负性筛选策略与食管鳞癌循环肿瘤细胞检测

目的建立基于细胞学水平的循环肿瘤细胞负性筛选方法,检测食管鳞癌患者外周血循环肿瘤细胞。方法选用负性筛选策略,分步去除7．5ml食管鳞癌外周血样本中的红、白细胞,富集上皮来源的稀有细胞。比较3种免疫磁珠（Miltenyi、AVIVA和Xinzhi磁珠）去除白细胞、富集外周血循环肿瘤细胞的特点和效率。用经典的细胞化学染色鉴定循环肿瘤细胞。结果Miltenyi和AVIVA磁珠去除白细胞、富集肿瘤细胞效果较好。从富集后的食管鳞癌患者外周血稀有细胞中鉴定到形态各异的循环肿瘤细胞。结论负性筛选策略可以有效分离鉴定食管鳞癌患者外周血形态各异的循环肿瘤细胞。     

循环肿瘤细胞与卵巢癌患者临床特征之间的关系

目的:探讨卵巢癌患者检测循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）的意义,及其检测结果与临床特征之间的关系。方法:选取30例卵巢癌患者、15例卵巢良性疾病患者和健康受试者,用免疫磁珠阴性富集联合荧光原位杂交的方法(imFISH)检测循环肿瘤细胞并计数,分析其与年龄、TNM分期、腹水、肿瘤标志物、肿瘤疗效评价之间的关系。结果:卵巢癌患者CTCs数目高于卵巢良性疾病及健康受试者(P<0.05)。外周血CTCs检出的阳性率与肿瘤大小、分化程度、临床T分期、临床M分期之间差异有统计学意义(P<0.05),与年龄、病理类型、肿瘤位置、性质、总分期、腹水、N分期之间差异无统计学意义(P>0.05)。CTCs阳性率与肿瘤标志物HE4表达水平之间具有相关性。分期越高,CTCs的数值变化范围越大,检出阳性率越高。CTCs与肿瘤疗效评价之间具有相关性。结论:卵巢癌患者外周血中CTCs阳性率与临床特征相关,CTCs检测可以做为临床诊断的辅助方法和检测指标,进一步指导分期、治疗和评估预后。     

联合应用抗CK及EpCAM抗体检测食管癌外周血循环肿瘤细胞

目的:探讨联合应用抗细胞角蛋白抗体（cytokeratin,CK）及抗上皮特异性黏附分子(epithelial cell adhesion molecule,EpCAM)免疫磁珠富集循环肿瘤细胞（circulating tumor cells,CTCs）的方法,用于提高食管癌患者外周血循环肿瘤细胞检测率。方法:将不同数量的食管癌细胞系（KYSE-170、KYSE-180、EC0156）分别与健康志愿者外周血混合后,比较单独使用抗体磁珠及联合使用双抗免疫磁珠时肿瘤细胞的检出率;并应用优化的方法对20例食管癌患者外周血中的CTCs进行富集鉴定。结果:联合应用抗CK和EpCAM抗体用于富集外周血中CTCs的方法能够提高肿瘤细胞的检出率,其差异具有统计学意义（P<0.05）;应用优化的方法富集食管癌外周血中的CTCs检出率为75%。结论:联合应用抗CK和EpCAM抗体的免疫磁珠检测体系能够用于检测食管癌外周血中的CTCs,对指导患者的个体化治疗有较高的临床意义。     

食管鳞癌循环肿瘤细胞在新辅助放化疗中动态变化及预后意义

目的 循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)被认为是肿瘤复发转移的重要因素之一,食管鳞癌患者放疗后CTCs阳性率较治疗前下降并和预后相关.本研究探讨进展期食管鳞癌新辅助化疗中CTCs的状态,以及CTCs与食管癌临床特征及预后的相关性.方法 回顾性分析十堰市太和医院(湖北医药学院附属医院)2013-01-10-2014-03-27收治的96例食管鳞癌患者,采用免疫磁珠富集联合免疫荧光法检测患者外周血中CTCs,对比分析患者CTCs状态与临床特征及2年生存率的关系.同时分析患者新辅助放化疗前后CTCs状态的变化,以期明确新辅助治疗的意义及适应人群.计数资料采用χ2检验或Fisher精确概率法,生存分析采用Kaplan-Meier法和Cox模型法.结果 96例患者随访至2016-03-27,随访率100%,中位随访时间25个月.患者CTCs状态与肿瘤的病变长度、T分期、N分期及临床分期相关(P<0.05),与患者的年龄、性别及病变部位无关,P>0.05.首诊CTCs阳性患者的中位生存时间约19.2个月;而CTCs阴性患者的中位生存时间约26.8个月,两者差异有统计学意义,P=0.038.Cox模型结果显示,Ⅲ~ⅣA期是影响CTCs不同状态患者的独立危险因素.首诊CTCs阳性的患者Ⅱ期中位生存时间为28.2个月,与CTCs阴性患者的30.2个月比较,差异无统计学意义,P=0.189;但Ⅲ期的中位生存时间分别为19.9和24.6个月,差异有统计学意义,P=0.044;ⅣA期的中位生存时间分别为11.2和21.2个月,差异有统计学意义,P=0.045.新辅助治疗后,有21例(34.42%)患者由CTCs阳性转为阴性,转阴率差异有统计学意义,P=0.002.新辅助治疗后,CTCs仍为阳性的患者中位生存时间约16.5个月,与CTCs转阴的患者(23.4个月)和首诊CTCs阴性的患者(26.8个月)比较,差异有统计学意义,P<0.05;但后两者差异无统计学意义,P>0.05.结论 CTCs可反映食管癌患者的疾病进展程度,并可作为判断预后的指标.此外,新辅助放化疗可改善首诊CTCs阳性患者的中位生存时间.     

食管腺癌临床病理特征及影响预后的因素

目的:分析食管腺癌手术患者的临床病理特征及影响预后的因素。方法:对2004年1月-2011年1月我院收治的20例食管腺癌及同期手术的24例食管鳞癌患者临床资料行回顾性分析。Kaplan-Meier方法绘制各临床病理参数的生存曲线,并用Breslow检验比较各组生存率变异。Cox模型分析影响食管癌患者预后的因素。结果:食管腺癌与鳞癌肿瘤平均长度分别为(4.2±1.8)cm、(5.4±2.0)cm(P<0.05)。生存时间分别为(20.2±15.0)月、(33.7±24.2)月(P<0.05)。食管腺癌肿瘤长度≥5cm的患者有12人,全部未发生淋巴结转移;肿瘤长度<5cm的有8人,其中有6人发生淋巴结转移(P<0.05)。单因素分析食管腺癌肿瘤长度、T分期、N分期、G分期、TNM分期及是否有淋巴结转移对生存时间均有影响(P<0.05)。多因素分析44例食管癌患者,TNM分期及组织学类型是影响其预后的因素(P<0.05)。结论:与食管鳞癌相比,食管腺癌肿瘤平均长度短,生存时间短。食管腺癌有无淋巴结转移与肿瘤长度有关。病变长度、T分期、N分期、G分期、TNM分期及有无淋巴结转移对食管腺癌预后有影响。TNM分期及组织学类型是影响食管癌预后的因素。     

食管鳞癌组织FGF3和Podoplanin表达及与预后相关性分析

目的:探讨食管鳞癌组织中成纤维细胞生长因子3(FGF3)和Podoplanin表达及对预后的影响。方法:免疫组织化学法检测FGF3和Podoplanin在60例食管鳞癌组织中的表达,Cox回归模型和Kaplan-Meier生存曲线分析其表达与患者预后的关系。结果:在60例鳞癌组织中,FGF3的阳性率为92%(55/60),20例正常黏膜组织中的表达率为50%(10/20),差异有统计学意义,P<0.05。在食管鳞癌组织中,不同临床分期、分化程度、浸润深度、有或无淋巴结转移组之间FGF3蛋白的阳性率差异有统计学意义,P<0.05;不同临床分期、浸润深度、有或无淋巴结转移组和不同肿瘤大小组的淋巴管密度(LVD)的差异都有统计学意义,P<0.05。5年总生存率为35%,LVD计数>25/HP组5年生存率显著高于≤25/HP组,P<0.05。Cox模型多因素分析结果表明,肿瘤浸润深度、TNM分期和淋巴管密度均是影响生存期的独立因素,P<0.05。结论:FGF3是与食管鳞癌浸润和转移关系密切的指标。淋巴管密度,肿瘤浸润深度和TNM分期都是影响食管鳞癌患者预后的独立的危险因素。     

339例中晚期胸段食管鳞癌术后生存评价及预后因素分析

目的探讨影响中晚期胸段食管鳞癌患者术后生存和预后的因素。方法采用COX比例风险模型回顾性分析新疆肿瘤医院行胸段食管癌根治术339例病例的临床资料。结果中晚期胸段食管鳞癌患者总1、3、5年生存率分别为80.49%、41.94%、23.12%,单因素分析显示体重减轻、血红蛋白水平、术前白蛋白水平、淋巴结转移个数、侵润深度、术后病理分期、脉管瘤栓与生存时间有关（P〈0.05）;多因素分析显示肿瘤侵润深度、淋巴结转移个数、术后病理分期、术前白蛋白水平是影响中晚期胸段食管鳞癌预后的独立因素。结论肿瘤侵润深度、淋巴结转移个数、术后病理分期、术前白蛋白水平是影响中晚期胸段食管鳞癌患者术后生存的独立因素。     

食管鳞癌患者外周血MMP-9 mRNA表达水平及临床意义研究

[目的]探讨食管鳞癌患者外周血中基质金属蛋白酶-9 (MMP-9)基因的表达及其与临床病理资料、生存情况的关系.[方法]应用实时定量PCR技术定量检测食管癌外周血标本中MMP-9 mRNA的表达,分析MMP-9基因表达情况与患者临床病理参数及预后之间的关系.[结果]在169例食管鳞癌患者外周血标本中,有106例(62.7％)存在外周血MMP-9基因的阳性表达,与食管癌的淋巴结转移(P=0.039)、远处转移(P=0.019)和TNM分期(P=0.014)显著相关.单因素生存分析显示N分期(P=0.000)、M分期(P=0.002)、TNM分期(P=0.003)、MMP-9表达(P=0.042)对患者生存的影响有统计学意义.MMP-9基因阳性表达的食管癌患者远期生存明显低于阴性表达者.多因素分析显示N分期是食管鳞癌患者预后的独立影响因子(RR=1.671,95％CI:1.212～2.306).[结论]食管鳞癌患者外周血中MMP-9基因的高表达与食管癌转移存在关联,并可提示食管癌患者的不良预后.     

ѭ����ϸ����θ��Ԥ���ϵ��Meta����

目的 探讨循环癌细胞(CTCs)和胃癌患者肿瘤分期、淋巴结转移和预后的相关性.方法 计算机检索Embase、Medline和PubMed数据库,根据纳入和排除标准筛选文献,对入选文献的特征、研究结果的内容进行摘录和评价,并对各研究结果进行异质性检验和数据合并.结果 入选文献18篇,均发表于2000-2011年.Ⅰ～Ⅱ期胃癌术前CTCs阳性率显著低于Ⅲ期患者(RR=0.63,95％CI:0.48～0.84),有淋巴结转移患者的CTCs阳性率高于无淋巴结转移的患者(RR=1.42,95％CI:1.20～1.68).术前CTCs阳性的患者术后发生复发或转移的风险显著高于阴性患者(RR=2.42,95％ CI:1.94～3.02),而且总体生存率更低(HR=1.83,95％CI:1.30～2.60).结论 术前CTCs检测阳性是胃癌患者预后不良的一个重要判断指标,可为胃癌的治疗决策提供参考.     

胃癌外周血循环肿瘤细胞水平及其临床意义

目的 探讨胃癌患者外周血循环肿瘤细胞（CTCs）水平及其与临床病理特征的关系。方法 选取本院2013年7月至2014年1月经病理组织学证实的胃癌患者41例（胃癌组）,清晨空腹抽取其肘正中静脉血5ml,24h内采用免疫磁微粒阴性富集CTCs并行免疫荧光原位杂交检测,计算CTCs阳性率并分析其与临床病理特征（TNM分期、T分期、N分期、远处转移、肿瘤大小、分化程度及脉管侵犯）的关系。选取同期的24例良性胃病患者作为对照（对照组）。结果 对照组外周血CTCs阳性率为8.3％（2／24）,低于胃癌组的63.4％（26／41）,差异有统计学意义（P＜0.05）。胃癌患者CTCs水平与TNM分期、T分期、N分期、远处转移、肿瘤大小、分化程度及脉管侵犯均无关（P＞0.05）。结论 胃癌患者外周血中CTCs水平较高,且其表达与胃癌临床病理特征无关,胃癌早期阶段外周血中便可检出CTCs,提示可能在肿瘤早期阶段即发生微转移。     

乳腺癌患者外周血中循环癌细胞的检测及其临床意义

背景与目的近年来,免疫细胞化学和免疫磁珠富集技术已应用于检测乳腺癌患者外周血中癌细胞。本研究拟探索一种全新的改良免疫磁珠富集联合免疫荧光细胞化学技术,检测乳腺癌患者外周血中循环癌细胞,并探讨其临床应用的意义。方法通过放置MCF-7乳腺癌细胞于正常人外周血标本中以检验本检测方法的敏感度。取52例初治乳腺癌患者和20例健康女性志愿者的外周血,分离其单个核细胞,通过与磁珠共价结合的表皮细胞粘附分子(EpiCAM)抗体富集外周血中表达EpiCAM抗原的肿瘤细胞,并通过改良的免疫荧光细胞化学法检测细胞骨架蛋白CK8/18阳性的肿瘤细胞(呈绿荧光),并用DAPI标记细胞核(呈蓝荧光)进一步排除假阳性。结果该改良方法敏感性较高,可在1×107的外周血单个核细胞中检测到一个肿瘤细胞。在20例健康志愿者的外周血中均未检测到CK8/18阳性细胞,特异性为100%。52例乳腺癌患者的外周血中有28例检测到CK 细胞,阳性率为53.8%。两组有显著性差异(P<0.001)。并初步证明乳腺癌患者外周血中循环癌细胞与临床分期、腋窝淋巴结状态呈正相关(P值分别为0.001和0.005)。而与原发肿瘤大小、绝经前后、不同病理类型、不同的组织学分级、激素受体状况及C-erbB2的表达与否无明显相关性(P值均>0.05)。结论改良免疫磁珠富集及免疫荧光细胞化学方法检测乳腺癌患者外周血中的循环癌细胞,简单方便,耗时较少,敏感性、特异性高,本法检测结果证明乳腺癌患者外周血中循环癌细胞与临床分期、腋窝淋巴结状况密切相关。     

循环肿瘤细胞SE-iFISH检测结果与乳腺癌患者临床特征及预后的相关性

目的:探究乳腺癌患者的循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)差异富集-荧光免疫染色原位杂交技术(subtraction enrichment-immunofluorescence in situ hybridization,SE-iFISH)检测结果与临床特征及预后的相关性.方法:选取...     

微流控芯技术检测循环肿瘤细胞在脑胶质瘤预后预测中的价值

背景与目的：脑胶质瘤患者的预后既往多通过生化指标进行预测,临床实践中有一定难度且受多种因素影响,导致预测效率相对较差。探讨微流控芯技术检测循环肿瘤细胞（circulating tumor cell,CTC）在脑胶质瘤预后预测中的价值。方法：选取2016年3月—2020年3月内蒙古自治区人民医院神经外科收治的96例脑胶质瘤患者为研究对象,采用微流控芯技术富集患者外周血CTC,并利用免疫荧光法对CTC进行鉴定;采用logistic回归方程分析脑胶质瘤患者外周血CTC的检测结果与脑胶质瘤临床特征之间的关系并建立受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线;制作并分析脑胶质瘤患者术后生存曲线。结果：微流控芯技术对CTC富集联合免疫荧光结果显示,CTC检测阳性率为42.71%,外周血检测出的CTC数目为（66.27±6.36）/mL;单因素分析结果显示,外周血CTC与患者的肿瘤分期、组织学类型、淋巴结转移是否存在囊性病变、神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）密切相关（P<0.05）,与年龄、性别、KPS评分、血清胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）含量等临床特征无相关性;多因素分析结果显示肿瘤分期、组织学类型及NSE的表达与CTC密切相关;通过ROC曲线分析得出肿瘤分期、组织学类型以及NSE的AUC分别为0.645、0.687、0.720,预测概率AUC为0.814（P<0.05）;CTC阳性组和阴性组患者1年生存率差异无统计学意义（P>0.05）,但两组患者2年和3年生存率差异有统计学意义（P<0.05）。结论：微流控芯技术可定量检测脑胶质瘤患者外周血CTC,其水平与肿瘤分期、组织学类型、NSE密切相关,直接影响脑胶质瘤患者远期生存率。因此,外周血CTC可作为脑胶质瘤患者预后预测的重要指标。     

原发性食管腺癌

目的了解原发性食管腺癌（ＰＥＡＣ）的临床生物学特征及影响患者预后的重要因素,探讨合理的手术指征及综合治疗措施。方法对１０６例ＰＥＡＣ患者的外科治疗结果进行回顾性研究,并与同期３６０３例食管鳞癌进行对比分析。结果ＰＥＡＣ患者的手术切除率、手术死亡率及手术并发症发生率分别为９２．５％、２．８％和２３．５％,与食管鳞癌相似;影响其预后的主要因素有病变分期、淋巴结转移、肿瘤外侵及手术切除性质。其总的术后５年生存率为２１．０％,低于食管鳞癌（Ｐ＜０．０１）;其手术５年后死于转移复发的占８２．４％,高于食管鳞癌（Ｐ＜０．０１）。辅助放疗对Ⅰ、Ⅱａ期患者有一定帮助,对Ｎ１患者帮助不大。结论ＰＥＡＣ和食管鳞癌相比恶性程度高,病变进展快,患者预后差。手术是其首选的主要治疗手段,手术指征为０、Ⅰ、Ⅱ期及估计可切除的Ⅲ期甚至Ⅳ期患者。早发现、早诊断、早治疗以及肿瘤的根治性切除是改善患者预后的主要手段。辅助放疗可能对Ｎ０患者有所帮助,对Ｎ１患者帮助不大。     

Prognostic impact of detecting viable circulating tumour cells in gastric cancer patients using a telomerase-specific viral agent: a prospective study

ABSTRACT: BACKGROUND: The identification of circulating tumour cells (CTCs) in peripheral blood is a useful approach to estimate prognosis, monitor disease progression, and measure treatment effects in various malignancies. However, clinical relevance of CTCs is controversial. We attempted to detect viable CTCs in the peripheral blood of gastric cancer patients using a telomerase-specific viral agent. We took a 7.5-ml blood sample from 65 treatment-negative gastric cancer patients before surgery and 10 healthy volunteers. We detected viable CTCs in the blood samples after incubating them with a telomerase-specific, replication-selective, oncolytic adenoviral agent carrying the green fluorescent protein (GFP) gene (OBP-401). GFP-positive CTCs were defined as having a diameter of at least 7.735 mum; this threshold was determined by receiver operating characteristic curve analysis. GFP-positive cells were counted under a fluorescence microscope. RESULTS: There was a significant difference in overall survival among the patients with 0[EN DASH]4 and those with [GREATER-THAN OR EQUAL TO]5 GFP-positive CTCs in the stage I[EN DASH]IV disease group and stage II[EN DASH]IV advanced disease group. The number of GFP-positive CTCs was not related to cancer stage. Among the pathological findings, the number of GFP-positive CTCs was only significantly related to venous invasion, although there were trends towards more GFP-positive CTCs with disease progression (tumour depth, lymph node metastasis, distant metastasis, lymphatic invasion, and histological type). CONCLUSIONS: There was a significant relationship between the number of GFP-positive CTCs and overall survival in the patients with gastric cancer. The detection of CTCs using OBP-401 may be useful for prognostic evaluation.Trial registrationUniversity Hospital Medical Information Network in Japan, UMIN000002018.     

HER2-positive circulating tumor cells indicate poor clinical outcome in stage I to III breast cancer patients.

PURPOSE: Early metastasis in node-negative breast cancer indicates that breast cancer cells obviously can bypass the lymph nodes and disseminate directly hematogenous to distant organs. For this purpose, we evaluated the prognostic value of blood-borne, HER2-positive circulating tumor cells (CTC) in the peripheral blood from 42 breast cancer patients with a median follow-up of 95 months. EXPERIMENTAL DESIGN: Cells were isolated by the patented combined buoyant density gradient and immunomagnetic separation procedure and analyzed by immunocytochemistry. RESULTS: We detected one to eight CTCs in the peripheral blood of 17 of 35 patients (48.6%) presenting no overt metastasis. As a positive control, 7 of 7 (100%) patients with metastatic disease presented positive. Healthy persons and patients (n = 32) operated for nonmalignant diseases presented negative for CTCs. The presence and frequency of HER2-positive CTCs correlated with a significantly decreased disease-free survival (P < 0.005) and overall survival (P < 0.05). Interestingly, in 12 patients with HER2-positive CTCs, the primary tumor was negative for HER2 as assessed by immunohistochemical score and fluorescence in situ hybridization. CONCLUSIONS: This study provides some evidence of a prognostic effect of HER2-positive CTCs in stage I to III breast cancer. Future studies have to determine the outcome of patients treated with HER2-targeting therapies with respect to HER2-positive CTC levels because it is not unlikely that high levels of HER2-positive CTCs reflect the activity of the tumor and may predict response to trastuzumab.     

Detection of circulating tumor cells in peripheral blood of colorectal cancer patients without distant organ metastases

Purpose

Recently, the detection of circulating tumor cells (CTCs) in peripheral blood has become an important tool for the non-invasive assessment of micrometastases and to predict clinical outcome. The objective of this study was to investigate if the presence of CTCs in peripheral blood influences the prognosis in colorectal cancer (CRC) patients without distant organ metastases.

Methods

The GCC mRNA and CK20 mRNA levels in peripheral blood and the serum levels of CEA of 92 CRC patients without distant organ metastasis were analyzed by quantitative RT-PCR and ELISA, respectively. Its associations with overall survival (OS) and disease-free survival (DFS) rates were analyzed.

Results

Univariate analyses showed that lower OS and DFS rates were significantly associated with GCC and CK20 mRNA levels, the presence of lymph node metastases, the presence of mesenteric root lymph node metastases, and the presence of tumor emboli in vessels (p?<?0.05), but not with CEA levels. Multivariate analyses showed a significant association between 1) OS and GCC mRNA levels and differentiation types and 2) DFS and the presence of tumor emboli in the vessels. Kaplan-Meier curves showed that DFS was significantly associated with the presence of poorly differentiated cells, the presence of mesenteric root lymph node metastases having received prior chemotherapy, and the presence of tumor emboli in vessels.

Conclusion

The detection of CTCs in peripheral blood may be useful for the prediction of clinical outcome in CRC patients without distant organ metastases.