玉竹ISSR反应体系的优化

目的建立稳定性高、重复性好的适合玉竹ISSR-PCR扩增的反应体系。方法以玉竹根茎为材料,采用改良的CTAB法提取玉竹基因组DNA,并利用单因素多水平试验,分别对模板DNA、引物、Mg2 、Taq酶、dNTP的浓度和退火温度进行考察。结果玉竹的最佳反应体系为:在20μL的反应体系中,含1×buffer、15 ng模板DNA、0.4μmol/L引物、2 mmol/L Mg2 、1.0 U Taq酶、200μmol/L dNTP。此反应体系以52℃的退火温度扩增出来的玉竹电泳图谱清晰,重复性好。结论本实验反应体系适宜于玉竹ISSR-PCR的扩增,为玉竹下一步分子生物学的研究打下基础。     

药用植物诃子ISSR-PCR反应体系的建立与优化

目的 建立和优化药用植物诃子的ISSR-PCR反应体系.方法 以诃子叶片为实验材料,采用CTAB法提取诃子DNA为模板,通过单因素和双因素实验,研究诃子ISSR-PCR反应体系中DNA模板、Taq DNA聚合酶、Mg2+、引物、dNTPs等的用量,以及退火温度对扩增结果的影响.结果 建立了适合诃子ISSR分析的反应体系...     

红树植物白骨壤化学成分的分离鉴定

目的：研究红树植物白骨壤(Avicennia marina)叶子部位次生代谢产物的结构多样性。方法：采用多种色谱方法进行分离纯化,通过波谱方法,并对照文献鉴定化合物结构。结果：分离并鉴定了21个苯丙素和萘醌类化合物,包括3个新化合物,分别是erythro-guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether (1),marinnone A (16)和marinnone B (17);18个已知物,分别是threo-guaiacylglycerol-β-ferulic acid ether (2),eleutheroside E₂ (3),(+)-lirioresinol A (4),dihydroxymethyl-bis (3, 5-dimethoxy-4-hydroxyphenyl) tetrahydrofuran-9-O-β-glucopyranoside (5),(+)-lyonire sinol 3α-O-β-D-glucopyranoside (6),(-)-lyoniresinol 3α-O-β-D-glucopyranoside (7),epi-pinoresinol (8),leucoseceptoside A (9),jionoside C (10), salsaside A (11),ilicifolioside A (12),acteoside (13),isoacteoside (14),ethyl ferulate (15),avicennone D (18),avicenone E (19),avicennol C (20), stenocarpoquinone B (21),其中化合物1和2互为差向异构体,16和17互为同分异构体。结论：化合物1,16,17为新化合物,13个已知化合物2~12,14,15为首次从该属植物中获得。     

白芨ISSR-PCR反应体系的建立及优化

目的：建立并优化白芨ISSR-PCR反应体系,为白芨种质资源分子评价奠定技术基础.方法：应用单因素和正交试验研究ISSR-PCR反应体系中模板DNA、Mg2、引物、dNTP、BSA及Taq DNA聚合酶等6个主要成分对扩增结果的影响,优化出ISSR-PCR最佳反应体系.结果：优化后25 μL反应体系中含100 ng DNA模板、2.0 mmol/L Mg2＋、2.5 μmol/L引物、0.2 mmol/L dNTP浓度、3.75 g/L BSA及1.25 UTaq DNA聚合酶.结论：建立了适用于白芨的ISSR-PCR最佳反应体系.     

红树植物木榄的活性成分研究概况

长链脂肪酸、二萜、三萜、甾醇、黄酮、二硫化合物及鞣质是红树植物木榄的主要化学活性成分。为了得到这些化合物,研究了该红树植物的不同部位,如花、果、叶、根、皮及木部。一些化学成分的药理活性检测结果显示了良好的抗炎、抗真菌、抗白蚁、杀虫和抑制肿瘤生长等作用。     

中国红树科植物角果木中Dolabrane型二萜的抗肿瘤作用

目的 探讨中国红树植物角果木中Dolabrane型二萜Tagalsins A的抗肿瘤作用及其初步作用机制.方法 建立小鼠H22肝癌实体瘤及H22肝癌腹水瘤模型,随机分为Tagalsins A高、中、低剂量组(20、10、5 mg·kg-1)、生理盐水组(空白对照)、环磷酰胺组(CTX 10 mg·kg-1),每组小鼠各10只.建模24 h后开始给药,Tagalsins A各剂量组给予Tagalsins A连续灌胃7 d,对照组灌胃给予同体积生理盐水,CTX组连续腹腔给予CTX 7 d.末次给药24 h后处死动物,计算抑瘤率、生命延长率、脏器指数;流式细胞术测细胞凋亡率.结果 Tagalsins A各剂量组小鼠H22实体瘤生长较空白对照组明显减慢(F=8.90,q=3.31～6.52,P＜0.01).Tagalsins A低、中、高剂量组的抑瘤率分别为24.49%、35.37%、48.30%,其中Tagalsins A中、高剂量组抑瘤作用与CTX组比较差异无显著性(q=2.85、1.01,P＞0.05).Tagalsins A明显延长H22腹水瘤小鼠生存时间(F=17.06,q=5.45～11.26,P＜0.01);降低小鼠的胸腺指数(F=21.82,P＜0.01),而升高肝脏指数(F=121.84,P＜0.01).Tagalsins A各组肿瘤细胞的凋亡率较空白对照组明显升高(F=127 7.68,q=51.11～82.02,P＜0.01).结论 Dolabrane型二萜Tagalsins A对小鼠H22移植瘤的生长具有明显的抑制作用,其机制可能与诱导细胞凋亡有关.     

红树伴生植物相思子的化学成分研究

目的 研究红树伴生植物相思子Abrus precatoriusL.茎叶的化学成分.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱等手段对相思子茎叶的化学成分进行分离,应用光谱分析方法并结合文献对化合物进行结构鉴定.结果 从相思子茎叶中分离得到7个化合物,经鉴定分别为3-吲哚甲酸(1)、尿嘧啶(2)、N-[2-(1,3,4-三羟基-正二十烷基)]-正十六碳酰胺(3)、芒柄花素(4)、异亮氨酸(5)、豆甾-4,22-二烯-3β,6β-二醇(6)、△5.22豆甾醇-3-O-β-D吡喃葡萄糖苷(7).结论 化合物2～7首次从该植物中分离得到.     

地龙类药用动物的简单序列重复区间分子鉴定研究

[目的]探索利用简单序列重复区间(ISSR)分子标记方法在核酸分子水平上鉴别不同来源的地龙类药用动物.[方法]从100条ISSR引物中筛选出能扩增明显多态性条带的引物,对采集自广东、福建、湖北、上海等地的7个不同品种的地龙类药用动物样品进行扩增和凝胶电泳分析,寻找特征位点.采用NTSYS软件计算材料间的相似系数,并用U...     

ISSR法鉴定中药黄精与卷叶黄精

目的:鉴别中药黄精和卷叶黄精,探索中药鉴别的新方法。方法:从原植物鉴定、显微鉴定和ISSR分析等方面着手。对随机引物进行筛选,选出两个引物,对样品进行PCR扩增,用电泳分离产物。结果:通过引物(AC)8T,(AG)8T等经PCR扩增产生足够的多态性谱带用于分析。结论:ISSR技术可应用于黄精和卷叶黄精的区分。     

金黄色葡萄球菌rep-PCR指纹图谱分型技术反应条件的优化

[目的]优化金黄色葡萄球菌细菌基因组重复序列PCR(rep-PCR)指纹图谱的分型方法,为构建金黄色葡萄球菌同源性追踪体系提供依据。[方法]以金黄色葡萄球菌ATCC25923基因组DNA作为模板,对参考文献提供的PCR引物,反应体系的引物浓度以及退火温度进行优化,以期得到最佳的指纹图谱。[结果]对于金黄色葡萄球菌进行指纹图谱的构建,引物rep为最佳引物,PCR反应体系引物浓度为1.0 pmol/μL,退火温度为45℃时,指纹图谱条带最清晰,明亮。[结论]优化了金黄色葡萄球菌rep-PCR分子分型技术。     

旋毛虫肌幼虫培养细胞的扫描电镜观察

目的:观察旋毛虫(Trichinella spiralis,T1)肌幼虫培养细胞的超微结构.方法:分离旋毛虫肌幼虫细胞,进行体外传代培养.利用简单重复序列区间扩增(ISSR-PCR)标准引物对第3代培养细胞及肌幼虫基因组进行扩增,利用扫描电镜观察贴壁细胞的形态特征.结果和结论:旋毛虫肌幼虫第3代培养细胞和旋毛虫肌幼虫DNA的ISSR-PCR扩增产物均在1 000 bp和750 bp处出现相同条带.扫描电镜下旋毛虫培养细胞的彤态有多种类型,可分为圆颗粒形、多角形、三角扇形、蜂窝型、似分裂型及褶皱型等.其中以圆颗粒形细胞占多数.     

印度红树植物木果楝种子的化学成分研究

目的 对印度红树植物木果楝Xylocarpus granatum种子的醋酸乙酯萃取部位的化学成分进行研究。方法 采用硅胶柱色谱、反相硅胶ODS柱色谱以及高效液相色谱(HPLC)对目的部位的化学成分进行分离纯化，并应用电喷雾质谱(ESI-MS)和核磁共振波谱(NMR)分离鉴定得到化合物的结构。结果 从印度木果楝种子中共分离得到了13个化合物，包括6个柠檬苦素、1个二氢黄酮、1个木脂素、1个脱落酸衍生物、1个生物碱和3个苯甲酸衍生物。其中新柠檬苦素1个，命名为印度木果楝素A(indiangranatumin A，1)，其他已知化合物分别鉴定为swietemahonolide(2)、febrifugin(3)、khayasin T(4)、febrifugin A(5)、gedunin(6)、isolariciresinol(7)、phaseic acid(8)、aromadendrin(9)、对羟基肉桂酸(4-hydroxy cinnamic acid， 10)、对羟基苯甲酸(4-hydroxybenzoic acid，11)、对羟基苯乙酸(4-hydroxyphenylacetic acid，12)和xylogranatinin(13)。结论 化合物1为新化合物，化合物7～12为首次从该植物中分离得到。     

菝葜RAPD扩增条件优化

目的 研究菝葜的RAPD-PCR扩增体系最适宜的条件。方法 采用CTAB提取方法，从菝葜的嫩叶中提取总基因组DNA，以此为模板，优化菝葜RAPD-PCR的反应条件。结果 最适宜的PCR扩增体系为：反应体积30 μL，内含0.20 μmol/L引物、200 μmol/L dNTP、40 ng模板DNA、2 U Taq DNA聚合酶、2 μmol/L Mg²⁺。结论 通过扩增条件优化实验，建立了重复性好、稳定性高的药用植物菝葜RAPD-PCR扩增体系最适宜的条件，筛选出条带清晰多态性好的14条随机引物，共扩增得到144条电泳带，其中有多态性带62条，检测到了62个多态性位点，多态率为43%。     

6种广西药用红树植物的体外抑菌作用研究

[目的]研究广西产6种药用红树植物的提取物对金黄色葡萄球菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的体外抑菌作用。[方法]采取纸片扩散法检测药物敏感性;采用琼脂稀释法检测最低抑菌浓度(MIC);采用试管稀释法检测最低杀菌浓度(MBC)。[结果]6种药用红树植物提取物对金黄色葡萄球菌及MRSA的抑菌圈直径均大于10 mm,表现出不同强度的抑制活性。MIC及MBC值显示:白骨壤水提物、红海榄水提物及醇提物的活性最强。[结论]榄李、白骨壤、桐花树、秋茄、红海榄和木榄具有抗金黄色葡萄球菌及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的作用,值得进一步深入研究。     

阿基瑞林合成条件的优化

阿基瑞林（Argireline,Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2）,又名乙酰六胜肽-3,又被称为类肉毒杆菌素,是模仿SNAP-25蛋白N端6个氨基酸的寡肽[1-2]。阿基瑞林为高端化妆品常用的原料之一,功效主要是减少由面部表情肌收缩造成的皱纹,对额头或眼睛周围的皱纹有理想的祛除效果[3-4]。另外,它还能促进胶原蛋白的生成,有助于肌肤组织重建。阿基瑞林是一种更安全、更廉价、温和的肉毒杆菌毒素替代品。     

基于简单重复序列标记的药用梅品种的身份证构建

目的 筛选一套适合中国药用梅品种鉴定标准的简单重复序列（simple sequence repeats, SSR）,用于构建药用梅品种DNA指纹身份证。方法 以30份药用梅农家种为材料,从180对SSR引物中,最终选取16对多态性较高、条带清晰且重复性好的SSR引物对30份药用梅农家种进行扩增。结果 30份药用梅共扩增出114个等位基因,平均等位基因数和多态信息含量分别为7.12和0.69,且在16个位点上识别两个具有相同基因型的随机个体的概率估计为5.24×10-17。最终筛选出4对扩增稳定、多态性强的核心引物,可将30个药用梅农家种进行有效区分,建立药用梅种质资源DNA指纹身份证。结论 SSR 标记技术可以作为药用梅分子身份证构建的有效技术手段。     

创伤弧菌优化培养条件的研究

目的：通过对创伤弧菌(VV)的培养研究，选择最佳优化培养条件，提高该菌的检出率。方法：用酶标仪测定各生长条件下的细菌吸光度值。结果：VV在各测试条件中，含1％NaCl培养10h细菌吸光度达峰值；640mg/L血红蛋白于6h达峰值；10％蛋白胨于8h达峰值；在pH值为8．0～8．5、温度为37℃时，细菌吸光度达峰值。结论：VV最佳优化培养条件为：1％NaCl、640mg/L血红蛋白、10％蛋白胨、pH8．0～8．5、温度37℃。本研究条件可进一步用于VV快速测定研究。     

应用简单序列重复区间扩增多态性分子标记鉴定我国12个城市与地区常见嗜尸蝇类的研究

目的 探讨应用ISSR分子标记鉴定我国不同地区常见嗜尸蝇类,分析其亲源关系及基因差异.方法 采集广州、深圳、阳江、南京、长春、宜昌、北京、武汉等12个城市与地区常见嗜尸蝇类:家蝇(Musca domestica),丝光绿蝇(Luciliase ricata),大头金蝇(Chrysomyia megocephala),黑尾麻蝇(Helicophagella melanura),棕尾别麻蝇(Boetthcherisca peregrina).设计22个ISSR引物,对采集的蝇类基因组DNA进行PCR扩增,从中筛选出8个引物用于我国不同地区法医蝇类的鉴定.进行ISSR分析,用PAUP聚类分析软件绘制聚类图.结果 8种ISSR引物鉴定我国部分城市与地区5种蝇类,总共扩增样品次数为121,可放大679个清晰和稳定的带,其中516个是多态性.结果 表明我国不同城市与地区的家蝇、大头金蝇、丝光绿蝇、棕尾麻蝇、黑尾麻蝇分别呈现不同带谱,不同地区的家蝇呈现种内与地域多态性的遗传带谱.而5种腐尸性蝇种间呈现完全不同的带谱,发现种特异性的片段.聚类分析结果 显示:10个不同地区的家蝇聚类为一棵分枝树,细分为4个不同层次的类群,不同地区的大头金蝇、丝光绿蝇的绝大多数种类聚类在一起,亦存在种内基因型与地理株的基因组DNA差异.结论 应用ISSR技术,首次对我国12个城市和地区的常见嗜尸蝇类做出鉴定,揭示我国10个城市与地区的家蝇种类存在种内基因型和遗传的差异;不同地区的大头金蝇、丝光绿蝇亦存在种内基因型与地理株基因组DNA的差异.     

犬肾细胞培养流感病毒条件的优化

目的 对影响流感病毒细胞分离培养的因素进行优化,得到细胞分离培养流感病毒的最佳方案。方法 将4种型别流感毒株接种至犬肾上皮细胞（MDCK）,以不同接种量、吸附时间、培养时间以及TPCK胰蛋白酶浓度进行病毒分离培养,以流感病毒红细胞凝集实验的血凝滴度作为指标对流感分离培养结果进行评价分析。结果甲型H1N1流感病毒、季节性流感病毒H3N2、乙型Victoria系流感病毒、乙型Yamagata系流感病毒在培养过程中的最适条件分别为：接种量为200、200、250、300μL/孔,吸附时间为1.5、1.5、2.0、2.0 h,TPCK胰酶浓度为1.0、2.0、2.0、1.5 mg/mL,培养时间为96、72、120、120 h。结论 成功对4种亚型流感病毒在MDCK细胞中的培养条件进行了优化,在培养流感病毒时应按照不同型别选取不同的培养条件。     

HPLC法测定酮洛芬缓释片含量的优化条件研究

目的探讨高效液相色谱法(HPLC)测定酮洛芬缓释片含量的优化条件。方法采用Agilent C18色谱柱(200mm×4·6mm,5μm),以磷酸二氢钾溶液—乙腈(50:50)为流动相,考察测定酮洛芬缓释片含量的优化条件。结果选择检测波长为254nm,流动相流速为1·0ml·min-1,酮洛芬在进样量为0·0123~0·2455μg范围内线性关系良好;精密度(r=0·9999,n=6)RSD为0·49%,平均回收率为100·9%,RSD为0·65%,n=9。结论选取的各项测定条件,显示本方法操作简便,结果准确、可靠。