复合培养人工皮移植12例疗效观察

目的 在体外培养表皮细胞及成纤维细胞并与人工真皮复合培养,用以修复患者皮肤缺损创面.方法 从12例皮肤缺损患者体表切取皮肤标本,分离成单个表皮细胞和小块真皮组织进行体外培养、增殖,将收获的表皮细胞和成纤维细胞与人工真皮复合培养,形成人工皮,移植于患者皮肤缺损创面.结果 复合培养人工皮能存活,形成皮肤替代物,皮肤缺损创面得以修复.结论 复合培养人工皮能在新鲜创面上存活,形成皮肤替代物,性质比单纯培养表皮细胞膜片移植效果好,比自体皮片扩增速度快.     

衰老皮肤表皮细胞和成纤维细胞生长动力学研究

为了研究衰老表皮细胞和成纤维细胞生长动力学方面的变化，应用细胞培养和流式细胞仪染色体分析技术研究衰老皮肤与小儿皮脸表皮细胞及真皮成纤维细胞的生长曲线，分裂指数，生长周期各期细胞比例等特点，动态观察衰老细胞生长动力学方面的变化，结果发现衰老皮肤的表皮细胞和真皮成纤维细胞Ｇ０－Ｇ１其细胞比例较低，合成期细胞仅占５－６％，而小儿表皮细胞和成纤维细胞Ｇ０－Ｇ１期细胞占６％，合成期细胞占１３～１４％，这说明     

人毛囊细胞来源双层皮肤替代物的构建和组织学特征

目的 探索人毛囊细胞构建的双层皮肤替代物的组织学特征.方法 用毛乳头细胞、真皮鞘细胞分别与外根鞘细胞构建复合壳多糖双层皮肤替代物,分析其体外和移植至大白鼠后的组织学特征.结果 毛囊来源细胞构建的皮肤替代物中表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团形成.结论 毛囊细胞是构建皮肤替代物的良好细胞来源.     

脱细胞异种真皮皮下埋植的实验研究

目的 :观察胰蛋白酶及冻融法制备的脱细胞真皮能否为构建人工复合皮提供一种理想的真皮替代物。方法 :将胰蛋白酶消化和冻融法制备的脱细胞异种真皮 ( 2cm× 2cm)埋入SD大鼠皮下 ,分别于术后 2、4、6、8周活检行组织学检查。结果 :术后 4周脱细胞真皮内有明显的微血管和成纤维细胞长入。结论 :胰蛋白酶消化和冻融法制备的脱细胞异种真皮能诱导宿主微血管和成纤维细胞长入 ,为其上培养的表皮或重叠移植的自体薄皮片提供营养 ,是一种理想的真皮替代物。     

应用胶原蛋白构建组织工程皮肤的实验研究

目的 探讨以胶原蛋白为支架构建组织工程皮肤的体外培养理想方法.方法 体外分离、培养、鉴定角朊细胞和成纤维细胞;利用本室自制胶原蛋白,制备胶原凝胶和胶原海绵两种组织工程支架;在成功构建人工真皮的基础上,种植角朊细胞,构建人工复合皮肤,并进行组织学及免疫组化检查.结果 制备的胶原海绵孔径平均100～150μm,孔隙率89%,组织相容性良好;两种皮肤替代物免疫组化染色显示Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白(FN)和层粘连蛋白(Laminin)阳性,HE染色可见均具有表皮和真皮双层结构,厚度约3mm,在形态结构上与正常皮肤相似.结论 培养的人角朊细胞和成纤维细胞种植于胶原蛋白支架上气-液界面培养可构建出具有类似天然皮肤结构的组织工程皮肤.     

异体表皮细胞和成纤维细胞库的建立

目的 寻找表皮细胞和成纤维细胞体外培养、鉴定、冻存与复苏的可行方法.方法 酶消化法分离表皮细胞和成纤维细胞,分别进行原代、传代培养,并对细胞进行冻存与复苏.表皮细胞进行广谱角蛋白-异硫氰酸荧光素(PAN-FITC)免疫荧光染色,成纤维细胞行波形蛋白-FITC免疫荧光染色.结果 表皮细胞呈克降样增长,以后细胞逐渐互相融合.PAN-FITC染色均为阳性.成纤维细胞的体外生长活力强,波形蛋白-FITC染色呈阳性.结论 酶消化法是表皮细胞和成纤维细胞体外培养的重要方法,本实验为构建组织工程皮肤奠定了基础.     

染发剂对豚鼠皮肤表皮和真皮超微结构的影响

目的:探讨染发剂对豚鼠皮肤的毒性作用.方法:用市售染发剂涂抹豚鼠皮肤制作染发剂的皮肤慢性损伤动物模型,统计豚鼠的体重变化,以及用电子显微镜观察皮肤表皮和真皮的超微结构改变.结果:在8000～20000倍电子显微镜下观察,皮肤角质形成细胞及真皮成纤维细胞的细胞核、细胞器都出现不可逆转损伤.结论:50%、100%浓度的染发剂可导致豚鼠皮肤角质形成细胞和成纤维细胞发生不可逆病理改变,以及豚鼠的生长抑制等全身性影响.     

人和猪脱细胞真皮体外构建活性真皮替代物的对比研究

目的 观察异体和异种脱细胞真皮支架(ADM)对体外构建的活性人工真皮生物学活性的影响.方法 体外培养、扩增人皮肤成纤维细胞后,按2.5×105个/cm2密度分别接种于异体(人)脱细胞真皮(hADM)、异种(猪)脱细胞真皮(pADM)支架表面进行复合培养.动态观测细胞生长情况及活性真皮替代物的组织结构,并观测复合培养3、6、10 d培养上清中IL-6、透明质酸(HA)的变化.结果 人皮肤成纤维细胞在人和猪的脱细胞真皮支架上粘附、生长良好,均可形成细胞膜片并向支架内生长.在接种人皮肤成纤维细胞后,hADM组和pADM组培养上清液中均可检测出逐渐增高的IL-6和HA.复合培养第6、10天,hADM组和pADM组均显著高于单层成纤维细胞培养组(P＜0.05),但两组间并无统计学差异.结论 人皮肤成纤维细胞接种于hADM和pADM进行体外复合培养后均可构建具有生物学活性的人工真皮,就成纤维细胞的生物学活性而言.二者之间并无差别.     

人工皮肤培养模型的建立

模拟体内生理条件,采用细胞三维培养技术将角朊细胞接种在一活性真皮替代物（即成纤维细胞胶原凝胶）上,然后行气液界面培养,使角朊细胞的一些正常生长和分化的特殊提以再现,从而形成一种能应用于临床的人工皮肤。而且这一培养模型使角朊细胞、成纤维细胞和细胞外基质构成了一有机的整体,因而也是研究表皮分化、其表皮间相互关系的良好模型。     

在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成的初步研究

目的探索人毛乳头细胞和外根鞘细胞在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成的可能性。方法用毛乳头细胞和与外根鞘细胞构建复方壳多糖双层皮肤替代物,观察其体外和大白鼠移植后的组织学特征。结果体外毛乳头细胞和外根鞘细胞构建的皮肤替代物表皮细胞排列更紧密、角化突出,真皮内可见与表皮相连的上皮细胞柱及球形膨大细胞团。但移植后未见肯定的毛囊样结构形成。结论目前的细胞培养技术尚不能在双层皮肤替代物中诱导毛囊形成。     

人表皮细胞在牛胶原膜粘附、生长及分化的研究

目的在牛胶原膜中植入胎儿表皮细胞和成纤维细胞，构建人工复合皮替代物，以研究细胞的粘附、生长、分化及真表皮间的相互作用。方法(1)酶消化法培养胎儿表皮细胞和成纤维细胞；(2)制备人工复合皮，接种表皮细胞后于不同时间通过HE染色和扫描电镜观察细胞的形态和数量变化；(3)透射电镜观察该复合皮中细胞的结构；(4)裸鼠移植试验验证该复合皮的作用。结果(1)该人工复合皮具有一定的弹性，可出现较明显的细胞增殖，未见人工复合皮收缩现象。(2)HE染色和扫描电镜下可见随培养时间的延长，成纤维细胞和表皮细胞逐渐增多，表皮细胞可发生分化。并逐渐分层。(3)透射电镜下见成纤维细胞和表皮细胞功能活跃。(4)裸鼠移植试验证实该人工皮可起到覆盖创面防止感染的作用。结论该人工复合皮基本具备了正常皮肤的结构和功能，可作为移植物覆盖全层皮肤损伤。     

组织工程皮肤用真皮支架细胞相容性的比较研究

目的研究几种真皮支架的细胞相容性，为构建组织工程皮肤提供资料。方法取胶原海绵、明胶海绵、PEGA和PHBV共4种真皮支架，与小鼠成纤维细胞和ES源表皮样干细胞体外培养，观察前者对后者粘附率的影响，及对成纤维细胞增殖的影响，评价真皮支架的细胞相容性。结果成纤维细胞和ES源表皮样干细胞在4种支架材料上均能粘附存活，成纤维细胞能增殖，但在胶原海绵、PHBV和PLGA支架上的增殖率明显高于明胶海绵。结论几种真皮支架的细胞相容性较好，可用于新型组织工程皮肤的构建。     

组织工程皮肤种子细胞生物学特性的研究

目的建立一种分离培齐组织工程皮肤种子细胞的方法,并对细胞的生物学特性进行研究。方法分别通过Dispase-胰蛋白酶消化法和组织块法对表皮干细胞和成纤维细胞进行分离培养,利用倒置相差显微镜和扫描电镜等对其进行形态学观察,MTT比色法对细胞的增殖动态进行测定,免疫组化法对两种细胞进行鉴定。结果分离的表皮细胞和成纤维细胞可在体外快速贴壁生长、增殖,活力较好,免疫组织化学染色为阳性。结论通过Dispase-胰蛋白酶消化法和组织块法分别获得的表皮干细胞和成纤维细胞在体外能够快速扩增、培养,可为下一步组织工程皮肤的构建提供充足、可靠的细胞源。     

以表皮细胞及脱细胞真皮构建组织工程皮肤

目的 体外扩增培养表皮细胞，复合脱细胞真皮构建组织工程皮肤，以促进其进一步临床应用。方法 将人表皮细胞进行体外培养扩增后，以生长良好的表皮细胞接种于制备好的异种（猪）无细胞真皮支架上，行气液界面联合体外培养，构建组织工程皮肤。观察细胞生长情况及复合皮结构。结果 培养的表皮细胞扩增良好，脱细胞真皮支架去细胞完全，表皮细胞在脱细胞真皮上可以生长，可体外构建复合皮肤。结论 利用体外扩增的表皮细胞及制备的脱细胞真皮可体外联合构建具有复层结构的组织工程皮肤。     

脱细胞真皮基质的制备方法及其在口腔科的应用

脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix，ADM）是近几年国外兴起的一种真皮替代物，是利用特定的方法将皮肤中的细胞成分去除，仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。ADM根据制备材料的来源不同分为同种异体真皮基质（alloderm）与异种真皮基质（xenoderm）两种。同种异体真皮基质的制备材料为人类尸体皮肤，异种真皮基质主要来源于猪的皮肤。ADM作为真皮替代物治疗全层皮肤缺损的效价在于它的低抗原性、快速血管化和作为表皮载体或支架的稳定性，而这些特性很大程度上取决于ADM的最终成分。     

人与巴马香猪无细胞真皮移植效果的比较

目的比较巴马香猪与人无细胞真皮植入大鼠后的相容性、血管化和收缩率等移植效果,为猪无细胞真皮替代人无细胞真皮用于深度创伤治疗提供依据。方法以机械去表皮法制备巴马香猪与人无细胞真皮经辐照处理后移植于Wistar大鼠全厚皮肤缺损创面进行初步的淋巴细胞浸润、成纤维细胞进入生长、血管化、新生皮肤和创面收缩率比较。结果移植1个月后,移植两种无细胞真皮的的创面均完全愈合,组织学检测表明:巴马香猪无细胞真皮与人无细胞真皮相比炎症的发生时间较长,血管化速度和细胞迁入生长缓慢,而愈合后创面收缩率差异不显著。结论巴马香猪无细胞真皮的生物相容性和血管化等移植效果不及人无细胞真皮,主要影响因素可能在于二者蛋白质的差异。     

ES细胞源表皮样干细胞与胶原海绵体外构建组织工程化皮肤

【目的】 探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法，为构建新的组织工程皮肤奠定基础。【方法】 先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内，体外培养2d，再放置ES细胞源表皮样干细胞，体外培养3d，观察其形态和进行免疫组化检测。【结果】 成纤维细胞与ES细胞源表皮样干细胞均在真皮支架内黏附，免疫组化表明ES细胞源表皮样干细胞仍呈Bl整合素强阳性和CK15、CK19阳性。【结论】 结果提示ES细胞源表皮样干细胞在体外构建的组织工程化皮肤内仍维持未分化状态。     

ES细胞源表皮样干细胞与胶原海绵体外构建组织工程化皮肤

 【目的】 探讨以ES细胞源表皮样干细胞构建组织工程皮肤的方法，为构建新的组织工程皮肤奠定基础。【方法】 先把成纤维细胞放置于胶原海绵真皮支架内，体外培养2d，再放置ES细胞源表皮样干细胞，体外培养3d，观察其形态和进行免疫组化检测。【结果】 成纤维细胞与ES细胞源表皮样干细胞均在真皮支架内黏附，免疫组化表明ES细胞源表皮样干细胞仍呈Bl整合素强阳性和CK15、CK19阳性。【结论】 结果提示ES细胞源表皮样干细胞在体外构建的组织工程化皮肤内仍维持未分化状态。     

应用改性聚乳酸构建复层组织工程皮肤的可行性研究

目的：以改性聚乳酸为细胞外基质网架,探索利用其构建复层组织工程皮肤的可行性。方法：取出生24 h以内的Wistar大鼠背部皮肤,以Dispase-trypsin双酶消化分离培养表皮角质形成细胞;以Ⅰ型胶原酶消化分离培养真皮成纤维细胞。采用盐析法制备机械性能得到部分改进的聚乳酸多孔泡沫支架,向支架接种真皮成纤维细胞（密度为3.0×10⁵cell•mL^-1）和表皮角质形成细胞（密度为5.0×10⁵cell•mL^-1）,体外培养1周,构建复层组织工程皮肤,并取培养的皮肤进行切片检测。结果：复层组织工程皮肤在结构上与正常皮肤相似,具有真皮、表皮双层结构。改性聚乳酸网架上有双层细胞生长,生长的细胞与网架接触,并且在其表面形成较为明显而连续的细胞层。结论：双醛淀粉作为良好的增柔剂在改善聚乳酸网架机械性能的同时,也使其具有良好的细胞相容性,不影响细胞的生长增殖和代谢,可以进一步用作组织工程皮肤的支架材料。     

获取SD仔鼠角朊细胞和真皮成纤维细胞6种方法比较

目的 :探讨如何以简便快捷的方法获得大量最佳生长状态的角朊细胞和真皮成纤维细胞以作为皮肤组织工程的种子细胞 .方法 :用 2 .5 g·L -1 胰酶、35 g·L -1 热溶素和 9.0× 1 0 3 U·L-1 Dispase分别在不同条件下处理皮肤标本 ,观察表皮与真皮的分离情况 ,并分别培养角朊细胞和真皮成纤维细胞 ,观察比较细胞的贴壁率和克隆形成率 ,通过MTT和BrdU检测观察细胞的生长状态 ,并分别用不同方法获得的细胞构建组织工程皮肤 .结果 :在各种条件下 ,Dispase处理组获得的细胞数量、细胞贴壁率和克隆形成率均优于其他消化液处理组 ,细胞纯度高 ,生长状态良好 ;用其他方法获得的细胞生长状态相似 ,都可成功构建组织工程皮肤 .结论 :使用9.0× 1 0 3 U·L-1 Dispase可以简便快捷的获得大量生长状态良好的角朊细胞和真皮成纤维细胞 ,以作为皮肤组织工程的种子细胞 ,合适的消化方法、时间和温度可以最大限度保持原代细胞的活力