内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调控纤维肉瘤细胞血管外游走的实验研究

目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术,评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平.结果:纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,并且游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平升高.内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)能够抑制上述变化,并具有浓度依赖性.结论:内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可通过调控肌球蛋白轻链的磷酸化水平,引起骨架重组、细胞收缩,从而导致纤维肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走.     

内皮细胞Rho/Rho激酶介导纤维肉瘤细胞血管外游走的机制

目的 研究内皮细胞Rho/Rho激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法 采用血管外游走体外模型观察纤维肉瘤细胞血管外游走状况;测定游走过程中血管内皮单细胞层电阻变化;进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平.结果 纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外.在游走过程中跨血管内皮细胞层电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平升高.内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化.结论 内皮细胞Rho/Rho激酶可能是通过调节肌球蛋白轻链磷酸化水平诱导纤维肉瘤细胞向血管外游走.     

Rho GTP酶调节肺血管内皮屏障的研究进展

血管内皮是由单层连续的内皮细胞( endothelial cells, EC)和基膜组成的一层半选择性通透屏障,它决定血管内外溶质和液体的交换,并影响肺泡的有效气体交换及血管新生等生理过程。许多炎性介质,如组胺、凝血酶、血管内皮生长因子等均可损伤血管内皮屏障功能,导致其通透性增高,血浆蛋白渗出,引起组织、器官水肿和功能障碍。血管内皮屏障功能障碍是炎症的主要特征之一,并参与肿瘤转移、免疫反应及多器官功能障碍的发生。 Rho GTP酶在细胞的信号转导过程中作为信号转换器,通过调控细胞骨架,在血管通透性增高的疾病中发挥重要作用,本文就Rho GTP酶调节血管内皮屏障功能的研究进展作一概述。     

炎症反应与血管内皮屏障功能调节的研究

血管内皮包括内皮细胞(EC)单层和基膜,是血管腔面的一层半选择性通透屏障.血管内外溶质和液体的交换受内皮通透性大小控制.通透性是检测内皮屏障功能的客观计量指标.许多炎性、成血栓性介质均可损伤内皮屏障功能,导致其通透性增高,血浆蛋白渗出,引起组织、器官水肿和功能障碍.血管内皮屏障功能障碍是炎症的主要特征之一,并参与肿瘤转移、免疫反应及多器官功能障碍的发生[1].     

肌球蛋白轻链激酶在烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的观察烧伤大鼠血清刺激人脐静脉内皮细胞株ECV-304引起的纤维状肌动蛋白在细胞内分布变化的时间效应以及肌球蛋白轻链激酶在其中的作用。方法用烧伤大鼠血清分别孵育细胞30 min、1 h、2 h、4 h和6 h。或在烧伤血清作用30 min之前或之后使用5 μmol/L的ML-7作用30 min。使用罗丹明标记的鬼笔环肽探针特异性结合并显示细胞内的纤维状肌动蛋白,并在Nikon TE-300荧光显微镜下观察照相。结果正常情况下,纤维状肌动蛋白主要分布在内皮细胞内的外周膜部位。使用烧伤大鼠血清进行30 min~12 h的刺激后,内皮细胞内可观察到明显的应力纤维形成,并且随着刺激时间的延长而增强。可以通过使用肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7预处理细胞30 min来抑制这种效应。此外,ML-7还能够改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞内肌动蛋白重排。结论本研究表明,大鼠烧伤血清能够通过激活肌球蛋白轻链激酶引起明显的细胞内肌动蛋白排列的改变。在烧伤血清刺激细胞后,抑制肌球蛋白轻链激酶可以改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架重排。     

肌球蛋白轻链激酶在烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架改变过程中的作用

目的 观察烧伤大鼠血清刺激人脐静脉内皮细胞株ECV-304引起的纤维状肌动蛋白在细胞内分布变化的时间效应以及肌球蛋白轻链激酶在其中的作用。方法 用烧伤大鼠血清分别孵育细胞30min、1h、2h、4h和6h。或在烧伤血清作用30min之前或之后使用5μmol／L的ML-7作用30min。使用罗丹明标记的鬼笔环肽探针特异性结合并显示细胞内的纤维状肌动蛋白．并在Nikon TE-300荧光显微镜下观察照相。结果 正常情况下，纤维状肌动蛋白主要分布在内皮细胞内的外周膜部位。使用烧伤大鼠血清进行30min～12h的刺激后，内皮细胞内可观察到明显的应力纤维形成，并且随着刺激时间的延长而增强。可以通过使用肌球蛋白轻链激酶特异性抑制剂ML-7预处理细胞30min来抑制这种效应。此外，ML-7还能够改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞内肌动蛋白重排。结论 本研究表明，大鼠烧伤血清能够通过激活肌球蛋白轻链激酶引起明显的细胞内肌动蛋白排列的改变。在烧伤血清刺激细胞后．抑制肌球蛋白轻链激酶可以改善烧伤大鼠血清引起的内皮细胞骨架重排。     

快速补液对大鼠烧伤延迟复苏心肌血管内皮经细胞的保护作用

目的：探讨快速补液对烧伤延迟复苏大鼠心肌微血管通透性，心肌局部内皮素－1（ET－1）和一氧化氮等细胞因子产生和分泌的改善及其心肌损害的保护作用。方法：采用大鼠30％TBSA Ⅲ度烧伤模型，动态观察烧伤延迟复苏快速补液和均匀补液后，大鼠心肌微血管通透性和心肌局部内皮素－1和一氧化氮等细胞因子含量及血浆中心肌肌球蛋白轻链－1浓度的改变。结果：伤后1h，心肌微血管通透性，心肌局部内皮素－1和一氧化氮含量即显著升高，6h达高峰，补液后，微血管通透性，心肌局部内皮素－1和一氧化氮含量均明显降低，快速补液组的心肌微血管通透性和心肌局部内皮素－1含量的降低幅度显著大于均匀补液组，而一氧化氮含量则两组间无明显差异，血浆中心肌肌球蛋白轻链－1的浓度变化与心肌局部内皮素－1含量改变呈正相关。结论：烧伤延迟复苏快速补液能够改善心肌血管内皮细胞功能，减轻心肌受损程度，因此，对烧伤延迟复苏是有益的。     

晚期糖基化终产物通过肾素-血管紧张素系统上调内皮细胞血管生成样蛋白-4的表达

【目的】 观察晚期糖基化终产物对内皮细胞血管生成样蛋白-4表达的影响及作用机制?【方法】 不同浓度晚期糖基化终产物(AGE)干预内皮细胞24 h,实时荧光定量PCR 和免疫印迹检测血管生成样蛋白-4 mRNA和蛋白的表达,酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测细胞上清和裂解液中血管紧张素Ⅱ的浓度,异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖漏出率和跨内皮电阻检测内皮细胞的通透性?预氯沙坦(10-5 mol/L)预处理内皮细胞后,观察Angptl-4和内皮细胞通透性的变化?【结果】 AGE上调内皮细胞血管生成样蛋白-4的mRNA和蛋白的表达(P<0.05),升高细胞上清及裂解液中血管紧张素Ⅱ的水平,增加内皮细胞的通透性 (P<0.05),氯沙坦预处理后能减轻AGE介导的这些改变(P<0.05)?【结论】 AGE可能通过激活内皮细胞内的肾素-血管紧张素系统,上调血管生成样蛋白-4表达的机制,增加内皮细胞的通透性?     

己酮可可碱对脂多糖诱导的内皮细胞单层通透性的保护作用

目的：探讨己酮可可碱（PTX）对脂多糖（LPS）诱导的内皮细胞单层通透性的保护作用。方法：建立内皮细胞单层损伤模型,随机分为LPS组、PTX组、LPS＋PTX组、对照组,测定内皮单层滤过系数、蛋白质渗透压反射系数及进行内皮细胞单层形态学检查。结果：LPS组内皮单层滤过系数显著升高、蛋白质渗透压反射系数显著降低;与正常对照组比较,PTX组的滤过系数和蛋白质渗透压反射系数无明显变化;与LPS组比较,LPS＋PTX组两系数及内皮细胞单层形态学检查无明显变化,近似于正常对照组。结论：PTX无降低正常内皮细胞单层通透性的作用;PTX对LPS诱导的内皮细胞单层通透性有保护作用,其机制可能与PTX拮抗LPS导致内皮细胞单层通透性增加的某些环节有关。     

血管内皮生长因子与2型糖尿病大血管病变的关系

大血管并发症是2型糖尿病患者主要的致死致残原因，血管内皮损伤是糖尿病血管病变的始动环节，同时糖尿病血管病变发生又促进血管内皮的损伤，血管内皮生长因子（VEGF）能增加血管内皮细胞的通透性，促进内皮细胞迁移和增殖。我们研究了VEGF在2型糖尿病大血管病变中的变化。     

血脑屏障体外实验模型的建立

目的:应用培养的CBA/J小鼠脑血管内皮细胞(brain microvascular endothelial cells,BMVEC)构建血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的体外实验模型.方法:将BMVEC种植在明胶包被的24孔板细胞插入器的微孔滤膜上培养至汇合状态,通过4 h液面渗漏实验、扫描和透射电镜、血脑屏障形成前后膜两侧的电阻以及辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)的通透性和RMP-7对血脑屏障通透性的调控作用来证实BBB的形成.结果:BMVEC培养至汇合后,4 h液面渗漏实验成为阳性;扫描电镜显示细胞形成单层,透射电镜证实细胞间形成紧密连接;跨细胞电阻(the transendothelial electrical resistance,TEER)分别为汇合前和人脐静脉内皮细胞的3.2倍和7.7倍;对HRP的通透率分别为前对照组的13.4%和6.7%;RMP-7处理使HRP在BBB的通透率增加了2.7倍.结论:构建的BBB体外模型在形态学、电阻和通透性方面具备了BBB的基本特性,适用于中枢神经系统药物跨BBB能力的研究.     

己酮可可碱对p38丝裂原激活蛋白激酶激活的影响

目的:观察己酮可可碱(PTX)对p38丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)激活的影响,探讨PTX保护内皮细胞单层通透性的机制.方法:建立内皮细胞单层损伤模型,随机分为脂多糖(LPS)-A组、LPS-B组、LPS PTX-A组及LPS PTX-B组,分别以不同终浓度LPS及PTX刺激不同时间,以Western印迹杂交技术检测内皮细胞p38MAPK活性.结果:LPS组,随着LPS刺激时间的延长及刺激浓度的增大,磷酸化的p38MAPK亮度逐渐增强;LPS PTX组,磷酸化的p38MAPK亮度随着PTX刺激时间的延长及刺激浓度的增大而逐渐减弱.结论:PTX可通过降低p38 MAPK的活性而起保护内皮细胞通透性的作用.     

Deleterious effects of postburn subeschar tissue fluid on cultured cells

Multiple organ dysfunction and disturbance ofhemodynamics may develop or aggravate in seriously miedbum patients when the edema fluid is reabsorbed into thesystendc ciedation, which is one of the haportant causesOf death. In recent yeaxs, it was found that early eXtensive excision of eschar and bang has ~fested good effectS in reducing or pmhng the occ~nce Of systendcinflalnlnatory resPOnse syndIDme (SIRS), infechon andviscera olgan injury['j, but the mechedsm is shll nuclear. By the remov…     

呼吸道合胞病毒对人支气管上皮细胞通透性的影响

目的 探讨呼吸道合胞病毒对支气管上皮细胞通透性的影响.方法 通过ELISA、荧光定量PCR检测呼吸道合胞病毒感染人支气管上皮细胞后对其血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,同时,通过检测细胞的跨膜电阻了解呼吸道合胞病毒对人支气管上皮细胞通透性的影响.结果 呼吸道合胞病毒增加了人支气管上皮细胞VEGF的表达,增加了支气管上皮细胞的通透性,VEGF的单克隆抗体可以明显阻断这一效应.结论 呼吸道合胞病毒通过上调VEGF的表达增加对支气管上皮细胞的通透性.     

热休克蛋白A12B降低脂多糖诱导的血管内皮细胞通透性

目的 探讨脂多糖诱导下血管内皮细胞热休克蛋白A12B(HSPA12B)表达的改变及其对血管内皮通透性的影响.方法 体外传代培养人脐静脉内皮细胞,并将其分为空白组(未进行任何处理)、脂多糖(1 μg/mL)诱导组、脂多糖+HSPA12B高表达组(转染HSPA12B过表达质粒)和脂多糖+阴性质粒对照组(转染阴性对照质粒).采用电阻抗检测仪检测脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗,流式细胞仪检测血管内皮钙黏素(VE-cadherin)的表达,蛋白质印迹、PCR检测HSPA12B的表达改变.结果 脐静脉内皮细胞经脂多糖诱导后,细胞中HSPA12B表达在0～12 h内上调,12 h时达高峰.HSPA12B能使脐静脉内皮细胞的跨内皮电阻抗值明显升高(P＜0.001),并能完全对抗脂多糖诱导造成的跨内皮电阻抗值的下降(P＜0.001).HSPA12B能使脐静脉内皮细胞细胞膜上VE-cadherin的表达上调.结论 HSPA12B可能通过上调VE-cadherin表达降低血管内皮细胞的通透性,从而保护血管内皮的屏障功能.     

同型半胱氨酸对内皮细胞肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：研究同型半胱氨酸( Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)运动能力以及肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达的影响。方法不同浓度的Hcy处理人脐静脉内皮细胞后, MTT法检测Hcy对HUVEC增殖的影响,划痕实验检测Hcy对细胞迁移的影响,免疫组化法及Western blot法检测ML-CK表达的变化。结果随着浓度的升高,Hcy对HUVEC的增殖有显著的抑制作用,对HUVEC的迁移有明显的促进作用,免疫组化法及 Western blot 法结果显示 Hcy 可以增强MLCK的表达。结论 Hcy对HUVEC的迁移具有促进作用,可能是Hcy通过上调MLCK的表达所致。     

凝血酶对牛主动脉内皮细胞表达组织因子活性的影响

目的 :探讨凝血酶对内皮细胞表达组织因子 (TF)活性的作用及其机制。方法 :实验材料为第 4～ 8代新生牛主动脉内皮细胞 ,采用一期凝固法检测细胞冻融液中的TF活性。结果及讨论 :凝血酶可促进血管内皮细胞表达TF活性 ;凝血酶对内皮细胞的这种刺激作用可能具有Ca2 + /CaM依赖性 ,且可能与细胞内cAMP浓度有关。     

登革2型病毒及其NGC株、M株E基因的原核蛋白对HUVEC通透性的影响

目的：研究登革2型病毒（DENV-2）、登革2型病毒国际参考株（NGC）E基因1-476序列原核蛋白、登革2型病毒贵州蚊虫分离株（M）E基因1476序列原核蛋白对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）通透性的影响.方法：将DENV-2 M株和NGC株E基因1-476序列原核表达产物及DENV-2接种于HUVEC单层细胞,用tran-swell法检测HUVEC的通透性,透射电镜观察细胞超微结构的改变.结果：DENV-2、NGC株E基因的原核蛋白、M株E基因的原核蛋白分别在30 min、3h、12 h时对HUVEC通透性的影响最为明显,透射电镜结果显示有细胞超微结构的改变.结论：DENV-2、DENV-2 NGC株E基因原核蛋白、M株E基因原核蛋白对HUVEC通透性、细胞超微结构有明显影响.     

凝血酶诱导人胚胎肾系膜细胞增殖和PAI—1表达的研究

目的：探讨凝血酶对人胚胎肾系膜细胞增殖和纤溶酶原激活物抑制物－１（ＰＡＩ－１）表达的影响。方法：采用噻唑蓝（ＭＴＴ）掺入法、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和纤维蛋白平板法分别检测不同浓度凝血酶刺激下人胚胎肾小球系膜细胞增殖、ＰＡＩ－１ｍＲＮＡ表达和ＰＡＩ－１蛋白质活性的变化,并同时用人工水蛭素进行阻断实验。结果：凝血酶呈浓度依赖性的方式促进人胚胎肾小球系膜细胞增殖、ＰＡＩ－１ ｍＲＮＡ表达和ＰＡＩ－１蛋白质