Role of PHGPx in p ,p'-DDE Induced Reproductive Dysfunction in Pubescent Male Rats

目的 探讨磷脂氢谷胱甘肽过氧化物酶( PHGPx)在p,p’-DDE对大鼠睾丸生精细胞脂质过氧化及诱导生精细胞凋亡中的作用.方法 将20只健康清洁级50日龄雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组及低(20mg/kg)、中(60 mg/kg)、高(100mg/kg)剂量P,P’-DDE染毒组,每组5只.采用腹腔注射方式染毒,注射容积为10ml/kg,每隔ld染毒1次,连续进行10d.测定血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力和丙二醛(MDA)的含量.采用Western blotting方法和检测大鼠睾丸组织PHGPx蛋白相对表达情况,采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)测定大鼠睾丸组织PHGPx及B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bcl-2 associated proteinX,Bax),细胞色素C(cytC)、凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3 )mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,60 mg/kgp,p’-DDE染毒组血清SOD、GSH-Px活力和睾丸组织PHGPx蛋白表达水平均降低,l00mg／kgP,P’-DDE染毒组大鼠睾丸组织中PHGPx、CytC、Apaf-1 mRNA表达水平和60 mg/kgP,P’-DDE染毒组Caspase-3 mRNA表达水平较高,60 mg/kg、100 mg/kgp,p’-DDE染毒组Bax mRNA表达水平均升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PHGPx在P,P’-DDE所致男(雄)性生殖功能紊乱中起拮抗作用.     

p,p’-DDE和β-六氯化苯对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白和N-钙粘蛋白及卵泡刺激素受体mRNA和蛋白表达的影响

目的研究p,p’-DDE、β-六氯化苯(β-benzene hexachloride,β-BHC)联合染毒对青春期大鼠睾丸组织波形蛋白(Vimentin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)和卵泡刺激素受体(follicle stimulating hormone receptor,FSHR)mRNA和蛋白表达的影响。方法将20只50日龄清洁级雄性SD大鼠按体重随机分为4组,分别为对照(玉米油)组和p,p’-DDE(100 mg/kg)单独染毒组、β-BHC(100 mg/kg)单独染毒组、p,p’-DDE(100 mg/kg)+β-BHC(100 mg/kg)联合染毒组,每组5只。采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10 ml/kg,隔天1次,连续进行10 d。采用Real-time PCR检测大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA的表达;采用Western Blot法检测Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达。结果与对照组相比,β-BHC单独染毒组和p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、FSHR mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与p,p’-DDE+β-BHC联合染毒组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独染毒组大鼠睾丸组织Vimentin mRNA的表达水平均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR蛋白的表达水平均下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而p,p’-DDE和β-BHC单独和联合染毒组大鼠睾丸组织Vimentin、N-cadherin、FSHR mRNA和蛋白的表达水平间比较,差异均无统计学意义。结论 p,p’-DDE、β-BHC暴露可降低青春期大鼠睾丸组织中Vimentin、N-cadherin、FSHR的表达水平。     

p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织半胱氨酰天冬氨酸酶mRNA表达及活力的影响

目的研究p,p’-DDE在诱导青春前期SD大鼠睾丸细胞凋亡中半胱氨酰天冬氨酸酶(caspase)的作用。方法将22日龄清洁级雄性SD大鼠20只随机分为低(20mg/kg)、中(60mg/kg)、高(100mg/kg)剂量p,p’-DDE染毒组和对照组(玉米油),每组5只。采用腹腔注射染毒,注射容积为10ml/kg,隔天染毒1次,共进行10天。染毒结束后,处死大鼠,分离睾丸、肝、肾、脾、肺器官,称重后计算脏器系数。取睾丸制备组织匀浆,实时荧光定量PCR测定睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9mRNA的表达;比色法检测睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9的活力。结果各组大鼠体重和睾丸、肾、脾、肺的脏器系数间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠肝脏系数较高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9和中剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-9表达均升高,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,高剂量p,p’-DDE染毒组大鼠睾丸组织caspase-3、caspase-8、caspase-9活力均较高,差异有统计学意义(P0.05)。结论p,p’-DDE可能通过启动caspase-8和caspase-9,进而激活下游效应caspase-3的级联反应而诱导睾丸组织细胞凋亡。     

低剂量亚慢性纳米氧化镍对雄性大鼠的生殖毒性的影响

目的 探讨低剂量亚慢性纳米氧化镍染毒致雄性SD大鼠生殖毒性的机制。方法 将50只雄性SD大鼠按体质重（180～220 g）采用随机数字表分为5组,生理盐水对照组、4 mg/mL Micro-NiO阳性对照组及0.16、0.8、4 mg/mL Nano-NiO,采用非暴露式气管滴注法染毒,1次/3d,60天后,检测大鼠睾丸组织氧化应激指标、凋亡相关靶基因及蛋白的表达。结果 与生理盐水对照组相比,0.8、4 mg/mL Nano-NiO组 SOD活力、CAT活力、GSH-Px活力,均下降（P<0.05）; MDA含量均升高（P<0.05）。与生理盐水对照组和0.16 mg/mL Nano-NiO组相比,0.8、4 mg/mL Nano-NiO组Bax、Caspase-3mRNA的表达水平和Bax/Bcl-2 mRNA表达比值均升高（P<0.05）,而Bcl-2 mRNA表达水平均降低（P<0.05）;与生理盐水对照组和0.16 mg/mL Nano-NiO组相比,0.8、4 mg/mL组睾丸组织Bax、Caspase-3蛋白的表达水平均升高（P<0.05）;而0.8、4 mg/mL Nano-NiO组睾丸组织Bcl-2蛋白的表达水平均下降（P<0.05）。结论 0.8mg/L及以上浓度纳米氧化镍染毒60天可对雄性大鼠产生生殖毒性,Caspase-3和Bax基因和蛋白表达升高, Bcl-2表达下降,这可能是0.8mg/L及以上浓度纳米氧化镍染毒60天导致大鼠睾丸生殖细胞凋亡发生的重要途径     

镍冶炼烟尘对大鼠肺细胞凋亡相关蛋白表达水平的影响

目的探讨镍冶炼烟尘对大鼠肺组织细胞凋亡相关蛋白p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3表达水平的影响。方法健康Wistar雄性大鼠40只,随机分为5组:对照组及镍冶炼烟尘0.50、1.00、2.00、4.00 mg/kg组,第1天及第16天非暴露式气管内滴注受试尘,30 d处死。Hoechst33258法观察肺内细胞形态学改变;分光光度法测定肺组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)的含量;免疫印迹(Western blot)法检测肺细胞p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,各染毒组大鼠肺组织细胞凋亡率均增高,差异有统计学意义(P0.05);4.00 mg/kg染毒组细胞出现胞核固缩碎裂等凋亡早期形态学特征;各染毒组大鼠肺组织中SOD、GSH-Px活力较对照组显著降低,MDA含量显著升高,差异有统计学意义(P0.05);染毒组大鼠肺组织Bax蛋白表达均高于对照组(P0.05),肺组织p-JNK、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达水平显著高于对照组(P0.05)。结论镍冶炼烟尘引起大鼠肺组织氧化损伤,同时促进p-JNK、Bax、Caspase-9和Caspase-3蛋白表达,最终产生凋亡。     

p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织氧化应激及凋亡的影响

目的 研究p,p'-DDE对青春前期大鼠睾丸组织氧化应激及凋亡的影响.方法 将健康清洁级22日龄雄性SD大鼠25只按体重随机分为5组,分别为对照组(玉米油)、低(20 ms/kg)、中(60 mg/kg)、高(100 mg/kg)剂量P,p'-DDE染毒组和VitE干预组(100mg/kg p,p'-DDE+100mg/kg Vit E),每组5只.采用腹腔注射方式进行染毒,注射容积为10ml/kg,每隔1 d染毒1次,共10 d.染毒结束后,处死动物,取睾丸称重,并计算睾丸脏器系数;将睾丸制备组织切片和组织匀浆,分光光度计法测定大鼠睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,采用TUNEL法检测睾丸组织的细胞凋亡情况.结果 各组动物染毒前体重及染毒期间体重变化无差异.大鼠睾丸重量及其脏器系数间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).与对照组比较,高、中、低剂量p,p'-DDE染毒组SOD活力降低,中、高剂量p,p'-DDE染毒组MDA含量升高,高剂量p,p'-DDE染毒组GSH-Px活力下降,差异均有统计学意义(P＜0.05).与高剂量p,p'-DDE染毒组比较,Vit E干预组SOD活力升高,差异有统计学意义(P＜0.05).Vit E干预组和高剂量p,p'-DDE染毒组MDA含量和GSH-Px活力间比较,差异无统计学意义(P＞0.05).高、中、低剂量p,p'-DDE染毒组和对照组均有睾丸细胞凋亡情况发生,对照组中凋亡细胞稀少;随着p,p'-DDE染毒剂量的升高,凋亡细胞数也逐渐增多,以精原细胞和精母细胞为主,伴有支持细胞.与对照组比较,高、中、低剂量P,p'-DDE染毒组的细胞凋亡指数均升高,差异有统计学意义(P＜0.05);Vit E干预组的细胞凋亡指数低于高剂量p,p'-DDE染毒组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 p,p'-DDE可通过引发睾丸组织氧化应激而诱导细胞凋亡.     

锰对大鼠生精细胞凋亡的影响

目的研究氯化锰对大鼠生精细胞凋亡的影响,探讨锰诱发生精细胞凋亡的机制。方法24只健康雄性SD大鼠随机分为3组。锰染毒组给MnCl2.4H2O(15 mg/kg,30 mg/kg)4周,对照组给予生理盐水,各组给药途径为腹腔注射,1次/d,5 d/周。应用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)技术检测睾丸生精细胞凋亡;免疫组化法检测生精细胞p53和Bcl-2蛋白的表达;化学比色法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力。结果生精细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)在锰染毒15 mg/kg组为(1.05±0.19)%,锰染毒30 mg/kg组为(1.80±0.21)%,均明显高于对照组(0.48±0.01)%(P<0.01);p53阳性细胞率在锰染毒15 mg/kg组为(9.83±1.15)%,锰染毒30 mg/kg组为(18.23±2.15)%,均明显高于对照组(3.72±0.35)%(P<0.01);锰染毒30 mg/kg组Bcl-2阳性细胞率(21.26±2.50)%明显低于对照组(52.46±3.57)%和锰染毒15 mg/kg组(51.34±3.87)%(P<0.01)。锰染毒组睾丸组织SOD、CAT及GSH-Px活力均明显低于对照组(P<0.01)。结论锰诱导的p53高表达、Bcl-2低表达以及抗氧化能力的下降可能是大鼠生精细胞凋亡增加的重要原因之一。     

p,p’-DDE对大鼠睾丸支持细胞抑制素B表达的影响

目的研究p,p’-DDE对离体培养的大鼠睾丸支持细胞细胞内抑制素B的影响。方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养,在细胞毒性试验的基础上确定受试物的剂量,以RT-PCR方法定量抑制素B在不同剂量受试物作用下的变化情况。结果p,p’-DDE中、高浓度组与溶剂对照组和低浓度组比较差异均有显著性(P<0.05)。抑制素B的灰度值随着p,p’-DDE浓度的增高逐渐降低,呈剂量依赖关系。结论p,p’-DDE对大鼠睾丸支持细胞分泌抑制素B表达可能存在着抑制作用。     

p,p’-DDE对离体培养支持细胞DNA损伤与FasL基因表达的影响

目的研究p,p’-DDE对离体培养支持细胞DNA损伤与FasL基因表达的影响。方法从大鼠睾丸组织中分离支持细胞进行离体原代培养3天,加入不同浓度p,p’-DDE继续培养24h,应用单细胞凝胶电泳(SCGE)和反转录聚合链式反应(RT-PCR)研究p,p’-DDE诱导支持细胞DNA损伤和FasL基因表达。结果发现支持细胞DNA迁移度随着p,p’-DDE剂量的增高而增高,同时FasL的基因表达水平也随之增高。结论p,p’-DDE可诱导支持细胞DNA损伤和FasL基因表达,pp’-DDE可能是通过Fas/FasL途径诱导支持细胞损伤,破坏生精过程的动态平衡,最终导致精子减少。     

二硫化碳对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响

[目的]研究二硫化碳（carbondisulfide,CS：）染毒对大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因表达的影响。[方法]选用22～24d龄清洁级雄性SD大鼠,建立睾丸生精-支持细胞体外共培养体系,将细胞分为4组：1个对照组和3个不同浓度csz染毒组（1、2、4μmol／mL）,提取RNA,应用荧光实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测Cyto C、 Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9、Aif、EndoG、Smac、IAPS、 Bax、 Bcl-2 mRNA表达水平。[结果]大鼠睾丸支持一生精共培养细胞中,CS2染毒可导致CytoC、Smac、IAPS、Caspase-3、BaxmRNA的表达水平和Bax／Bcl-2mRNA表达水平值均明显升高（P〈0．05）,同时使Apaf-1、Aif、Bcl-2和EndoGmRNA的表达水平明显下降（P〈0．05）。[结论]CS2染毒可影响大鼠睾丸支持-生精共培养细胞凋亡线粒体途径相关基因的表达,并且这一机制与CS2导致生殖损伤相关。     

双酚A对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为研究双酚A(BPA)对小鼠睾丸生精细胞凋亡的损伤。将52只健康成年雄性昆明小鼠随机分为对照组(玉米油)、低(75 mg/kg)、中(150 mg/kg)、高(300 mg/kg)剂量组,每组13只,连续经口染毒8周。观察小鼠睾丸的组织学变化;采用免疫组织化学染色方法检测睾丸生精细胞细胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)和caspase-3蛋白的表达。结果显示,与对照组相比,300 mg/kg染毒组小鼠睾丸产生一定程度的损伤;免疫组化结果显示,各染毒组睾丸组织中Cyt C和caspase-3蛋白表达量均高于对照组。随BPA剂量升高,睾丸组织中Cyt C和caspase-3蛋白阳性表达增多,且有一定的剂量-效应关系。提示亚慢性BPA染毒会引起小鼠睾丸组织一定程度的损伤及睾丸组织中Cyt C和caspase-3蛋白表达增多,影响生精功能。     

锰对大鼠睾丸SOD/(CAT+GSH-Px)和p53及Bcl-2表达的影响

[目的]研究锰对大鼠睾丸超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性和p53及Bcl-2表达的影响.[方法]将健康雄性SD大鼠随机分为3组.即空白对照组、15 mg/kg MnCl2组、30 mg/kg MnCl2组,各组给药途径均为腹腔注射,5 d/w,1次/d.大鼠于第6周末处死,取双侧睾丸.采用化学比色法检测睾丸组织SOD、CAT、GSH-Px活性,采用免疫组化法检测p53和Bcl-2的表达.[结果]①与空白对照组比较,15mg/kg MnCl2组和30 mg/kg MnCh组睾丸SOD/(CAT GSH-Px)比值均下降,有统计学意义(P<0.05,P<0.01).(②与空白对照组比较,15 mg/Kg MnCl2组和30 mg/kg MnCl2组生精细胞p53阳性细胞率显著升高,有统计学意义(P<0.01);30 mg/kg MnCl2组与15 ms/ks MnCl2组比较,生精细胞p53阳性细胞率显著升高,差异有统计学意义(P<0.01).③30 mg/kg MnCl2组生精细胞Bcl-2阳性细胞率显著低干其余各组,有统计学意义(P<0.01).[结论]①15 mg/kg MnCl2可诱发大鼠睾丸组织SOD/(CAT GSH-Px)比值降低和生精细胞p53选择性高表达.②30 ms/kg MnCl2,可诱发大鼠生精细胞Bcl-2选择性低表达.(③大鼠睾丸组织SOD/(CAT GSH-Px)比值下降、生精细胞p53选择性高表达和Bcl-2选择性低表达可能是促生精细胞凋亡的重要原因.     

姜黄素及其类似物H8对糖尿病大鼠心肌损伤的改善

目的探讨姜黄素及其类似物H8改善糖尿病大鼠心肌损伤的作用及机制。方法将50只健康8周龄SPF级雄性SD大鼠随机分为5组,分别为对照组、糖尿病组和3、6 mg/kg H8组及姜黄素(6 mg/kg)组,每组10只。糖尿病组和3、6mg/kg H8组及姜黄素组建立2型糖尿病大鼠模型后,H8组和姜黄素组采用灌胃方式染毒,对照组及糖尿病组均给与等量的1%CMC-Na溶液,染毒容量为2.5 ml/kg,每日1次,连续4周。测定血清中脂蛋白A [lipoprotein A,LP(A)]、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein,HDL)、低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)、血糖(glucose,GLU)的水平。采用HE和MASSON染色检测大鼠心肌组织的病理改变及纤维化情况。采用Real-time PCR法检测大鼠心肌组织中心钠肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、Bax/Bcl-2、Caspase-3 mRNA的表达水平;采用Western Blot法检测Bax、Bcl-2、Caspase-3的蛋白表达水平。结果与对照组比较,糖尿病组大鼠血清中LP(A)、TC、TG、GLU水平较高,差异有统计学意义(P0.05);与糖尿病组比较,6 mg/kg H8组血清中TC水平降低,3、6 mg/kg H8组及姜黄素组血清中LP(A)、TG、GLU水平较低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,糖尿病组心肌细胞排列紊乱,部分心肌细胞变性坏死,且肌间质胶原纤维分布及心肌增生纤维组织积分光密度增加,差异有统计学意义(P0.05);与糖尿病组比较,3、6 mg/kg H8组及姜黄素组大鼠病理情况及心肌细胞纤维化程度均得到了明显的改善,且心肌增生纤维组织积分光密度减少,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,糖尿病组大鼠心肌组织中ANP、BNP mRNA表达均升高,差异有统计学意义(P0.05);与糖尿病组比较,3、6 mg/kg H8组及姜黄素组大鼠心肌组织中ANP、BNP mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,糖尿病组大鼠心肌组织中Bcl-2、Bax、Caspase-3的mRNA和蛋白表达水平及Bax/Bcl-2的比值均升高,差异均有统计学意义(P0.05);与糖尿病组比较,3、6 mg/kg H8组及姜黄素组大鼠心肌组织中Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平及Bax/Bcl-2的比值均降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论姜黄素及其类似物H8可通过抑制凋亡因子基因和蛋白的表达,改善糖尿病大鼠心肌损伤。     

p,p'-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响

目的 研究p,p‘-DDE和β-BHC联合染毒对大鼠离体支持细胞脂质过氧化的影响.方法 通过离体培养SD大鼠支持细胞的四甲基偶氮唑盐(MTT)实验,确定后续实验的染毒剂量,p,p‘-DDE和β-BHC的染毒浓度均为10、30、50μmol/L,p,p‘-DDE β-BHC联合染毒浓度为10μmol/L p,p‘-DDE 10μmol/L β-BHC,30μmol/L p,p‘-DDE 30μmol/L β-BHC,50μmol/Lp,p‘-DDE 50μmol/L β-BHC,检测染毒后支持细胞乳酸脱氢酶(LDH)的漏出率、总超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量的变化.结果 50μmol/L的p,p‘-DDE、β-BHC均可使支持细胞的吸光度(A)值显著下降(P＜0.05).睾丸支持细胞LDH的漏出率随染毒浓度的增加而明显增加(P＜0.05),二者以不同浓度联合染毒时支持细胞LDH的漏出率均显著高于对应浓度的单独染毒(P＜0.05).不同浓度的p,p‘DDE、β-BHC及二者联合染毒均可使细胞内总SOD活力显著降低(P＜0.05)、MDA的含量增加(P＜0.05),且联合染毒时MDA的含量与二者单独染毒时相比均有显著增加(P＜0.05).结论 p,p‘-DDE、β-BHC单独和联合作用均可以引发睾丸支持细胞脂质过氧化,p,p‘-DDE和β-BHC对支持细胞的联合毒性作用具有一定的协同效应.     

氯氰菊酯对大鼠睾丸组织氧化应激的影响

为研究氯氰菊酯(cypermethrin,CYP)对大鼠睾丸组织氧化应激的影响,将60只健康清洁级雄性大鼠随机分为5组,分别为对照(玉米油)组和7.5、15、30、60 mg/kg氯氰菊酯染毒组,每组12只。采用灌胃方式进行染毒,染毒容量为5 ml/kg,每天1次,连续染毒15 d。检测睾丸组织中活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力。结果显示,与对照组比较,15、30、60 mg/kg氯氰菊酯染毒组大鼠睾丸组织中ROS含量和SOD活力及30、60 mg/kg氯氰菊酯染毒组大鼠睾丸组织中MDA含量以及15、30 mg/kg氯氰菊酯染毒组大鼠睾丸组织中GSH-Px活力均较高,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。且随着氯氰菊酯染毒剂量的升高,大鼠睾丸组织中ROS和MDA含量均呈上升趋势,而SOD和GSH-Px活力均呈先上升后下降的趋势。提示氯氰菊酯可引起大鼠睾丸组织明显的氧化应激反应,其毒作用特点可能表现为毒物兴奋效应。     

p,p’-DDE和β-BHC联合染毒对孕小鼠生殖及其胎仔发育的影响

目的研究p,p’-DDE和β-BHC联合染毒对孕小鼠生殖和胎仔发育的影响。方法对孕12~14天小鼠每天联合灌胃不同剂量的p,p’-DDE和β-BHC(各1、5、10mg/kg bw),并设植物油溶剂对照组,采用磁性分离酶联免疫法检测孕鼠血清雌二醇(E2)和孕酮(P)含量,RT-PCR检测小鼠胎盘组织中雌激素受体(α-ER)、促性腺激素释放激素(GnRH)和β-内啡肽(β-EP)mRNA表达水平。结果①生殖影响:随染毒剂量加大母鼠子宫剥离重和子宫腔内液增加,子宫着床数减少,胎仔肛殖距和雌雄比增加,孕鼠血清中雌二醇和孕酮水平上升,胎盘组织α-ER和GnRHmRNA表达上调而β-EP mRNA表达下调,且均呈现剂量依赖性关系,差异有显著性(P<0·05)。②发育影响:随染毒剂量增加孕鼠体重增长减少,肝脏的脏器系数增加,活胎数下降,不良妊娠结局(死胎、吸收胎和畸形数)增多,雌胎数所占比例加大,均呈剂量效应关系,差异有显著性(P<0·05)。结论p,p’-DDE和β-BHC可干扰孕小鼠生殖功能,导致生殖和发育障碍,造成雌雄比例失衡。     

原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的观察原花青素对硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞凋亡相关基因Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响,探讨原花青素在拮抗镍诱导肝细胞凋亡中发挥的作用及可能的调控机制。方法选择健康Wistar雄性大鼠40只,每组8只,硫酸镍模型组给予硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒及生理盐水灌胃处理,原花青素干预组在用硫酸镍2.50mg/kg腹腔注射染毒的同时,给予原花青素水溶液1.25、2.50、5.00mg/kg等容积灌胃处理,1次/d,连续30d。采用Western Blot技术检测各组大鼠肝脏细胞中Caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平。结果原花青素可拮抗硫酸镍染毒大鼠肝脏细胞中Caspase-3的活化,并引起Bcl-2蛋白表达量的增强及Bax蛋白表达量的减弱,且Bax/Bcl-2比值随着原花青素干预剂量的增加呈下降趋势,其中原花青素1.25mg/kg剂量组Pro-Caspase-3活性、5.00mg/kg剂量组Cleaved-Caspase-3活性与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05);原花青素1.25mg/kg剂量组Bcl-2蛋白表达量、1.25和5.00mg/kg剂量组Bax/Bcl-2比值与硫酸镍模型组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论原花青素可拮抗硫酸镍诱导的大鼠肝脏细胞凋亡,其机制可能与拮抗Caspase-3蛋白活化、并抑制Bcl-2蛋白表达的下调和Bax蛋白表达上调有关。     

苯并(a)芘对大鼠睾丸胰岛素样因子3基因表达的影响

目的 观察青春期大鼠苯并(a)芘(BaP)亚慢性染毒对睾丸间质细胞功能标志物胰岛素样因子3(Ins13)mRNA表达水平的影响.方法 72只青春期健康雄性SD大鼠随机分为溶剂对照组(玉米油)、1、5mg/kgBaP染毒组,每组24只.隔日染毒,等体积灌胃,连续染毒90d.分别于染毒后30、60和90 d,每组各随机选取8只大鼠处死.取睾丸、附睾、心、肝、脾、肾称重并计算脏器系数,放免法检测血清睾酮含量,实时荧光定量PCR法检测睾丸Ins13 mRNA表达差异.结果 60dBaP各染毒组以及90 d5 mg/kg组附睾系数显著低于对照组(P＜0.05);染毒30 d5 mg/kg组肝脏系数显著大于对照组(P＜0.05),90d时显著小于对照组(P＜0.05);血清睾酮水平30 d和60 d 5 mg/kg染毒组明显高于对照组(P＜0.05),90 d 5 mg/kg组明显低于1 mg/kg组(P＜0.05);BaP处理组睾丸Ins13 mRNA表达水平各时相点比对照组显著下调(P＜0.01),染毒60 d比30 d显著下调(P＜0.05),尤其是5mg/kg组(P＜0.01).结论 青春期大鼠BaP亚慢性暴露可以干扰血清睾酮及睾丸Ins13基因表达水平,对附睾、肝脏可能有潜在毒性.     

番茄红素对丙烯腈染毒大鼠睾丸保护机制的研究

目的研究番茄红素对丙烯腈(ACN)染毒大鼠睾丸的保护性机制。方法将72只雄性SD大鼠随机分成6组,分别为对照组(Control)、染毒组(ACN)、泰特(TAD)组(ACN+TAD),低剂量(10mg/kg)、中剂量(20mg/kg)和高剂量(30mg/kg)番茄红素组。对各组睾丸组织脂质过氧化产物(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平进行检测,对睾丸组织病理切片HE染色及NF-κB p65免疫组化染色。结果与对照组比较,染毒组大鼠MDA含量升高,而SOD和GSH活力水平均下降,组织形态明显损伤,NF-κB p65表达升高,差异有统计学意义(P0.05);番茄红素处理以后,特别是中、高剂量番茄红素处理以后,MDA含量明显降低,而SOD、GSH活力水平上升,同时组织形态损伤程度减轻,NF-κB p65的表达降低,差异有统计学意义(P0.05)。结论番茄红素对ACN染毒所致大鼠睾丸损伤有一定的保护作用,且这种保护作用可能与减少氧化应激和降低NF-κB的表达有关。     

二硫化碳对大鼠睾丸组织细胞凋亡线粒体通路的影响及环孢素A的干预作用

[目的]研究二硫化碳(carbon disulfide,CS2)对大鼠睾丸生殖细胞凋亡线粒体通路的影响及其可能的分子机制,同时观察环孢素A(cyclosporin A,Cs A)对细胞凋亡的干预作用。[方法]选取清洁级雄性SD大鼠48只并随机分为6组:对照组、3个CS2染毒组(50、250、1 250 mg/m3)、干预组[CS2(1 250 mg/m3)+Cs A(12.5 mg/kg)]和Cs A(12.5 mg/kg)组。静式吸入染毒,每天2 h,每周5 d,共10周,对照组仅吸入新鲜空气,Cs A则依据大鼠体重并按相应比例先溶解在牛奶中然后灌胃。染毒结束后取睾丸组织做HE染色,观察其形态学改变;TUNEL荧光法检测大鼠睾丸组织细胞凋亡情况;Western Blot法检测各组细胞色素C(Cyt C)、半胱氨酸天冬氨酸酶原9(Procaspase-9)、Procaspase-3、Bcl-x L抗凋亡和促凋亡蛋白Bad的表达含量。[结果]随着CS2染毒浓度的增加,HE染色大鼠睾丸组织形态损伤情况不断加剧,中、高浓度组的凋亡指数高于对照组(P<0.05),Cs A干预对大鼠睾丸组织形态损伤有一定缓解;与高浓度CS2染毒组相比,干预组的凋亡指数明显下降(P<0.05),但仍高于Cs A组(P<0.05)。CS2染毒组Cyt C、Bad蛋白含量与对照组比较有所增加,而Procaspase-9、Procaspase-3和Bcl-x L蛋白含量则有下降的趋势(P<0.05)。Cs A干预后与高浓度CS2染毒组比较,干预组Cyt C蛋白含量下降(P<0.05),Bcl-x L蛋白含量则提高(P<0.05);Procaspase-9、Procaspase-3和Bad蛋白含量均有不同程度的变化,但与CS2高浓度组相比差异无统计学意义。[结论]CS2染毒可影响细胞凋亡线粒体通路继而诱导大鼠睾丸生殖细胞凋亡,而细胞凋亡线粒体通路相关蛋白的表达可能与Cs A的干预有关。