淫羊藿苷逆转耐甲氨蝶呤肺癌A549细胞转移表型

目的:研究中药淫羊藿苷(icariin,ICA)作用甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)耐药肺癌A549细胞后对细胞转移表型的影响,初步探讨ICA逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用机制及对肺癌的治疗价值.方法:采用MTT法检测ICA对A549/MTX耐药细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC_(50)).采用双层软琼脂克隆形成实验检测A549/MTX 组和A549/MTX+ICA组细胞的克隆形成率,并观察其集落形态.细胞划痕实验检测A549/MTX组和A549/MTX+ICA组细胞的迁移能力.Transwell小室实验检测细胞侵袭能力的变化.结果:MTT结果显示,无毒剂量的ICA与MTX联合应用后A549/MTX细胞的IC_(50)值为35.50±1.85 μmol/L,比单独应用MTX(同等剂量)后A549/MTX细胞的IC50值(52.17±2.25 μmol/L)有了一定程度的下降.软琼脂实验发现,A549/MTX+ICA组细胞克隆形成率为0.94±0.09,小于A549/MTX组细胞的1.56±1.07(P<0.05).划痕实验显示,72 h后A549/MTX组细胞的迁移能力大于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05).Transwell实验显示,A549/MTX组细胞的穿膜细胞数明显多于A549/MTX+ICA组细胞(P<0.05),说明A549/MTX+ICA组细胞的侵袭浸润能力小于A549/MTX组细胞.结论:中药ICA具有逆转A549/MTX耐药细胞转移表型的作用.     

c-Met在人非小细胞肺癌A549细胞系中表达活性与放疗抵抗的关系

目的:探讨c-Met对A549人非小细胞肺癌细胞系的放疗抵抗作用及发生机制.方法:采用人肺癌细胞系A549体外培养作为研究对象.将经不同浓度c-Met抑制剂处理后的A549细胞经或不经X线照射,用Western blot法检测c-Met及c-Src蛋白磷酸化形式表达水平,观察不同浓度c-Met抑制剂对c-Met和c-Src蛋白活性的抑制作用,同时用MTT法检测不同处理组细胞增殖抑制情况,流式细胞仪(FCM)检测不同处理组的细胞凋亡情况.结果:X线照射可使A549细胞系c-Met及c-Src磷酸化水平升高(P＜0.05),经或不经X线照射c-Met抑制剂(PHA665752)均可使c-Met及c-Src磷酸化水平降低,即有效抑制其蛋白活性表达(P＜0.05).MTT法及流式细胞法检测结果显示c-Met蛋白活性表达得到有效抑制后,A549细胞经X线照射后增殖抑制率及凋亡率较单纯放疗时明显增高(P＜0.05).结论:X线照射后c-Met信号通路活化使A549人非小细胞肺癌细胞系产生放疗抵抗,c-Src可能位于c-Met信号通路下游共同参与放疗抵抗,有效抑制c-Met蛋白活性表达可提高A549细胞放疗敏感性,其机制与抑制细胞增殖及诱导细胞凋亡有关.     

基质金属蛋白酶-9反义寡核苷酸对人肺腺癌细胞凋亡及转移能力的影响

背景与目的 基质金属蛋白酶-9（MMP-9）是一个重要的细胞外基质降解酶,与肿瘤的发生发展生长密切相关。本研究初步探讨MMP-9反义寡核苷酸（MMP-9ASODN）对人肺腺癌细胞A549凋亡及转移能力的影响。方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN对A549细胞周期和凋亡比率的影响;MTT比色法和划痕迁移试验观察MMP-9ASODN对A549细胞体外黏附以及迁移的影响。结果 MMP-9ASODN对A549细胞存活率抑制呈浓度和时间依赖性,MMP-9ASODN浓度为600nmol/L、作用48h时抑制作用最明显;与对照组相比,转染MMP-9ASODN的A549细胞凋亡百分比明显升高（P〈0.01）,而黏附力及迁移细胞数显著降低（P〈0.01）。结论 MMP-9ASODN在体外能够显著降低A549细胞的黏附及迁移能力,有效地抑制肺癌A549细胞的增殖,同时促进其凋亡。     

川芎嗪通过调控Wnt信号通路抑制肺癌细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究

目的:探讨川芎嗪通过调控Wnt信号通路影响人肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的机制研究。方法:将培养的人肺癌细胞A549随机分为四组:对照组、川芎嗪组、抑制剂组、川芎嗪+抑制剂组,噻唑蓝（MTT）法检测各组A549细胞增殖能力,流式细胞术检测各组A549细胞生长周期,Transwell实验检测各组A549细胞侵袭能力,划痕实验检测各组A549细胞迁移能力,蛋白免疫印迹（Western blot）检测各组A549细胞中β-连环蛋白（β-catenin）、c-myc、增殖细胞核抗原（PCNA）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白水平。结果:与对照组相比,川芎嗪组和抑制剂组均能够抑制A549细胞增殖,阻滞细胞周期至G1期,阻碍细胞侵袭和迁移,下调细胞中β-catenin、c-myc、PCNA和MMP-9蛋白水平,差异具有统计学意义（P＜0.05）。与川芎嗪组和抑制剂组相比,川芎嗪+抑制剂组A549细胞增殖能力显著降低,细胞周期阻滞于G1期,细胞侵袭和迁移能力受到抑制,细胞中β-catenin、c-myc、PCNA和MMP-9蛋白水平显著降低,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:川芎嗪能够抑制人肺癌细胞A549细胞的增殖、侵袭和迁移,其作用机制与抑制Wnt信号通路的激活有关。     

Glypican-3过表达对A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响

目的探讨glypican-3对人肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法采用glypican-3 cDNA瞬时转染A549细胞,Western blot方法检测转染前后glypican-3在A549细胞中的表达水平,分别采用MTT、流式和Transwell小室研究glypican-3 cDNA对A549细胞增殖、凋亡和迁移的作用。结果转染后glypican-3在A549细胞中表达上调,细胞增殖和迁移能力增强,细胞凋亡率降低（均P〈0.05）。结论 A549细胞中glypican-3过表达促进细胞增殖和迁移,抑制细胞凋亡,可能对A549细胞的生长和存活具有重要作用。     

IL-17A通过PI3K/Akt通路促进肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:研究IL-17A对肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法:使用不同浓度的IL-17A（0、1、10、100 ng/mL）分别作用于A549细胞。CCK-8检测IL-17A对A549细胞增殖的影响;划痕修复实验和Transwell细胞侵袭实验检测IL-17A对A549细胞迁移和侵袭的影响;Western blot检测IL-17A对PI3K/Akt信号通路和凋亡通路蛋白表达的影响;流式细胞术检测IL-17A对A549细胞凋亡的影响;IL-17A和PI3K抑制剂LY294002共同作用于A549细胞,划痕修复实验观察对A549细胞迁移的影响。结果:IL-17A可以促进A549细胞的增殖,其对A549细胞增殖的促进作用随着IL-17A浓度的增加而增加。IL-17A能够促进PI3K和Akt磷酸化蛋白表达、抑制凋亡蛋白caspase3的表达,并抑制A549细胞的凋亡。LY294002可以明显减弱IL-17A对A549细胞迁移的促进作用。结论:IL-17A通过PI3K/Akt通路抑制A549细胞的凋亡,从而促进A549细胞的增殖、迁移和侵袭。     

pVAX-iNOS真核表达载体的构建及其抗肺癌作用研究

背景与目的 iNOS与NO介导的抗肿瘤效应有关.本研究旨在构建pVAX-iNOS载体并转染A549肺癌细胞,检测其基因的表达并初步探讨iNOS基因表达增高后对A549肺癌细胞的抗肿瘤作用.方法 应用RT-PCR方法扩增人iNOS编码序列的CDS片段,构建pVAX-iNOS载体后转染肺癌A549细胞,通过RT-PCR和Western blot方法检测目的基因的表达;采用MTT法、Hoechst 3235染色和划痕实验分别检测iNOS高表达在体外对肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移作用的影响.结果 真核表达质粒载体pVAX-iNOS构建成功,iNOS蛋白在转染后的A549细胞中表达升高.pVAX-iNOS转染A549肺癌细胞后能明显诱导细胞发生凋亡并抑制肿瘤细胞的生长和迁移.结论 本研究成功构建pVAX-iNOS真核表达质粒,高表达iNOS能明显抑制A549细胞的增殖、迁移并促进细胞发生凋亡.本研究有望为临床治疗肺癌提供一个新的有效策略.     

调气消积汤对人肺腺癌A549 细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨调气消积汤对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响。方法:以不同剂量的调气消积汤及顺铂制作含药血清并分别作用于A549细胞,MTT法检测细胞的增殖能力,TUNEL原位法染色标记凋亡细胞,计算凋亡率。结果:调气消积汤低剂量组在不同时间段对A549细胞增殖没有明显影响,中、高剂量组及顺铂组对A549细胞增殖有明显的抑制作用,与空白对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01）。调气消积汤各剂量组凋亡细胞的数量与剂量呈正相关,凋亡率与空白对照组相比,差异显著(P<0.01),顺铂组绿色荧光强度最大。结论:调气消积汤可剂量依赖性抑制A549细胞增殖并诱导其凋亡。     

青蒿琥酯对人肺癌A549细胞恶性生物学行为的影响及其可能机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,ART)对人肺癌细胞株A549增殖、迁移和侵袭的影响及其可能机制.方法:采用CCK-8法检测不同质量浓度的ART对A549细胞作用24、48 h后细胞的增殖水平,Transwell小室试验检测30 μg/ml青蒿琥酯对A549细胞侵袭能力的影响,划痕实验检测对A549细胞迁移能力的影响.Western blotting检测A549细胞经30 μg/ml的ART作用48 h后人抗原R(human antigen R,HuR)和MMP-9蛋白表达变化.结果:ART能够抑制人肺癌A549细胞的增殖,呈剂量依赖性(P＜0.05).与未处理组比较,ART(30 μg/ml)处理的A549细胞穿膜的细胞数目显著减少[(47.11±8.61)vs(131.00±14.58)个,P＜0.01];A549细胞迁移距离显著缩短[(1.08±0.13)vs(2.91±0.24)mm,P＜0.01];A549细胞内HuR和MMP-9蛋白表达水平降低(P＜0.05).结论:ART能够抑制肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与抑制HuR的表达有关.     

mTOR信号通路与非小细胞肺癌放疗敏感性的关系

目的:研究mTOR信号通路与非小细胞肺癌放疗敏感性的关系。方法:采用不同剂量的雷帕霉素抑制非小细胞肺癌细胞系A549中的mTOR信号通路;Western blot检测雷帕霉素作用后下游信号分子的表达;将A549细胞分为空白对照组及雷帕霉素作用的实验组,将对照组和实验组经不同剂量射线作用;用MTT实验（噻唑蓝）及克隆形成能力检测细胞增殖能力,流式细胞仪检测细胞凋亡的变化。结果:雷帕霉素药物作用抑制了mTOR信号通路及下游分子的表达,经不同剂量射线照射后细胞的增殖能力和克隆形成能力显著低于对照组,凋亡显著高于对照组。结论:抑制mTOR信号通路可以增加非小细胞肺癌对放疗的敏感性。     

姜黄素联合KLF8-siRNA干扰对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的:探讨姜黄素联合KLF8-siRNA干扰对肺癌A549细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制.方法:采用脂质体法将KLF8-siRNA干扰序列转染至体外培养的A549细胞中,RT-PCR和Western blot检测转染效果.实验分为NC组(转染阴性对照)、KLF8-siRNA组(转染KLF8-siRNA)、Cur组(...     

IL-17RA基因过表达对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:探讨白介素-17受体A（interleukin-17 receptor A,IL-17RA）对人肺腺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建IL-17RA基因过表达慢病毒载体并感染A549细胞,采用RT-qPCR法和Western blot方法检测IL-17RA、MMP-2、MMP-9 mRNA和蛋白的表达。MTT实验、划痕实验及Transwell侵袭实验检测IL-17RA过表达对A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:IL-17RA过表达A549细胞中IL-17RA mRNA和蛋白表达显著上调。IL-17RA过表达细胞的增殖活性同对照组无明显变化,但过表达组细胞的迁移距离较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）,过表达组穿膜细胞数较空载病毒组及空白对照组明显增多（P<0.05）。IL-17RA高表达可明显上调MMP-2和MMP-9蛋白的表达。结论:成功构建IL-17RA过表达A549细胞,IL-17RA具有增强A549细胞迁移及侵袭的作用,其机制可能与上调MMP-2和MMP-9表达有关。     

槲皮素抑制X线照射后宫颈癌Hela细胞侵袭性的作用

目的:研究放射线及槲皮素对人宫颈癌Hela细胞侵袭性变化的影响,并初步探讨VEGF、MMP-9表达对其影响。方法:MTT法检测不同浓度的槲皮素对宫颈癌Hela细胞增殖的影响;Transwell体外侵袭实验分别观察放射线及不同浓度槲皮素作用后24h细胞的侵袭能力的改变。Western blot法检测不同浓度槲皮素、放射线单独及联合应用后Hela细胞中VEGF、MMP-9蛋白的表达。结果:槲皮素对Hela细胞具有增殖抑制作用,并呈浓度和时间依赖性（P<0.05）,24小时的IC50值约为120μmol/L。与空白组比较,X线照射24h后细胞侵袭能力增加（P<0.01）,槲皮素对HeLa细胞的侵袭能力具有抑制作用（P<0.01）,槲皮素与X线共同处理细胞后,仍具有明显的抑制侵袭能力（P<0.01）,组间差异具有统计学意义。X线单独作用后VEGF、MMP-9蛋白表达在一定时间内有增加的趋势（P>0.05）,槲皮素、以及联合X线组VEGF、MMP-9蛋白表达降低（P<0.05）。结论:X线照射后宫颈癌Hela癌细胞侵袭潜能短暂增强;槲皮素能抑制X线照射后宫颈癌细胞的侵袭能力。机制可能与槲皮素能下调VEGF、MMP-9的表达有关。     

RNAi沉默CXCR6基因对肺癌A549细胞增殖、体外侵袭力和裸鼠成瘤能力的影响

目的：探讨RNAi沉默CXC型趋化因子受体6（CXCR6）基因对A549细胞增殖、体外侵袭力和裸鼠成瘤能力的影响。方法 MTT法和Transwell小室模型检测稳定沉默CXCR6基因的A549细胞增殖和细胞侵袭迁移能力。将稳定沉默CXCR6的A549细胞与正常A549细胞分别皮下接种裸鼠，观察接种后肿瘤生长情况。结果稳定沉默CXCR6基因的A549细胞与正常A549细胞相比，前者增殖速率下降（P﹤0.05），平均增殖抑制率为30.70%；前者的体外侵袭力也降低（P﹤0.05），平均侵袭抑制率为74.93%，平均迁移抑制率为70.19%。裸鼠体内实验显示，稳定沉默CXCR6基因的A549细胞与正常A549细胞相比，其裸鼠体内成瘤能力降低（P﹤0.05），瘤体重量下降了62.5%。结论 RNAi沉默CXCR6基因，可以抑制A549细胞的增殖、体外侵袭力和成瘤能力。     

莱菔硫烷抑制肺癌干细胞增殖的体外实验

目的 研究莱菔硫烷（sulforaphane, SFN）对肺癌干细胞增殖的影响及其机制。方法 采用MTT法分析SFN对H460细胞增殖的影响;应用流式细胞术（FACS）检测SFN对细胞凋亡和侧群细胞比例的影响;肿瘤球培养法分析SFN对肿瘤球生长的影响;使用shRNA慢病毒载体构建β-catenin低表达细胞株,并应用蛋白电泳法检测在β-catenin正常或低表达情况下莱菔硫烷对β-catenin、Oct4、Sox2、c-Myc、Nanog等基因表达的影响。结果 SFN有效抑制H460细胞增殖,IC50为11.2 μmol/L。SFN处理72 h后,细胞凋亡呈剂量依赖性增高。SFN有效抑制原代肿瘤球和2代肿瘤球的生长,在较低浓度（1.0 μmol/L）下即有明显的抑制作用。FACS检测提示侧群细胞比例随SFN浓度增高而减少。SFN浓度依赖性地抑制β-catenin、Oct4、Sox2、c-Myc和Nanog等蛋白表达。在低表达β-catenin情况下,Oct4、Sox2、c-Myc、Nanog等基因表达水平与SFN浓度相关。结论 SFN通过β-catenin和干性相关基因（Sox2、c-Myc、Nanog和Oct4）特异地抑制肺癌干细胞的增殖。     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移与黏附的影响

背景与目的：研究表明,黄连素在清热解毒、抗菌消炎的同时,还具有诱导肿瘤细胞凋亡的作用,但最近的研究认为黄连素还能抑制肿瘤细胞的转移和扩散。为了进一步探讨黄连素对肿瘤细胞转移的作用及机制,本研究对黄连素作用后的肺腺癌A549细胞的增殖、迁移及黏附能力进行了检测。方法：应用MTT法检测不同浓度黄连素作用后细胞增殖情况;通过划痕试验和黏附试验测定黄连素作用前后细胞迁移和黏附能力;半定量RT-PCR法检测MMP2、MMP9的mRNA表达;明胶酶谱法测定MMP2、MMP9的活性。结果：黄连素能显著抑制A549增殖,并呈现一定的量效和时效关系（P〈0.05）;细胞的迁移率和黏附率明显降低,并且呈现剂量依赖性（P〈0.05）;经黄连素作用后的A549细胞,MMP2和MMP9的mRNA的表达明显降低,MMP2和MMP9降解明胶的能力下降,尤以100μg/mL的作用最为明显（P〈0.05）。结论：黄连素能够抑制A549细胞的迁移和黏附能力,其机制可能与下调MMP2和MMP9的mRNA表达,从而降低其活性有关。     

TPX2 shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响

目的:研究Xklp2靶蛋白（TPX2）shRNA对乳腺癌细胞生长、凋亡、侵袭、迁移能力的影响。方法:乳腺癌细胞MCF-7感染靶向TPX2基因shRNA慢病毒和阴性对照慢病毒,设置为TPX2 shRNA组、shRNA-NC组,把不做慢病毒感染的细胞设为对照组（Control组）。Real time PCR和Western blot测定沉默效果,MTT测定细胞增殖活性,克隆形成实验测定细胞克隆形成能力,流式细胞术测定细胞凋亡,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力,Western blot测定细胞中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、基质金属蛋白酶-9（MMP-9）、活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）蛋白水平。结果:TPX2 shRNA组TPX2 mRNA和蛋白水平均低于shRNA-NC组和Control组（P<0.05）。TPX2 shRNA组细胞增殖活性和细胞克隆形成能力降低,细胞凋亡率升高,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-2、MMP-9蛋白水平降低,Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平升高,与shRNA-NC组和Control组比,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:下调TPX2明显抑制乳腺癌细胞生长、侵袭和迁移能力,并诱导乳腺癌细胞凋亡。     

葛根素抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的机制探讨

目的:探讨葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的作用及其机制.方法:不同浓度葛根素处理非小细胞肺癌A549细胞后,采用CCK-8法检测葛根素对非小细胞肺癌A549细胞增殖抑制作用及半数抑制浓度(half-inhibitory concentration,IC50);显微镜下观察葛根素对非小细胞肺癌A549细...     

miRNA-200c对非小细胞肺癌A549细胞甲氨蝶呤耐药性的影响

目的 探讨miRNA-200c（miR-200c）在非小细胞肺癌A549细胞耐甲氨蝶呤（MTX）（A549/MTX）中的影响及可能的作用机制。方法 通过实时荧光定量（qRT-PCR）法检测人肺癌亲本细胞株A549细胞、转染miR-200c模拟物（mimic）的A549/MTX细胞（A549/MTX-M）及转染miR- 阴性对照（NC）A549/MTX细胞（A549/MTX-N）中miR-200c的表达水平。分别采用MTT法、锥虫兰染色及流式细胞术检测三组细胞对MTX的药物敏感度、细胞增殖能力及细胞凋亡变化,并采用qRT-PCR检测其P53和P21基因表达的变化。结果 miR-200c在A549细胞中的表达水平显著高于A549/MTX-N细胞;A549/MTX-M细胞miR-200c水平高于A549/MTX-N细胞;用不同浓度MTX刺激细胞,与A549/MTX-N细胞比较,A549/MTX-M细胞的增殖能力减弱、凋亡细胞增多,并呈剂量依赖性,差异均有统计学意义。转染miR-200c mimic后,P53和P21基因表达水平上升,与转染miR-NC细胞比较,差异有统计学意义。结论 miR-200c能够逆转A549/MTX细胞对MTX的耐药性,其作用机制可能是通过P53/P21信号转导通路诱导细胞凋亡来实现的。