霍山石斛种内遗传稳定性的RAPD初探

目的 研究霍山石斛荚果内遗传稳定性及荚果间的差异大小。方法 利用从20个随机引物筛选出来的3个稳定性较好的10碱基引物对来自5个不同荚果的霍山石斛种群进行RAPD检测。结果 5个荚果内遗传相似系数较大,在92.5926%-100.00%,其中H1、H9、H10、H14存在一定程度的变异,H23是一个较为稳定的群体;5个荚果间H1、H9、H10、H23的遗传距离较小,H14与其他4个荚果的遗传距离则较大。结论 建立霍山石斛稳定的无性快繁体系是切实可行的,同时说明霍山石斛种内存在一定的变异,H14与其他荚果的差异最大。     

霍山石斛不同生长阶段遗传稳定性的RAPD分析

目的：研究霍山石斛同一蒴果组培不同生长阶段遗传稳定性。方法：利用从20个随机引物筛选的3个稳定性较好的10碱基引物对已继代7～8次的H23种群进行RAPD检测。结果：发现不同阶段内遗传相似系数较大,在85.409 3%～98.360 6%,其中在原球茎、萌芽期和一叶期存在的变异比两叶期、开花期要显著,但程度都极其微弱。结论：来自同一蒴果的变异非常小,建立霍山石斛稳定的无性快繁系是切实可行的。     

半夏遗传多样性的RAPD分析

目的对半夏的遗传多样性、亲缘关系进行研究。方法采用RAPD分子标记技术,使用80个随机引物对其遗传多样性进行了研究。结果半夏物种水平上的多态性比率为88.06%,其中野生半夏(88.06%)比栽培半夏(84.31%)要高。在群体水平上,野生半夏多态位点比率的加权平均值(82.61%)比栽培半夏(84.31%)略低。结论半夏由野生转栽培对其遗传多样性影响不大,各个产地半夏种内遗传差异小;但钟祥野生半夏多态位点数最高,遗传信息最丰富,质量优。     

我国仙茅属植物遗传关系的RAPD分析

目的从分子水平研究我国仙茅属(Curculigo Gaertn.)植物的遗传关系。方法对我国仙茅属植物7个国产种30个单株进行RAPD分析。运用Popgene Version1.31软件计算相关参数,采用UPGMA聚类法进行聚类分析。结果 11个RAPD引物共扩增出157条带,其中有145条呈多态性。我国仙茅属植物的遗传多样性极为丰富,在物种水平上,多态位点百分率(PPB)为92.36%,平均每个位点的有效等位基因数(Ne)为1.493 7,Nei’s基因多样性指数(H)为0.300 1,Shannon’s多样性信息指数Hsp为0.457 7。在种内水平上,PPB=5.09%,Ne=1.036 6,H=0.020 4,种内Shannon’s多样性信息指数(Hpop)为0.029 8。Nei’s基因多样性指数计算的种间遗传分化系数(Gst=0.931 3)与Shannon’s分化系数(0.934 9)基本一致,均说明大部分遗传变异存在于种间。种间基因流(Nm)为0.036 9,说明种间基因流动较少,遗传分化程度较高。两种间的Nei’s遗传一致度(I)的范围为0.520 8～0.823 7。根据Nei’s遗传距离进行UPGMA聚类,基于RAPD分子标记的聚类结果与传统分类一致。结论我国仙茅属植物的遗传多样性十分丰富,且种间的遗传差异大于种内的遗传差异。     

栀子遗传多样性及遗传分化的RAPD分析

 目的应用随机扩增多态性DNA(random amplifed polymorphic DNA,RAPD)标记技术对栀子8个种群遗传多样性和遗传分化进行研究。方法18种随机引物对92个个体进行检测,应用POPGENE软件和AMOVA软件对结果进行处理。结果共得到120个可重复的位点,其中多态位点75个,多态百分率为62.5%。各种群内多态位点百分率在39.17%～68.83%之间,平均为56.98%。河南南阳(POP1)种群最高,其次是江西新干县野生种群(POP7),最低是江西抚州水栀子种群(POP3)。Shannon指数和Nei指数均反映出栀子各种群具有较高的遗传多样性。Shannon指数为0.431 3,各种群Shannon指数在0.2256～0.380 6之间,Nei指数为0.289 2,各种群Nei指数在0.148 2～0.263 0之间。AMOVA揭示种群内遗传多样性占总遗传多样性的76.05%,而种群间遗传多样性只占23.95%。运用POPGENE也得出种群内遗传变异(69.34%)大于种群间(30.66%)的结论。种群间的遗传分化系数为0.306 6。栀子种群间的基因流为1.130 6,遗传相似度平均为0.129 09,遗传距离平均为0.880 72。根据遗传距离聚类分析,河南南阳种群(POP1)与江西樟树新干种群(POP4,POP5,POP6,POP7)聚为一类,湖南种群(POP8)与江西抚州栀子种群(POP2)聚为一类,江西抚州水栀子种群(POP3)与其他各种群间的遗传关系较远。结论目前,虽然野生资源逐年减少以及多年栽培中的品种选育,栀子遗传多样性仍较丰富,且种群内大于种群间,种群间存在较少的遗传分化。     

药用植物华南忍冬居群遗传多样性的RAPD分析

目的:分析药用植物华南忍冬5个居群的遗传多样性和分化程度.方法:应用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术扩增可分析位点.结果:10条随机引物扩增出100个可分析位点,多态位点百分率(PPL)为87.00%.经POPGENE分析发现,华南忍冬居群平均水平的多态位点百分率为58.86%,Nei′s基因多样性(H)为0.2647,Shannon′s信息指数(I)为0.4022,具有较高水平的遗传多样性.居群间遗传分化程度较高(Gst=0.3839);地理距离与遗传距离之间具有显著相关性(r=0.8504,P=96.80%),表明地理隔离效应是导致居群间遗传分化的重要因素.根据遗传距离(POPGENE软件)和遗传相似系数(NTSYS-pc软件)的UPGMA聚类分析,罗浮山居群(LFS)和新兴居群(XX)先聚在一起,再与南宁居群(NN)聚成一类,而徐闻居群(XW)和海口居群(HK)聚成另一类.结论:基于华南忍冬的物种保护与资源利用,建议加强现有自然居群的就地保护,促进居群的自然更新;建立种质资源库,从中选育优良品系用于药材的规范化种植.     

远志种质资源遗传多样性随机扩增多态性DNA分析

目的 用随机扩增多态性DNA(RAPD)技术分析远志Polygala tenuifolia Willd.及卵叶远志P.sibirica L.的遗传多样性.方法 反应总体积25 μl,内含10×PCR buffer 2.5 μl,dNTPs 2.0 μl,MgCl2 2.0 μl,引物1.0 μl,模板2 ng,Taq酶0.3 μl.扩增程序为:94℃预变性4 min,然后进行45循环:94℃变性15 s,36℃复性1 min,72℃延伸1.3 min,循环结束后72℃延伸4 min.结果 10个引物共检测到154个位点,平均每个引物扩增9.24条带,其中148条带表现为多态性,占总带数的94.3%;距离系数为24时,11个样品明显聚为远志居群和卵叶远志居群两类.结论 远志与卵叶远志具有丰富的遗传多样性,遗传聚类与其地理分布有一定的相关性.     

利用随机扩增多态性DNA技术分析刺五加的遗传多样性

目的从DNA水平对收集的4个产地的刺五加进行遗传多样性分析，为更好地开发利用刺五加资源奠定基础。方法随机扩增多态性DNA（RAPD）技术分析遗传多样性，UPGMA进行聚类分析。结果10个随机引物扩增得到72条片段，多态性位点比率为88．89％。不同产地间的遗传相似系数在0．4693—0．7851之间，均值为0．6293，同一产地不同居群间的遗传相似系数在0.5630-0.9542之间，均值为0.7644。不同产地刺五加之间的遗传多样性高于同一产地不同居群的个体，其中产地穆棱的刺五加与产地和龙、本溪、尚志之间的相似性较低，单成一支。产地之间的相似性与地理距离呈不完全相关性。结论刺五加种群内部具有较高的遗传多样性，利用RAPD技术分析刺五加的遗传多样性是可行的。     

将西洋参 DNA导入大豆实现遗传转化的研究Ⅰ.导入后代形态性状变异的分析

用西洋参作ＤＮＡ的供体,用栽培大豆品种作为受体分子育种导入技术之一的“浸种法”进行外源ＤＮＡ导入,试衅在继续保持大豆营养价值和具有的医疗保健作用的前提下,提高其已用的药用成分的含是和导入新的药用成分。培育出具更高药用价值或保健作用的栽培大豆新材料和新品系。目前导入后代在形态、品质和药物成分含量等性状方面产生了广泛的变异。本文报道了导入后代形态上的差异。     

基于RAPD的青天葵遗传多样性及鉴别研究

目的 建立及优化青天葵样品总DNA的提取方法及RAPD反应,探讨不同品种的青天葵及其替代品、伪品在DNA分子水平上的遗传多样性及其遗传关系.方法 使用高盐低pH值法提取总DNA,采用随机扩增多态性DNA,从49条随机引物中筛选能扩出清晰条带的引物,对22个青天葵样品及伪品进行RAPD分析.用统计分析软件对扩增出的条带进行聚类分析,以Shonnon's指数和Nei's指数对青天葵遗传多样性进行估算.结果 高盐低pH值法提取的新鲜样品纯度高,药材纯度低,但都能用于RAPD.选取能扩增出清晰条带的19条引物,把鲜品与干品分别聚类分析.干药材中小叶与中叶距离较近,与大叶及毛叶距离远.新鲜叶片中三种青天葵为一类,青天葵与其组培品、毛叶与红薯叶距离稍远,与车前草、积雪草距离最远.青天葵种群遗传多样性Shonnon's指数为0.463,Nei's指数为0.267,种群内遗传多样性较高,基因流为0.94.结论 不同品种青天葵间及伪品在分子水平上存在差异,可用此方法鉴别青天葵.青天葵的遗传多样性大多是由地理环境造成的.     

不同产地西洋参种质遗传多样性的RAPD和ISSR分析

目的采用RAPD和ISSR分子标记技术对我国10个产地的西洋参Panax quinquefolium的遗传多样性进行分析。方法以人参及加拿大西洋参为对照,采用CTAB法提取基因组DNA,选取13个RAPD随机引物及12个ISSR引物对样品进行PCR扩增,根据条带数目,应用NTSYS-pc2.10e软件采用UPGMA方法进行聚类分析。结果 13条RAPD引物共扩增出97条清晰条带,多态性条带81,多态性百分率为85.51%;12条ISSR引物共扩增出99条清晰条带,多态性条带64,多态性百分率为64.65%;通过聚类分析,RAPD及RAPD+ISSR综合将样品聚为4大类;ISSR将样品聚为2大类。结论 RAPD和ISSR标记构建的样品聚类树状图在分类上稍有差异,但总体趋势一致。人参与西洋参被明显区分开来;在ISSR上,吉林兴参镇与北岗镇西洋参与人参聚为一大类;在生长环境及种植条件影响下,东北部分产地西洋参与加拿大西洋参相比在遗传多样性上有所改变。     

人参、西洋参化感作用研究进展

人参、西洋参忌连作,作者报道近年来国内外从化感作用角度研究人参和西洋参的连作障碍问题。综述了人参、西洋参化感作用的最新研究进展,从化感物质的收集提取到其对人参、西洋参种子萌发,幼苗生长和抗氧化酶活性及病原菌和愈伤组织的影响等方面综合分析了人参、西洋参中的化感作用,认为化感作用是人参、西洋参连作障碍的主要影响因子之一。并在此基础上指出人参、西洋参化感作用研究中存在的主要问题:研究成分是混合物,具体起作用的成分和物质尚不明确;以单个化感物质为研究而忽视了化感物质间的相互作用。今后应深入开展人参和西洋参特有的化感物质及化感物质间相互作用的研究,以及人参、西洋参化感物质与环境影响因子的互作关系,特别是化感物质在土壤中的迁移和转化等环境化学行为,化感物质与土壤微生物的相互关系及共同对人参和西洋参生长的影响。     

基于人参皂苷含量的西洋参等级规格标准研究

目的：分析不同产地、不同等级规格西洋参中人参皂苷的含量,评价西洋参的化学信息,为其行业标准的制定提供实验依据。方法：采用UPLC测定主要活性成分人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Rg2含量,用SPSS16.0软件进行统计分析。结果：建立了不同产地西洋参样品人参皂苷分布特征图谱;西洋参中Rg1、Re、Rb1的含量之和符合《中国药典》标准;方差分析表明产地、长度对同一个规格的西洋参中人参皂苷的含量影响具有统计学意义（P〈0.01）。结论：由于西洋参中人参皂苷含量受产地、长度、重量等多因素影响,在等级规格评价中,符合《中国药典》标准基础上不宜采用人参皂苷含量为指标进行等级规格划分。     

人参选育品系的遗传变异研究

 目的通过对不同品系人参之间的遗传变异进行分析,为人参育种提供依据。方法采用随机引物扩增多态性DNA(RAPD)方法,对经过系统选育优选出的3个人参品系32个样本进行遗传多样性及遗传变异分析。结果21个随机引物共检测出170条扩增片段,其中多态性片段57条,占总扩增数的33.53%。由Nei’s和Shannon’s指数估算各品系间的遗传分化已较明显,分别占总变异的44.62%和43.04%。聚类分析结果显示各品系人参已纯化的较好,都先分别聚类后再与其他样品聚在一起。结论首次用RAPD方法在分子水平上对人参品系间和品系内的遗传变异性进行研究,证明采用系统选择的方法对人参进行培育是有效可行的。     

基于细胞凋亡表达的生晒参、红参和西洋参四性研究展望

中药四性的研究一直是困扰中医药界的热点和难点问题,迄今未取得实质性的进展,严重影响了中医药现代化的进程.把细胞凋亡学应用于中药四性的研究,定性定量刻画中药四性的生物学效应与细胞凋亡的关系.从细胞分子水平建立一个中药四性的模式识别系统,将成为衡量中药四性的一个新突破.结合国内外大量文献研究和本课题组的研究基础,对中药四性的发展和定位提出新的观点和思路,对中药四性的研究进行评述和前瞻性分析.     

营养元素缺乏对西洋参生长及皂苷积累的影响

矿质营养元素是维持西洋参正常生长和保证其品质的关键因素,为了解不同营养元素缺乏对西洋参的综合影响,以二年生西洋参为材料,采用温室砂培试验,设置Hoagland全营养对照和10种营养元素缺乏处理,观察缺素症状,测定株高、叶面积、生物量、光合指标、根系活力、人参皂苷含量。结果表明,缺氮、钾、铁可导致西洋参叶片明显失绿黄化;缺氮、钾、钙、镁和硼是导致株高和叶面积下降的主要因子;所有缺素处理西洋参的生物量均显著下降(P<0.05),其中缺氮、钾、钙、铁下降最多,全株生物量低于全营养对照的50%以上。氮、钾、铁缺乏是导致西洋参净光合速率、气孔导度、胞间二氧化碳浓度、蒸腾速率、叶绿素含量下降的主要因子;氮、钾、钙缺乏是降低根系活力的前3位因子;不同营养元素缺乏对西洋参6种单体皂苷的影响有差异,综合来看,氮、磷、硼、锌、铜缺乏对皂苷的合成影响最大。以上研究结果有助于明确西洋参对不同营养元素的需求特性,对栽培生产中缺素诊断、肥料合理使用、提高产量和质量具有重要意义。     

不同贮藏处理对西洋参鲜根品质及成分的影响

目的:研究2种贮藏方法对西洋参鲜根品质及成分的影响.方法:选择无病健康的四年生西洋参鲜根,分别采用砂藏(处理A)和"清洗+保鲜剂+保鲜袋"(处理B)2种方式进行保鲜贮藏至180 d,每隔45 d随机取样1次,调查参根发病率和病情指数,测定人参皂苷、粗多糖以及游离氨基酸的含量.结果:贮藏45 d内,B处理的参根没有发病,优于A处理;贮藏至180d时,则以A处理的效果更好,发病率和病情指数均低于B处理.2种贮藏方式下,人参皂苷、粗多糖和游离氨基酸含量均存在明显差异.在整个贮藏过程中,A处理的西洋参中人参皂苷含量一直保持较高,粗多糖和游离氨基酸含量在135 d贮藏期内变化平缓,至180 d时有较明显的上升;而B处理的西洋参中粗多糖含量在贮藏90 d后明显下降,至135 d后基本保持稳定,游离氨基酸含量呈类似变化趋势,但下降不明显.结论:总体看来,在180 d贮藏期间,A处理更有利于保持西洋参鲜根的品质.     

不同年份林下山参叶中皂苷类成分含量变化研究

目的:分析不同年份林下山参叶中多个人参皂苷类成分的含量,考察年份对人参皂苷类成分含量的影响.方法:采用Acquity UPLC BEH Shield RP18(2.1 mm×100 mm,1.7 μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.05％甲酸溶液梯度洗脱;检测波长203 nm.结果:建立了同时测定13个人参皂苷类成分的含量的UPLC分析方法,分析了5～17年份林下山参叶中人参皂苷类成分的含量,皂苷含量随年份有波动,14年份各皂苷类成分含量均处于较高水平.结论:建立的分析方法,简便,准确,可靠,可以作为同时测定人参类药材中多种皂苷含量的方法及指纹图谱研究方法;研究结果为林下山参叶人参皂苷类成分的积累和林下参资源的利用提供了可靠的基础.