TGF-β1对大鼠脑瘤术后缺氧性脑损伤BAD及Bcl-2 mRNA的影响

目的 观察脑瘤术后大鼠缺氧性脑损伤,外源性转化生长因子β1(TGF-β1)对脑组织BAD及Bcl-2 mRNA表达的影响.方法 40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生理盐水对照组和TGF-β1干预组,每组10只.建立大鼠脑瘤术后缺氧性脑损伤模型2 h后,侧脑室注入20 ng的TGF-β1,RT-PCR方法检测给药24 h后脑组织BAD及Bcl-2 mRNA表达.结果 模型组及生理盐水组较假手术组,BADmRNA表达显著增高(P《0.05),Bcl-2 mRNA表达降低(P《0.05).TGF-β1干预组较模型组及生理盐水组BAD mRNA表达显著降低(P《0.05),Bcl-2 mRNA表达显著增高(P《0.05).结论 TGF-β1可以通过上调Bcl-2 mRNA表达及下调BAD mRNA表达,抑制细胞凋亡,从而发挥神经保护作用,为TGF-β1临床脑瘤术后缺氧性脑损伤治疗提供理论依据.     

褪黑素对小鼠肝癌细胞增殖及p27Kip1、cyclin D1基因表达的影响

目的探讨褪黑素(melatonin MT)抑制H22小鼠肝癌细胞增殖的可能机制.方法通过体外细胞培养,分别采用不同剂量MT作用不同的时间,MTT显色技术检测细胞的增殖;RT-PCR检测MT作用4 d后,H22细胞中p27Kip1、cyclin D1mRNA的表达;免疫组化检测H22细胞中p27Kip1、cyclin D1蛋白的表达.结果MT具有抑制肝癌细胞的生长和增殖的作用,且具有时间依赖关系.MT诱导细胞凋亡的过程中,与对照组相比,MT药理剂量组H22细胞中的p27Kip1 mRNA及蛋白表达升高(P＜0.01);cyclin D1 mRNA及蛋白表达下降(P＜0.01).MT生理剂量组p27Kip1mRNA表达升高(P＜0.01),而p27Kip1蛋白表达水平与对照组相比差异无显著性(P＞0.05),cyclinD1 mRNA及蛋白表达均下降,差异元显著性(P＞0.05).结论MT抑制肝癌细胞的增殖可能与上调细胞周期抑制因子p27Kip1的表达,降低周期蛋白cyclin D1表达,进而延迟细胞周期的进程有关.     

三氧化二砷与HMBA对白血病K562细胞增殖抑制作用及其分子机制的研究

目的:探讨诱导分化荆对K562细胞增殖抑制的作用与分子机制.方法:通过MTT试验和细胞形态学观察K562细胞增殖的改变和分化情况.通过流式细胞仪实验检测细胞周期改变,RT-PCR检测EⅥ1、TGF-β1和WT1基因表达的变化.结果:K562细胞经六亚甲基二乙酰胺(HMBA)和(或)三氧化二砷(As2O3)作用后增殖明显受到抑制,并向不同方向分化,细胞被阻滞在G1期.K562细胞的增殖抑制作用与EVI1和WT1基因表达下调,TGF-β1基因表达上调一致.EⅥ1/β-aetin从0.925 3渐降至0.137 9,WT1/β-actin从0.995 3降至0.197 8.TGF-β1/β-actin从0.331 5增至1.245 2.结论:HMBA、As2O3及其联合抑制K562细胞增殖作用与EⅥ1和WT1基因表达下调,TGF-β1基因表达上调有关.     

泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响

目的 探讨泮托拉唑对胃癌细胞MKN-45增殖与凋亡的影响及相关机制.方法 采用0、10、20、40 μg/ml的泮托拉唑处理MKN-45细胞48 h;MTT法检测细胞活力;Hoechst染色检测细胞形态;流式细胞术检测细胞周期;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及Cyclin E表达.结果 与0 μg/ml比较,10、20、40 μg/ml的泮托拉唑能明显降低MKN-45细胞活力(P﹤0.01),使细胞核发白,皱染,使细胞周期阻滞在G1期(P﹤0.01),下调Cyclin D1及Cyclin E的表达(P﹤0.01);与0 μg/ml比较,20、40 μg/ml的泮托拉唑能明显下调MKN-45细胞中Bcl-2的表达(P﹤0.01),上调Bax的表达(P﹤0.01).结论 泮托拉唑通过调控细胞周期蛋白及细胞凋亡相关蛋白表达抑制胃癌细胞MKN-45的增殖,并诱导细胞凋亡.     

膀胱移行细胞癌组织TGF—β1和细胞周期调控因子表达及其意义的研究

目的:通过检测TGF-β1、p21WAFI/CIPI(简称p21)、Cyclin D1和Ki-67在膀胱移行细胞癌(transitional cellcarcinoma,TCCs)组织中的表达,探讨TGF-β1在膀胱癌细胞周期调控中的作用及时细胞增殖的影响.方法:应用免疫组化SP法检测50例TCCs标本和10例正常膀胱黏膜组织中TGF-β1、p21、Cyc-lin D1和Ki-67的表达,分析与病理分级、临床分期、肿瘤数目、复发的关系及相关指标之间的相关性.结果:TGF-β1在TCCs组阳性表达率为58%,显著高于正常膀胱黏膜组(20%),且与分级、分期呈负相关;初发组TGF-β1和p21表迭均高于复发组,P<0.001.p21表达与分级、分期呈负相关,P<0.005.Cyclin D1随分级、分期增高其表达有增强的趋势,但差异无统计学意义,P<0.05;复发组、多发组的表达显著高于初发组、单发组.Ki-67表达随分级、分期升高,呈正相关;复发组、多发组表达显著高于初发组、单发组.TGF-β1与p21的表达呈正相关,与Ki-67呈负相关.结论:TGF-β1在TCCs早期表达升高,诱导细胞周期负性调控因子p21的表达,从而抑制Cyclin D1-CDK4/6复合物的活性,以及肿瘤生长.随着膀胱癌的恶变演进,TGF-β1表达下降,其诱导p21表达的作用减弱,而Cyclin D1促进细胞周期进程及其增殖作用占优势.     

TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡及TIEG1,Bcl-2/Bax的表达变化

目的:研究TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡后TIEG1及Bcl-2/Bax的表达变化。方法:用不同浓度的TGF-β1处理HL-60细胞,采用MTT法检测细胞生长抑制率。用10.4 ng/ml TGF-β1处理HL-60细胞,以流式细胞仪检测细胞凋亡,以RT-PCR方法检测TIEG1、Bcl-2及Bax的表达。结果:TGF-β1对HL-60细胞具有增殖抑制作用,其抑制效应呈时间及剂量依赖性。10.4 ng/ml TGF-β1增殖抑制作用较为明显。在细胞凋亡过程中,TIEG1、Bax表达呈升高趋势,而Bcl-2呈下降趋势。结论:TGF-β1可以抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡,且呈时间、剂量依赖性。在TGF-β1诱导HL-60细胞凋亡的过程中,TIEG1表达逐渐加强,与HL-60细胞凋亡呈负相关。Bcl-2/Bax与TGF-β1诱导HL-60细胞的凋亡相关,且与TIEG1的表达有相关性。     

三氧化二砷联合顺铂对人结肠癌细胞株colon26抑制作用机理的研究

目的:探讨三氧化二砷(Arsenic Trioxide,As2O3)联合顺铂(Cisplatin,CDP)对人结肠癌细胞株colon26的抑制作用及其机制.方法:用MTT法检测CDP和As2O3对colon26细胞的半数抑制浓度(IC50)及其抑制率.用荧光染色法琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡形态学变化.用流式细胞术分析细胞周期、细胞凋亡及Bcl-2、Bax蛋白表达.结果:IC50浓度的As2O3、CDP和1/2IC50(CDP) 1/2IC50(As2O3)对colon26细胞的抑制率分别为50.13±0.29%、55.26±0.63%和75.82±0.24%.AO/PI双荧光染色观察,正常对照组、As2O3组、CDP组、联合组细胞凋亡比率依次增加.As2O3处理组G2/M期细胞明显增多,而CDP处理组G0/G1期细胞明显增多,联合用药组则主要表现为S期细胞增多,组间差异有显著性(P＜0.01).CDP处理组与对照组相比Bel-2/Bax的表达无变化,As2O3与CDP联合作用时和As2O3单独作用时相比,Bcl-2/Bax无变化.结论:低浓度As2O3和CDP联合应用与两药高浓度单独应用相比,对colon26细胞增殖的抑制作用和诱导凋亡能力均有明显增强.As2O3联合CDP抗colon26细胞的作用机制可能与下调Bcl-2蛋白表达有关.     

亚砷酸与甲磺酸伊马替尼单用及联用对淋巴瘤细胞Raji增殖和凋亡的影响

 目的　研究不同浓度的亚砷酸（As2O3）、甲磺酸伊马替尼（简称伊马替尼）单用及联用对恶性淋巴瘤细胞株Raji的影响。方法　采用MTT法检测两药对Raji细胞的生长抑制作用。采用流式细胞仪检测两药对Raji细胞Caspase-3的表达及G1期、S期的比例变化。采用免疫组织化学SABC法检测p16蛋白的表达。结果　As2O3、伊马替尼及两药联用均使细胞抑制率升高,两药联合组与各单药组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。As2O3上调Raji细胞Caspase-3表达呈时间、剂量依赖效应（P＜0.0001）。伊马替尼对Caspase-3表达无明显影响（P＞0.05）,且两药联用无协同上调Caspase-3作用（P＞0.05）。Raji细胞随As2O3浓度升高、作用时间延长,p16蛋白平均吸光度值增加（P＜0.05）。伊马替尼在低浓度72 h与高浓度48 h、72 h时p16蛋白表达与对照组相比差异有统计学意义（P＜0.05）。但两药联用无协同上调p16蛋白表达的作用（P＞0.05）。As2O3可使G1期细胞比例明显增高,S期比例降低,呈现剂量、时间依赖效应（P＜0.0001）,并出现明显凋亡峰。伊马替尼对Raji细胞周期无影响（P＞0.05）。两药联合组与单用As2O3组差异亦无统计学意义（P＞0.05）。结论　As2O3可通过激活Caspase-3表达诱导Raji细胞凋亡、上调p16蛋白、阻滞细胞周期于G1期来发挥抗肿瘤作用。伊马替尼在高浓度时可以上调Raji细胞p16蛋白的表达。As2O3和伊马替尼对恶性淋巴瘤细胞株Raji细胞无协同作用。     

柠檬酸钠联合三氧化二砷体外抗人胃癌细胞及其作用机制

目的探讨柠檬酸钠（Citrate）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对胃癌细胞的凋亡及其作用机制。方法用Citrate（终浓度为5 mmol/L）和（或）不同浓度的As2O3（终浓度依次为5、10 μmol/L）处理体外传代培养的胃癌细胞株SGC-7901和BGC-803。流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR法观察凋亡相关基因Bcl-2、Mcl-1表达的变化。结果Citrate与As₂O3联合应用相对于单用Citrate或As₂O3可显著提高诱导胃癌细胞凋亡率（P<0.05）;与空白组相比,用药后 G0／G₁期细胞比例下降,G₂/M期细胞比例上升,细胞周期阻滞于G₂/M期,抗凋亡基因Bcl-2、Mcl-1表达明显下降。结论Citrate与As2O3联合应用具有协同抗胃癌细胞的作用,其机制可能与细胞周期阻滞、增强诱导胃癌细胞凋亡以及调控凋亡相关基因的表达有关。     

低氧下三氧化二砷对食管癌Eca109细胞放射敏感性的影响

目的： 观察三氧化二砷（As 2O 3）在低氧条件下对食管癌Eca109细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨其发挥放射增敏作用的可能机制。 方法： CoCl 2处理模拟肿瘤细胞模拟低氧微环境,MTT法分别检测常氧和低氧条件下不同浓度As2O3及不同剂量放射线对食管癌Eca109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测低氧下As 2O 3、放射线单独及两者联合对细胞周期及凋亡的影响,Western blotting检测经As 2O 3、放射线单独及两者联合作用后Eca109细胞中HIF-1α、p27蛋白的表达情况。 结果： 在常氧和低氧两种条件下,As2O3均呈时间和剂量依赖方式抑制Eca109细胞增殖,相同时间和相同剂量条件下,其抑制水平相当（P>0.05）;而低氧下放射线对Eca109细胞增殖的抑制作用较常氧下明显减弱（P<0.05）。低氧下Eca109细胞周期出现G 0/G 1期阻滞、G 2/M期细胞比例明显减少（P<0.05）,As 2O 3在低氧条件下可诱导G 2/M期阻滞、G 0/G 1期细胞比例减少。As 2O 3与放射线联合作用时,Eca109细胞的凋亡率大于两者单独作用之和。低氧条件下,Eca109细胞HIF-1α、p27蛋白表达均明显增强,As 2O 3可逆转HIF-1α、p27表达水平的升高。 结论： 低氧条件下,As 2O 3对食管癌Eca109细胞有放射增敏作用,其机制可能与下调HIF-1α进而降低p27表达水平、解除G 0/G 1期细胞周期阻滞和促进细胞凋亡有关。     

三氧化二砷和曲古抑菌素A协同诱导HL-60细胞凋亡的作用及分子机制研究

目的 探讨三氧化二砷(As2O3)和曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病细胞HL-60凋亡过程中的协同作用.方法 采用MTT法检测As2O3和(或)TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达.结果 As2O3和TSA联用较单独用药能明显抑制细胞,引起细胞周期阻滞和凋亡,Bax基因表达升高,Bcl-2基因表达降低,Bax/Bcl-2比值升高.结论 As2O3和TSA均能够引起HL-60凋亡,二者具有协同效应,其机制是引起细胞周期阻滞,且上调Bax与Bcl-2比值.     

细胞周期调控因子与下咽癌生物学行为相关性初步研究

目的：探讨细胞周期调控因子与下咽癌临床生物学行为之间的关系。方法：取下咽鳞状细胞癌手术标本53例，癌旁正常粘膜标本11例，应用免疫组化SP法检测P27^Kipl、Cyelin D1、CDK4在下咽癌组织及正常粘膜中的表达。结果：P27^Kipl、CyclinD1、CDK4均为弥漫性细胞核表达。P27^Kipl。在下咽癌中的表达低于正常粘膜．且表达与N分级明显相关（P〈0．05）；CyclinD1在下咽癌中的表达高于正常粘膜，且表达与T分级明显正相关（P〈0．05）：CDK4在下咽癌中的表达高于正常粘膜，且表达与T分级、N分级明显正相关（P〈0．01、P〈0．05）P27^Kipl与CyclinD1．P27^Kipl与CDK4在下咽癌组织中多呈反向表达，CyclinD1与CDK4多呈同向表达。结论：CyclinD1、CDK4与P27^Kipl在下咽癌发病机制中共同作用．对预后有一定的参考价值。     

膜结合型前列腺素E2合酶 1抑制剂MK886对白血病HL-60／A细胞周期的影响

 【摘要】　目的　探讨膜结合型前列腺素E2合酶 1（mPGES-1）抑制剂MK886对人类急性髓系白血病耐药细胞HL-60／A细胞周期的作用。方法　采用流式细胞术、Western blot、酶联免疫吸附（ELISA）等方法,检测HL-60／A及健康人单个核细胞（MNC）、敏感细胞株HL-60的细胞周期、 mPGES-1蛋白、细胞周期素D1（cyclin D1）的差异,检测不同浓度的MK886对HL-60／A细胞周期的作用及对cyclin D1、mPGES-1、PGE2、P-Akt、c-myc蛋白的影响。结果　与健康人MNC及敏感细胞株HL-60比较,HL-60／A细胞cyclin D1、mPGES-1表达最高,G0～G1期细胞比例为（30.53±2.15）％,较正常MNC[（62.63±6.58）%]及HL-60细胞[（38.86±2.25）%]减少（均P＜0.05）;S期比例为（57.56±1.54）％,较正常MNC[（12.18±4.43）%]及HL-60细胞[（47.70±1.88）%]明显增多（均P＜0.05）。MK886作用后,被阻滞于G0～G1期的细胞增多,同时mPGES-1表达下调,合成PGE2减少,cyclin D1、P-Akt、c-myc蛋白表达下降。结论　MK886对白血病HL-60／A细胞有细胞周期阻滞作用,其机制与抑制mPGES-1表达,减少PGE2的合成,抑制cyclin D1、P-Akt、c-myc表达有关。     

姜黄素对白血病细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系

目的研究姜黄素（Cur）对K562细胞和HL-60细胞的细胞周期阻断与细胞周期蛋白的关系。方法用流式细胞光度术对K562细胞和HL-60细胞进行细胞周期检测，用蛋白免疫印迹检测细胞周期蛋白水平。结果姜黄素0—10mg／L作用24h可将K562细胞和HL-60细胞阻滞于G0／G1期，该期细胞比例增加；阻断细胞从S期向G2／M期转化，G2／M期细胞比例减少；姜黄素作用24h减少K562细胞和HL-60细胞Cyclin D1、Cyclin B1的蛋白水平，但几乎不影响K562细胞和HL-60细胞Cyclin A的蛋白水平。结论姜黄素扰乱K562细胞和HL-60细胞的细胞周期进程与Cyclin D1和Cyclin B1的蛋白水平减少有一定关系。     

甲基化EGCG对SGC 7901细胞Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL表达影响与抑癌作用研究

目的：观察甲基化表没食子儿茶素没食子酸酯（methylated epigallocatechin gallate,甲基化EGCG）对胃癌SGC 7901细胞Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL表达的影响,探讨甲基化EGCG抗肿瘤的作用机制。方法：采用MTT法观察甲基化EGCG对胃癌细胞SGC 7901增殖的影响,采用免疫细胞化学方法、Western blot法分别检测Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达。结果：甲基化EGCG呈时间依赖性抑制胃癌SGC 7901细胞增殖（P〈0.05）,下调Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达。结论：甲基化EGCG可能通过下调Cyclin E、Bcl-2、Bcl-xL的表达,使胃癌SGC 7901细胞的增殖和凋亡之间达到平衡,从而发挥抗肿瘤作用。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HL-60细胞凋亡前G2/M期阻滞及机制

背景和目的:蛋白酶体(proteasome)抑制剂能够诱导多种肿瘤细胞凋亡,是一种潜在的有应用前景的抗肿瘤剂.本研究旨在探讨蛋白酶体抑制剂MGl32(Z-Leu-Leu-Leu-CHO)诱导白血病细胞HL-60凋亡和C2/M期阻滞的机制.方法:采用荧光显微镜观察、流式细胞术和免疫印迹研究测定MG132诱导HL-60细胞凋亡和周期阻滞及机制.结果:2μmol/L的MG132能够有效地诱导HL-60细胞凋亡,用药后24 h就显现有细胞凋亡;在MG132诱导HL-60细胞凋亡出现之前有一个明显的G2/M期阻滞,加MG132后12 h时G2/M期时相百分比为63.42±2.02;24 h时加MG132组细胞凋亡为16.67±1.48,与对照组G2/M期时相百分比为7.29±3.01及细胞凋亡为0相比,两者之间有显著性差别(P＜0.01);咖啡因CAF能够减少MG132诱导HL-60细胞出现的G2/M期阻滞,同时也减少凋亡细胞的比例;细胞周期检查点的负调控因子p21waf/cip1蛋白在加MG132处理后3 h有明显的表达,但并未能检测到p53和p27蛋白.结论:MG132诱导HL-60细胞凋亡之前有一个明显的G2/M期阻滞,p21蛋白表达明显上调提示:是p21waf/cip1而不是p53或其同源蛋白参与了其中的调控.     

PML-RARα表达对细胞凋亡诱导剂敏感性差异的分子机制研究

目的 研究PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞对三氧化二砷(As2O3)诱导细胞凋亡敏感性差异的分子机制.方法 经As2O3作用人急性早幼粒细胞白血病HL-60和NB4细胞后,MTT法检测细胞增殖变化,流式细胞术测定细胞凋亡水平的变化,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Fas等基因在mRNA水平的表达变化.结果 As2O3可诱导NIM细胞出现明显的凋亡现象,细胞增殖受到明显抑制(P<0.05),Bcl-2基因表达明显下调(P<0.05),但Bax、Fas基因表达没有明显变化(P>0.05),Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.05).而对于PML-RARa表达阴性的HL-60细胞,经小剂量As2O3作用后,对细胞的增殖抑制作用不明显(P>0.05),未出现明显凋亡现象,Bcl-2、Bax、Fas或Bcl-2/Bax表达水平及比值变化不明显(P>0.05).结论 Bcl-2/Bax表达比值变化与否,可能是小剂量As2O3诱导PML-RARα表达阴性的HL-60细胞和表达阳性的NB4细胞发生凋亡差异的分子机制.     

抗CD44单抗A3D8对HL-60细胞Cyclin D1 CDK4 p21 cip1表达的影响*

目的:探讨CD44单克隆抗体A3D8对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖分化影响的分子作用机制.方法:采用FCM、RT-PCR及Western blot方法检测A3D8作用前后HL-60细胞Cyclin D1、CDK4、p21cip1表达的变化.结果:A3D8作用使HL-60细胞发生G0/G1期阻滞.A3D8下调HL-60细胞Cyclin D1及CDK4的表达,上调HL-60细胞p21cip1 mRNA及P21蛋白表达.结论:A3D8抑制HL-60细胞增殖、诱导其分化的分子机制可能与p21cipl表达上调及Cyclin D1、CDK4表达下调有关.     

Arsenic trioxide downregulates telomerase activity in HL-60 cells

Telomeres are the specialized nucleoproteincomplexes at the physical ends of eukaryoticchromosomes[1]. Telomere length decreases along with increasing cycles of cell divisions. Telomere shortening has therefore been proposed to play a role in cellular senescence. Telomerase is a protein-RNA enzyme complex that adds a six-base DNA sequence (TTAGGG) to the ends of chromosomes and thereby prevents their shortening. This enzyme is specifically activated in most malignant tumors but is usuall…