基于基因表达谱的肝细胞癌过表达基因筛选

目的 利用基因表达谱芯片技术筛选肝细胞癌（HCC）中表达上调最为明显的基因。方法 利用AffymetrixU133 Plus2.0表达芯片检测93例HCC及配对癌旁肝组织的全基因表达谱。HCC与配对癌旁肝组织中基因表达的比较采用配对t检验,筛选表达上调最为明显的10个基因。各基因表达与临床病理参数的关系采用χ2检验。结果 与癌旁肝组织相比,HCC中表达上调倍数最多的10个基因分别为：CDKN3、CCL20、PTTG1、MELK、PRMT1、TOP2A、TPX2、SMYD3、TMEM106C和UCK2,上调25.2～44.6倍（均P≤2.0×10-22）。CCL20、PRMT1和UCK2基因表达与血清AFP有关,CCL20、PTTG1、PRMT1、TOP2A和UCK2基因表达与组织学Edmondson Steiner分级有关,CCL20基因表达与TNM分期有关（均P＜0.05）。结论 筛选出HCC中表达上调最为明显的10个基因,将为HCC分子靶向治疗研究提供潜在靶点。     

RhoC基因的过量表达与肝细胞癌的侵袭转移

目的　研究探讨RhoC基因mRNA和蛋白的过量表达与肝细胞癌 (HCC)的发生发展和侵袭转移的关系。方法　采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)和Western印迹法 ,检测 2 5例HCC及其癌旁肝组织、4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中RhoCmRNA和蛋白的表达 ;同时采用PCR产物单链构象多态性 (PCR SSCP)银染法检测RhoC基因的突变情况。结果　HCC组织和癌旁肝组织中均可检测到RhoC基因mRNA和蛋白的表达 ,RhoCmRNA在HCC组织中的表达较癌旁肝组织高 ,其吸光度(A)比值分别为 1.8± 1.1和 1.0± 0 .7,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;RhoC蛋白在HCC组织中的表达同样高于癌旁肝组织 ,其A比值分别为 33992± 10 384和 17342± 9998,差异有显著性 (P <0 .0 1)。 4例门静脉主干癌栓或肝外转移灶中的RhoC基因mRNA和蛋白的表达量分别为 3.3± 0 .5和 6 386 5±9116 ,较HCC肝内病灶高 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;RhoCmRNA和蛋白在分化较差、结节数较多、有静脉浸润或伴有肝外转移灶的HCC中过量表达 (P <0 .0 5 )。全部HCC经PCR SSCP银染法分析均未发现异常泳动条带。结论　RhoC基因的过量表达与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关 ,且可能是通过过量表达而非突变发挥作用。     

人肝细胞癌中AFP基因的表达

目的：探讨ＡＦＰｍＲＮＡ在人肝细胞癌中的表现规律。方法：用ＲＴ－ＮｅｓｔｅｄＰＣＲ技术检测３０例肝癌组织及癌旁组织ＡＦＰｍＲＮＡ；放免法检测其血清ＡＦＰ。结果：２８例癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ阳性（２８／３０），２例癌旁组织ＡＦＰｍＲＮＡ阳性；９例血清ＡＦＰ阴性者有７例癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ阳性；２例癌组织ＡＦＰｍＲＮＡ及血清ＡＦＰ均阴性。结论：人肝细胞癌ＡＦＰ基因表达调控形式不同，ＡＦＰｍＲＮＡ在早期诊断肝细胞癌中有一定价值。     

肝细胞癌癌栓形成机制及治疗——肝细胞癌门静脉癌栓形成机制

原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC;简称肝癌）是世界上常见的恶性肿瘤之一,在我国已成为第2位的癌症杀手。肝癌起病隐匿,大部分患者诊断时已属晚期,预后很差,总体5年生存率仍不超过7％。     

肝细胞癌门静脉癌栓形成机制

原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC;简称肝癌)是世界上常见的恶性肿瘤之一,在我国已成为第2位的癌症杀手.肝癌起病隐匿,大部分患者诊断时已属晚期,预后很差,总体5年生存率仍不超过7%.肝癌侵犯门静脉形成门静脉癌栓(portal vein tumor thrombus,PVTT)并导致肝内播散是其主要原因之一.     

炎性乳腺癌中肿瘤微环境的研究进展

炎性乳腺癌（IBC）是一种罕见且进展迅速的高侵袭性乳腺癌亚型。因其在起病初期常被误诊,对标准治疗反应较差以及缺少大样本的前瞻性研究,IBC患者的生存率明显低于非炎性乳腺癌患者。国内外一直致力于阐释IBC的各方面生物学机制,而作为肿瘤免疫最直接的表现形式,肿瘤微环境（TME）参与了IBC的各种恶性生物学行为。IBC的TME中包括淋巴管、血管、肿瘤相关成纤维细胞、肿瘤细胞外基质及浸润性免疫细胞等组成成分,但无明确特征,各种调控TME中免疫细胞的分子机制和信号通路在很大程度上仍不清楚。全文就IBC的TME与IBC发病机制及其预后的相关性进行综述。     

原发性肝细胞癌组织免疫微环境的分析

目的： 探讨原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）组织中免疫细胞的浸润及分布情况。 方法： 采用免疫组化S-P法,检测采集自福建省肿瘤医院30例HCC癌组织、癌周组织（距肿瘤边缘<2 cm）、非癌肝组织（距肿瘤边缘＞5 cm）石蜡标本中CD3、CD4、CD8、FoxP3、CD20、CD56、CD68的表达。 结果： 免疫组织化学结果显示,HCC患者CD3+、CD4+、FoxP3+细胞数在癌周组织中最高,癌组织中其次,非癌肝组织中最低（P<0.05）;CD8+、CD56+、CD68+细胞数在癌周组织中最高,非癌肝组织其次,癌组织中最低（P<005）;CD20+细胞数在肝癌组织、癌周组织、非癌肝组织中无明显差异（P>005）。肝癌组织中CD3+、CD4+、CD8+、CD56+、CD68+细胞主要分布于癌巢中的间质区,FoxP3+细胞呈散在分布。 结论: 肝癌组织局部微环境中,杀伤性免疫细胞减少,抑制性免疫细胞增加,从而导致局部免疫抑制状态。     

肝细胞癌中抑癌基因CDKN2A甲基化的研究进展

肝细胞癌（HCC）的发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程，相关癌基因激活和抑癌基因失活的致癌模式逐渐为人们所认识。DNA甲基化是转录水平的DNA修饰方式之一，在调节基因表达及维持细胞正常分化中起着重要作用。其状态的改变是肝癌相关基因调控的一种方式，属于肝癌发生的早期事件。本文就抑癌基因CDKN2A（cyclin—dependent kinase inhibitor，CDKN2A）的结构与功能及其与肝癌的关系等方面的研究进展进行综述。     

应用基因表达谱芯片从抗脱落凋亡肺癌A549细胞中筛选转移相关基因

背景与目的正常上皮或内皮细胞脱离细胞外基质会发生脱落凋亡,但肿瘤细胞可不依赖细胞基质生长而不发生凋亡,这一现象被称为抗脱落凋亡,目前国内外相关研究均认为抗脱落凋亡是肿瘤发生转移的始动环节。本实验旨在比较抗脱落凋亡及正常贴壁生长肺腺癌A549细胞基因组表达差异,从中筛选肺癌转移相关基因。方法利用多聚羟乙基甲基丙烯酸树脂处理培养皿,致细胞无法贴壁生长,建立抗脱落凋亡肺癌A549细胞系;利用北京博奥生物芯片公司的人类V2.0全基因组寡核苷酸微阵列芯片,检测其与正常贴壁生长A549细胞的基因表达差异性,筛选肺癌转移相关基因。结果共得到表达差异的基因745个,从中筛选出63个与肺癌转移密切相关的基因。结论成功建立抗脱落凋亡肺癌A549细胞系并筛选出转移相关差异表达基因,为进一步研究肺癌转移相关信号转导通路及其它相关研究提供依据。     

肝细胞癌的相关血清标志物

肝细胞癌(HCC)的早期诊断是其治疗的关键,HCC血清标志物的检测为其诊断提供了有利的方法,并且操作简单,敏感性高、特异性强。目前常用的血清标志物为AFP、AFPvariants、AFPmRNA、AFU、GGT、DCP、AIF、GPC3等。这些标志物的联合使用有助于HCC的诊断及预后判断。     

Identification of Genes Associated with Dedifferentiation of Hepatocellular Carcinoma with Expression Profiling Analysis

To identify the genes associated with dedifferentiation of hepatocellular carcinoma (HCC), gene expression profiles of HCCs of well-and moderately differentiated grades were compared by means of oligonucleotide arrays. One tumor showed a nodule-in-nodule appearance (NIN), which is occasionally observed in the course of progression of HCC from well to less differentiated grade, when an inner, moderately differentiated tumor (MD) develops sequentially from the outer, well-differentiated tumor (WD). Seventy-six genes were identified to be up-regulated more than 3-fold and 33 genes were down-regulated in the inner nodule in NIN. By statistical analysis of the profiles from 10 individual additional liver tumors, 5 WDs and 5 MDs, we were able to identify 12 genes, LAMA3, PPIB, ADAR, PSMD4, NDUFS8, D9SVA, CCT3, GBAP, ARD1, RDBP, CSRP2 , and TLE1 , with significantly elevated expression, and 4 genes, CP, IL7R, CD48 , and PLGL , with decreased expression in MD. These selected genes were further validated using another 12 tumors, 5 WDs and 7 MDs, with semi-quantitative RT-PCR. We also applied neighborhood analysis to list the genes with high predictability values as most closely correlated with WD-MD distinction. Seven genes, ADAR, PSMD4, D9SVA, CCT3, GBAP, RDBP , and CSRP2 , whose expression was elevated and one gene, IL7R , whose expression was decreased, were included among the top 50 predictor genes. These genes are likely to be associated with dedifferentiation of HCC and their identification may help to elucidate the mechanism of liver cancer progression.     

基质金属蛋白酶-9基因及RECK基因在肝癌组织中的表达

目的探讨肝癌患者基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因及RECK基因表达的情况。方法33例原发性肝细胞癌患者术中取癌组织及癌旁组织;提取组织总RNA;用逆转录共扩增定量PCR方法测定MMP-9基因及RECK基因表达水平。结果肝癌组织MMP-9基因表达水平明显高于癌旁的肝硬化组织及正常肝组织,肝癌组织RECK基因表达水平明显低于癌旁的肝硬化组织及正常肝组织。肝癌患者MMP-9基因表达水平与血清AFP浓度、肿瘤大小无关。RECK基因及MMP-9基因在肝癌组织中的表达呈负相关（P=0．019）。结论RECK与MMP-9在肝癌组织中的表达呈负相关;MMP-9及RECK基因在肝癌的进展中可能起重要作用。     

不同化疗敏感性下咽鳞癌差异基因表达谱的筛选

 目的筛选化疗敏感性不同的下咽鳞癌差异基因表达谱,探讨基因表达谱预测下咽鳞癌化疗敏感性的可能性。方法选取诱导化疗敏感和不敏感的下咽鳞癌各4例,分别提取mRNA,体外反转录为cDNA和cRNA,不同生物素标记和片断化后制成cRNA探针,与人类基因组芯片杂交,对杂交信号扫描并归一化处理,使用GCOS4.0统计软件分析。以Signal Log Ratio≥1和change P-value≤0.05为标准筛选差异表达基因并根据生物学过程和功能分类。结果筛选差异表达基因119条,其中上调基因65条,下调基因54条。差异表达基因包括信号传导(STAT3),细胞周期(CCND1、TCF7L1),细胞凋亡(FADD),黏附分子(MUC4、cadherin 11、ICAM2)以及酶类等,化疗敏感组中EGFR、TGF-β和TNFR等细胞信号通路异常。结论不同化疗敏感性的下咽鳞癌基因表达谱不同,根据基因表达谱的变化评估化疗敏感性是可能的。     

原发性肝癌组织中Fas和FasL的表达研究

为了探讨原发性肝癌组织中乙肝病毒和丙肝病毒的感染与Ｆａｓ 和ＦａｓＬ表达的关系,采用免疫组化方法观察４０ 例原发性肝癌组织中Ｆａｓ、ＦａｓＬ、ＨＢｓＡｇ 及ＨＣＶ 抗原（ＮＳ５） 的表达。结果显示：癌细胞Ｆａｓ 阳性７ 例,阳性率为１７．５％ ,ＦａｓＬ阳性６例,阳性率为１５．０％ ;癌旁肝细胞Ｆａｓ 阳性２１ 例,阳性率５２ ．５％ ,ＦａｓＬ阳性１８ 例,阳性率４５ ．０％ 。癌组织中ＨＢｓＡｇ 阳性１２ 例,阳性率为３０．０％ ;癌旁组织中２５ 例阳性,阳性率为６２ ．５％ 。１２ 例ＨＢｓＡｇ 阳性的癌组织中,Ｆａｓ 阳性６ 例,ＦａｓＬ阳性５ 例;２８ 例ＨＢｓＡｇ 阴性的癌组织中,Ｆａｓ 和ＦａｓＬ 阳性各１ 例;癌组织中ＨＣＶＮＳ５ 阳性１１ 例,阳性率为２７ ．５ ％ ,癌旁组织中其阳性率为１２ ．５％（５／４０） ,１１ 例ＨＣＶＮＳ５ 阳性的肝癌组织中,Ｆａｓ 和ＦａｓＬ 阳性各５ 例,２９ 例ＨＣＶＮＳ５ 阴性的肝癌组织中,Ｆａｓ 阳性２ 例,ＦａｓＬ阳性１ 例。２ 组比较有显著性差异（ Ｐ＜０ ．０５） 。结果表明肝癌组织中Ｆａｓ 和ＦａｓＬ的表达与ＨＢＶ 和ＨＣＶ 的感染有一定关系。癌旁肝组织Ｆａｓ 和ＦａｓＬ高表达的意义尚不清楚     

转酮醇酶在肝癌中的表达及临床意义

目的 探讨转酮醇酶基因家族在肝细胞肝癌（HCC）中的表达及其与临床病理的关系。方法检测42例HCC组织及对应癌旁组织的转酮醇酶活性;用RT PCR的方法检测转酮醇酶基因家族各成员（tkt、tktl1、tktl2）mRNA在HCC及癌旁组织中的表达。结果 HCC组织的转酮醇酶活性明显高于癌旁组织（P＜0.05）。HCC组织中tktl1的阳性表达率明显高于tkt和tktl2（P＜0.05）,tktl1在HCC中的阳性表达率及表达量均明显高于癌旁组织（P＜0.05),tktl1的表达同肿瘤分化程度、静脉癌栓、肝内有无卫星灶以及5年生存情况有关（P＜0.05）。tktl2在HCC中的表达量高于癌旁组织（P＜0.05）,其表达与肿瘤分化程度有关（P＜0.05）。结论 转酮醇酶与HCC的发生发展有关,tktl1的表达在肝癌转酮醇酶活性中起主要作用,且影响肝癌的分化、转移及患者预后;tktl2可能在肝癌分化中起协同作用。它们有望成为HCC治疗的新靶点。     

DNA修复基因ERCC1在原发性肝细胞癌组织中的表达及临床意义

  目的  探讨切除修复交叉互补基因1(ERCC1)在原发性肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma, HCC)组织中的表达情况及临床意义。   方法  应用免疫组织化学方法检测226例HCC癌组织、65例HCC癌旁组织和17例非癌肝组织中ERCC1的表达情况, 并分析其与HCC临床病理因素和预后的关系。   结果  肝癌组织中ERCC1阳性率为44.2%(100/226), 显著高于癌旁组织及非癌正常肝组织中的阳性率(分别为16.9%和5.9%, P < 0.05)。有门静脉癌栓组的ERCC1阳性率为66.7%, 无癌栓组为42.3%, 差异具有统计学意义(P < 0.05);但ERCC1阳性表达与性别等其他临床病理特征均无关(P均 > 0.05)。接受根治术的184例患者中, ERCC1阳性率随着中位复发转移时间(TTR/M)的延长而显著降低(χ2=9.630, P=0.047);ERCCI阳性组TTR/M为10.3个月, 而阴性表达组为20.3个月, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。多因素生存分析显示, 术前谷草转氨酶 > 2.5倍正常值、病灶最大径 > 5 cm和ERCCl阳性表达是HCC患者术后复发转移风险增加的独立危险因素。   结论  肝癌组织中ERCCl阳性率显著高于癌旁肝组织及非癌肝组织, 其阳性表达与门静脉癌栓形成及术后复发、转移风险增高显著相关。      

CyclinE及相关基因在人原发性肝癌中的表达及其意义

[目的]研究CyclinE、CDK4、VEGF、c-myc及p53基因在肝癌中的表达及其意义.[方法]采用荧光实时定量PCR技术、免疫组织化学技术及蛋白免疫印迹技术对肝癌组织、自身癌旁组织的CyclinE、CDK4、VEGF、c-myc及p53基因的表达水平进行检测.[结果]肝癌组织中的CyclinE、CDK4、VEGF、c-myc及p53 mRNA的表达水平均高于自身癌旁组织(P均＜0.05);CyclinE蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为59.52％;CDK4蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为40.48％;VEGF蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为35.71％;c-myc蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为7.62％;p53蛋白在肝癌组织中的阳性表达率为52.38％;而在癌旁组织不表达或呈微弱表达.相比于中、高分化肝癌患者,低分化癌组织中的各蛋白的阳性表达率均显著升高(CyclinE:94.74％ys 30.43％;CDK4:47.37％ vs 34.78％:VEGF:42.11％ vs 30.43％;c-myc:57.89％vs 39.13％;p53:63.16％ys 43.48％),且差异有统计学意义(均P＜0.05).相比于没有发生肝外转移的肝癌患者,有肝外转移的癌组织中的各蛋白的阳性表达率均显著升高(CyclinE:81.25％ vs 46.15％;CDK4:68.75％vs 23.08％;VEGF:43.75％ vs 30.77％:c-myc:62.50％ vs 38.46％;p53:62.50％ vs 46.15％),且差异有统计学意义(P均＜0.05).[结论]CyclinE、CDK4、VEGF、c-myc及p53基因在人肝细胞癌组织中的表达呈阳性,且阳性表达程度与肿瘤分化程度和有无肝外转移相关.     

β-Catenin,cyclinD1及c-myc在肝细胞癌中的表达

目的探讨β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白的表达与肝癌临床病理参数的关系。方法采用EnVisionTMplus免疫组织化学方法研究β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白在52例HCC及癌旁肝组织中的表达情况。结果52例HCC中β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白染色阳性率分别为55.8%、48.1%及53.8%,癌旁肝组织的阳性率为36.5%、25.0%及32.7%,β-Catenin、cyclinD1及c-myc在HCC及癌旁肝组织两者间有显着性差异(P<0.05)。在HCC中β-Catenin的阳性表达与cyclinD1、c-myc的阳性表达密切相关(P=0.0108,r=0.3920;P=0.0295,r=0.3406)且呈正相关;β-Catenin、cyclinD1及c-myc在人肝癌组织中的检出率与肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度明显有关(P<0.05),cyclinD1的检出率与门静脉癌栓也明显有关(P<0.05),β-Catenin的检出率与临床分期和门静脉癌栓也有显著性差异(P<0.05)。结论β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白...     

β-Catenin，cyclinD1及c—myc的表达在肝细胞癌中的表达

目的 探讨β-Catenin、cyclinD1及c—myc蛋白的表达与肝癌临床病理参数的关系。方法 采用EnVisions^TMplus免疫组织化学方法研究β-Catenin、cyclinD1及c—myc蛋白在52例HCC及癌旁肝组织中的表达情况。结果 52例HCC中β-Catenin、cyclinD1及c-myc蛋白染色阳性率分别为55．8％、48．1％及53．8％，癌旁肝组织的阳性率为36．5％、25．0％及32．7％，β-Catenin、cyclinD1及c-myc在HCC及癌旁肝组织两者间有显着性差异（P（0．05）。在HCC中β-Catenin的阳性表达与cyclinD1、c-myc的阳性表达密切相关（P=0．0108，r=0．3920；P=0．0295，r=0．3406）且呈正相关；β-Catenin、cyclinD1及cmyc在人肝癌组织中的检出率与肝外转移、术后复发及肿瘤分化程度明显有关（P〈0．05），cyclinD1的检出率与门静脉癌栓也明显有关（P〈0．05），β-Catenin的检出率与临床分期和门静脉癌栓也有显著性差异（P〈0．05）。结论 β-Catenin、cyclin D1及c-myc蛋白的过表达可促使肝癌细胞增殖，使肝癌细胞具有更强的侵袭力，与肝癌的发生发展关系密切。