miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭

背景与目的：生物信息学分析提示GATA6是miR-203a-3p的潜在靶基因,明确miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭。方法：采用Lipofectamine ^TM RNAiMAX对培养的KYSE-70和KYSE-180细胞瞬时转染。采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测miR-203a-3p和GATA6的表达水平。采用蛋白质印迹法（Western blot）检测GATA6蛋白的水平。质粒联合转染后检测相对萤光素酶活性。对食管鳞癌患者标本进行恶性肿瘤与异型增生组织miR-203a-3p和GATA6的表达检测。结果：RTFQ-PCR及Western blot检测结果显示,与对照组比较,GATA6基因和蛋白的表达在miR-203a-3p转染组中降低,在miR-203a-3p inhibitor组却升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较,miR-203a-3p转染组KYSE-70细胞增殖能力下降,miR-203a-3p inhibitor组中却升高,差异均有统计学意义（P<0.05）。在KYSE-180中虽然差异无统计学意义,但其趋势却与KYSE-70一致。与对照组比较,在KYSE-70和KYSE-180细胞系中,侵袭细胞数值/视野在miR-203a-3p转染组中均明显下降（P<0.01）,在miR-203a-3p inhibitor组中却明显升高（P<0.05）。与miR-203a-3p掠夺型+GATA6野生型组和miR-203a-3p野生型+GATA6突变型组比较,相对萤光素酶活性在miR-203a-3p野生型+GATA6野生型组中降低,差异有统计学意义（P<0.05）。与异型增生组织相比较,100%（10/10）食管鳞癌患者miR-203a-3p在恶性肿瘤组织的表达下调,而GATA6表达水平上调。结论：miR-203a-3p通过靶向调控GATA6抑制食管鳞癌细胞的增殖和侵袭能力。     

miR-513a-5p通过靶向调控PAK1抑制子宫颈癌细胞增殖和侵袭

目的 研究miR-513a-5p通过靶向调控p21活化激酶1(p21-activated kinase 1,PAK1)抑制子宫颈癌细胞增殖和侵袭的机制。方法 通过分析高通量基因表达（Gene Expression Omnibus,GEO）数据库GSE145372数据集的数据确认miR-513a-5p在子宫颈癌组织和正常子宫颈组织中的表达差异。采用实时定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测miR-513a-5p和PAK1在子宫颈癌细胞株（HT3、C-33A和HeLa）和人子宫颈内膜上皮细胞株（End1/E6E7）中的表达情况。在miR-513a-5p表达最低的细胞株HT3和C-33A中分别转染miR-513a-5p mimics(miR-513a-5p mimics组)和NC mimics(NC mimics组)。在HT3和C-33A细胞中分别转染pcDNA3.1-PAK1和空载pcDNA3.1-NC用于后续功能拯救实验。采用EdU实验和transwell实验分别检测miR-513a-5p...     

siRNA干扰蛋白质精氨酸甲基转移酶5表达对人胃癌SGC7901细胞增殖和克隆形成能力的影响

目的 探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制蛋白质精氨酸甲基转移酶5（PRMT5）表达后对人胃癌SGC7901细胞增殖和克隆形成能力的影响。方法 设计靶向抑制PRMT5表达的特异siRNA（siRNA-1、siRNA-2）,瞬时转染胃癌SGC7901细胞（干扰组）,同时设置转染无义序列的阴性对照组。在瞬时转染48 h后采用Western blotting实验评估siRNA对PRMT5的干扰效果;采用CCK-8法检测siRNA抑制PRMT5表达后胃癌SGC7901细胞的增殖情况;采用EdU法检测siRNA抑制PRMT5表达后胃癌SGC7901细胞的DNA复制情况;采用平板克隆形成实验检测siRNA抑制PRMT5表达后对胃癌SGC7901细胞克隆形成能力的影响。结果 在胃癌SGC7901细胞中,瞬时转染siRNA-1和siRNA-2后PRMT5蛋白的表达水平均显著低于阴性对照组（P＜0.01）,表明两个siRNA具有良好的干扰效果,可用于后续实验。与阴性对照组相比,PRMT5表达干扰后的胃癌SGC7901细胞增殖速率显著下降,差异有统计学意义（P＜0.01）。转染siRNA序列后,PRMT5干扰组（siRNA-1和siRNA-2）的EdU阳性细胞百分比为（16.0±2.0）％和（19.5±3.0）％,远低于阴性对照组的（38.0±4.0）％,差异有统计学意义（P＜0.01）。PRMT5干扰组（siRNA-1和siRNA-2）的克隆形成数分别为（50±6）个和（68±7）个,远低于阴性对照组的（120±11）个,差异均有统计学意义（P＜0.01）。结论 通过siRNA抑制PRMT5表达后可显著抑制胃癌SGC7901细胞的增殖和克隆形成能力,为胃癌的临床治疗提供新的策略和理论依据。     

miR-125a-5p通过靶向STAT3 抑制肾癌细胞增殖和侵袭及其可能机制

目的：探究miR-125a-5p 靶向STAT3 对肾癌细胞增殖和侵袭的影响,并初步分析其作用机制。方法：选取2017 年3月至2018 年2 月于北部战区空军医院泌尿外科接受肾癌手术治疗的癌组织及配对的癌旁组织灶边缘（距癌缘>3 cm）标本各48例,体外培养正常肾细胞HK-2、和肾癌细胞A498、GRC-1、786-O及ACHN,采用qPCR 检测组织和细胞中miR-125a-5p 的表达。分别将miR-125a-5p-NC、miR-125a-5p-mimics、pLV-STAT3 及pLV-STAT3+miR-125a-5p mimics 转染A498 细胞作为NC组（阴性对照组）、miR-125a-5p-mimics 组、pLV-STAT3 组及pLV-STAT3+mimics 组,另外以正常培养A498 细胞作为空白对照组（Control,Ctrl）,采用qPCR检测各组细胞中miR-125a-5p、信号转导和转录激活因子3（STAT3）mRNA的表达。应用生物信息学预测软件和双荧光素酶法分析miR-125a-5p 与STAT3 的靶向关系;采用CCK-8 检测各组细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室法检测细胞侵袭能力;WB检测细胞中STAT3、B 细胞淋巴瘤/白血病-2 蛋白(Bcl-2)、B 细胞淋巴瘤/白血病-2 相关X 蛋白(BAX)、活化半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3 蛋白（cl-caspase-3）、抑癌基因p21、神经钙黏素（N-cadherin）、钙黏蛋白（E-cadherin）、血管内皮生长因子（VEGF）及缺氧诱导因子-1（HIF-1）的表达。结果：miR-125a-5p 在肾癌组织和细胞中表达显著低于癌旁组织和正常肾细胞（均P<0.05）;相较于NC组,转染miR-125a-5p-mimics 后A498 细胞中miR-125a-5p 的表达显著上升、STAT3mRNA的表达显著下降（均P<0.01）。实验证实STAT3 为miR-125a-5p 的靶基因。与NC组相比,miR-125a-5pmimics 组细胞增殖活性、侵袭细胞数及Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平均显著下降（均P<0.05）,凋亡率及BAX、p21、cl-caspase-3 及E-cadherin 表达显著上升（均P<0.05）;pLV-STAT3 组细胞增殖活性、侵袭细胞数及Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平显著上升（均P<0.05）,凋亡率及BAX、p21、cl-caspase-3、E-cadherin 表达显著下降（均P<0.05）。与pLVSTAT3组相比,pLV-STAT3 mimics 组细胞增殖活性、侵袭细胞数、Bcl-2、N-cadherin、VEGF、HIF-1、STAT3 及其磷酸化水平显著下降（均P<0.05）,凋亡率、BAX、p21、cl-caspase-3 及E-cadherin 表达显著上升（均P<0.05）。结论：miR-125a-5p 在肾癌组织和细胞中呈低表达,可通过下调其靶基因STAT3 抑制A498 细胞的增殖和侵袭,并促进其凋亡。     

miR-125a-3p下调胃癌细胞NRG1表达并抑制细胞增殖

目的:探讨microRNA-125a-3p(miR-125a-3p)在胃癌细胞恶性增殖中的作用及调控机制。方法:qRT-PCR法检测各肿瘤细胞系及正常对照细胞系中miR-125a-3p的表达,应用microRNA类似物(Mimic及Inhibitor)转染技术改变细胞内miR-125a-3p表达。Western-blot检测NRG1蛋白表达水平的改变。XTT、平板克隆及裸鼠成瘤试验检测处理后胃癌细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞周期变化情况。结果:miR-125a-3p在多个胃癌细胞系中表达均低于永生化胃黏膜上皮细胞系(P<0.01)。利用类似物转染可以有效改变肿瘤细胞miR-125a-3p的表达(P<0.01)。miR-125a-3p过表达可以降低NRG1蛋白的表达、抑制细胞周期进展,并降低胃癌细胞系的体外和在体增殖能力,抑制miR-125a-3p表达可以见到相反结果。结论:miR-125a-3p可通过调控NRG1表达在胃癌中起到抑癌作用。miR-125a-3p可以抑制胃癌细胞的恶性增殖,因此具有成为胃癌治疗新策略候选靶点的可能。     

miR-133a-3p在胃癌组织和血浆中的表达及其对胃癌细胞增殖的影响

[摘要] 目的：检测miR-133a-3p 在胃癌组织及患者血浆中的表达水平及其对胃癌细胞增殖的影响,并探讨其与患者预后的关系。方法：收集河北医科大学第四医院普外科2012 年5 月至2013 年5 月胃癌手术切除的组织标本及术前外周静脉血标本52例,每例组织标本采集肿瘤组织(非坏死部分)和配对的癌旁组织。采用实时荧光定量RT-PCR（RT-qPCR）法检测miR-133a-3p 在胃癌组织、癌旁组织、血浆及健康体检者血浆（35 例）的表达情况,分析miR-133a-3p 的表达水平与胃癌患者中位DFS及临床病理特征的关系。CCK-8 法检测过表达或沉默miR-133a-3p 对胃癌SGC7901 细胞增殖的影响。结果：miR-133a-3p 在胃癌组织中的表达明显降低（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、肿瘤侵润深度（T）、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.01）;在胃癌患者血浆中的表达明显升高（P<0.01）,其表达水平与肿瘤TNM分期、淋巴结转移（N）及脉管瘤栓相关（P<0.05）;与患者血清中CA199的表达水平正相关（P<0.01）。胃癌组织中miR-133a-3p 高表达组患者中位DFS 明显高于低表达组（20.8 vs 14.8 个月,P<0.05）。血浆中miR-133a-3p 的高表达组患者中位DFS明显低于低表达组（14.4 vs 20.3 个月,P<0.05）。过表达miR-133a-3p 可明显抑制SGC7901 细胞的增殖能力,同样沉默其表达可明显促进SGC701 细胞的增殖能力（均P<0.05）。结论：miR-133a-3p 可明显抑制胃癌细胞SGC7901 的增殖能力,在胃癌组织和血浆中存在明显异常表达,其表达与患者预后明显相关,可作为胃癌早诊早治及患者临床预后判定的潜在标志物。     

miR-203a-3p靶向AKT2增强骨肉瘤细胞的放射敏感性

目的:研究miR-203a-3p对骨肉瘤MG-63细胞凋亡和放射敏感性的影响及潜在作用机制.方法:qRT-PCR检测AKT2 mRNA的表达水平及不同放射剂量(0、2、4、6、8 Gy)照射后MG-63细胞中miR-203a-3p的表达水平,克隆形成实验检测不同放射剂量处理后细胞存活分数,流式细胞术测定MG-63细胞凋...     

miR-125a-5p通过下调BAG4表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-125a-5p通过调控Bcl-2相关永生基因4(Bcl-2-associated athanogene 4,BAG4)的表达抑制胃癌细胞迁移和侵袭的分子机制.方法:选用2014年1月至2015年12月兰州大学第一医院手术切除的82例胃癌组织标本及配对的癌旁组织以及人胃癌细胞系MGC803、BGC823...     

miR-125a-3p靶向负调控PLK4抑制神经母细胞瘤细胞增殖及其机制探讨

目的:研究miR-125a-3p对神经母细胞瘤细胞增殖的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法检测Hela、SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达;将miR-125a-3p组（转染miR-125a-3p mimics）、miR-NC组（未转染细胞）、inhibitor-NC组（转染空inhibitor）、miR-125a-3p inhibitor组（转染miR-125a-3p inhibitor）、siPLK4组（转染siPLK4）、miR-125a-3p+Vector组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1共转染）、miR-125a-3p+PLK4组（miR-125a-3p mimics和pcDNA 3.1-PLK4共转染）以脂质体法转染至SH-SY-5Y细胞;MTT法检测各组细胞的增殖情况;Western blot检测各组细胞中PLK4、PIK3CA、Akt、p-Akt蛋白的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果:与Hela细胞相比,SH-SY-5Y、SHEP、SK-N-BE细胞中miR-125a-3p的表达均显著降低（P<0.05）;与Control组相比,miR-125a-3p组细胞的增殖显著降低,PLK4、PIK3CA、p-Akt蛋白的表达量均显著降低（P<0.05）;PLK4为miR-125a-3p的靶基因。过表达PLK4可逆转miR-125a-3p对SH-SY-5Y细胞增殖及PI3K/Akt信号通路的抑制作用。结论:miR-125a-3p可抑制神经母细胞瘤细胞增殖,其作用机制与靶向负调控PLK4有关,将可为神经母细胞瘤的治疗提供新靶点。     

miR-203a-3p在胰腺癌组织与细胞中的表达及其对BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨miR-203a-3p对胰腺癌BxPC-3细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法:运用癌症基因组图谱(TCGA)数据库筛选胰腺癌组织和癌旁组织中差异表达的miRNA,分析miRNA高表达与低表达时胰腺癌患者的生存率和临床分期;利用TarBase数据库分析miRNA与癌症相关的GO功能与KEGG通路,利用DIAN...     

miR-133a-5p suppresses gastric cancer through TCF4 down-regulation

BackgroundThe effect of microRNAs (miRNA) on cancer regulations has received a considerable amount of attention recently. MiR-133a-5p has been identified as an anti-tumor miRNA in several types of cancers. However, the effect of miR-133a-5p on gastric cancer (GC) have not been uncovered. In this study, we sought to evaluate the regulation of TCF4 expression by miR-133-5p and the role of the miR-25-3p/TCF4 axis in the progression of GC, with the aim of identifying a potential therapeutic target for GC.MethodsTCGA (The Cancer Genome Atlas), GTEx (The Genotype-Tissue Expression) and GEO (Gene Expression Omnibus) database were used to analyze the expression and prognosis. We performed MTT and EdU assays to elucidate the effect on cell replication. Apoptotic cells were stained with annexin V-fluorescein isothiocyanate and propidium iodide to stain, and then analyzed by flow cytometry. The effect on cell metastasis was investigated in wound healing and transwell assays. A dual-luciferase reporter assay was used to check for the direct targeting of TCF4 by miR-133a-5p. Bioinformatic analysis of the relationship of TCF4 with tumor microenvironment and the signaling cascade of TCF4 was finally performed.ResultsWe found that the level of miR-133a-5p was decreased in both tumor tissues and GC cell lines. MiR-133a-5p inhibited cell growth and metastasis, but promoted cell apoptosis. MiR-133a-5p directly targeted TCF4 and downregulated its expression. TCF4 was highly expressed in tumor and higher level of TCF4 indicated poorer prognosis. Moreover, TCF4 overexpression reversed the aforementioned anti-tumor activity of miR-133a-5p. The expression level of TCF4 was significantly correlated with tumor-infiltrating immune cells.ConclusionsOur findings altogether reveal that miR-133a-5p can serve as a tumor suppressor in gastric cancer via the miR-133a-5p/TCF4 pathway.     

LncRNA MEG3靶向miR-181a-5p调控宫颈癌细胞放射敏感性

目的 研究LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 运用qRT-PCR法检测放射抗性和放射敏感性宫颈癌细胞中LncRNA MEG3的表达;将过表达对照组(转染pcDNA 3.1)、过表达LncRNA MEG3组(转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3)、抑制miR-NC组(转染anti-miR-NC)、抑制miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-NC组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-NC)、过表达LncRNA MEG3+过表达miR-181a-5p组(共转染pcDNA 3.1-LncRNA MEG3和anti-miR-181a-5p),均用脂质体法转染至SiHa细胞;克隆形成实验检测细胞的存活分数;流式细胞术检测细胞的凋亡率;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光活性;Western blot检测细胞中PTEN、p-Akt、Akt的蛋白表达。结果 与放射敏感组相比,放射抗性宫颈癌组织中LncRNA MEG3的表达明显降低(P<0.05),其表达量与宫颈癌细胞的放射敏感性呈正相关;过表达LncRNA MEG3、抑制miR-181a-5p均可显著增强宫颈癌细胞SiHa放射敏感性,促进凋亡(P<0.05);野生型LncRNA MEG3细胞的荧光活性受miR-181a-5p的抑制。过表达miR-181a-5p逆转了LncRNA MEG3对宫颈癌细胞放射增敏和促凋亡作用及对PTEN/Akt信号通路的调控。结论 长链非编码RNA LncRNA MEG3可增强宫颈癌细胞放射敏感性,其机制可能与靶向miR-181a-5p调控PTEN/Akt 信号通路有关,可为提高宫颈癌的预后提供新方向。     

LINC01089通过调控miR-27 a-3p/TET1轴抑制胰腺癌细胞的增殖和迁移

目的:本研究旨在探究胰腺癌中长链非编码RNA 01089(LINC01089)/miR-27a-3p/TET1轴在胰腺癌进展中的作用及其机制.方法:通过GEPIA数据库分析LINC01089在胰腺癌中的表达及其与预后的相关性.使用定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测LINC01089、miR-27a-3p、TET...