微核着丝粒的荧光原位杂交技术在辐射研究中的应用

微核分析因其在遗传毒理学和辐射生物剂量学中的广泛应用而受到人们关注。近年来,随着分子遗传学及荧光原位杂交(FISH)技术的发展,人们对微核有了进一步的认识。FISH技术能用于解释微核的形成机理、功能及微核的超微结构,并可用于辐射损伤的遗传学评价。     

荧光原位杂交微核技术在辐射生物剂量学的应用研究

目的探讨荧光原位杂交(FISH)微核作为生物剂量计及评价职业受照射人群辐射效应的可行性。方法用^137Cs7射线不同剂量(0．1～2．5Gy)照射离体人外周血细胞，用泛着丝粒探针的FISH技术进行微核分析，拟合剂量效应方程；检测医用X射线工作者的无着丝粒微核率并估算其生物剂量。结果离体照射条件下微核率随吸收剂量增加而增加，以无着丝粒微核增加为主，着丝粒微核仅有轻度增加。微核率与剂量之间的拟合曲线方程，CB微核法：Y=0．005 0．036D 0．01ID^2，R^2=0．99；FISH微核法：Y=0．001 0．035D 0．007D^2，R^2=0．99。结论FISH微核法优于CB微核法。用FISH微核法对医用X射线工作者的检测结果显示无着丝粒微核率可以用来估算生物剂量。     

荧光原位杂交技术在辐射剂量学中应用进展

荧光原位杂交技术在辐射剂量学中应用进展姜涛作者单位：１０００８８北京，卫生部工业卫生实验所早在六十年代，当染色体分析技术开始用于辐射剂量估算时，一些染色体工程学者就打趣说：“如果生物学家能将每一条染色体涂染成不同颜色，一切就将变得简单得多”。三十年后...     

M-FISH技术检测辐射诱导染色体易位和双着丝粒畸变

目的　探讨用多色荧光原位杂交 (M FISH)技术检测的易位和双着丝粒染色体畸变的差异。方法　用 1,2 ,3,7,8,9,14和 15号染色体端粒和着丝粒特异性探针的M FISH方法 ,分析6 0 Coγ射线离体照射的脐带血淋巴细胞染色体易位和双着丝粒畸变。结果　 (1)用M FISH方法分析6 0 Coγ射线诱导的易位和双着丝粒染色体畸变的剂量 效应曲线 ,均符合线性二次剂量效应模式 ;易位与双着丝粒的比值在大多数剂量水平不等于 1。 (2 )细胞中无非稳定性畸变的完全相互易位的比例随着吸收剂量的增加而降低。 (3)对大多数被标记染色体 ,3 0 0Gyγ射线照射诱发的染色体畸变观察值与理论值无差别 ;9号染色体畸变 (易位和双着丝粒 )观察值显著高于理论值 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,15号染色体易位观察值显著低于理论值 (P <0 0 1)。结论　电离辐射诱导的染色体易位率不等于双着丝粒畸变率 ;对于大多数染色体 ,辐射诱发染色体易位率和双着丝粒畸变率符合随机性规律。     

荧光染色体原位杂交技术在产前诊断中的应用

目的 建立并优化荧光染色体原位杂交技术并评价其在胎儿21、18、13、X和Y染色体数目异常产前诊断中的临床应用价值.方法 常规穿刺取羊水或脐带血样本196例,经低渗、固定、制片、老化等,直接利用两组特异性探针(GLP 13/GLP 21和CSP18/CSP X/CSP Y)进行原位杂交,快速检测羊水或脐带血细胞中21、18、13、X和Y染色体的数目,并同时对样本进行经典的细胞培养和染色体核型分析.结果 以≥90％的细胞显示的荧光信号点数目作为染色体数目的判断标准,正常情况下GLP 13/GLP 21探针组显示2个绿色荧光点/2个红色荧光点,CSP18/CSP X/CSPY探针组显示2个蓝绿色荧光点/2个黄色荧光点(女性)或者2个蓝色荧光点/1个黄色荧光点/1个红色荧光点(男性).196例羊水或脐血均在72～96h内给出报告,检出21三体综合征7例、l8三体综合征2例、性染色体异常(47,XYY)1例,与1个月后报告的染色体核型分析结果一致.结论 荧光染色体原位杂交方法可用于快速产前诊断胎儿21、18、13、X、Y染色体数目异常,与常规的染色体核型分析技术结合,可快速准确地检测胎儿染色体的非整倍体异常.     

荧光原位杂交技术作为辐射生物剂量计的可行性研究

荧光原位杂交技术检测辐射诱发畸变的结果与Ｇ显带等传统方法的结果相吻合，但同时又具有其它方法所不具备的优点，特别是能准确检测易位，所以将可能成为估算慢性照射剂量和早先事故照射剂重建的理想手段。     

荧光原位杂交技术作为辐射生物剂量计的可行性研究

荧光原位杂交技术检测辐射诱发畸变的结果与Ｇ显带等传统方法的结果相吻合，但同时又具有其它方法所不具备的优点，特别是能准确检测易位，所以将可能成为估算慢性照射剂量和早先事故照射剂量重建的理想手段     

荧光标记染色原位杂交技术及其应用

介绍了荧光标记染色体原位杂交技术的基本过程，各种探针的特点、用途及制备方法，并叙述了此技术在基因定位、生物剂量估计和临床诊断等领域里的广泛应用。     

多色荧光原位杂交显带技术在高、低传能线密度辐射损伤中的应用

淋巴细胞染色体畸变率与电离辐射密切相关,并且已经广泛应用于辐射损伤的生物剂量评估.多色荧光原位杂交显带技术(mBAND)是染色体畸变检测的重要新兴技术,并且逐步应用于不同传能线密度(LET)射线所引起的染色体畸变检测.该文对mBAND技术在X、γ射线所属的低LET射线和太空射线及高能重离子流所属的高LET射线中的应用,二者引起不同染色体畸变类型以及产生的不同辐射生物剂量效能作综合阐述.     

荧光标记染色体原位杂交技术及其应用

介绍了荧光标记染色体原位杂交技术的基本过程，各种探针的特点、用途及制备方法，并叙述了此技术在基因定位、生物剂量估计和临床诊断等领域里的广泛应用。     

荧光原位杂交技术检测细胞内在放射敏感性的研究

长期以来 ,细胞的内在放射敏感性在放射生物学和肿瘤学领域中是研究的焦点之一 ,在放疗前预测个体肿瘤和正常组织对辐射的反应 ,可使临床医生选择合适的治疗方案 ,提高治愈率 ,减少并发症[1 ] 。研究发现 ,辐射诱发的染色体畸变与细胞放射敏感性有很好的相关性 ,有望成为细胞内在放射敏感性的预测指标[2 ] 。但在应用于临床之前 ,尚需进行大量的基础性工作。笔者应用ＦＩＳＨ技术及噻唑蓝比色法(ＭＴＴ法 )研究了辐射诱发的染色体畸变细胞率与细胞内在放射敏感性之间的关系。一、材料和方法1 细胞系和培养 :人成纤维细胞系ＧＭ6 37,ＡＴ5…     

荧光原位杂交技术在石油化工业探伤人员剂量重建中的应用研究

目的对早年从事放射工作的人员进行剂量重建。方法用1^#、4^#全染色体探针进行荧光原位杂交(FISH)分析了22名探伤人员及10名对照者的染色体畸变。结果探伤人员染色体易位率、总畸变率显著高于对照组，二者差异有统计学意义；染色体易位率随探伤工龄增加而增加；探伤人员生物剂量与物理剂量比较基本一致。结论用FISH方法检测染色体畸变对早期受照射人员进行剂量重建是可行的。     

荧光原位杂交法分析中国医用诊断X射线工作者的染色体易位畸变

目的　用荧光原位杂交技术研究小剂量职业受照者的辐射损伤远期效应。方法　用4 #和 7#全染色体探针和荧光原位杂交技术 ,分析 2 5名早期X射线工作者的染色体易位 ,按照PAINT分类法进行。结果　X射线工作者基因组易位率为 (13 14± 1 2 3) 10 0 0细胞。完全性易位与不完全性易位为 1∶1 7。 196 5年后工作的X射线工作者不完全性易位 (Ti)与对照组相比差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;196 5年前工作的X射线工作者不完全性易位 (Ti)和完全性易位 (Tc)与对照组相比差异有显著性 (分别为P <0 0 1,P <0 0 5 )。结论　医用诊断X射线工作者染色体易位以不完全性易位为主。染色体易位率与染色体DNA含量无关。不完全性易位T(Ab)、T(Ba)和完全性易位Tc均随着放射性工龄的增长而增加     

荧光原位杂交技术在膀胱癌早期诊断中的作用

目的通过荧光原位杂交(FISH)技术检测尿液内脱落细胞染色体异常情况,以提高膀胱癌早期诊断率,减少患者膀胱镜检查次数。方法应用FISH技术分析110例血尿患者尿脱落细胞染色体异常情况,其中包括膀胱癌86例、泌尿系感染12例、滤泡增生(腺性膀胱炎)4例、良性肿瘤(乳头状瘤)4例、不明原因血尿4例。上述患者均经膀胱镜组织活检确诊。比较FISH检测与病理切片检查在确诊膀胱肿瘤上的区别。结果 86例膀胱癌患者中有68例FISH检测结果为阳性,剩余18例FISH检测为阴性的膀胱癌患者中有10例为小于5mm的Ta期浅表膀胱癌。与病理学检查结果比较,FISH检测的特异性为100%,敏感性为87%。FISH检测结果发现T1及T2期膀胱癌细胞染色体异常数目明显高于Ta期膀胱肿瘤(P<0.05),但在T1及T2期膀胱肿瘤间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 FISH检测具有敏感性高、特异性强、无创伤等优点,在初步诊断及监测膀胱癌复发方面具有较好的临床应用前景,有可能成为简便、有效的膀胱癌初筛指标之一。     

阿多拉扶正霖对钴辐射诱发小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响

目的 观察小鼠受钴(~(60)Co)γ射线照射前后,分别口服阿多拉扶正霖(ADL)冲剂,对诱发骨髓嗜多染红细胞微核的影响。方法 将昆明种小鼠随机分成对照组、~(60)Coγ射线照射A组、ADL预防组、~(60)Coγ射线照射B组和ADL治疗组,每组16只,雌雄各半。以ADL 6g/kg体重每天灌胃1次,连续8天。ADL预防组与A组于第9天照射,第10天处死;ADL治疗组与B组于第1天照射,第10天处死。~(60)Coγ射线照射剂量为2.0Gy,全身1次照射。小鼠处死后制作骨髓片,常规染色与计数。结果 无论是ADL预防组还是治疗组,微核率均比相应的~(60)Coγ射线照射组低,有非常显著性差异(P<0.01),两个~(60)Coγ射线照射组之间和两个ADL组之间,差异均不显著(P>0.05)。结论 ADL可在短期内恢复由~(60)Coγ射线造成的小鼠骨髓嗜多染红细胞微核率的上升,提示ADL有抗辐射损伤的作用。     

原位杂交技术在软骨组织工程研究中的应用

组织工程学是近 10年来发展起来的一门新兴学科 ,软骨组织工程学研究为软骨缺损的修复提供了新的方法[1,2 ] 。通过各种组织学、免疫组织化学以及原位杂交等手段 ,对建造的组织工程化人工软骨进行检测 ,是进行软骨组织工程研究的重要一环 ,尤其是原位杂交技术因其具有敏感、组织定位准确等优势 ,是对建造的组织工程化软骨质量进行评价的重要手段 ,但国内相关研究尚少。本研究应用辣根过氧化物酶显色系统的原位杂交技术 ,探讨对组织工程化人工软骨中Ⅰ、Ⅱ型胶原进行检测的方法。1　材料与方法1.1　材料Ⅰ、Ⅱ型胶原基因探针 (胶原蛋白Ⅰ、Ⅱ…     

胞浆分裂阻滞微核法对山东"10·21"辐射事故病人受照射剂量的估算

目的 对山东"10·21"辐射事故中2例严重受照射者进行淋巴细胞微核(MN)检测,并估算受照射剂量.方法 用胞浆分裂阻滞微核(CBMN)法对2例患者(A和B)的外周血和骨髓样本分别进行MN检测.结果 2例患者的外周血培养均未见双核淋巴细胞.患者A的骨髓培养所获双核细胞极少,依据双核淋巴细胞多少粗估剂量＞20Gy.患者B的骨髓MN率为2.42个/细胞,剂量估计为8.7(8.0～9.4)Gy,与用染色体畸变分析、物理方法及ESR法所估算剂量接近,与临床表现基本一致.结论 MN法简便快速,结果准确,是除染色体畸变分析之外又一种可靠的生物剂量计.     

多色荧光原位杂交技术的建立及其在早先受照射者剂量重建中的应用

目的 建立多色荧光原位杂交方法，并探讨用该方法进行早先辐射受照射者的剂量重建的可行性。方法 筛选8对染色体端粒和着丝粒特异性人工细菌染色体(BAC)克隆，建立多色荧光原位杂交方法，用该方法分析^60Coγ射线离体照射的新生儿脐带血淋巴细胞染色体畸变，并建立相应的标准剂量—效应曲线，参照标准剂量—效应曲线来估算两例早先受照射者的累积吸收剂量。结果 本研究中建立的多色荧光原位杂交方法用生物素和(或)地高辛将端粒和着丝粒BACDNA标记成绿、红、黄(绿 红)3种荧光染色，使得1，2，3，7，8，9，14和15号染色体很容易辨认。用该方法分析受^60Coγ射线照射的新生儿脐带血淋巴细胞染色体畸变，除断片外，其他染色体畸变的剂量—效应曲线均为线性二次剂量反应模式。用所有细胞或稳定性细胞中的完全相互易位率作指标，估算了两例早先受射照者的吸收剂量。结论 本研究所建立的多色荧光原位杂交方法可以用来进行早先受照射者的剂量重建。