miR-539对肺癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 研究miR-539对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的调控作用.方法 通过荧光定量PCR检测非小细胞肺癌细胞系(A549、NCI-H358、NCI-H1650、NCI-H1299、HCC827)和正常人支气管上皮细胞(16HBE)中miR-539表达的差异;通过转染miR-539-mimics在NCI-H358细胞中上调miR-539的表达,并通过MTT和TUNEL法检测miR-539对非小细胞肺癌细胞(NCI-H358)增殖和凋亡的影响.结果 与正常人支气管上皮细胞相比,非小细胞肺癌细胞中miR-539的表达显著降低(P<0.01);与空白对照组和阴性对照组相比,过表达miR-539能显著降低非小细胞肺癌NCI-H358细胞的增殖能力并增加其对地塞米松诱导凋亡的敏感性(P<0.01,P<0.05).结论 miR-539能够抑制非小细胞肺癌细胞增殖并促进其凋亡,可作为非小细胞肺癌基因治疗的靶点.     

miR-328-5p对乳腺癌细胞的调控机制研究

目的 探究miR-328-5p对乳腺癌细胞的调控机制。方法 选取乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231及正常乳腺上皮细胞系MCF10A,据不同转染方法分为Control组、miR-NC组、miR-328-5p mimic组及转染miR-328-5p mimic+整合素α5(ITGA5)组,采用RT-PCR检测乳腺癌细胞系内miR-328-5p、ITGA5 mRNA,采用CCK-8法检测乳腺癌细胞MCF-7增殖情况,采用Annexin-FITC/PI双染法流式细胞术检测乳腺癌细胞MCF-7凋亡情况,采用Western blot法检测ITGA5、PI3K、AKT、p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平。结果 乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-231中miR-328-5p mRNA含量显著低于正常乳腺上皮细胞系MCF10A,而ITGA5 mRNA含量显著高于正常乳腺上皮细胞系MCF10A(P<0.05)。miR-328-5p mimic组miR-328-5p mRNA含量显著高于Control组和miR-NC组(P<0.05)。miR-328-5p转染后ITGA5荧光素酶...     

慢病毒介导的细胞分裂周期相关蛋白 2基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 探讨应用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默细胞分裂周期相关蛋白2(CDCA2)基因对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)法分别检测人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A与乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT549中CDCA2 mRNA及蛋白表达.构建慢病毒表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞,实验分为对照组、Lv-NC组、Lv-siRNA-CDCA2组.采用噻唑蓝(MTT)实验及克隆形成实验检测沉默CDCA2表达对细胞增殖能力的影响;采用流式细胞仪检测沉默CDCA2表达对细胞凋亡能力的影响.Western blotting法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、CDK4、P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达.采用裸鼠移植瘤实验观察Lv-siRNA-CDCA2对移植瘤体积及体质量的影响.结果 乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT549中CDCA2 mRNA[(2.18±0.13)、(1.56±0.09)、(1.83±0.10)比(1.02±0.06)]及蛋白表达水平[(1.13±0.15)、(0.56±0.08)、(0.79±0.11)比(0.23±0.04)]与MCF-10A相比显著升高(P<0.05),乳腺癌MCF-7细胞中CDCA2的表达水平升高最为显著;与Lv-NC组相比,Lv-siRNA-CDCA2组MCF-7细胞增殖活性与克隆形成率显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),可促进P21、Bax表达(P<0.05),而抑制Cyclin D1、CDK4、Bcl-2表达(P<0.05);与Lv-NC组比较,Lv-siRNA-CDCA2组移植瘤体积和体质量均显著降低(P<0.05).结论 慢病毒介导的CDCA2基因沉默可乳腺癌细胞细胞增殖,诱导细胞凋亡,并抑制肿瘤生长.     

微小 RNA-525-5p通过靶向 RECQ样蛋白 5调控乳腺癌放射敏感性

目的探讨微小 RNA-525-5p(miR-525-5p)对乳腺癌细胞辐射照射敏感性的影响及机制。方法该研究起止时间为 2019年 6月至 2020年 6月,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A均购自美国菌种保藏中心。运用 qRT-PCR法检测人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474、非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A中 miR-525-5p的 mRNA的表达;将 miR-525-5p模拟物( miR-525-5p mimics)阴性对照( miR-NC)组(转染 miR-NC)、 miR-525-5p组(转染 miR-525-5p mim. ics)、 RECQL5小干扰 RNA阴性对照( si-NC)组(转染 si-NC)、 RECQL5小干扰 RNA(si-RECQL5)组(转染 si-RECQL5)、 miR-525-5p+RECQL5过表达空载体( pcDNA)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA)、 miR-525-5p+RECQL5过表达载体( pcDNA-REC. QL5)组(共转染 miR-525-5p mimics和 pcDNA-RECQL5),均用脂质体法转染至 MDA-MB-231细胞; Western blotting检测细胞中 RECQ样蛋白 5(RECQL5)的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;克隆形成实验检测细胞的存活分数。结果与非恶性乳腺上皮细胞 MCF-10A相比,人乳腺癌细胞 MDA-MB-231、MCF-7、BT474中 miR-525-5p表达［ 0.28±0.02,0.33±0.02,0.42±0.03比 1.01±0.08］显著降低, RECQL5 mRNA和蛋白表达［ 1.68±0.15,1.58±0.12,     

miR-96在人乳腺癌中表达及其对乳腺癌细胞侵袭和迁移活性的影响

目的研究miR-96在人乳腺上皮细胞株和乳腺病变组织中表达状况及其对人乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法抽提4株人乳腺上皮细胞系和28例人乳腺病变新鲜组织总miRNA,实时定量PCR方法检测它们miR-96的表达状况;脂质体介导的转染方法将miR-96抑制物转染人乳腺癌MCF-7细胞株;通过MTS试剂盒检测细胞增殖能力,Transwell侵袭和迁移实验检测细胞侵袭及迁移能力。结果miR-96在高侵袭乳腺癌细胞株中表达较低侵袭乳腺细胞明显下调(P<0.01);人乳腺癌组织中miR-96表达较乳腺良性病变组织明显下调(P<0.01);miR-96抑制物转染乳腺癌MCF-7后,乳腺癌细胞侵袭和迁移活力较阴性对照组细胞明显增强(P<0.05),而细胞增殖活力改变无统计学意义(P>0.05)。结论 miR-96在人乳腺癌细胞株和乳腺癌组织中存在表达下调,并对人乳腺癌细胞的侵袭及迁移能力可能存在一定负性调控作用。     

miR-187通过靶向胰岛素生长因子 -1受体基因对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究miR-187通过靶向胰岛素生长因子-1受体(IGF-1R)基因对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测人正常乳腺上皮细胞HBL-100和不同乳腺癌细胞中miR-187的表达水平.在MDA-MB-231细胞中分别转染miR-187 mimics(miR-187组)或阴性对照mimics-NC(miR-NC组),以未转染的MDA-MB-231细胞为空白对照(空白对照组).采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blotting)法分别检测转染后细胞中miR-187和IGF-1R蛋白表达水平,噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况.Western blot检测与增殖和凋亡相关蛋白表达水平.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-187与IGF-1R靶向调控关系.结果 与人正常乳腺上皮细胞HBL-100(1.00±0.10)相比,乳腺癌细胞中miR-187表达水平明显降低(P<0.05),在MDA-MB-231细胞中表达水平最低(0.11±0.01).与miR-NC组和空白对照组相比,miR-187组的miR-187表达水平明显上调[(0.98±0.09)、(1.00±0.11)比(3.18±0.33),P<0.05],IGF-1R蛋白表达水平明显下调[(0.28±0.03)、(0.27±0.03)比(0.09±0.01),P<0.05],细胞增殖活力OD值[(0.79±0.08)、(0.82±0.08)比(0.43±0.04)]和PCNA表达水平[(0.39±0.04)、(0.40±0.04)比(0.20±0.02)]均显著降低(P<0.05),凋亡率[(5.02±1.13)％、(4.61±1.01)％比(20.38±3.44)％]和Cleaved Caspase-3表达水平[(0.09±0.02)、(0.08±0.02)比(0.58±0.07)]显著升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因实验显示miR-187与IGF-1R基因3'非编码区(UTR)存在靶向关系.结论 miR-187对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用,其作用机制与靶向抑制IGF-1R基因表达有关.     

miR-539增强顺铂对非小细胞肺癌耐药株的杀伤作用研究

目的 研究miR-539对顺铂诱导的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)耐药细胞株凋亡的影响.方法 通过荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测NSCLC细胞系和人正常支气管上皮细胞16HBE中miR-539表达情况;通过转染miR-539建立miR-539过表达细胞系,观察miR-539过表达对顺铂抑制NSCLC细胞生长率的影响,检测细胞凋亡水平及相关基因的表达.结果 NSCLC细胞系中miR-539表达水平低于人正常支气管上皮细胞(P<0.01).阴性对照组培养48、72、96 h NCI-H460细胞增殖率均明显低于空白对照组,转染miR-539组培养不同时间NCI-H460细胞增殖率均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.01).阴性对照组和转染miR-539组NCI-H460细胞凋亡率高于空白对照组(P<0.05).阴性对照组和转染miR-539组的Bcl-2、Bcl-xL基因表达量均低于空白对照组,且转染miR-539组低于阴性对照组,而Bim、Bax、P53、Myc基因表达量高于空白对照组,且转染miR-539组高于阴性对照组(P<0.05,P<0.01).结论 miR-539能够增强顺铂对NSCLC耐药细胞株的杀伤作用,可作为NSCLC基因治疗的有效靶点.     

SERPINB7对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响

目的 探讨丝氨酸蛋白酶抑制剂B7(SERPINB7)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用及其可能机制。方法 将人乳腺癌细胞系MCF-7分为sh-SERPINB7组、空白对照组(BC组)和阴性对照组(NC组);其中,sh-SERPINB7组和NC组分别转染SERPINB7 RNA干扰慢病毒和阴性对照慢病毒。采用qRT-PCR法检测SERPINB7 mRNA表达,CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭,Western blot法检测SERPINB7、Bax、Bcl-2、Snail、Slug、转化生长因子β(TGF-β)、Smad3和磷酸化Smad3(p-Smad3)的蛋白表达。结果 MCF-7细胞中SERPINB7蛋白表达高于人正常乳腺上皮细胞系MCF-10A(P<0.05)。与BC组和NC组相比,sh-SERPINB7组MCF-7细胞中SERPINB7 mRNA表达以及Bcl-2、Snail、Slug、TGF-β、p-Smad3蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,细胞划痕愈合率和侵袭细胞数减少,Bax蛋白表达增加(P<0...     

miR-34a靶向调控Akt/Bcl-2对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响

目的：探讨miR-34a通过下调AKT/BCL2信号通路对乳腺癌细胞多柔比星耐药性的影响及其分子机制?方法：通过实时定量PCR法检测miR-34a-3p在乳腺癌细胞（MCF-7）和乳腺耐药细胞株（MCF-7/ADR）中的表达,并成功构建miR-34a mimics/inhibitor调控其表达水平;通过CCK8法分别筛选多柔比星处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50值并处理细胞;使用CCK8,流式细胞技术以及免疫印迹实验验证在miR-34a过表达及干扰组中,乳腺癌细胞存活率,凋亡细胞百分比以及AKT/BCL2信号通路的改变。结果：miR-34a在MCF-7/ADR中的表达显著低MCF-7细胞,同时成功构建miR-34a过表达及敲减模型;多柔比星处理MCF-7及MCF-7/ADR细胞的IC50分别为0.89 μg/mL、13.61 μg/mL。当MCF-7及MCF-7/ADR细胞中miR-34a表达水平降低时,经多柔比星处理后,细胞存活率显著升高（P<0.05）,凋亡细胞比例显著减少（P<0.01）,同时下游AKT/BCL2信号表达上调（P<0.01）。而当MCF-7/ADR细胞中miR-34a表达升高时相应的观察到相反的细胞表型。结论：miR-34a在乳腺癌细胞中的表达下调,可能通过减少对AKT/BCL2信号的负向调控,减少细胞凋亡,进而增强细胞对多柔比星的耐药性。     

ERK抑制剂U0126通过下调cyclin D1与survivin蛋白表达抑制乳腺癌细胞增殖

目的研究ERK通路抑制剂U0126对乳腺癌细胞增殖的抑制作用,并探讨其调控机制。方法培养人乳腺癌细胞株MCF-7、MDA-MB231,将细胞分组干预,MTT法检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡; Western blot检测细胞中p-ERK/ERK、cyclin D1、survivin及cleaved caspase-3蛋白表达。结果MTT结果显示,U0126干预24、48 h后,MCF-7、MDA-MB231细胞抑制率明显增加(P <0. 01); MCF-7、MDA-MB231细胞经U0126干预24 h后,检测细胞周期及细胞凋亡,G_0/G_1期细胞比例较对照组明显增加,S及G_2期细胞比例下降(P <0. 05);而干预组细胞凋亡率较未干预组明显增多(P <0. 01); U0126处理人乳腺癌细胞2 h后,可阻断ERK的磷酸化,减少cyclin D1的蛋白表达,抑制survivin而上调cleaved caspase-3的表达,与对照组相比差异有显著性(P <0. 01)。结论 U0126通过阻断MCF-7、MDA-MB231细胞中ERK信号通路,调控cyclin D1,将细胞周期阻断在G_0/G_1期,抑制survivin而增加cleaved caspase-3表达,增加细胞凋亡,继而使乳腺癌细胞MDA-MB231、MCF-7的增殖受到抑制。     

miR-1307-3p通过靶向ISM1促进乳腺癌细胞的增殖和迁移

目的 探讨miR-1307-3p通过靶向ISM1促进乳腺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法 （1）利用TCGA 数据库分析miR-1307-3p在乳腺癌患者中的表达水平及其与临床指标的关系。（2）利用qPCR、CCK-8实验、细胞划 痕实验和流式细胞术检测过表达或沉默miR-1307-3p后乳腺癌MCF-7细胞miR-1307-3p表达、细胞增殖、迁移和凋 亡水平变化。（3）生物信息学分析软件预测 miR-1307-3p 的靶基因,同时采用双荧光素酶实验进行验证。结果 miR-1307-3p在乳腺癌细胞及乳腺癌组织中均显著上调。miR-1307-3p过表达可促进MCF-7细胞增殖和迁移;而 miR-1307-3p inhibitor则抑制细胞迁移,并诱导凋亡。ISM1可能是miR-1307-3p的靶基因。乳腺癌组织中ISM1表 达水平明显低于正常乳腺组织,且与临床病理分期有关。 结论miR-1307-3p可促进乳腺癌细胞增殖和迁移,可能 通过调控ISM1基因而影响乳腺癌的发生发展。     

miR-130a-3p下调CYLD表达对乳腺癌MCF-7细胞功能的影响

目的：探讨miR-130a-3p对人乳腺癌MCF-7细胞功能的影响及其可能的靶向基因。方法：应用脂质体介导方法将miR-130a-3p模拟物（实验组）或对照模拟物（对照组）转染MCF-7细胞,分别采用MTT方法和细胞划痕实验检测细胞增殖和迁移能力变化,印迹法检测细胞中miR-130a-3p靶基因圆柱瘤基因（CYLD）的表达。结果：与对照组比较,实验组MCF-7细胞的增殖和迁移能力增强（P＜0.05）,细胞中CYLD蛋白表达水平明显下调（P＜0.05）。结论：miR-130a-3p可能通过靶向调节CYLD蛋白表达增强人乳腺癌MCF-7细胞的增殖和迁移。     

miR-142-3p靶向HMGB1逆转乳腺癌细胞MCF-7对阿霉素的耐药性

目的化疗耐药是乳腺癌复发转移、治疗效果不理想的主要因素。本文探讨miR-142-3p通过靶向高迁移率族蛋白1(high-mobility group box 1,HMGB1)提高乳腺癌化疗敏感性的分子机制。方法实时荧光定量PCR检测人乳腺癌MCF-7细胞及阿霉素耐药株MCF-7/DOX细胞中的miR-142-3p水平;MTT法检测阿霉素(doxorubicin,DOX)处理后各组的增殖情况、流式细胞术检测凋亡率、Western blot检测HMGB1和自噬有关蛋白的表达水平;双荧光素酶报告实验评价miR-142-3p对HMGB1的靶向调控作用。结果阿霉素耐药株MCF-7/DOX细胞中的miR-142-3p水平明显下调。miR142-3p的过度表达增强了乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性和提高阿霉素诱导的凋亡比率。HMGB1是乳腺癌细胞中miR-142-3p的直接功能靶点,HMGB1的过表达可以明显解除由miR-142-3p上调所产生的细胞凋亡和自噬抑制。结论miR-142-3p的过表达可能通过抑制自噬靶向HMGB1,增强乳腺癌细胞对阿霉素的化学敏感性。miR-142-3p/HMGB1为提高乳腺癌对药物的敏感性提供了新的靶点,具有一定价值。     

人参皂苷Rg3对乳腺癌MCF-7细胞增殖和侵袭的影响

目的 观察人参皂苷Rg3对雌激素受体阳性的乳腺癌细胞MCF-7增殖和侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法 采用MTT法检测细胞的增殖能力,流式细胞仪分析细胞周期分布以及凋亡比率,通过Transwell小室观察细胞侵袭力,RT-PCR法检测细胞中的MMP-9 mRNA的表达。结果 与对照组相比,人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖;G₀/G₁期及S期细胞比例减少,而G₂/M期细胞比例显著增加;同时细胞凋亡比率亦明显提升,而细胞侵袭指数降低,且呈现良好的剂量、时间依赖性。同时人参皂苷Rg3还能显著抑制细胞中MMP-9 mRNA的表达水平(P<0.05)。结论 人参皂苷Rg3能抑制MCF-7细胞的增殖和侵袭,其作用机制可能与其能降低MMP-9基因的表达有关。     

野马追总黄酮的体内外抗乳腺癌活性及机制研究

目的 探究野马追总黄酮(TFE)的体内外抗乳腺癌活性及相关的作用机制。方法 MTT法检测TFE对乳腺癌细胞(MCF-7、T47D、MDA-MB-231、MDA-MB-468)和人正常乳腺上皮细胞MCF-10A增殖的影响;流式细胞术检测TFE对乳腺癌细胞周期和凋亡的影响;吖啶橙(AO)染色法检测TFE对细胞自噬的影响;Western blot检测细胞周期、凋亡、自噬相关蛋白的变化,以及PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化;建立MDA-MB-231细胞的裸鼠移植瘤模型,观察TFE的体内抗肿瘤活性。结果 TFE能明显抑制乳腺癌细胞增殖,并呈剂量依赖性,而对人正常乳腺上皮细胞无显著的抑制作用;TFE能增加G₂/M期细胞比例,上调p-cdc-2蛋白表达,下调cdc-2和Cyclin B1蛋白表达;TFE能显著增加乳腺癌细胞凋亡比例,上调促凋亡蛋白Bad和Bax表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2表达;TFV能够诱导乳腺癌细胞产生自噬,自噬相关蛋白LC3-II表达上升,p62表达降低;TFE能够抑制显著抑制PI3K和Akt的磷酸化水平;TFE能够在体内抑制裸鼠肿瘤的体积。结论 TFE通过抑制PI3K/Akt信号通路,阻滞细胞周期、诱导凋亡和自噬,进而在体内外抑制乳腺癌细胞的生长。