA-3在此过程中的改变及其意义。方法：90只BALB/c小鼠随机分为正常对照组30只,弓形虫感染组60只。于感染后奇数天每天处死感染组小鼠2只,对照组小鼠1只,采用ELISA法动态检测各组小鼠血清中IFN-γ和IL-4的水平,同时应用荧光定量PCR方法检测小鼠脾细胞中T-bet和GATA-3 mRNA的表达情况。结果：感染组小鼠中,血清IFN-γ于感染后第4天开始显著升高,第5~7天维持在高峰值,从第8天开始下降,第9天降至正常水平;IL-4于感染后第8天开始显著升高,第9天升至峰值,从第14天开始下降,第15天降至正常水平;脾细胞T-bet mRNA的表达在感染后第3天升高,第5天达高峰后于第9天降至正常水平;脾细胞GATA-3 mRNA的表达在感染后第7天升高,第11天达高峰,于第13天降至正常水平。正常对照组小鼠在实验期内IFN-γI、L-4水平没有明显变化,维持在正常的较低水平。结论：BALB/c小鼠感染弓形虫后诱导的免疫应答在感染急性期（第1~8天）以Th1应答为主,第9至13天,宿主免疫应答以Th2细胞应答为主,之后Th1/Th2应答基本恢复平衡。Th1应答向Th2应答的漂移与T-bet和GATA-3 mRNA的表达相关并受其调控,Th1/Th2型免疫应答的发生时相和效应强度可能影响弓形虫感染的最终结局。     

T细胞免疫BALB/c小鼠诱导调节性体液免疫应答的研究

目的 :研究T细胞免疫后正常小鼠的调节性体液免疫应答。方法 :用经γ射线照射的体外扩增的活化OVA特异T细胞克隆免疫BALB c小鼠 ,FACS法分析血清中抗T细胞抗体水平 ,免疫共沉淀法分析靶抗原。结果 :T细胞免疫能诱导BALB c小鼠产生抑制T细胞增殖的抗T细胞抗体 ,这种抗体不是多克隆活化的结果 ,其靶抗原可能是T细胞上 93、87、5 5和 4 5kD的蛋白。结论 :T细胞免疫能诱导正常小鼠产生调节性体液免疫应答