PCR技术在汉坦病毒研究中的应用

ＰＣＲ(Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ)技术是一种试管内快速、大量扩增特异性序列的技术 ,该技术自 1985年问世以来 ,以惊人的速度广泛应用于生物科学的各个领域 ,成为分子生物学发展史上的又一重大技术革新 ,由于该方法对ＤＮＡ片段的扩增具有简单、快速、敏感、特异的特点 ,特别是在病原微生物特异性核苷酸序列的检测、分析和克隆等方面显示出无比的优越性 ,因此得到了广泛的应用。自 1986年美国学者Ｃ .Ｓ .Ｓｃｈｍａｌｊｏｈｎ发表了汉坦病毒原型株 76 - 118株的Ｓ片段序列以来 ,多株汉坦病毒的Ｓ、Ｍ和Ｌ片段序列…     

PCR技术在传染病中的应用

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术是1985年Mullis建立的;1988年Erlich引入耐热Taq酶后几年来其应用越来越广泛,给医学生物界带来了一场深刻的变革。该技术具有灵敏性高、特异性强及快速、操作简便等优点,故尤其适用于传染病中难以培养和(或)生长缓慢的病原微生物的诊断。本文重点介绍PCR技术在诊断结核性脑膜炎、乙型肝炎、爱滋病等疾病中的应用。     

PCR技术在甲型血友病基因诊断中的应用

甲型血友病是一种最常见的X连锁隐性遗传性出血性疾病,至今尚无满意的治疗方法,故进行有效的遗传控制,防止患儿出生十分必要.目前,国内外多采用FⅧ基因内及与FⅧ基因紧密连锁的限制酶片段长度多态性(RFLPs)为遗传标志,通过连锁分析进行携带者检出和高危胎儿出生前诊断.聚合酶链反应(PCR)技术利用一对寡核苷酸引物在体外扩增特异DNA片段,已广泛用于β地中海贫血突变基因的检测;此外,PCR还可检测限制酶位点的改变,通过RFLPs连锁分析诊断甲型血友病基因.本实验室采用PCR对4个甲型血友病家系进行基因连锁分析,其中包括3例高危胎儿的出生前基因诊断.     

PCR技术在检测HBV中的应用

乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBVDNA)作为病毒复制的指标,随着聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)技术的问世,其检验变得简易、快速。本文通过242例标本用酶联免疫吸附试验(ELISA)与PCR检验进行对比检验,对HBV—DNA的存在与乙肝病毒免疫标记物(HBVm)的关系进行分析。研究对象     

应用PCR技术检测HBsAg携带者血清中HBV DNA

应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增38例HBsAg携带者和58例正常人血清中的HBV DNA特异性片段,通过与HBsAg滴度及HBV血清标志物进行对比分析,发现HBV DNA阳性率与HBsAg滴度呈正相关(r=0.981,P<0.005),与HBeAg减低、抗-HBe产生以及其后的e系统消失过程呈相应递减趋势。并且在单项抗-HBs阳性的血清中,HBV DNA检出率可达10％。     

PCR技术在呼吸道病毒检测中的应用进展

反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)在病毒监测中的作用随着其自身的发展越来越重要,它从最初的RT-PCR到与其他各项新兴技术相结合,逐渐发展成实时荧光定量RT-PCR、多重RT-PCR、多重实时荧光RT-PCR、多重PCR技术为基础的反式线点杂交、环介导的反转录等温扩增、反转录为基础的电喷雾电离质谱技术、扩增片段长度多态性分析等各项技术。现对这几项技术在病毒检测中的优点与不足予以综述。     

应用PCR技术诊断乙型肝炎母婴垂直传播的研究

目的了解本地区乙型肝炎（ＨＢＶ）母婴传播的现状，评价ＰＣＲ技术的应用价值。方法用ＰＣＲ技术对１５６例孕妇及１１２例新生儿进行了ＨＢＶ检测。结果孕妇ＨＢＶ感染率为１０．２６％，孕妇ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者，其新生儿ＨＢＶ感染率为５６．２５％。结论本地区新生儿ＨＢＶ感染率明显高于国内报道。ＰＣＲ技术用于诊断ＨＢＶ感染简便、快捷、可靠。     

ACE基因与糖尿病合并冠心病的关联研究

目的：探讨内蒙古地区汉族糖尿病合并冠心病病人的ACE基因I／N的多态性，并同汉族健康人群比较，分析其遗传特点。方法：34例NIDDM合并冠心病病人的DNA应用ACE基因内含子16多态部位侧翼的前体进行PCR扩增。等位基因在琼脂胶上电泳，溴乙啶染色，紫外灯下观察。结果：病人的DD，DI和Ⅱ基因型的频率是0．58，0．15和0．26，汉族健康人群的DD，DI和Ⅱ基因型的频率是0．33，0．31和0．35。糖尿病合并冠心病病人DD基因型及DD等位基因频率显著增高。结论：在北方汉族人群的研究中发现ACE基因I／N的多态性与糖尿病舍并冠心病相关。     

聚合酶链反应检测HBV－DNA的意义探讨

对肝功能试验正常的１４９例ＨＢＶ感染者用ＰＣＲ技术检测血清ＨＢＶ─ＤＮＡ，结果ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｓ、抗ＨＢｃ均阳性者，ＨＢＶ─ＤＮＡ全部阳性，ＨＢｓＡｓ、ＨＢｅＡｓ、抗ＨＢｅ、抗ＨＢｃ或抗ＨＢｓ单项或合并其它项阳性者，ＨＢＶ─ＤＮＡ阳性率分别为７９．４％、９４．６％、５０％、８１％和８．７％。这些结果与文献报告的相类似。     

PCR技术在B-淋巴细胞白血病研究中的应用

用PCR方法对B-淋巴细胞白血病患者的免疫球蛋白(Ig)重链基因进行扩增。发现急、慢性B-淋巴细胞白血病、慢粒急淋变的Ig重链基因重排出现异常。有的患者出现两种基因扩增产物。即使在骨髓抑制期和完全缓解期白血病细胞少于4％时,也可以检出异常重排的Ig重链基因。本研究对B-淋巴细胞白血病的诊断和治疗具有重要意义。     

PCR检测HPVDNA诊断女性生殖道尖锐湿疣

应用聚合酶链反应检测ＨＰＶＤＮＡ诊断女性生殖道尖锐湿疣。方法应用ＰＣＲ法对门诊女性生殖道尖锐湿疣标本中ＨＰＶ６．１１型进行检测。结果９例病理学检测阳性标本有８例检测出ＨＰＶ６．１１型病毒，２０例病理检测阴性标本也有４例检出ＨＰＶ６．１１型病毒。     

从石蜡包埋和甲醛浸泡组织中提取DNA进行PCR扩增

对石蜡色埋组织用二甲苯或水浴法脱石蜡,乙醇进行梯度水化,溶液A裂解细胞,对经抽提、纯化后的DNA进行PCR扩增,获得了较满意的效果。同时对石蜡包埋组织与甲醛浸泡组织中的DNA受损程度进行了比较,此工作为能使肿瘤等症病将在基因水平上进行回顾性分析提供了一个良好开端.     

酵母质粒PCR扩增及酶切在酵母双杂交中的运用

目的:减少对初步筛选获得的阳性克隆进一步鉴定的工作量,防止阳性克隆的丢失.方法:提取酵母双杂交筛选cDNA表达文库获得的阳性克隆酵母细胞质粒,以文库载体插入片段两端特异序列为引物,PCR扩增插入片段,限制性核酸内切酶酶切扩增产物,琼脂糖凝胶电泳,根据带型对阳性克隆进行分类.结果:将初步获得的107株阳性克隆,分为24类,在PCR扩增过程中发现个别克隆含有两种以上的文库质粒.结论:酵母质粒PCR扩增,酶切分类的方法,不仅可以大大减轻阳性克隆进一步鉴定的工作量,避免不必要的浪费,而且还可以避免阳性克隆的丢失.     

胰岛素增敏剂罗格列酮治疗2型糖尿病的临床疗效观察

目的：观察胰岛素增敏剂罗格列酮的降血糖疗效。方法：采用双盲双模拟随机对照试验,５５例２型糖尿病人分为两组,Ａ组给罗格列酮２ｍｇ口服,１次／ｄ,Ｂ组给格华止８５０ｍｇ口服,１次／ｄ,如２周后血糖≥１１．１ｍｍｏｌ／Ｌ,则各组加量至２次／ｄ,疗程８周。结果：罗格列酮治疗后ＰＢＧ降低,与治疗前比较,有显著性差异（Ｐ〈０．０５）;其降血糖总有效率为８２．８％,疗效与格华止相近（Ｐ〉０．０５）;能降低ＦＩＮ     

应用SPA的ELISA检测血清胰岛素抗体

应用SPA代替抗人IgG第二抗体的ELISA测定血清胰岛素抗体(IA)。经正交试验分析,受检血清稀释度是影响IA测定的主要因素。选用胰岛素包被浓度为10μg/ml,受检血清1:2.5稀释时,IA测定可获较满意的结果。竞争性结合抑制试验表明IA测定具有特异性。血清稀释试验提示OD值大小反映了IA滴度高低。28例正常人血清IA测定结果OD正常值范围(X±2SD)为0.05～0.25。使用胰岛素的DM病例均为阳性,而未使用胰岛素病例未发现IA阳性。本文认为应用该法测定IA是一种稳定、特异、简便的方法。     

多重PCR法检测喉癌组织中P16基因纯合缺失及异常甲基化

目的：采用多重ＰＣＲ法检测喉癌及癌旁组织中Ｐ１６ 基因纯合缺失和异常甲基化。方法：选用二对引物分别扩增Ｐ１６ 基因外显子１ 和２,分析有无纯合缺失,对未检出缺失的样品用甲基化敏感内切酶Ｓｍ ａＩ消化后,再扩增外显子１,分析有无Ｐ１６ 基因异常甲基化。结果：３９ 例喉癌组织标本中９ 例标本有Ｐ１６ 基因纯合缺失,缺失率为２３．０８％ （９／３９）。３０ 例未检测到Ｐ１６ 基因缺失的喉癌组织标本,有４ 例检出异常甲基化,检出率为１３．３３％ （４／３０）。３９ 例癌旁组织标本均未检测到Ｐ１６基因缺失或异常甲基化。结论：采用多重ＰＣＲ法可检测出Ｐ１６ 基因常见的纯合缺失和异常甲基化失活。研究表明,Ｐ１６ 基因失活可能在喉癌的发生发展中起重要作用