雌激素通过激活AKT通路产生的细胞因子增强子宫内膜癌细胞增殖能力

背景与目的：目前认为子宫内膜癌的发生可能与无拮抗的雌激素长期作用有关,但雌激素如何调节细胞增殖的作用机制尚不清楚。AKT信号转导通路是细胞生存和增殖的一个重要调节信号。本研究探讨在子宫内膜癌细胞HEC-1A中,雌二醇能否通过激活AKT通路产生细胞因子,以及其对细胞增殖能力的影响。方法：蛋白质印迹法(Western blot)技术检测雌二醇作用HEC-1A细胞后AKT活化情况,以及AKT抑制剂、ER抑制剂对AKT活化的影响。荧光定量PCR及ELISA技术检测雌二醇(E2组)作用于HEC-1A细胞30 min后;或雌激素受体抑制剂(ER组)、AKT抑制剂(AKT组)分别预处理细胞1 h后再加入雌二醇作用30 min后,细胞内血管内皮生长因子受体(VEGF)、bFGF、IL-8基因mRNA表达及细胞培养上清液中蛋白表达。细胞集落形成实验、流式细胞仪检测细胞周期的变化,CFSE法检测细胞增殖能力。结果：E₂组的AKT活化比值较对照组显著升高(P=0.006 2),ER组和AKT组的AKT活性比值较E2组显著降低(P=0.006 0和P=0.006 4),但不能完全抑制雌二醇作用。E₂组的VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显高于对照组(P均<0.01);在ER组及AKT组中VEGF、bFGF、IL-8 mRNA或蛋白的表达均明显低于E2组(P均<0.05);雌二醇作用HEC-1A细胞后,细胞增殖数明显增多,细胞周期加快(P均<0.01)。结论：在HEC-1A细胞,雌二醇可能通过激活AKT信号通路产生VEGF、bFGF、IL-8因子,从而增强肿瘤细胞的增殖能力。     

雌二醇对子宫内膜癌Ishikawa细胞MAPK通路的激活及对增殖的影响

目的 探讨雌激素是否能激活MAPK信号转导通路,以及对子宫内膜癌细胞增殖能力的影响。方法 培养子宫内膜癌Ishikawa细胞,按药物干预分为3组：雌二醇（E₂）组、U0126（MAPK激酶抑制剂）+E₂组、对照组。采用荧光定量PCR技术检测各组MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达的变化;Western blot法检测各组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白的活化程度;流式细胞仪检测各组的细胞周期比例;细胞集落形成实验检测各组细胞的增殖能力;体外穿膜实验比较各组细胞的迁移能力。结果 E2组MEK1/2、ERK1/2 mRNA表达增加（P=0.025, P=0.002）,U0126+E2组中,U0126能阻断E2诱导MEK1/2、ERK1/2 mRNA的表达上调（P=0.000, P=0.000）。E2组p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化水平升高（P=0.049, P=0.028);U0126+E2组中,U0126能阻断E2诱导的p-MEK1/2、p-ERK1/2蛋白活化（P=0.018, P=0.003）。E2组G₁期细胞比例显著低于对照组及U0126+E₂组（P=0.017）,集落形成率显著高于对照组及U0126+E₂组（P=0.009）,穿过微孔的细胞数显著多于对照组及U0126+E₂组（P=0.000）。结论 雌二醇通过激活MAPK通路,促进子宫内膜癌的发展,MEK抑制剂能阻断并抑制这一作用。     

子宫内膜癌微环境中间质细胞相关信号通路的研究进展

和子宫内膜癌上皮细胞相似，肿瘤微环境中主要细胞的间质细胞也表达雌激素受体（ER），同样也受到雌激素的调控。在雌激素和抑癌基因的作用下，间质细胞与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移等密切相关。间质细胞相关信号通路的研究，为探索雌、孕激素失衡的发病机制、肿瘤复发和化疗耐药等机制提供新的依据。     

雌激素与抗雌激素制剂对子宫内膜癌细胞化疗效应的影响

我们采用体外实验方法 ,探讨雌激素 (ＥＲ)与抗雌激素制剂 (三苯氧胺 )对子宫内膜癌细胞化疗效应的影响。一、材料与方法1 材料 :ＥＲ( )ＲＬ 95 2子宫内膜癌细胞株由上海医科大学妇产科医院提供 ,其胞浆与胞核雌激素受体阳性。 17 β Ｅ2 、三苯氧胺、阿霉素为美国Ｓｉｇｍａ公司产品 ,细胞凋亡ＥＬＩＳＡ检测试剂盒为德国ＢｏｅｎｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈｅｉｍ公司产品。2 方法 :阿霉素溶于 0 .9%生理盐水 ,配制成 10 -4 ｍｏｌ/Ｌ原液。培养细胞株分为对照组与实验组 ,实验组加入 17 β Ｅ2 或三苯氧胺 ,使其终浓度分别为 10 -12 ,10 -1…     

siRNA干扰PTX3基因对子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的:探讨siRNA干扰PTX3基因在子宫内膜癌组织中的表达及其对子宫内膜癌细胞增殖的影响。方法:实时荧光定量PCR法检测子宫内膜癌组织中PTX3基因的表达。MTT法检测人子宫内膜癌RL95-2细胞增殖能力。流式细胞术检测RL95-2细胞周期分布。Western blot检测RL95-2细胞PTX3、p-AKT和AKT蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,PTX3基因在子宫内膜癌患者组织中高表达。siRNA干扰PTX3基因抑制人子宫内膜癌RL95-2细胞增殖能力。下调PTX3基因阻断人子宫内膜癌RL95-2细胞周期G1/S期进程。siRNA干扰PTX3基因降低人子宫内膜癌RL95-2细胞p-AKT/AKT水平。结论:PTX3能够促进人子宫内膜癌细胞增殖,且这种促进作用可能与其调控AKT通路的活化有关。     

雌激素诱导子宫内膜癌细胞血管因子生成的作用

目的探讨雌激素诱导子宫内膜癌细胞HEC-1A血管因子生成的机制,阐述雌激素在子宫内膜癌发生中的作用。方法以雌激素（E2组）作用于HEC-1A细胞30min,雌激素受体抑制剂（ER组）、AKT抑制剂（AKT组）、NF-κB抑制剂（NF-κB组）分别预处理HEC-1A细胞1h,各加入雌激素作用30min后;采用qRT-PCR检测各组细胞内血管因子mRNA表达,Westernblot检测血管因子蛋白的表达情况。结果 E2组的血管因子mRNA及蛋白的表达均明显高于对照组（P〈0.05）;ER组、AKT组及NF-κB组的血管因子mRNA和蛋白的表达均明显低于E2组（P〈0.05）。结论雌激素在子宫内膜癌HEC-1A细胞中起到信号传导的作用,可调节血管生成因子的表达,参与子宫内膜癌发生、发展的过程。     

子宫内膜癌组织的雌激素,孕激素受体检测

本文用亲和酶标法检测32例子宫内膜腺癌组织的ER和PR,ER阳性率62.5％,PR阳性率71.8％。发现ER、PR阳性率与组织学分化程度密切相关(P值均<0.025),而ER、PR与临床分期及肌层浸润之间当分化程度相同时未发现明确关系(P>0.025)。电镜观察发现PR(-)者超微结构特征上有较多的恶性特征。与DCC法对照,总符合率达92.5％和95.8％,且特异性检测发现酶标法是一种专一性较强的检测技术。     

顺铂通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬

目的：探讨顺铂对子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的影响,并初步探讨PI3K/AKT/mTOR信号通路在其中的作用。方法：透射电镜观察自噬泡形成,免疫荧光检测微管相关蛋白1轻链3融合蛋白II（microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II） 的荧光聚集情况。采用Westerblot检测mTOR通路中的PI3K、AKT及mTOR蛋白的表达。结果：顺铂（20μg/mL）能诱导Ishikawa细胞发生自噬,其中24h组明显高于12h组（P<0.05）;与对照组（20μg/mL-0h组）相比较,自噬相关蛋白-LC3的表达随着时间延长表达增加（P<0.05）。磷酸化AKT1、磷酸化mTOR及PI3Kp85蛋白表达水平随着时间延长表达下降。胰岛素样生长因子-1（insulin-like growth factors-1,IGF-1）与顺铂共培养组自噬小体及LC3蛋白表达少于顺铂组,但高于对照组。结论：顺铂可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路,从而诱导子宫内膜癌细胞发生自噬。     

ERK途径在胰岛素促进子宫内膜癌细胞增殖中的作用

背景与目的 观察胰岛素对子宫内膜癌细胞ERK信号通路的活化,并探讨ERK信号通路对Cyclin D1mRNA、蛋白水平的影响及该通路在细胞增殖调节中的作用.方法 将无血清饥饿的子宫内膜癌Ishikawa3-H-12细胞分为空白对照组、10-6mol/L胰岛素单独刺激组以及不同剂量MEK抑制剂PD98059预处理后再用胰岛素刺激组.Western blot检测各组ERK磷酸化(P-ERX)及Cyclin D1蛋白水平.RT-PCR检测Cyclin D1 mRNA水平,MTT试验观察细胞增殖情况.结果 胰岛素可引起子宫内膜癌细胞ERK活化,刺激30 min后P-ERK/ERK比值显著高于空白对照组(65.419% vs22.45%,P<0.001),胰岛素可促进子宫内膜癌细胞Cyclin D1 mRNA转录和蛋白表达,分别刺激12h、24h后Cyclin D1mRNA转录和蛋白表达水平显著高于空白对照组(分别为84.62% vs 18.55%;74.04% vs 32.91%,均P<0.001),PD98059以浓度依赖方式抑制胰岛素引起的ERK磷酸化、mRNA转录和蛋白表达水平.MTT试验显示,在药物处理24 h,48 h和72 h 3个时间点,不同组570 nm吸光度值(OD570)均有显著差异(F=204.160;33.850;90.764,均P<0.001).胰岛素组OD570值均高于同时间点的空白对照组(均P<0.001),PD98059可抑制胰岛素的增殖促进作用,且具有浓度依赖性.结论 胰岛素可以经由ERK(途径促进Cydin D1 nRNA车专录和蛋白表达,并进一步促进细胞增殖.     

Notch信号通路在肿瘤干细胞中的研究进展

肿瘤干细胞是一类具有自我更新分化能力,在移植动物宿主中具有致瘤性且对放化疗抵抗的细胞小亚群,是肿瘤复发转移的主要原因。Notch信号通路在进化中高度保守,具有调控细胞增殖、分化和凋亡的功能,且在维持肿瘤干细胞的干细胞特性方面发挥重要作用,在干细胞中与多个信号通路存在交互作用。通过抑制Notch信号通路靶向作用肿瘤干细胞的治疗策略已进入临床试验阶段,具有广阔的发展前景。全文就Notch信号通路在肿瘤干细胞中的作用及其与Wnt、TGF-β、Her-2信号通路的交互作用进行阐述与分析。     

MiR-374a通过PTEN/AKT信号通路调节乳腺癌细胞的增殖和凋亡

摘 要：［目的］ 探讨miR-374a在乳腺癌细胞增殖和凋亡中的作用，并进一步探讨其机制。［方法］ 采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测人乳腺癌细胞MCF-7及正常人乳腺细胞Hs 578Bst的miR-374a及PTEN mRNA转录水平，Western blot法测定MCF-7、Hs 578Bst组细胞及对照、 miR-374a抑制剂组细胞的PTEN、p-AKT蛋白表达变化，用CCK-8法及Tunel法分别观察对照组和miR-374a抑制剂组细胞的增殖和凋亡，并用Western blot法检测两组细胞的凋亡相关蛋白Bcl-2、Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9表达。［结果］ 与人正常乳腺Hs 578Bst细胞相比，乳腺癌MCF-7细胞的miR-374a表达水平显著性增高（P<0.001），PTEN mRNA及蛋白的表达水平显著性降低（P<0.001），而p-AKT蛋白表达水平明显升高（P<0.001）。miR-374a抑制剂可抑制乳腺癌细胞的增殖（P<0.001），并促进其凋亡的发生（P<0.001），降低抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平（P<0.001）的同时活化凋亡相关蛋白Caspase-3和Caspase-9（P<0.001）。miR-374a 通过靶点PTEN影响AKT通路，miR-374a组细胞PTEN mRNA表达水平显著性降低（P<0.001），而miR-374a抑制剂处理后，PTEN蛋白水平显著性升高（P<0.001），p-AKT表达降低（P<0.001）。［结论］ miR-374a在乳腺癌细胞高表达，并通过调节PTEN/AKT信号通路抑制乳腺癌细胞的增殖，促进凋亡的发生。miR-374a/PTEN/AKT信号通路有望成为乳腺癌的新治疗靶点。     

莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响

[目的]探讨莪术醇对乳腺癌细胞增殖凋亡及JAK2/STAT3信号通路的影响。[方法]以不同浓度(0、12.5、25、50、100μg/ml)莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞,MTT法检测MCF-7细胞增殖抑制率,流式细胞术观察细胞周期凋亡分布,Hoechst33258染色法观察细胞凋亡形态学变化,逆转录聚合酶链反应法检测细胞酪氨酸激酶2(JAK2)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)信使核糖核酸相对表达量,蛋白印迹法检测细胞磷酸化JAK2(P-JAK2)、磷酸化STAT3(P-STAT3)蛋白相对表达量。[结果]莪术醇对MCF-7细胞增殖具有明显抑制作用,且抑制率随药物作用时间及作用浓度的增加而上升。随着莪术醇作用浓度的增加,细胞凋亡率也有所上升[(4.27%±0.82%)、(4.54%±1.21%)、(19.32%±1.87%)、(29.58%±2.92%)、(33.74%±3.91%)、(42.94%±2.81%)]。细胞周期结果显示,莪术醇可将细胞周期阻滞在G0/G1期,从而抑制细胞增殖。Western blot结果显示,莪术醇可抑制JAK2、STAT3磷酸化的表达,而RT-PCR结果显示,莪术醇作用细胞后,JAK2、STAT3 mRNA表达受到明显抑制。[结论]莪术醇作用于乳腺癌MCF-7细胞G0/G1期,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是通过JAK2/STAT3信号通路来实现。     

LY294002抑制PI3K/AKT信号通路对胃腺癌SGC-7901细胞的影响

目的：观察应用PI3K抑制剂2- （4-吗啉基） -8-苯基-4氢-1-苯并吡喃-4酮 （LY294002） 对胃腺癌细胞株SGC-7901中磷脂酰肌酸3-激酶 （PI3K） /丝氨酸苏氨酸激酶 （AKT） 信号通路的变化以及由此产生的细胞生长、 侵袭及凋亡等方面的影响。方法： 应用LY294002作用于胃腺癌细胞株SGC-7901, 通过Western blot检测PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质P-AKT、 基质金属蛋白酶-2 （MMP-2）、 基质金属蛋白酶-9 （MMP-9）、 B细胞淋巴瘤/白血病-2 （Bcl-2）、 细胞周期素 （CyclinD1） 的表达情况。噻唑蓝比色法 （MTT） 和流式细胞法及Transwell等实验评价胃腺癌细胞增殖、 侵袭、 凋亡等变化。结果： 与空白对照组和DMSO组相比,LY294002组能有效抑制P-AKT、 MMP-2、 MMP-9、 Bcl-2及CyclinD1蛋白的表达。LY294002组自第2天起生存率明显下降 （P<0.05）。Transwell穿过细胞数结果分别为空白对照组 （81.0±2.65）、 DMSO组 （81.3±1.52）、 LY294002组 （44.6±2.52）, 3组相比较差异具有统计学意义 （F=255.1, P=0.000）。LY294002组细胞周期被阻滞在G0/G1期, S期减（P<0.05）, 早期凋亡的细胞数明显增多（F=149.66, P=0.000）。结论： LY294002是一种对PI3K/AKT信号传导通路具有抑制作用的抑制剂, 靶向PI3K的LY294002可以有效抑制胃腺癌SGC-7901细胞的PI3K/AKT信号通路中相关蛋白质的表达, 在体外显著抑制细胞的增殖、 侵袭, 并促进细胞的凋亡, 因此为临床肿瘤防治提供了新思路, 针对信号传导通路的靶向治疗有望成为肿瘤治疗的新途径。     

Notch1信号通路调控乳腺癌肿瘤细胞放疗敏感性的机制研究

摘　要：［目的］ 探讨抑制Notch1信号通路对乳腺癌肿瘤细胞放疗敏感性的影响及机制。［方法］ Western blot检测人乳腺癌MCF-7细胞中加入5、10、20μmol/L的Notch1信号通路抑制剂γ分泌酶抑制剂(γ-secretase inhibitor,GSI)后Notch1、Hes1蛋白表达;克隆形成实验检测细胞经GSI和照射处理后增殖情况;后续实验分为对照组、GSI组和GSI+8Gy组,48h后CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Ki67、Cleaved caspase3蛋白表达。［结果］ 随着GSI的浓度增高,Notch1和Hes1蛋白表达随之降低(P<0.05),且呈剂量依赖性关系。GSI与照射同时处理细胞较单纯用照射有较高的增敏比。GSI组和GSI+8Gy组细胞吸光值均显著性低于对照组(P<0.05),而GSI+8Gy组吸光值显著性低于GSI组(P<0.05),除对照组,GSI组和GSI+8Gy组随着处理时间的延长均明显降低(P<0.05),呈时间依赖性关系。GSI组和GSI+8Gy组细胞凋亡率均显著性高于对照组,GSI+8Gy组细胞凋亡率显著性高于GSI组(P<0.01)。GSI组和GSI+8Gy组Ki67蛋白表达显著性低于对照组(P<0.05),Cleaved caspase3蛋白表达显著性高于对照组(P<0.05),GSI+8Gy组Ki67蛋白表达显著性低于GSI组,Cleaved caspase3蛋白表达显著性高于GSI组(P<0.05)。［结论］ 抑制Notch1信号通路可增强乳腺癌的放疗敏感性。     

PI3K/AKT信号通路与前列腺癌关系的研究进展

近年来针对前列腺癌靶向治疗的研究作为新的热点受到越来越多的关注,主要集中在非AR途径的通路及靶点的探索,其中较为成熟且具有明显研究价值的途径之一是磷脂酰肌3-羟激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路.研究表明,该信号通路的异常活化与疾病的发展和转归有显著相关性,在机体细胞的生长、增殖、凋亡以及炎症反...     

雌、孕激素对子宫内膜癌细胞端粒酶活性及细胞周期的影响

 目的　研究雌、孕激素对子宫内膜癌HHUA细胞端粒酶活性及细胞周期的影响。方法　用TRAP ELISA法和实时荧光定量PCR技术检测雌、孕激素作用前后HHUA子宫内膜腺癌细胞系端粒酶活性及hTERT RNA的表达 ,流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的变化。结果　雌激素对HHUA细胞端粒酶活性和hTERT的表达有明显增强作用 (P <0 .0 5 ) ,而孕激素对其影响不显著。孕激素作用下 ,G1期细胞比例明显增高 ,S期及G2 ～M期细胞比例明显降低 (P <0 .0 5 ) ;细胞的分裂、增殖受到明显抑制 ;凋亡细胞比例明显增加。雌激素的作用则相反。结论　雌激素能增强子宫内膜癌细胞端粒酶活性和hTERT的表达 ,促进其分裂和增殖 ,降低凋亡细胞比例 ,孕激素的作用相反