不同糖浓度下心肌细胞糖代谢情况及糖毒性对心肌细胞的伤害

目的 以体外培养的H9C2心肌细胞为模型,探讨不同糖浓度下心肌细胞糖代谢情况,并揭示糖毒性对心肌细胞是否有直接伤害作用.方法 同位素示踪法检测不同葡萄糖浓度时H9C2心肌细胞3氚标记-葡萄糖(3H-G)摄取的变化,相差显微镜、Hoechst 33258染色观察H9C2细胞凋亡的形态学变化,流式细胞仪检测H9C2细胞凋亡率.结果 培养24 h,高糖组H9C2细胞形态学开始发生变化;与5.5 mmol/L葡萄糖组比较,25.0 mmol/L葡萄糖组H9C2细胞3H-G摄取明显降低(P<0.01).培养48 h,Hoechst 33258染色观察到H9C2细胞凋亡明显增加;与5.5 mmol/L葡萄糖组比较,25.0 mmol/L葡萄糖组H9C2细胞凋亡率明显增加(P<0.01).结论 高糖浓度下心肌细胞的糖摄取明显降低,表明心肌细胞存在胰岛素抵抗.随着高糖的作用时间延长,心肌细胞发生了凋亡.高糖对心肌细胞有直接伤害作用.     

血管紧张素-(1-7)通过抑制ClC-3通道减轻高糖引起的心肌细胞损伤

目的 探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]能否通过调控ClC-3通道保护心肌细胞对抗高糖引起的损伤.方法 应用35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞24 h建立损伤模型.Ang-(1-7)或氯通道抑制剂与心肌细胞共处理24 h观察对高糖诱发的心肌细胞损伤的影响.应用细胞计数试剂盒8检测细胞存活率;Hoechst33258染色荧光显微镜照相术检测凋亡细胞的形态学改变;双氯荧光素染色荧光显微镜照相术测定细胞内活性氧水平;超氧化物歧化酶试剂盒测定活性;罗丹明123染色荧光显微镜照相术检测线粒体膜电位;Western blot法测定心肌细胞ClC-3通道蛋白的表达水平.结果 35 mmol/L葡萄糖处理H9c2心肌细胞24 h明显地增加ClC-3通道蛋白的表达水平(P<0.01);1μmol/LAng-(1-7)与葡萄糖共处理心肌细胞24 h显著地抑制葡萄糖对ClC-3通道蛋白表达的上调作用(P<0.01);1μmol/LAng-(1-7)或100μmol/L氯通道抑制剂氯通道抑制剂与葡萄糖共处理心肌细胞24 h减轻葡萄糖引起的损伤作用,表现为增加细胞存活率和超氧化物歧化酶活性,减小细胞凋亡数量,胞内活性氧水平及线粒体膜电位丢失(P<0.01).结论 ClC-3通道参与葡萄糖引起的心肌细胞损伤;Ang-(1-7)通过抑制ClC-3通道保护心肌细胞对抗葡萄糖引起的损伤.     

过表达ODC抑制氧化应激诱导大鼠心肌细胞凋亡的研究

目的构建过表达鸟氨酸脱羧酶(ODC)基因慢病毒载体,并研究其对氧化应激诱导大鼠H9C2心肌细胞凋亡的影响。方法构建大鼠ODC基因pHIV-ODC过表达质粒,与包装质粒psPAX2、pMD2G共转染293FT细胞,检测其侵染效率;包装慢病毒并侵染H9C2心肌细胞;72 h后观察其侵染效率,RT-PCR法检测细胞ODC mRNA的表达,利用CCK-8、Hochest33258染色检测ODC对H2O2诱导H9C2心肌细胞凋亡的影响。结果酶切及测序鉴定ODC序列正确插入慢病毒过表达载体。侵染H9C2细胞72 h后ODC mRNA水平较阴性慢病毒感染组显著升高。过表达ODC能抑制H2O2诱导的细胞活力下降,减轻H2O2诱导的心肌细胞凋亡,与H2O2组比较差异均有统计学意义(P<0.001)。结论成功构建的过表达ODC慢病毒,上调H9C2细胞中ODC的表达,过表达ODC能显著抑制氧化应激诱导的H9C2心肌细胞凋亡。     

柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护机制研究

目的探讨柴胡皂苷D对H2O2诱导大鼠心肌细胞H9c2损伤保护作用及机制。方法培养H9c2细胞,利用H2O2（400μM,4h）建立心肌细胞损伤模型。设立空白对照组、心肌损伤模型组（H2O2组）、柴胡皂苷D组（4滋M）,加入柴胡皂苷D预作用3h后,换成含浓度为400滋MH2O2的完全培养基,继续培养4h后,应用多功能酶标仪检测细胞内活性氧水平,Hoechst33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡变化,利用检测试剂盒检测细胞乳酸脱氢酶（LDH）和丙二醛（MDA）含量,同时利用荧光定量PCR（real-timePCR）技术检测过氧化物酶体增殖子活化受体（PPAR酌）、核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素加氧酶-1（HO-1）基因水平的表达变化。结果Hoechst33258染色和流式细胞检测结果显示：与对照组比较,H2O2组凋亡细胞升高,而柴胡皂苷D组的凋亡细胞量明显少于H2O2组（均P＜0.05）;细胞内活性氧（ROS）含量检测结果显示：H2O2组的细胞内ROS含量明显高于对照组,而柴胡皂苷D组明显低于H2O2组（均P＜0.05）;与对照组比较,H2O2组细胞LDH、MDA含量明显升高,柴胡皂苷D组细胞LDH、MDA含量明显降低（均P＜0.05）;柴胡皂苷D组的PPARγ、Nrf2、HO-1在mRNA水平的表达较H2O2组升高（均P＜0.05）。结论柴胡皂苷D能够降低H2O2诱导H9c2心肌细胞产生的氧化应激反应,对心肌细胞具有保护作用。     

山姜素对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察山姜素对新生大鼠心肌细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法利用体外培养的新生大鼠心肌细胞,给予200 mmol.L-1H2O2作用的同时给予不同浓度的山姜素作用24 h,MTT法测定细胞存活率,流式细胞仪分析细胞周期,Annexin V-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率,Western blot检测Caspase-3及Bcl-2表达。结果山姜素可显著抑制心肌细胞凋亡(P<0.01),其作用具有时间和浓度依赖性;同时改变细胞周期分布,与模型组比较,山姜素不同浓度组的细胞凋亡率有显著性差异(P<0.01)。结论山姜素可抑制H2O2导致的心肌细胞凋亡,并且改变细胞周期分布,从而促进心肌细胞的增殖。     

左旋紫草素通过减轻坏死性凋亡抑制高糖心肌细胞炎症的作用研究

目的 研究左旋紫草素抑制高糖心肌细胞炎症的机制.方法 培养H9 C2心肌细胞株,分为正常糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)和左旋紫草素低、中、高浓度(25、50、100μmol/L)分别预处理30 min的高糖组.CCK8测定各组心肌细胞活力;ELISA测定各组肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达;2,7-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)荧光探针测定活性氧簇ROS水平;蛋白质印迹技术检测坏死性凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达;Hoechst 33258核染色测定心肌凋亡细胞数量.结果 高糖处理H9 C2心肌细胞24 h能明显降低细胞存活率、增加ROS生成,升高TNF-α、IL-1β和IL-6表达水平,上调Cleaved Caspase-3及Cleaved PARP蛋白表达和增加凋亡细胞数量.左旋紫草素可抑制高糖诱导的心肌细胞损伤,升高细胞存活率,降低ROS生成,降低TNF-α、IL-1β和IL-6炎症因子水平,减轻凋亡细胞数量及坏死性凋亡蛋白Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP表达,呈剂量依赖性.结论 左旋紫草素抑制高糖心肌细胞炎症可能是通过降低坏死性凋亡实现.     

重组胰生定多肽对H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞凋亡的抑制作用

目的观察重组胰生定多肽(EXf)对H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞凋亡的影响。方法将INS-1细胞分成5组:空白对照组、阴性对照组、阳性对照组(EX-4)、给药组(EXf,终浓度分别为10、100 nmol/L),每组至少6孔。除空白对照组外,均给予终浓度为100μmol/L H2O2诱导INS-1胰岛β细胞凋亡模型。通过MTT检测法、Hoechest 33342染色法、DNA ladder检测法,观察EXf对H2O2诱导INS-1胰岛β细胞细胞存活率、形态学变化和凋亡的影响。结果 MTT实验结果显示与模型对照组相比,EXf能使H2O2处理的INS-1胰岛β细胞存活率明显增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。Hoechst 33342染色检测显示给药组细胞凋亡数量明显减少,正常细胞数量明显增加。EXf能明显抑制DNA ladder的出现,且呈一定量效关系。结论 EXf对H2O2诱导的INS-1胰岛β细胞的凋亡具有明显的保护作用。     

黄芩茎叶总黄酮对H2O2诱导的心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达的影响

目的 探讨黄芩茎叶总黄酮(scutellaria baicalelensis stem leaftotal flavonoid,SSTF)对过氧化氢(H2O2)诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡相关基因Bcl-2/Bax蛋白表达的影响.方法 培养大鼠乳鼠心肌细胞,随机分为3组,即正常对照组;H2O2损伤组;SSTF干预组.以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2/Bax蛋白表达变化;心肌细胞损伤程度以心肌细胞存活率表示.结果 H2O2损伤组心肌细胞Bcl-2蛋白的阳性表达指数(positive expression index,PEI)显著低于对照组(P＜0.01),Bax蛋白PEI明显高于对照组(P＜0.01),细胞存活率明显低于对照组(P＜0.01).SSTF干预组Bcl-2蛋白的PEI显著高于H2O2损伤组(P＜0.01),Bax蛋白PEI明显低于H2O2损伤组(P＜0.01),细胞存活率明显高于H2O2损伤组(P＜O.01).结论 SSTF对心肌细胞的保护效应可能与其促进Bcl-2蛋白高表达,抑制Bax蛋白的表达从而抑制心肌细胞凋亡有关.     

CBIQ对肺泡上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究CBIQ对肺泡上皮细胞株A549氧化损伤的保护作用.方法:应用MTT法检测不同浓度CBIQ对正常及过氧化氢(H2O2)损伤的肺泡上皮细胞株A549的保护作用;DNA Ladder检测细胞凋亡;相差显微镜观察Hoechst染色后细胞凋亡形态的变化.结果:H2O2损伤后的A549细胞经不同浓度CBIQ处理后,细胞死亡数明显减少.浓度为1×10-2,1×10-3mmol/L的CBIQ组平均细胞存活率分别为(76.1±0.8)%,(71.3±1.0)%,较损伤组(46.3±0.9)%明显增高(P<0.01);终浓度为100μmol/L H2O2及10μmol/LCBIQ共同干预A549细胞4 h后,可检测到凋亡标志性的DNA梯形带;实验组细胞凋亡率较对照组明显下降(P<0.05).结论:在一定浓度范围内,CBIQ对氧化损伤的A549细胞生长有浓度依赖性的保护作用,并可抑制氧化损伤的A549细胞发生凋亡.     

Calpain活化在H2O2诱导的成年小鼠心肌细胞损伤中的作用

目的探讨Calpain(钙蛋白酶)在ROS介导的心肌细胞损伤中的作用。方法原代培养的成年小鼠心肌细胞分为3组:对照组;H2O2组(用25μM H2O2处理原代培养的成年小鼠心肌细胞3h来模拟ROS介导的心肌细胞损伤);PD+H2O2组,H2O2处理前用20μM PD150606(Calpain抑制剂)预处理心肌细胞30min。检测各组细胞的存活率、Calpain活性、caspase-3活性、细胞色素C的释放以及Ca2+浓度的变化情况。结果与对照组相比较,H2O2组的细胞存活率下降;Calpain及caspase-3活性增高,细胞色素C的释放以及细胞内Ca2+均明显增加(P<0.05)。然而,用PD150606预处理细胞30min能抑制H2O2引起的上述变化。结论 Calpain活化在ROS介导的心肌细胞损伤中可能具有重要作用。     

内毒素对过氧化氢引起的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响

目的：观察内毒素(LPS)对过氧化氢(H₂O₂)诱导的神经胶质瘤C6细胞损伤的影响,探讨其相关机制。方法：C6细胞按处理方法不同分为空白对照组、100 μmol•L^-1 LPS组、1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组及1 000 μmol•L^-1 H₂O₂与100μmol•L^-1 LPS联合应用组。药物作用C6细胞6 h,取培养液上清与细胞沉淀,利用LDH检测试剂盒,采用紫外分光光度法检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率;原位末端标记技术(TUNEL)检测细胞凋亡率;应用RT-PCR检测相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA表达;Western blotting检测Bcl-2、Bax、Caspase-3、细胞色素C(Cyt-C)及CLIC4蛋白水平。结果：与空白对照组比较, 100 μmol•L^-1 LPS组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2、Bax表达率未见明显改变(P>0.05),而Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,与空白对照组比较,Bcl-2、Bax、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平未见明显变化(P>0.05) ,而Caspase-3蛋白水平高于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,1 000 μmol•L^-1 H₂O₂组C6细胞凋亡率及LDH释放率增加(P<0.05);在mRNA水平上Bcl-2表达率低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率高于空白对照组(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于空白对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3、CLIC4及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于空白对照组(P<0.05)。与H₂O₂组和LPS组比较,LPS与H₂O₂联合作用组细胞凋亡率及LDH释放率明显增加(P<0.05),在mRNA水平上Bcl-2表达率下降(P<0.05),Bax、Caspase-3表达率升高(P<0.05);在蛋白水平上,Bcl-2蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Caspase-3及胞浆Cyt-C蛋白水平明显高于对照组(P<0.05),而CLIC4蛋白水平变化不明显(P>0.05)。结论：单独应用LPS能够激活Caspase-3信号通路,引起C6细胞早期凋亡,同时LPS能促进H₂O₂引起的C6细胞损伤,其机制可能与凋亡相关的Bcl-2/Bax及Caspase-3途径过度激活有关。线粒体氯通道蛋白CLIC4在此过程中作用不明显。     

HMGB1在鉴别过氧化氢诱导心肌细胞凋亡和死亡中作用的研究

目的:观察不同浓度过氧化氢(H2O2)致心肌细胞损伤的作用,探讨心肌细胞凋亡和坏死时HMGB1的表达变化.方法:用H2O2作用于新生SD大鼠心肌细胞,建立心肌细胞损伤模型.观察心肌细胞状态,测定心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)浓度,并对心肌细胞用Western blot检测HMGB1.结果:H2O2致心肌细胞过氧化损伤,细胞存活率明显下降(P＜0.01),培养液LDH增高(P＜0.05),而SOD降低(P＜0.05).Western blot显示HMGB1在正常对照组和H2O2 A组表达量相同,H2O2 B组表达量明显增加.结论:心肌细胞凋亡时HMGB1表达正常、死亡时HMGB1表达增加.     

番茄红素对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：探讨番茄红素（Lycopene）对心肌细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养 H9c2心肌细胞,分为正常对照组（对照组）、番茄红素预处理组（Lycopene组）、模型组（H2 O2组）和番茄红素预处理后建立模型组（Lycopene加H2 O2组）。除对照组及Lycopene组外,其余各组用过氧化氢（H2 O2）200μmol／L处理6 h ,建立心肌细胞氧化应激损伤模型。Lycopene组建模前30 min加入5μmol／L的番茄红素。6 h后M T T观察H9c2心肌细胞存活率;分光光度计检测细胞培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）活性和细胞中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活性;激光共聚焦联合流式细胞仪观察细胞内活性氧（ROS）的产生和线粒体膜电位;流式细胞仪检测细胞凋亡;酶标仪检测细胞内ATP水平。结果与对照组比较,H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）。与 H2O2组比较,Lycopene加 H2O2组LDH、CK-BM、ROS、MDA及细胞凋亡率显著降低,差异有统计学意义（P＜0．05）;H9c2心肌细胞存活率、SOD、ATP及线粒体膜电位显著增加,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论番茄红素可以减轻氧化应激条件下H9c2心肌细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内氧化应激产物,增强细胞内抗氧化酶活性及改善线粒体功能有关。     

不同缝合方式对胆肠吻合术后并发症的影响

目的：：观察临床应用不同缝合方式对胆肠吻合术后并发症的影响。方法：选取2012年2月至2015年6月于我院进行胆肠吻合术的165例患者,简单随机分为 A、B、C 三组,每组55例,分别给予单纯间断、单纯连续以及降落伞式连续缝合,对比分析三组患者并发症发生情况。结果：三组患者的胆管直径、胆管壁水肿、胆汁性腹膜炎发生率比较差异无统计学意义(P>0.05),胆肠吻合时间比较 A 组高于 B、C 两组,差异具有统计学意义(P<0.05),B、C 两组间差异不具统计学意义(P>0.05),T 管放置率比较 A、B 两组高于 C 组,差异具有统计学意义( P <0.05),A、B 两组间比较差异无统计学意义( P >0.05)。胆漏及胆道缩窄发生率比较 A 组高于 B、C 两组,差异具有统计学意义(P <0.05),且 B 组较 C 组增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论：降落伞式连续缝合对减少胆肠吻合术并发症发生有明显效果。     

刺五加叶皂苷B对过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡的抑制作用

目的：探讨刺五加叶皂苷B（C-B）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的乳鼠心肌细胞凋亡的影响,阐明其对氧化应激损伤所致的心肌细胞凋亡的抑制作用。方法：乳鼠心肌细胞行原代培养,取自主搏动良好的心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2 损伤组(200 μmol•L^-1H2O2诱导心肌细胞凋亡)、100 mg•L^-1C-B 组和200 mg•L^-1 C-B 组,倒置相差显微镜观察细胞形态,MTT法检测细胞存活率,AnnexinⅤ-FITC 流式细胞术检测凋亡率,分光光度法检测Caspase-3活性,免疫印迹法检测细胞Caspase-3、PARP、Bcl-2和Bax蛋白表达。结果：与正常对照组比较,200 μmol•L^-1H₂O₂组心肌细胞有损伤性改变,细胞
存活率明显降低（P<0.001）,凋亡率升高（P<0.001）,Caspase-3活性增加（P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达减少,Caspase-3及Bax蛋白表达增多,PARP蛋白降解增多。与H2O2损伤组比较,100及200 mg•L^-1C-B组心肌细胞损伤性改变均减轻,细胞存活率增加（P<0.05或P<0.01）,凋亡率降低（P<0.001）,Caspase-3活性降低（P<0.05或P<0.01）,细胞Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达和Caspase-3蛋白表达减少,PARP蛋白降解减少（依据电泳条带的宽窄及明暗度判断蛋白表达程度）,且200 mg•L^-1C-B组的作用更明显。结论：C-B对H₂O₂诱导的心肌细胞凋亡有一定的抑制作用,可能与其调节细胞内凋亡相关蛋白Caspase-3、Bcl-2、Bax的表达有关。     

担载阿霉素的可降解静电纺丝纤维毡对小鼠H22肝癌移植瘤的抑制作用

目的：探讨担载阿霉素的可降解左旋聚乳酸和聚乙二醇的嵌段共聚物静电纺丝纤维毡（简称阿霉素缓释系统）对小鼠植入性肝癌的抗肿瘤作用。方法：用C-57BL小鼠和H22肝癌瘤株建立肝癌小鼠模型,并将其分为实验组（缓释剂瘤内植入组）、对照1组（阿霉素瘤内注射组）、对照2组（阿霉素静脉注射组）和对照3组（生理盐水静脉注射组）,分别于给药后第1、3、6、9和13天测量肿瘤的长、短径并计算肿瘤体积,第14天处死动物、剥离肿瘤标本,计算抑瘤率;同时对瘤体进行HE染色,行细胞凋亡相关蛋白fas和凋亡相关酶caspase-3的免疫组织化学分析,流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率。结果：给药后第6天实验组和对照1组小鼠的肿瘤体积增大速度小于其他组(P<0.05）;给药后第9和13天,实验组肿瘤的体积增大速度明显小于对照1、2和3组 (P<0.05）,第14天实验组肿瘤生长抑制率明显高于对照1和2组(P<0.01）。HE染色结果显示实验组瘤体组织坏死程度较重;免疫组化结果显示实验组肿瘤细胞的凋亡相关蛋白fas和凋亡相关酶caspase-3的表达明显高于对照组(P<0.01）;流式细胞仪检测显示实验组肿瘤细胞凋亡率明显高于对照组(P<0.01）。结论：植入的阿霉素缓释系统对小鼠H22肝癌移植瘤能产生较好的抑制作用,并可明显加快肿瘤细胞的凋亡速度。     

人参蛋白对β淀粉样蛋白1-40和H2O2损伤神经元的保护作用及其机制

目的：探讨人参蛋白(GP)对β淀粉样蛋白1-40（Aβ1-40）和过氧化氢（H2O2）诱导神经元损伤的影响,阐明GP对神经元的保护作用及其机制。方法：从新生乳鼠大脑皮层中分离纯化神经元,培养12 d后,分别采用Aβ1-40（30 μmol•L-1）和H2O2 （200 μmol•L-1）诱导神经元损伤,并随机分为模型组（Aβ1-40模型组与H2O2模型组,不加药物）、GP组和GP含药血清组。采用MTT法检测各组神经元存活率;试剂盒法检测细胞培养上清液中一氧化氮合酶（NOS）活性和一氧化氮（NO）水平;Hoechst 33342/PI荧光染色检测细胞凋亡与坏死率。结果：倒置荧光显微镜,Aβ1-40和H2O2处理后,神经元数量明显减少,轴突缩短或消失,
胞体变圆、缩小,大小不等,核固缩,核染色质聚集;Heochst 33342染色呈现高蓝光;部分细胞PI染色呈现高红光。加入GP及其含药血清后,神经元数量增多,胞体增大,细胞核着色形态为圆形、淡蓝色,PI阳性细胞数量减少。MTT法,GP组细胞存活率明显高于模型组（P<0.05或P<0.01）,GP含药血清组与模型组无显著差异（5％GP含药血清组除外,P>0.05）;试剂盒法,GP组细胞培养上清液中NOS活性与NO水平明显低于模型组（P<0.05　或P<0.01）
;Hoechst 33342/PI法,GP及其含药血清组细胞凋亡率低于模型组,以GP组差异更明显（P<0.05或P<0.01）,GP及其含药血清组细胞坏死率与模型组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：GP具有神经保护作用,作用机制与减少NOS活性、降低NO水平、抑制神经元凋亡有关。
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敲低EphB1基因对过氧化氢诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤的影响

目的：探讨敲低EphB1基因对过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠心肌H9c2细胞氧化损伤的影响,为EphB1基因治疗心血管疾病提供依据。方法：体外培养大鼠心肌H9c2细胞,分为空白组（不做任何处理）、H₂O₂组（H₂O₂细胞损伤）、阴性对照组（转染siRNA control）和转染si-EphB1组（转染si-EphB1后H₂O₂细胞损伤）。实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组H9c2细胞中EphB1基因表达水平,噻唑蓝（MTT）法检测各组H9c2细胞存活率,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况,DCFH-DA探针法检测各组细胞内活性氧（ROS）水平,分光光度计法检测各组细胞中丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）水平。结果：与空白组比较,H₂O₂组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显升高（P<0.05）,阴性对照组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平无明显变化（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组H9c2细胞中EphB1 mRNA表达水平明显降低（P<0.05）。与空白组比较,H₂O₂组细胞存活率降低（P<0.05）,细胞凋亡率升高（P<0.05）,ROS和MDA水平升高（P<0.05）,SOD水平降低（P<0.05）,而阴性对照组细胞存活率、凋亡率、ROS、MDA和SOD水平差异无统计学意义（P>0.05）;与H₂O₂组比较,转染si-EphB1组细胞存活率升高（P<0.05）,细胞凋亡率降低（P<0.05）,ROS和MDA水平降低（P<0.05）,SOD水平升高（P<0.05）。结论：敲低EphB1基因能够抑制H₂O₂诱导的大鼠心肌细胞氧化损伤,起到心肌保护作用,其机制与提高心肌细胞存活率、抑制细胞凋亡、改善抗氧化酶活性和提高细胞内氧化应激产物清除能力有关。     

红景天苷对H9c2心肌细胞应激高糖损伤的保护作用及机制研究

目的?利用氧化应激联合高糖复合损伤心肌细胞,建立H9c2心肌细胞应激及高糖损伤模型,探讨应激高糖H9c2心肌细胞线粒体动力学相关蛋白表达、线粒体膜电位水平及细胞凋亡的影响,以及红景天苷对应激高糖H9c2心肌细胞的保护作用及其机制。方法?将正常培养的H9c2细胞随机分为5组:①对照组（C组,正常培养基）;②高糖组（G组,高糖培养基）;③H₂O₂组（H组,H₂O₂处理2小时后,更换为正常培养基继续培养）;④高糖+H₂O₂组（GH组,H₂O₂及高糖处理2小时后,更换为高糖培养基继续培养）;⑤红景天苷+高糖+H₂O₂组（SGH组,H₂O₂+高糖+红景天苷处理2小时后,更换为红景天苷+高糖培养基继续培养）。分组加药培养后,利用流式细胞技术分析各组H9c2心肌细胞的凋亡率;Western blot分别检测线粒体动力学相关蛋白Drp1、OPA1的表达水平;JC-1荧光染色法检测各组心肌细胞的线粒体膜电位水平。结果?①与C组比较,G组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低（P<0.01）;线粒体膜电位下降,细胞凋亡率升高（P＜0.05）;与C组比较,H组及GH组H9c2细胞Drp1蛋白表达水平显著升高,OPA1蛋白表达水平显著降低,线粒体膜电位显著下降,细胞凋亡率显著升高（P<0.01）。②与GH组比较,SGH组Drp1蛋白表达水平显著降低,OPA1蛋白表达水平显著升高,线粒体膜电位显著升高,细胞凋亡率显著降低（P<0.01）。结论?①氧化应激联合高糖通过降低线粒体膜电位,抑制H9c2心肌细胞线粒体动力学平衡,增加心肌细胞凋亡,从而损伤心肌细胞。②红景天苷可抑制氧化应激联合高糖引起的H9c2心肌细胞凋亡,其机制与升高线粒体膜电位水平以及增加线粒体OPA1蛋白表达、抑制Drp1蛋白表达从而改善线粒体动力学平衡有关;红景天苷对应激高糖心肌细胞具有一定的保护作用,值得进一步深入研究。      

Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

目的：探讨 Ghrelin 预处理对 H9C2心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。方法培养 H9C2心肌细胞并建立心肌细胞缺氧(21 h)/复氧(6 h)模型。细胞随机分成4组：对照组,缺氧/复氧组(H/ R 组),缺氧/复氧+ Ghrelin 组(H/ R +G 组),缺氧/复氧+ Ghrelin +生长激素促分泌素受体(GH-SR)-siRNA 组(H/ R + G + G-siRNA 组);采用 siRNA 干扰技术阻断 Ghrelin 受体 GHSR 的表达以及 Hoechst 33258染色剂和流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot 法检测各组凋亡相关蛋白表达情况。结果 GHSR 存在于正常H9C2心肌细胞中,GHSR-siRNA 可以显著抑制 H9C2心肌细胞中 GHSR 的表达。与 H/ R 组相比,在 H/ R + G 组中缺氧/复氧损伤所导致心肌细胞的凋亡率明显下降(P <0．05),B淋巴细胞瘤-2蛋白/ Bcl-2相关 X 蛋白(Bcl-2/ Bax)比率明显上调(P <0．05),含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)表达水平被显著抑制(P <0．05)。而与 H/ R + G组相比,H/ R + G + G-siRNA 组心肌细胞凋亡率增加( P <0．05),Bcl-2/ Bax 比率显著下降(P <0．05),caspase-3表达上调(P <0．05)。结论 Ghrelin 具有减轻缺氧/复氧所引起的心肌细胞损伤、抑制心肌细胞凋亡的作用。