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1.
背景与目的:目前认为子宫内膜癌的发生可能与无拮抗的雌激素长期作用有关,但雌激素如何调节细胞增殖的作用机制尚不清楚。AKT信号转导通路是细胞生存和增殖的一个重要调节信号。本研究探讨在子宫内膜癌细胞HEC-1A中,雌二醇能否通过激活AKT通路产生细胞因子,以及其对细胞增殖能力的影响。方法:蛋白质印迹法(Western blot)技术检测雌二醇作用HEC-1A细胞后AKT活化情况,以及AKT抑制剂、ER抑制剂对AKT活化的影响。荧光定量PCR及ELISA技术检测雌二醇(E2组)作用于HEC-1A细胞30 min后;或雌激素受体抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)分别预处理细胞1 h后再加入雌二醇作用30 min后,细胞内血管内皮生长因子受体(VEGF)、bFGF、IL-8基因mRNA表达及细胞培养上清液中蛋白表达。细胞集落形成实验、流式细胞仪检测细胞周期的变化,CFSE法检测细胞增殖能力。结果:E2组的AKT活化比值较对照组显著升高(P=0.006 2),ER组和AKT组的AKT活性比值较E2组显著降低(P=0.006 0和P=0.006 4),但不能完全抑制雌二醇作用。E2组的VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显高于对照组(P均<0.01);在ER组及AKT组中VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显低于E2组(P均<0.05);雌二醇作用HEC-1A细胞后,细胞增殖数明显增多,细胞周期加快(P均<0.01)。结论:在HEC-1A细胞,雌二醇可能通过激活AKT信号通路产生VEGF、bFGF、IL-8因子,从而增强肿瘤细胞的增殖能力。 相似文献
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目的 探讨雌激素是否能激活MAPK信号转导通路,以及对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响。方法 培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,按药物干预分为3组:雌二醇(E2)组、U0126(MAPK激酶抑制剂)+E2组、对照组。采用荧光定量PCR技术检测各组MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达的变化;Western blot法检测各组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的活化程度;流式细胞仪检测各组的细胞周期比例;细胞集落形成实验检测各组细胞的增殖能力;体外穿膜实验比较各组细胞的迁移能力。结果 E2组MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达增加(P=0.025, P=0.002),U0126+E2组中,U0126能阻断E2诱导MEK1/2、ERK1/2 mRNA的表达上调(P=0.000, P=0.000)。E2组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平升高(P=0.049, P=0.028);U0126+E2组中,U0126能阻断E2诱导的p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化(P=0.018, P=0.003)。E2组G1期细胞比例显著低于对照组及U0126+E2组(P=0.017),集落形成率显著高于对照组及U0126+E2组(P=0.009),穿过微孔的细胞数显著多于对照组及U0126+E2组(P=0.000)。结论 雌二醇通过激活MAPK通路,促进子宫内膜癌的发展,MEK抑制剂能阻断并抑制这一作用。 相似文献
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我们采用体外实验方法 ,探讨雌激素 (ER)与抗雌激素制剂 (三苯氧胺 )对子宫内膜癌细胞化疗效应的影响。一、材料与方法1 材料 :ER( )RL 95 2子宫内膜癌细胞株由上海医科大学妇产科医院提供 ,其胞浆与胞核雌激素受体阳性。 17 β E2 、三苯氧胺、阿霉素为美国Sigma公司产品 ,细胞凋亡ELISA检测试剂盒为德国BoenringerMannheim公司产品。2 方法 :阿霉素溶于 0 .9%生理盐水 ,配制成 10 -4 mol/L原液。培养细胞株分为对照组与实验组 ,实验组加入 17 β E2 或三苯氧胺 ,使其终浓度分别为 10 -12 ,10 -1… 相似文献
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目的:探讨siRNA干扰PTX3基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响。方法:实时荧光定量PCR法检测子宫内膜癌组织中PTX3基因的表达。MTT法检测人子宫内膜癌RL95-2细胞增殖能力。流式细胞术检测RL95-2细胞周期分布。Western blot检测RL95-2细胞PTX3、p-AKT和AKT蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,PTX3基因在子宫内膜癌患者组织中高表达。siRNA干扰PTX3基因抑制人子宫内膜癌RL95-2细胞增殖能力。下调PTX3基因阻断人子宫内膜癌RL95-2细胞周期G1/S期进程。siRNA干扰PTX3基因降低人子宫内膜癌RL95-2细胞p-AKT/AKT水平。结论:PTX3能够促进人子宫内膜癌细胞增殖,且这种促进作用可能与其调控AKT通路的活化有关。 相似文献
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目的探讨雌激素诱导子宫内膜癌细胞HEC-1A血管因子生成的机制,阐述雌激素在子宫内膜癌发生中的作用。方法以雌激素(E2组)作用于HEC-1A细胞30min,雌激素受体抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)、NF-κB抑制剂(NF-κB组)分别预处理HEC-1A细胞1h,各加入雌激素作用30min后;采用qRT-PCR检测各组细胞内血管因子mRNA表达,Westernblot检测血管因子蛋白的表达情况。结果 E2组的血管因子mRNA及蛋白的表达均明显高于对照组(P〈0.05);ER组、AKT组及NF-κB组的血管因子mRNA和蛋白的表达均明显低于E2组(P〈0.05)。结论雌激素在子宫内膜癌HEC-1A细胞中起到信号传导的作用,可调节血管生成因子的表达,参与子宫内膜癌发生、发展的过程。 相似文献
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本文用亲和酶标法检测32例子宫内膜腺癌组织的ER和PR,ER阳性率62.5%,PR阳性率71.8%。发现ER、PR阳性率与组织学分化程度密切相关(P值均<0.025),而ER、PR与临床分期及肌层浸润之间当分化程度相同时未发现明确关系(P>0.025)。电镜观察发现PR(-)者超微结构特征上有较多的恶性特征。与DCC法对照,总符合率达92.5%和95.8%,且特异性检测发现酶标法是一种专一性较强的检测技术。 相似文献
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目的:探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法:透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II(microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II) 的荧光聚集情况。采用Westerblot检测mTOR通路中的PI3K、AKT及mTOR蛋白的表达。结果:顺铂(20μg/mL)能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组(P<0.05);与对照组(20μg/mL-0h组)相比较,自噬相关蛋白-LC3的表达随着时间延长表达增加(P<0.05)。磷酸化AKT1、磷酸化mTOR及PI3Kp85蛋白表达水平随着时间延长表达下降。胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factors-1,IGF-1)与顺铂共培养组自噬小体及LC3蛋白表达少于顺铂组,但高于对照组。结论:顺铂可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而诱导子宫内膜癌细胞发生自噬。 相似文献
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背景与目的 观察胰岛素对子宫内膜癌细胞ERK信号通路的活化,并探讨ERK信号通路对Cyclin D1mRNA、蛋白水平的影响及该通路在细胞增殖调节中的作用.方法 将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、10-6mol/L胰岛素单独刺激组以及不同剂量MEK抑制剂PD98059预处理后再用胰岛素刺激组.Western blot检测各组ERK磷酸化(P-ERX)及Cyclin D1蛋白水平.RT-PCR检测Cyclin D1 mRNA水平,MTT试验观察细胞增殖情况.结果 胰岛素可引起子宫内膜癌细胞ERK活化,刺激30 min后P-ERK/ERK比值显著高于空白对照组(65.419% vs22.45%,P<0.001),胰岛素可促进子宫内膜癌细胞Cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达,分别刺激12h、24h后Cyclin D1mRNA转录和蛋白表达水平显著高于空白对照组(分别为84.62% vs 18.55%;74.04% vs 32.91%,均P<0.001),PD98059以浓度依赖方式抑制胰岛素引起的ERK磷酸化、mRNA转录和蛋白表达水平.MTT试验显示,在药物处理24 h,48 h和72 h 3个时间点,不同组570 nm吸光度值(OD570)均有显著差异(F=204.160;33.850;90.764,均P<0.001).胰岛素组OD570值均高于同时间点的空白对照组(均P<0.001),PD98059可抑制胰岛素的增殖促进作用,且具有浓度依赖性.结论 胰岛素可以经由ERK(途径促进Cydin D1 nRNA车专录和蛋白表达,并进一步促进细胞增殖. 相似文献
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肿瘤干细胞是一类具有自我更新分化能力,在移植动物宿主中具有致瘤性且对放化疗抵抗的细胞小亚群,是肿瘤复发转移的主要原因。Notch信号通路在进化中高度保守,具有调控细胞增殖、分化和凋亡的功能,且在维持肿瘤干细胞的干细胞特性方面发挥重要作用,在干细胞中与多个信号通路存在交互作用。通过抑制Notch信号通路靶向作用肿瘤干细胞的治疗策略已进入临床试验阶段,具有广阔的发展前景。全文就Notch信号通路在肿瘤干细胞中的作用及其与Wnt、TGF-β、Her-2信号通路的交互作用进行阐述与分析。 相似文献
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摘 要:[目的] 探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用,并进一步探讨其机制。[方法] 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平,Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化,用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡,并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。[结果] 与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比,乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高(P<0.001),PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低(P<0.001),而p-AKT蛋白表达水平明显升高(P<0.001)。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖(P<0.001),并促进其凋亡的发生(P<0.001),降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平(P<0.001)的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9(P<0.001)。miR-374a 通过靶点PTEN影响AKT通路,miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低(P<0.001),而miR-374a抑制剂处理后,PTEN蛋白水平显著性升高(P<0.001),p-AKT表达降低(P<0.001)。[结论] miR-374a在乳腺癌细胞高表达,并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖,促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。 相似文献
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[目的]探讨莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。[方法]以不同浓度(0、12.5、25、50、100μg/ml)莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞周期凋亡分布,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化,逆转录聚合酶链反应法检测细胞酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)信使核糖核酸相对表达量,蛋白印迹法检测细胞磷酸化JAK2(P-JAK2)、磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白相对表达量。[结果]莪术醇对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用,且抑制率随药物作用时间及作用浓度的增加而上升。随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡率也有所上升[(4.27%±0.82%)、(4.54%±1.21%)、(19.32%±1.87%)、(29.58%±2.92%)、(33.74%±3.91%)、(42.94%±2.81%)]。细胞周期结果显示,莪术醇可将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞增殖。Western blot结果显示,莪术醇可抑制JAK2、STAT3磷酸化的表达,而RT-PCR结果显示,莪术醇作用细胞后,JAK2、STAT3 mRNA表达受到明显抑制。[结论]莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞G0/G1期,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过JAK2/STAT3信号通路来实现。 相似文献
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目的:观察应用PI3K抑制剂2- (4-吗啉基) -8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮 (LY294002) 对胃腺癌细胞株SGC-7901中磷脂酰肌酸3-激酶 (PI3K) /丝氨酸苏氨酸激酶 (AKT) 信号通路的变化以及由此产生的细胞生长、 侵袭及凋亡等方面的影响。方法: 应用LY294002作用于胃腺癌细胞株SGC-7901, 通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质P-AKT、 基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)、 基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 (Bcl-2)、 细胞周期素 (CyclinD1) 的表达情况。噻唑蓝比色法 (MTT) 和流式细胞法及Transwell等实验评价胃腺癌细胞增殖、 侵袭、 凋亡等变化。结果: 与空白对照组和DMSO组相比,LY294002组能有效抑制P-AKT、 MMP-2、 MMP-9、 Bcl-2及CyclinD1蛋白的表达。LY294002组自第2天起生存率明显下降 (P<0.05)。Transwell穿过细胞数结果分别为空白对照组 (81.0±2.65)、 DMSO组 (81.3±1.52)、 LY294002组 (44.6±2.52), 3组相比较差异具有统计学意义 (F=255.1, P=0.000)。LY294002组细胞周期被阻滞在G0/G1期, S期减(P<0.05), 早期凋亡的细胞数明显增多(F=149.66, P=0.000)。结论: LY294002是一种对PI3K/AKT信号传导通路具有抑制作用的抑制剂, 靶向PI3K的LY294002可以有效抑制胃腺癌SGC-7901细胞的PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质的表达, 在体外显著抑制细胞的增殖、 侵袭, 并促进细胞的凋亡, 因此为临床肿瘤防治提供了新思路, 针对信号传导通路的靶向治疗有望成为肿瘤治疗的新途径。 相似文献
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摘 要:[目的] 探讨抑制Notch1信号通路对乳腺癌肿瘤细胞放疗敏感性的影响及机制。[方法] Western blot检测人乳腺癌MCF-7细胞中加入5、10、20μmol/L的Notch1信号通路抑制剂γ分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitor,GSI)后Notch1、Hes1蛋白表达;克隆形成实验检测细胞经GSI和照射处理后增殖情况;后续实验分为对照组、GSI组和GSI+8Gy组,48h后CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、Cleaved caspase3蛋白表达。[结果] 随着GSI的浓度增高,Notch1和Hes1蛋白表达随之降低(P<0.05),且呈剂量依赖性关系。GSI与照射同时处理细胞较单纯用照射有较高的增敏比。GSI组和GSI+8Gy组细胞吸光值均显著性低于对照组(P<0.05),而GSI+8Gy组吸光值显著性低于GSI组(P<0.05),除对照组,GSI组和GSI+8Gy组随着处理时间的延长均明显降低(P<0.05),呈时间依赖性关系。GSI组和GSI+8Gy组细胞凋亡率均显著性高于对照组,GSI+8Gy组细胞凋亡率显著性高于GSI组(P<0.01)。GSI组和GSI+8Gy组Ki67蛋白表达显著性低于对照组(P<0.05),Cleaved caspase3蛋白表达显著性高于对照组(P<0.05),GSI+8Gy组Ki67蛋白表达显著性低于GSI组,Cleaved caspase3蛋白表达显著性高于GSI组(P<0.05)。[结论] 抑制Notch1信号通路可增强乳腺癌的放疗敏感性。 相似文献
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目的 研究雌、孕激素对子宫内膜癌HHUA细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法 用TRAP ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测雌、孕激素作用前后HHUA子宫内膜腺癌细胞系端粒酶活性及hTERT RNA的表达 ,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化。结果 雌激素对HHUA细胞端粒酶活性和hTERT的表达有明显增强作用 (P <0 .0 5 ) ,而孕激素对其影响不显著。孕激素作用下 ,G1期细胞比例明显增高 ,S期及G2 ~M期细胞比例明显降低 (P <0 .0 5 ) ;细胞的分裂、增殖受到明显抑制 ;凋亡细胞比例明显增加。雌激素的作用则相反。结论 雌激素能增强子宫内膜癌细胞端粒酶活性和hTERT的表达 ,促进其分裂和增殖 ,降低凋亡细胞比例 ,孕激素的作用相反 相似文献