电穿孔法和化学法在多药耐药胃癌细胞转染中的效果比较

目的:比较电穿孔法和化学法在多药耐药(MDR)胃癌细胞中转染效果。方法:将表达抑癌基因WTX的质粒分别用电穿孔法和两种化学法(Lipofectamine2000、Attractene)转染MDR胃癌SGC7901/VCR细胞,观察转染后细胞中增强型绿色荧光蛋白(e GFP)和目的基因WTX m RNA的表达情况。结果:e GFP分析结果显示,与无耐药的亲代SGC7901细胞比较,两种化学转染法对SGC7901/VCR细胞的转染效率明显降低(均P0.05),而电穿孔转染法未见明显降低(P0.05),且明显高于两种化学转染法对SGC7901/VCR细胞的转染效率(均P0.05)。RT-PCR结果显示,电穿孔转染的SGC7901/VCR细胞中WTX m RNA表达量明显高于两种化学法转染的SGC7901/VCR细胞中的WTX m RNA表达量(均P0.05)。结论:对于MDR胃癌细胞,电穿孔转染法不易受其细胞膜成分的影响,可以保持较好的转染效率。     

SIRT1蛋白在胃癌中的表达及其与P-gp、Top-Ⅱα关系的研究

目的:探讨SIRT1蛋白在胃癌组织和细胞中的表达,分析SIRT1蛋白表达与耐药相关蛋白P-gp和Top-IIα的相关性。方法:免疫组化SP法检测SIRT1、P-gp及Top-IIα蛋白在15例胃癌组织和15例正常胃黏膜组织中的表达。Western blot检测正常人胃黏膜上皮细胞株GES-1和人胃癌细胞株SGC7901、MKN45、MKN28、HGC27、AGS、MGC803中SIRT1蛋白的表达;检测GES-1、SGC7901及MKN45中的SIRT1、P-gp和Top-IIα的蛋白表达;siRNA-SIRT1/脂质体转染胃癌细胞SGC7901后,Western blot检测SIRT1、P-gp和Top-IIα的蛋白表达变化;MTT检测SGC7901细胞的体外增殖能力变化及对化疗药物5-Fu的敏感性变化。结果:15例胃癌组织中SIRT1蛋白表达阳性15例,P-gp蛋白表达阳性13例,Top-IIα蛋白表达阳性3例;15例正常胃黏膜中SIRT1蛋白表达阳性6例,P-gp蛋白表达阳性5例,Top-IIα蛋白表达阳性0例。GES-1、SGC7901、MKN45、MKN28、HGC27、AGS、MGC803中SIRT1相对蛋白表达量平均值分别为0.385、0.827、0.009、0.232、0.275、0.159、0.117;GES-1、SGC7901、MKN45中的P-gp相对蛋白表达量平均值分别为0.339、0.526、1.03;Top-IIα的蛋白相对表达量分别为0.093、0.889、0.158。siRNA-SIRT1转染SGC7901 8 h,培养72 h后检测control、BC-V、negative、siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3的SIRT1相对蛋白表达量平均值分别为0.965、0.937、0.958、0.567、0.253、0.083;P-gp相对蛋白表达量平均值分别为1.893、1.905、1.932、0.465、0.006、0.005;Top-IIα的蛋白相对表达量分别为0.09、0.07、0.073、0.085、0.168、0.195。MTT结果显示抑制SIRT1蛋白表达后,SGC7901体外增殖能力无明显变化,对化疗药物5-Fu的敏感性显著增加。结论:SIRT1在胃癌组织中过表达,且过表达的胃癌组织、细胞中SIRT1扮演促癌因子角色;SIRT1蛋白过表达能促进P-gp蛋白表达,降低Top-IIα蛋白表达,导致胃癌细胞化疗多重耐药性的增加。     

抑制核转录因子κB活性对SGC7901/VCR细胞mdr1表达及凋亡的影响

目的 观察突变型IκBα抑制核转录因子κB(NF-κB)活性对耐药胃癌细胞株SGC7901/VCR中多药耐药基因1(mdr1)的表达及细胞凋亡的影响.方法 突变型IκBα真核表达重组体(pCMV4-mIκBα)经脂质体介导转染至SGC7901/VCR细胞中,凝胶迁移率实验(EMSA)检测SGC7901/VCR细胞核内NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测细胞内mdr1的表达,荧光分光光度法检测罗丹明123(Rh123)的胞内聚集,流式细胞术检测细胞凋亡.结果 pCMV4-mIκBα瞬时转染人SGC7901/VCR细胞24 h后,可显著抑制NF-κB活性达64%,抑制mdr1的表达达75%,使Rh123在细胞内的聚集增加2.3倍.转染24 h后SGC7901/VCR细胞凋亡率为(14.15±1.52),与对照组(4.37±1.31)比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 突变型IκBα抑制NF-κB活性对耐药胃癌细胞株mdr1的表达有直接抑制作用,并促使耐药胃癌细胞凋亡.     

沉默信息调节因子1对胃癌侵袭的影响及其机理研究

目的 研究沉默信息调节因子1 （SIRT1）蛋白在胃癌组织中的表达及其对胃癌侵袭的影响和可能机理。方法 采用免疫组化SP法检测46例胃癌组织中SIRT1和血管内皮生长因子A （VEGF-A）蛋白的表达;采用Kaplan-Meier法分析SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白表达对胃癌患者预后的影响;采用Western blot法检测GES-1人胃黏膜细胞株及SGC7901人胃癌细胞株中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;采用siRNA小干扰技术特异性干扰SGC7901细胞株中SIRT1基因的表达后,检测SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白的表达;通过细胞侵袭实验检测不同处理后SGC7901细胞侵袭能力的变化。结果 与正常胃黏膜组织比较,胃癌组织中SIRT1蛋白和VEGF-A蛋白均呈高表达（P＜0.050）。SIRT1蛋白阳性表达患者的生存情况较差（P=0.001）,SIRT1及VEGF-A蛋白均呈阳性表达者的生存情况较差（P=0.006）,但VEGF-A蛋白表达与胃癌患者的预后无关（P=0.091）。SGC7901细胞中SIRT1蛋白（P=0.010） 和VEGF-A蛋白（P=0.020） 的表达较GES-1细胞上调。构建SIRT1-siRNA特异性抑制SIRT1基因的表达后（siRNA阳性组）,SIRT1蛋白和VGEF-A蛋白的表达均下调（P=0.010）,且SGC7901细胞的侵袭能力下降（P=0.000）。结论 SIRT1基因可能通过促进VEGF-A蛋白的表达而促进胃癌的侵袭,其可能是抑制胃癌侵袭的一个治疗靶点。     

胃癌中硒结合蛋白-1的表达及其临床病理学意义

目的 检测硒结合蛋白1(SBP1)在胃癌细胞系SGC7901、BGC823、正常胃黏膜上皮细胞系GES-1、胃癌组织以及正常胃黏膜组织中的表达水平,分析其表达变化与胃癌临床病理因素之间的联系,探讨其作为胃癌标记物的可能性.方法 回顾性分析2006年至2007年武汉大学中南医院收治的135例胃癌患者的临床资料,利用免疫组织化学染色法对胃癌组织及16例正常胃黏膜组织中SBP1蛋白表达部位及水平进行测定,并进行半定量评分.Western blot和RT-PCR检测细胞系SGC7901、BGC823、GES-1中SBP1蛋白和mRNA的表达水平.组间比较采用单因素方差分析,SBP1表达强度与临床病理因素的关系采用x2检验.结果 SBP1 mRNA在胃癌细胞系BGC823、SGC7901中的表达分别为0.120±0.020、0.133±0.015,显著低于其在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达(0.907±0.015)(F=2106.462,P＜0.05).胃癌细胞系BGC823、SGC7901中的SBP1蛋白表达分别为0.253±0.015、0.273±0.015,显著低于其在正常胃黏膜上皮细胞系GES-1中的表达水平(0.877±0.025)(F=1026.758,P＜0.05).3例胃癌组织中SBP1呈强免疫反应,而16例正常胃黏膜中SBP1呈强免疫反应.SBP1蛋白表达减少与胃癌患者临床分期相关(x2=12.629,P＜0.05),而与患者的性别、年龄、肿瘤组织学分型、分化程度、浸润深度以及淋巴结转移无关(x2=2.142,0.860,1.838,5.001,4.858,1.994,P＞0.05).结论 SBP1表达减少可以作为一种胃癌诊断的新指标.SBP1下调在胃癌发生及进展中可能发挥着重要作用.     

胃癌细胞多药耐药相关蛋白质筛选鉴定的蛋白质组学研究

目的 在胃癌细胞株SGC7901及稳定的耐药细胞株SGC7901/VCR中寻找与胃癌多药耐药(MDR)直接相关的蛋白质,观察其功能.方法 胃癌细胞株SGC7901和稳定的耐药细胞株SGC7901/VCR培养后提取总蛋白,采用蛋白质组学技术(双向凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱鉴定)筛选并鉴定差异表达的蛋白质,并应用蛋白印迹试验法对鉴定出的部分蛋白质在胃癌细胞株中的表达进行验证.结果 在两种细胞株中找到表达差异明显的蛋白质点9个,经质谱分析,7种蛋白质得到鉴定,为S60核糖体蛋白L23、电压依赖性阴离子选择性通道蛋白1、锌指蛋白394、角蛋白Ⅰ型细胞骨架9、核糖核酸3'-端磷酸化酶1、matrin型锌指蛋白2、Sideroflexin-1.这些蛋白质与胃癌MDR直接相关.蛋白印迹试验法检测部分蛋白质在胃癌细胞株中的表达,与蛋白质组学所得结果一致.结论 胃癌细胞SGC7901和SGC7901/VCR蛋白质表达存在差异.

Abstract：

Objective To investigate multidrug resistance related proteins in human gastric carci noma cell lines SGC7901 and SGC7901/VCR by comparative proteomics.Methods After culture,the holoproteins of human gastric carcinoma cell lines SGC7901 and GC7901/VCR were extracted,and then measured by two-dimensional gel electrophoresis and matrix assisted laser desorption/ionization time-offlight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS).Some proteins obtained through proteomics were tested by Western blotting in the cell lines.Results There were different proteins in these 2 human gastric carcinoma cell lines.Nine different protein spots were found in these 2 gastric carcinoma cell lines,and 7 spots were identified by MALDI-TOF-MS,and these proteins were 60S ribosomal protein L23 ( RL23),voltagedependent anion-selective channel protein-1 (VDAC1),zinc finger protein (ZNF) 394,keratin,type Ⅰcytoskeletal 9 ( KIC9),RNA 3' -terminal phosphate cyclase 1 ( RTC1 ),zinc finger matrin-type protein 2,Sideroflexin-1.These proteins had a direct relationship with multidrug resistance in gastric carcinoma.Results of Western blotting about protein expression were in consonance with those of proteomics.Conclusion Different proteins were found in human gastric carcinoma cell lines SGC7901 and SGC7901/VCR.     

胃癌中微小RNA表达谱及miR-429表达水平的研究

目的 检测胃癌组织及胃癌细胞中微小RNA (miRNA)表达谱,并测定胃癌组织及胃癌细胞中miR-429的表达水平.方法 采用基因芯片技术检测胃癌组织、癌旁正常胃组织标本及胃癌细胞株( SGC-7901)、正常人胃上皮细胞(GES-1)中miRNAs的表达.挑选基因芯片结果中胃癌组织表达显著下调的miR-429,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测7例正常胃组织、52例胃癌组织、胃癌细胞SGC-7901、GES-1中miR-429的表达.结果 基因芯片结果表明,胃癌组织中有23个miRNA上调,如miR-21、miR-30b等,31个下调如miR-429、miR-200等.qRT-PCR检测显示,miR-429在胃癌组织中下降约63.4％ (P＜0.01),在胃癌细胞株SGC7901中下降约76.2％(P＜0.01).结论 miR-429在胃癌组织中表达显著下调,可能作为胃癌特异性miRNA,在胃癌的发生发展过程中有重要作用.     

RASSF1A对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响

目的:观察外源性RASSF1A基因对人胃癌细胞SGC7901增殖的影响。方法:利用脂质体转染技术将真核表达重组体pcDNA3.0-RASSF1A质粒和空载体pcDNA3.0质粒分别导入SGC7901细胞，经G418筛选后获得稳定转染细胞克隆。采用RT-PCR和蛋白印迹检测RASSF1A基因表达。绘制细胞生长曲线，并用裸鼠成瘤实验、平板克隆形成实验、流式细胞术分析转染细胞的生物学行为。结果〖HT8.5SS〗经脂质体转染和筛选，建立了高表达RASSF1A基因的SGC7901细胞系。与未转染组和转染空白载体组比较，转染RASSF1A基因的SGC7901细胞生长速度明显减慢; 细胞周期中G1/G0期比例明显增加，而S期比例减少; 克隆形成率明显减少; 裸鼠成瘤抑制率为57.1%。结论:RASSF1A基因能抑制人胃癌细胞SGC7901的增殖。     

Celecoxib可通过抑制核转录因子-κB活性诱导SGC7901/ADR细胞的凋亡

目的 观察环氧合酶-2(COX-2)特异性抑制剂Celecoxib对胃癌SGC7901/ADR细胞多药耐药1(mdr1)基因表达、核转录因子(NF)-κB激活水平及细胞凋亡的作用.方法 实验分为4组:SGC7901组、SGC7901+Celecoxib组、SGC7901/ADR组和SGC7901/ADR+Celecoxib组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术检测mdr1基因的表达,电泳迁移率实验(EMSA)测定NF-κB激活水平,流式细胞术检测细胞内Rh123聚集及细胞凋亡.结果 SGC7901/ADR细胞中mdr1基因表达和NF-κB活性分别为SGC7901组的2.4倍和3.2倍(P＜0.01),Celecoxib可显著抑制SGC7901和SGC7901/ADR细胞mdr1基因的表达及NF-κB活性,使SGC7901和SGC7901/ADR细胞内Rh123的聚集分别增加1.2倍和1.9倍,可使ADR诱导的SGC7901和SGC7901/ADR细胞的凋亡率分别提高1.65倍和2.98倍.结论 Celecoxib可能通过抑制NF-κB活性而抑制mdr1基因的表达,进而增加SGC7901/ADR细胞内药物聚集并促进细胞凋亡.     

COL12A1在胃癌中的表达及其生物学功能研究

目的:探讨COL12A1在胃癌中的表达水平和生物学功能。方法:利用Oncomine与GEPIA在线数据库分析COL12A1在胃癌中的表达及其与胃癌病理分期和预后的关系;用qPCR和免疫组化检测COL12A1基因与蛋白在58例胃癌及癌旁组织中的表达;用siRNA干扰技术敲低胃癌细胞SGC7901中COL12A1的表达后,通过CCK-8、平板克隆存活及Transwell小室实验分析SGC7901生物学行为的变化。结果:Oncomine与GEPIA在线数据库分析结果显示,COL12A1在胃癌中的表达水平明显升高(均P0.05);COL12A1表达与胃癌病理分期无明显关系(P0.05),但COL12A1高表达胃癌患者总体生存率明显降低(P0.05)。qPCR和免疫组化结果显示,胃癌组织中COL12A1基因与蛋白表达均明显高于其癌旁组织(均P0.05)。敲低COL12A1后,SGC7901的生长、增殖和侵袭能力明显降低(均P0.05)。结论:COL12A1在胃癌中高表达,其高表达可能促进胃癌细胞生长、增殖和侵袭,并与患者不良预后密切相关。     

重组超抗原SEB-scFv融合蛋白体外靶向抑制胃癌细胞的研究

目的 观察SEB-scFv融合蛋白对人胃癌细胞的体外抑制作用.方法 噻唑蓝(MTT)法观察SEB-scFv融合蛋白对人胃癌细胞的增殖抑制作用;DNA ladder法观察融合蛋白对胃癌细胞凋亡的影响,电子显微镜法观察融合蛋白处理后胃癌细胞的形态变化;流式细胞仪分析胃癌细胞凋亡率.结果 胃癌细胞的增殖抑制率随SEB-scFv融合蛋白作用浓度的增加而逐渐增大,且对不表达MG7相关抗原的肿瘤细胞不表现杀伤效应.1.0、10 mg/L高浓度融合蛋白组DNA凝胶电泳呈现明显的梯状条带.被融合蛋白活化的免疫效应细胞攻击后的胃癌细胞表现出典型的凋亡特征性变化.融合蛋白0.1、1.0、10 mg/L组细胞G0/G1期前有明显的凋亡峰出现,三者凋亡率分别达到51.62%、54.21%和61.55%.而生理盐水组凋亡率仅为1.44%,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 SEB-scFv融合蛋白在效应细胞介导下,能对表达MG7相关抗原的胃癌细胞显示出有效的体外生长抑制作用,且在此过程中伴随有胃癌细胞的凋亡.     

TGFβ对胃癌细胞浸润、转移的影响及其作用机制研究

目的:探讨TGFβ与胃癌浸润、转移之间的关系及其作用机制。方法:以胃癌细胞株SGC7901和BGC823为对象，应用transwell迁移浸润、matrigel fibronectin基质黏附、内皮细胞黏附、明胶酶谱及裸鼠成瘤等实验分别检测0 ng/mL或10 ng/mL TGFβ1处理前后胃癌细胞株生物学行为的变化。结果:经TGFβ1处理成瘤裸鼠4周后肝转移数量远高于未处理组（P<0.05）; SGC7901和BGC823细胞经TGFβ1处理后，瘤细胞浸润基质胶的能力增强; 瘤细胞的迁移、黏附能力亦明显增加。结论:TGFβ1促进胃癌浸润、转移，其机制可能与其促进瘤细胞运动、黏附以及基质金属蛋白酶分泌有关。     

RhoC基因高表达对胃癌细胞血管内皮细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的 探讨RhoC基因对胃癌细胞血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响及其意义。方法 常规脂质体转染法将RhoC基因重组质粒转染人胃癌细胞系SGC7901；应用免疫细胞化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化酶(SP)法检测胃癌细胞转染RhoC基因重组质粒前后VEGF、bFGF蛋白表达的变化。结果 转染RhoC基因重组质粒在SGC7901细胞中有稳定表达。转染RhoC基因重组质粒SGC7901表达VEGF、bFGF明显强于对照组。结论 体外条件下RhoC基因可促进胃癌细胞VEGF、bFGF的表达。这可能是RhoC基因促进胃癌细胞侵袭、转移的分子基础。RhoC基因的表达可望作为估计胃癌转移的参考指标。     

Dapper1在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控

目的 研究Dapper1(Dpr1)在胃癌组织中的表达及其对survivin介导的细胞凋亡的调控.方法 用RT-PCR方法检测30例患者胃癌及癌旁正常组织中Dpr1 mRNA的表达情况;用RT-PCR检测SGC7901细胞转染pcDNA3.1-Dpr1质粒前后Dpr1和survivin mRNA表达的变化;用Western blot检测转染前后Dvl-2、β-catenin及survivin蛋白表达的变化;用流式细胞术检测转染后SGC7901细胞凋亡率的变化. 结果本组30例胃癌组织中17例Dapperl mRNA表达下调,发生率为57%,且与胃癌的浸润深度和分化程度相关(P＜0.05);转染pcDNA3.1-Dpr1后SGC7901细胞中Dpr1 mRNA表达水平上调,survivin mRNA表达水平下调;Dvl-2、β-catenin以及Survivin蛋白表达量降低;转染pcDNA3.1-Dpr1质粒后SGC7901细胞的凋亡率升高. 结论 Dpr1能够通过经典WNT通路抑制凋亡相关蛋白survivin的表达,在胃癌细胞的凋亡中发挥重要作用.     

PRL-3 miRNA重组慢病毒对胃癌SGC7901细胞增殖的抑制作用

目的 观察PRL-3在人胃癌SGC7901细胞增殖中的作用.方法 构建表达人工PRL-3 miRNA的慢病毒载体,转染SGC7901细胞,并检测其沉默PRL-3表达的效果;MTT试验评价沉默PRL-3表达对SGC7901细胞增殖的抑制作用.结果 成功构建表达PRL-3慢病毒载体.PRL-3慢病毒转染组,可沉默SGC7901细胞PRL-3的表达.MTT试验结果,沉默PRL-3的表达后,与空载体组比较,SGC7901细胞数下降了30.4%;生长曲线比较,SGC7901细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05).结论 PRL-3在胃癌生长中起着重要作用,可作为胃癌潜在的治疗靶点.     

脾酪氨酸激酶基因的再激活对胃癌生成和发展的影响

目的探讨去甲基化酶5-氮-2＇-脱氧胞苷对脾酪氨酸激酶（Syk）基因再表达的影响，以及Syk基因的再表达对胃癌肿瘤生成和发展的影响。方法分别用RT-PCR和MSP法检测SGC7901、MGC803、MKN28和MKN45细胞株中Syk基因表达及甲基化情况；用5-氮-2＇-脱氧胞苷处理人胃癌细胞株5GC7901后，检测此细胞株中Syk基因的甲基化及再表达情况，并用此治疗过的细胞株和未经治疗的细胞株分别接种于裸鼠皮下，对比观察裸鼠的成瘤率。结果SGC7901和MKN45细胞株中没有检测到Syk基因的表达，但可检测到Syk基因的甲基化。检测用5-氮-2＇-脱氧胞苷处理过的人胃癌SGC7901细胞株，Syk基因启动子没有甲基化，RT-PCR可检测到有Syk基因。用无Syk基因表达的SGC7901细胞株接种于10只对照组裸鼠皮下，8周后均有肿块生成；而用有Syk基因再表达的细胞株接种于另10只裸鼠（治疗组）皮下，8周后只有3只有肿块生成；对照组裸鼠的成瘤率显著高于治疗组（χ^2=7．91，P〈0．05）。结论5-氮-2＇-脱氧胞苷通过去甲基化使SGC7901细胞株中Syk基因再表达，Syk基因的再表达抑制了胃癌的生成和发展。     

不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物表达与腹膜转移潜能相关的体外研究

目的比较不同胃癌细胞系尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)表达及其活性与腹膜转移潜能的关系。方法采用ELISA和Western印迹方法,比较不同胃癌细胞系uPA表达的差异,并测定其活性。在24孔培养板或Boyden小室中与生长良好的间皮细胞共同培养不同时间,在显微镜下直接计数与间皮细胞黏附的胃癌细胞,而用MTT法评估胃癌细胞在间皮细胞间的迁移和侵袭情况。结果4株胃癌细胞(AGS、SGC7901、MKN45和MKN28)的uPA表达以SGC7901最高,uPA活性以MKN45最高,AGS两者皆最低。MKN45的黏附能力明显强于MKN28(P<0.05)、SGC7901(P<0.05)和AGS(P<0.01),但其迁移和侵袭能力与SGC7901和MKN28相比差异无统计学意义;而AGS在3方面均明显弱于其他3株细胞。结论4株胃癌细胞uPA表达量及其活性差异较大,并且与其腹膜转移潜能呈正相关。     

奥曲肽对人胃癌细胞的凋亡诱导作用

目的 探讨生长抑素对人胃癌细胞的抑制作用及其作用机理。方法 以生长抑素类似物奥曲肽作用于人胃癌细胞株SGC-7901细胞，以人成纤维细胞株HF作为正常细胞对照，以5-FU作为阳性药物对照，通过MTT实验、荧光显微镜观察及流式细胞术分析，得出结论。结果 一定浓度范围内的奥曲肽对SGC-7901细胞产生抑制作用，其抑制作用具有量效关系和饱和性。奥曲肽对SGC-7901细胞的抑制程度接近于5-FU对他的抑制，而对HF细胞无影响。奥曲肽可诱导SGC-7901细胞凋亡。结论 奥曲肽在体外对SGC-7901细胞具有抑制作用，诱导肿瘤细胞凋亡可能是其作用机理之一。     

蛋白酶体抑制剂MG-132对胃癌细胞SGC7901内质网凋亡的作用

目的 观察内质网凋亡在泛素-蛋白酶体抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡中的作用.方法 实验组分别给予终质量浓度为0.5、1.0、2.5、5.0、10.0、15.0ìmol/L的MG-132加入胃癌细胞SGC-7901,用噻唑蓝(MTT)法测定细胞生长抑制效应,流式细胞仪检测细胞内质网凋亡标志物CHOP和Caspase-12的表达,透射电镜检测凋亡小体.结果 MG-132对胃癌细胞有显著抑制作用,24、48、72 h的ICS0分别为13.233 82、8.595 85、0.472 28 ìmol/L,回归方程为Y=0.009X1+0.026X2-0.098;在MG-132作用后48 h胃癌细胞明显表达内质网凋亡标志物CHOP和Caspase12,透射电镜下发现大量凋亡小体.结论 MG-132能显著抑制胃癌细胞的增殖、诱导其凋亡,并诱导内质网凋亡.