异体脱矿松质骨基质和纳米羟基磷灰石材料应用于牙周组织工程中的可行性探讨

目的 进行人牙周膜细胞（PDLCs)三维立体培养的体外实验研究，初步探讨两种支架材料应用于牙周组织工程的可行性，为进一步研究牙周组织生理病理及牙周组织工程奠定实验基础。方法 组织块法培养人PDLCs，传代扩增后，接种于脱矿松质骨基质（CBM）和纳米羟基磷灰石材料（nHAC)两种三维支架上，体外继续培养3d，进行细胞计数和扫描电镜观察。结果 人PDLCs在两种支架材料上均能形成良好贴附并增殖，扫描电镜可见两种支架材料均具有良好的多孔网状结构，细胞在支架材料上生长旺盛，伸展充分。结论 CBM和nHAC均有望成为牙周组织工程的支架材料。     

构建人牙囊细胞三维立体培养模型及其用于牙周组织工程的可行性

目的:构建人牙囊细胞的体外三维立体培养模型,探讨两种支架材料用于牙周组织工程的可行性。方法:实验于2003-01/2004-10在第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心完成。采用酶消化法原代培养人牙囊细胞,传代扩增后,取第4代细胞分别接种于煅烧骨和Ⅰ型胶原膜三维支架上,体外继续培养1周,进行细胞记数和扫描电镜观察细胞生长状况。结果:细胞在两种材料上均能良好贴附并增殖,扫描电镜可见人牙囊细胞在这两种支架材料上均黏附良好,增殖旺盛,伸展充分,并有基质分泌。结论:煅烧骨和冻干胶原膜均有望成为牙周组织工程支架材料。     

构建人牙囊细胞三维立体培养模型及其用于牙周组织工程的可行性

目的：构建人牙囊细胞的体外三维立体培养模型，探讨两种支架材料用于牙周组织工程的可行性。方法：实验于2003-01／2004-10在第四军医大学口腔医学院组织工程实验中心完成。采用酶消化法原代培养人牙囊细胞，传代扩增后，取第4代细胞分别接种于煅烧骨和Ⅰ型胶原膜三维支架上，体外继续培养1周，进行细胞记数和扫描电镜观察细胞生长状况。结果：细胞在两种材料上均能良好贴附并增殖，扫描电镜可见人牙囊细胞在这两种支架材料上均黏附良好，增殖旺盛，伸展充分，并有基质分泌。结论：煅烧骨和冻干胶原膜均有望成为牙周组织工程支架材料。     

松质骨基质材料应用于牙周组织工程的可行性

背景：松质骨基质材料具有骨诱导性和骨传导性双重特性,已被成功应用于骨再生及骨组织工程研究。目的：分析松质骨基质材料的细胞相容性与毒性,探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法：采用改良组织块法体外培养人牙周膜细胞,将其接种于松质骨基质三维支架上复合培养,采用细胞计数方法和扫描电镜观察人牙周膜细胞在松质骨基质支架上的附着、生长情况,并通过MTT测试法和碱性磷酸酶活性检测法观察松质骨基质浸提液对人牙周膜细胞增殖及功能表达的影响。结果与结论：扫描电镜可见松质骨基质具有良好的多孔网状结构,人牙周膜细胞在松质骨基质上贴附紧密,生长旺盛,伸展充分,而人牙周膜细胞在不同浓度材料浸提液中的生长、增殖及碱性磷酸酶活性与阴性对照组相比差异无显著性意义。表明松质骨基质具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望应用于牙周组织再生及牙周组织工程研究。     

骨髓基质细胞三维立体培养的体外实验研究和应用于牙周组织工程的意义

目的:探讨磷酸三钙(TCP)、珊瑚羟磷灰石(CHA)两种生物材料作为牙周组织工程支架材料的可行性,为用组织工程方法修复牙周组织缺损提供依据。方法:将骨髓基质细胞分别接种到TCP,CHA两种支架材料上,体外培养后进行细胞增殖、矿化能力测定和扫描电镜观察。结果:骨髓基质细胞能在TCP,CHA上贴附、生长,其增殖、功能不受影响,矿化能力亦无明显变化。结论:TCP,CHA均可作为骨髓基质细胞的载体应用于牙周组织工程研究。     

骨髓基质细胞三维立体培养的体外实验研究和应用于牙周组织工程的意义

目的：探讨磷酸三钙(TCP)、珊瑚羟磷灰石(CHA)两种生物材料作为牙周组织工程支架材料的可行性，为用组织工程方法修复牙周组织缺损提供依据。方法：将骨髓基质细胞分别接种到TCP，CHA两种支架材料上，体外培养后进行细胞增殖、矿化能力测定和扫描电镜观察。结果：骨髓基质细胞能在TCP，CHA上贴附、生长，其增殖、功能不受影响，矿化能力亦无明显变化。结论：TCP，CHA均可作为骨髓基质细胞的载体应用于牙周组织工程研究。     

珊瑚转化羟基磷灰石应用于牙周组织工程的细胞相容性和细胞毒性

背景:经处理后的珊瑚转化羟基磷灰石具有良好的生物相容性和可降解性,其三维相通的孔隙结构不仅可为种子细胞的黏附、增殖提供足够的内部空间和表面积,而且有利于营养成分的渗透和血管化形成。目的:对珊瑚转化羟基磷灰石进行细胞相容性和细胞毒性的研究,以初步探讨其应用于牙周组织工程的可行性。方法:将体外培养的人牙周膜细胞接种到珊瑚转化羟基磷灰石支架上体外三维复合培养,通过细胞计数方法和扫描电镜观察人牙周膜细胞在珊瑚转化羟基磷灰石支架上的附着、生长情况,并设立阴性对照组和阳性对照组,采用MTT测试法和碱性磷酸酶活性检测法评估稀释浓度分别为100%,50%,10%,1%的珊瑚转化羟基磷灰石浸提液对人牙周膜细胞增殖及功能表达的影响。结果与结论:珊瑚转化羟基磷灰石具有良好的多孔网状结构,人牙周膜细胞在珊瑚转化羟基磷灰石支架上生长旺盛,伸展充分,而不同浓度的材料浸提液对人牙周膜细胞的生长、增殖及碱性磷酸酶活性的影响差异均无显著性意义。提示珊瑚转化羟基磷灰石具有良好的三维空间结构和细胞相容性,且无细胞毒性,有望用作牙周组织工程的支架材料。     

BMP-2基因修饰的骨髓基质干细胞种植纳米骨的实验研究

[目的]用携带BMP-2基因的腺病毒表达载体(Ad-BMP-2)转染兔骨髓基质干细胞(MSC),接种于胶原基纳米骨支架(nHAC)体外构建组织工程骨.[方法]将BMP-2基因修饰的MSC接种于nHAC支架,扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况;Western Blot分析BMP-2基因表达.[结果]BMP-2基因修饰的MSC在nHAC支架表面和孔隙内黏附、生长良好,仍可高水平表达BMP-2蛋白.[结论]BMP-2基因修饰的MSC在nHAC支架中黏附、生长良好,继续高水平表达并分泌BMP-2,组织工程骨构建成功.     

丝蛋白应用于牙周组织工程的可行性

背景：丝蛋白是有利于表皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、胶质细胞黏附和生长的一种新型生物材料。目的：评估丝蛋白作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法：采用组织块法培养人牙周膜细胞,将第5代细胞悬液以2×107L-1的浓度接种到丝蛋白支架材料上复合培养,并以1%,10%,50%,100%的丝蛋白支架浸提液培养,观察人牙周膜细胞在丝蛋白上及在丝蛋白浸提液中生长状况,用MTT法测定浸提液培养人牙周膜细胞的活力。结果与结论：扫描电镜可见人牙周膜细胞在丝蛋白支架上伸展充分,生长旺盛,不同浓度丝蛋白支架浸提液培养对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶活性均无影响。说明丝蛋白材料具有良好的生物相容性、独特的力学性能,可作为人牙周膜细胞黏附生长的理想支架材料较好地应用于牙周组织工程中。     

丝蛋白应用于牙周组织工程的可行性

背景:丝蛋白是有利于表皮细胞、成纤维细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、胶质细胞黏附和生长的一种新型生物材料。目的:评估丝蛋白作为支架材料应用于牙周组织工程的可行性。方法:采用组织块法培养人牙周膜细胞,将第5代细胞悬液以2×107L-1的浓度接种到丝蛋白支架材料上复合培养,并以1%,10%,50%,100%的丝蛋白支架浸提液培养,观察人牙周膜细胞在丝蛋白上及在丝蛋白浸提液中生长状况,用MTT法测定浸提液培养人牙周膜细胞的活力。结果与结论:扫描电镜可见人牙周膜细胞在丝蛋白支架上伸展充分,生长旺盛,不同浓度丝蛋白支架浸提液培养对人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶活性均无影响。说明丝蛋白材料具有良好的生物相容性、独特的力学性能,可作为人牙周膜细胞黏附生长的理想支架材料较好地应用于牙周组织工程中。     

牙周组织工程研究进展：问题与应用

背景：组织工程技术的出现为实现牙周组织完全再生提供了全新的思路和方法.目的：就近年来牙周组织工程种子细胞、生长因子和支架材料三大基本要素的最新研究及相关进展进行简要综述.方法：由第一作者检索PubMed数据库关于牙周组织工程研究方面的文章,检索词为“periodontal tissue englneenng”,限定文献语言种类为English;同时检索CBM数据库2009年1月至2013年12月相关牙周组织工程方面的文献,检索词为“牙周组织工程”.排除重复性研究,最终纳入30篇文献进行综述.结果与结论：研究证实牙周膜干细胞在牙周组织再生领域是具有良好的应用前景,骨髓基质干细胞是修复牙周组织缺损的一种较为理想的种子细胞,牙囊细胞具有多向分化潜能,可以形成牙周组织.多种生物活性分子已被证实有较强的牙周组织修复功能,与牙周组织工程相关的主要生长因子有血小板衍化生长因子、骨形态发生蛋白、转化生长因子β、胰岛素样生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、釉基质衍生物等.目前应用于牙周组织工程的支架材料主要分为天然生物材料和人工合成材料.如何选择最佳的种子细胞、细胞因子以及支架材料的复合物,其研究还需进一步完善.     

碱性成纤维细胞生长因子基因转染对人牙周韧带细胞的作用

背景:主要来源于因正畸或阻生拔除的健康牙培养而成的人牙周韧带细胞已成为牙周组织工程理想的种子细胞来源之一。目的:了解采用重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染对体外培养的人牙周韧带细胞增殖及细胞周期的影响。方法:体外培养人牙周韧带细胞,经重组腺相关病毒作为载体介导碱性成纤维细胞生长因子基因转染,分为3组:对照组、空载病毒组、碱性成纤维细胞生长因子转染组。用RT-PCR,Western blot检测人牙周韧带细胞在转染前后碱性成纤维细胞生长因子基因和蛋白的表达。应用细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝比色法观察细胞生长的优化作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果与结论:对照组、空载病毒组未检测到碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白表达;碱性成纤维细胞生长因子转染组碱性成纤维细胞生长因子mRNA和蛋白水平均有表达,细胞的生长速度明显增快,细胞周期G0/G1期减少,S期细胞数增多。各组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。     

胶原-纳米羟基磷灰石复合支架的细胞相容性

背景：观察成骨细胞在生物材料上的形态、增殖和分化等项目,可评估生物支架材料的生物相容性。目的：观察复合支架材料纳米羟基磷灰石/胶原对成骨细胞增殖、分化的影响。方法：取新生24h内Wistar大鼠的颅盖骨,采用改良胶原酶消化法进行成骨细胞原代培养,取第3代细胞与纳米羟基磷灰石/胶原支架或普通羟基磷灰石材料体外复合培养。培养3,6,9d后,观察材料周边的细胞形态及支架材料对细胞分化、增殖的影响。结果与结论：纳米羟基磷灰石/胶原材料较普通的羟基磷灰石材料更有利于成骨细胞的黏附、生长、分化、增殖,证实其生物相容性更好,有望成为一种新型的骨组织工程支架材料。     

人骨髓来源细胞外基质对人牙周膜干细胞增殖的影响简

背景：研究发现人来源的骨髓细胞外基质能促进人牙周膜干细胞增殖并保持干细胞的特性。目的：初步观察人骨髓来源的细胞外基质对人牙周膜干细胞增殖能力影响。方法：分离人正常牙周膜细胞及颌骨骨髓细胞,制备骨髓细胞外基质膜片。采用有限稀释法克隆培养纯化人牙周膜干细胞,透射电镜观察细胞超微结构。取P2代人牙周膜干细胞与骨髓细胞来源细胞外基质共同培养,以普通培养基对照,采用CCK8法及细胞周期流式技术检测人骨髓细胞来源细胞外基质对人牙周膜干细胞增殖能力的影响。结果与结论：实验组人牙周膜干细胞较对照组相比细胞增殖能力显著增强（P＜0.05）,且细胞符合其生物学形态及生物学特性,生长状态良好。说明实验建立起的骨髓细胞外基质能够促进牙周膜干细胞的增殖,是一种扩增干细胞的有效方法。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜细胞内核心蛋白多糖基因表达的影响(英文)

目的:研究己证实,碱性成纤维细胞生长因子刺激牙周膜细胞后可促进人牙周膜细胞的增殖,以利于重建丧失的牙周组织.利用不同质量浓度碱性成纤维细胞生长因子刺激体外培养的人正常牙周膜细胞,观察牙周膜细胞内核心蛋白多糖基因表达.方法:采用胰酶消化法分离培养牙周膜细胞.取第3代对数生长期的细胞,加入含有10%二甲基亚砜和含体积分数20%胎牛血清冻存液的DMEM中进行冻存,第2天移入液氮中保存.免疫组织化学方法行抗波形丝蛋白、角蛋白染色鉴定.取第6代人牙周膜细胞,分为实验组和空白组.实验组分别用含质量浓度为0.1,1,10 μg/L碱性成纤维细胞生长因子的DMEM培养液标准条件下培养24 h;空白组用DMEM培养液标准条件下培养24 h.RT-PCR法检测细胞内核心蛋白多糖基因表达变化.结果:镜下观察空白组细胞未见明显变化,实验组可见细胞增殖,刺激前瓶底细胞较稀疏的区域变得密集了.加入碱性成纤维细胞生长冈了的牙周膜细胞内核心蛋白多糖的mRNA表达水平明显下降了,而且随着碱性成纤维细胞生长因子质量浓度的增加,抑制作用逐渐减弱,在0.1 μg/L时抑制作用最强,在10 μg/L时抑制作用最弱.结论:碱性成纤维细胞生长凶子刺激可促进牙周膜细胞增殖,呈剂量依赖性抑制核心蛋白多糖的合成,0.1 μg/L时抑制作用最强.     

纳米晶羟基磷灰石/胶原骨与骨髓间充质干细胞的相容性

背景：组织工程支架材料表面的微观和亚微观结构对细胞的黏附与生长有很重要的影响。利用纳米技术和三维造孔技术制备的纳米晶羟基磷灰石，胶原骨模仿了天然骨的成分与微结构特征。目的：观察体外培养的人骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石，胶原骨的细胞相容性。设计、时间及地点：单一样本观察，于2005-09／2006—12在江苏大学医学技术学院完成。材料；纳米晶羟基磷灰石，胶原骨由清华大学材料科学与工程系研制。人骨髓间充质干细胞由健康成年志愿者自愿捐献，受试者对实验内容知情同意。方法：全骨髓法体外培养骨髓间充质干细胞，应用成骨诱导剂（地塞米松、维生素C、β-磷酸甘油、碱性成纤维细胞生长因子）诱导向成骨细胞表型转化。将第3代骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石，胶原骨复合培养14d。主要观察指标：通过碱性磷酸酶组织化学染色、Von Kossa染色鉴定诱导培养的成骨细胞的细胞学特性。通过倒置显微镜、扫描电镜观察细胞生长及其在纳米晶羟基磷灰石，胶原骨上的生长情况。结果：原代培养的骨髓细胞增殖迅速，10～12d左右即可稳定传代，传代细胞7-9d即可传代。经诱导培养的细胞碱性磷酸酶组织化学染色阳性，Von Kossa染色阳性，可见钙化的基质沉积，呈现典型的成骨细胞形态和生物学特征。构建的骨髓间充质干细胞与纳米晶羟基磷灰石／胶原骨共培养模型中，细胞可在纳米晶羟基磷灰石，胶原骨表面良好贴壁。复合培养8d，分布于支架材料上的细胞大量增殖、分泌细胞外基质。复合培养14d，大量细胞在材料表面和孔隙中生长，细胞之间广泛存在突起连接。结论：纳米晶羟基磷灰石肢原骨适合种子细胞的贴附、生长和增殖，细胞相容性良好。