MiRNA-381表达及其与食管鳞癌放疗敏感性的关系

目的:观察人食管鳞癌细胞及组织中miRNA-381的表达变化,探讨其与放射敏感性的关系.方法:采用RT-PCR法测定人食管鳞癌细胞TE-1、TE-10、TE-11及20例符合纳入标准的食管鳞癌组织中miRNA-381的表达.完成放疗后1个月接受影像学复查,分析患者的近期放疗疗效.采用克隆形成实验检测细胞的放疗敏感性.结果:入组患者根据近期疗效分为放疗抵抗组(6例)和放疗敏感组(14例),放疗抵抗组的miRNA-381表达显著低于放疗敏感组(P＜0.05).克隆形成实验结果显示细胞的放疗敏感性为TE-11＞TE-10 ＞TE-1,且有显著统计学差异(P＜0.05).RT-PCR结果显示放疗最敏感的TE-11细胞中miRNA-381表达量最高,而放疗抵抗的TE-1细胞中miRNA-381表达量最低.近期疗效和食管鳞癌组织中miRNA-381相对表达量的相关性分析显示miRNA-381相对表达量与近期疗效呈正相关(r=0.72,P＜0.05).结论:MiRNA-381在放疗敏感的食管鳞癌细胞及临床标本中的表达量显著高于放疗抵抗的细胞及组织.MiRNA-381相对表达量越高的食管鳞癌患者接受根治性放疗后的近期疗效越好.     

微小RNA hsa-miR-93靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗敏感性的机制研究

目的 研究hsa-miR-93在鼻咽癌放疗抗拒过程中的作用及分子机制。方法 以人鼻咽癌细胞株CNE-1、CNE-2、CNE-2R、HONE1、C666.1以及鼻咽上皮永生细胞NP460为研究对象,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测各组细胞经放疗后hsa-miR-93的表达;采用Western blot法检测各组细胞经放疗后STAT3蛋白的表达;通过miRWalk软件和RNAHybrid软件预测hsa-miR-93和STAT3的结合作用及结合位点;通过双荧光素酶报告基因法检测hsa-miR-93对STAT3靶向结合情况;瞬时转染小分子模拟物或抑制剂调控hsa-miR-93的表达后,采用qRT-PCR和Western blot法检测STAT3的表达;转染siSTAT3沉默STAT3的表达后,通过细胞集落形成实验检测鼻咽癌细胞经放疗后的集落形成能力。结果 与CNE-1、CNE-2细胞(相对放疗敏感)相比,hsa-miR-93在HONE1、CNE-2R细胞(相对放疗抗拒)中表达降低(P＜0.001),且各组鼻咽癌细胞经放疗后hsa-miR-93的表达呈剂量及时间依赖性降低(P＜0.05);与CNE-1、CNE-2细胞相比,STAT3在HONE1、CNE-2R细胞中表达升高,且各组鼻咽癌细胞经放疗后表达呈剂量及时间依赖性升高;经预测,hsa-miR-93可直接靶向结合STAT3。过表达hsa-miR-93可以在mRNA以及蛋白水平上显著抑制STAT3的表达(P＜0.05),而抑制hsa-miR-93的表达可以显著上调STAT3的表达(P＜0.05);过表达hsa-miR-93或沉默STAT3均使鼻咽癌细胞的集落形成显著减少(P＜0.001);抑制hsa-miR-93减弱了鼻咽癌对放疗的敏感性,而同时抑制hsa-miR-93和STAT3后,可提高鼻咽癌对放疗的敏感性。结论 hsa-miR-93可能通过靶向STAT3提高鼻咽癌对放疗的敏感性。     

miRNA-124-3p通过靶向STAT3抑制鼻咽癌细胞生长和转移

目的:探讨miR-124-3p在鼻咽癌中的表达及其对鼻咽癌细胞的影响及其机制.方法:收集鼻咽癌组织标本90例和慢性鼻咽炎症组织标本85例,运用qRT-PCR方法检测组织标本和CNE1、CNE2、SUNE1、HONE1、5-8F、6-10B及C666-1鼻咽癌细胞株和永生化鼻咽上皮细胞NP69中miR-124-3p的表达,脂质体介导的转染方法下调高表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株CNE2,同时上调低表达miRNA-124-3p的鼻咽癌细胞株C666-1.CCK8法、流式细胞技术、细胞划痕实验、Transwell实验和Boyden小室检测细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的变化;生物信息学靶基因预测miRNA-124-3的靶基因并运用荧光素酶报告实验验证,Western Blotting检测细胞中STAT3及其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2蛋白表达水平.结果:鼻咽癌组织中miRNA-124-3p表达水平与慢性鼻咽炎症组织相比明显下调(P ＜0.001);miRNA-124-3p的表达水平与肿瘤大小及范围、区域淋巴结受累情况及临床分期显著相关(均P＜0.001);7种鼻咽癌细胞与NP69细胞相比较,miRNA-124-3p的表达水平均显著低于NP69(均P＜0.05).miRNA-124-3p过表达后C666-1细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著低于空白对照组和mimics NC组(均P＜0.05);miRNA-124-3p抑制后CNE2细胞的增殖、凋亡、迁移和侵袭均显著高于inhibitor NC组和空白对照组(均P＜0.05).转染miRNA-124-3p后C666-1细胞STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低,抑制CNE2细胞的miRNA-124-3p表达后STAT3、p-STAT3、CCND2和MMP2的表达显著降低.结论:miR-124-3p可通过下调靶基因STAT3的表达,进而影响其下游的p-STAT3、CCND2和MMP2信号通路,从而促进鼻咽癌细胞凋亡,抑制鼻咽癌细胞的增殖、迁移及侵袭.     

LncRNA-KAT7在鼻咽癌中的表达及对化疗敏感性的影响

摘 要：［目的］探讨lncRNA-KAT7在晚期鼻咽癌患者中的表达及对顺铂化疗敏感性的影响。［方法］ 选取86例晚期鼻咽癌患者的组织标本作为研究组,选取同时间段就诊鼻咽良性病变患者的组织标本86例作为对照组。比较鼻咽癌组织、癌旁组织和鼻咽良性组织lncRNA-KAT7的相对表达量;研究组患者诱导化疗后评价疗效,根据疗效分为敏感组和抵抗组,比较lncRNA-KAT7表达水平。比较人鼻咽癌细胞株CNE1、HONE1、C666-1、CNE-2、5-8F及鼻咽上皮细胞株NP69中lncRNA-KAT7表达水平。细胞计数试剂盒（CCK）检测转染KAT7-siRNA过表达载体对细胞增殖和凋亡的影响。［结果］ 鼻咽癌组织lncRNA-KAT7相对表达量为1.05±0.31,低于癌旁组织（1.47±0.48）和鼻咽良性组织（2.59±0.73）,差异有统计学意义（P＜0.05）。化疗敏感组lncRNA-KAT7相对表达量为1.23±0.34,高于抵抗组（0.78±0.21）,差异有统计学意义（P＜0.05）。NP69细胞中lncRNA-KAT7相对表达量为1.01±0.11,高于CNE1（0.16±0.03）、HONE1（0.31±0.07）、C666-1（0.23±0.04）、CNE-2（0.32±0.20）、5-8F（0.39±0.16）细胞,差异均有统计学意义（P均＜0.05）。KAT7-siRNA组lncRNA-KAT7相对表达量为5.36±1.15,高于阴性对照组（1.27±0.12）和空白对照组（1.24±0.13）,差异有统计学意义（P＜0.05）。KAT7-siRNA组的IC50为12.54±3.43,低于阴性对照组（18.23±3.25）,差异有统计学意义（P＜0.05）。在顺铂1、4、8、16及32μmol/L浓度下KAT7-siRNA组细胞凋亡率明显高于阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。［结论］ lncRNA-KAT7在鼻咽癌组织中低表达,上调lncRNA-KAT7可以提高鼻咽癌对顺铂的敏感性。     

miR-6732-3p对鼻咽癌放射抗拒细胞株CNE-2R放射敏感性的影响

目的 探讨miR-6732-3p表达对人鼻咽癌CNE-2R细胞放射敏感性的影响。方法 采用RT-qPCR检测miR-6732-3p在CNE-2和CNE-2R细胞株中的表达。用miR-6732-3p慢病毒转染CNE-2R细胞后,将CNE-2R细胞分为三组,分别为CNE-2R组（正常对照组）、miR-6732-3p NC组（转染对照组）、miR-6732-3p inhibition组（转染组）。RT-qPCR检测各组细胞中miR-6732-3p的表达,CCK-8、流式细胞术和克隆形成实验分别检测转染前后的细胞增殖、凋亡能力及放射敏感性。结果 RT-qPCR检测结果显示,miR-6732-3p在CNE-2R细胞中的表达量明显高于CNE-2细胞（P=0.036）。采用慢病毒转染CNE-2R细胞后,转染组细胞miR-6732-3p 的表达量均较转染对照组和正常对照组低（P＜0.05）。CCK-8法检测结果显示,与两个对照组相比,转染组细胞生长受抑制（P＜0.001）;在不同照射剂量下,转染组细胞的存活分数均明显降低（P＜0.001）。流式细胞仪检测结果显示,未经照射（0 Gy）和接受8 Gy照射后转染组细胞凋亡率均较转染对照组及正常对照组明显升高（P＜0.05）。克隆形成实验结果显示,转染组的放射生物学参数D0、Dq、SF2值均低于两个对照组（P＜0.05）;在不同照射剂量下,转染组细胞存活分数亦低于两个对照组（P＜0.001）。结论 沉默miR-6732-3p可提高鼻咽癌CNE-2R细胞的放射敏感性,为鼻咽癌放射抗拒的分子靶向治疗提供新思路。     

鼻咽癌细胞中Survivin基因的转录和表达

目的研究新的凋亡抑制因子Survivin基因在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达.方法分别提取2种细胞总RNA,用逆转录PCR检测Survivin基因的转录;同时制备2种细胞的蛋白质样品,经免疫印迹检测Survivin基因的表达.结果Survivin基因在人鼻咽癌高、低分化细胞株中均有表达,其表达量差异无显著意义.结论Survivin的表达可能与鼻咽癌细胞分化程度无明显关系,但Survivin基因可能与鼻咽癌的发生、发展和预后不良有关.     

ADH1B对鼻咽癌细胞的增殖及迁移能力的影响

目的：鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）已成为我国头颈肿瘤患者的主要病死因素之一，局部治疗失败和远处转移是晚期NPC患者不良预后的主要原因。大量研究证明，ADH1B是多种癌症的风险基因，本研究探讨ADH1B在鼻咽癌细胞中的表达差异以及对鼻咽癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法：利用生物信息学方法分析ADH1B在头颈鳞状细胞癌（Head and neck squamous cell carcinoma，HNSC）与正常组织中的相对表达量，应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常永生化鼻咽上皮细胞NP69及鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、5-8F、6-10B中ADH1B的mRNA表达水平，对比两种研究结果的一致性。在此基础上建立稳转ADH1B高表达鼻咽癌细胞系，pCDH作为空载体对照。利用生长曲线实验来检验鼻咽癌细胞的增殖能力，利用划痕实验来检验鼻咽癌细胞的迁移能力。结果：生物信息学分析结果显示ADH1B在头颈鳞状细胞癌中表达量低于正常组织。qRT-PCR检测发现，ADH1B在鼻咽癌细胞CNE-1、CNE-2、5-8F、6-10B中均比NP69细胞表达低，过表达ADH1B组鼻咽癌细胞的生长曲线低于pCDH组（P<0.05），划痕愈合速度也低于正常表达组pCDH组（P<0.05）。结论：鼻咽癌细胞中ADH1B基因表达异常，明显低于正常鼻咽上皮细胞，且与生物信息学分析结果一致。ADH1B基因在鼻咽癌中高表达影响鼻咽癌细胞的增殖和迁移，这与NPC的发生发展密切相关，可能是参与调控NPC发生发展的一个重要靶标。     

实时荧光定量RT-PCR检测鼻咽癌Survivin mRNA基因表达

目的 建立实时荧光定量RT-PCR方法检测鼻咽癌组织中Survivin mRNA的表达.方法 用Trizol方法提取鼻咽癌CNE-2细胞株和鼻咽癌组织总RNA后,将其逆转录为cDNA,建立实时荧光定量RT-PCR方法,检测人鼻咽癌Survivin mRNA的表达,以慢性鼻咽炎患者鼻咽部组织作为对照.结果 鼻咽癌细胞株、鼻咽癌组和慢性鼻咽炎组患者鼻咽部组织均可检测到Survivin基因mRNA的表达,Survivin mRNA在鼻咽癌组织中的表达较慢性鼻咽炎患者鼻咽部组织高,两者差异有显著性意义(P＜0.01).Ⅲ+Ⅳ期和Ⅰ+Ⅱ期鼻咽癌患者均检测到Survivin基因mRNA的表达,但相对表达量无统计学意义.Survivin mRNA表达与鼻咽癌患者的年龄、性别无相关性.结论 实时荧光定量RT-PCR方法是一种快速有效灵敏度高的鼻咽癌Survivin mRNA表达的定量检测方法,Survivin mRNA的过度表达可能在鼻咽癌发生、发展过程中起一定作用.     

西妥昔单抗联合放疗对鼻咽癌细胞凋亡影响的研究

目的:西妥昔单抗(C225)对鼻咽癌细胞放疗增敏作用及其相关机制的研究.方法:通过免疫细胞化学法测得EGFR在鼻咽癌CNE-2Z细胞株中的表达水平,MTT法测出西妥昔单抗在体外细胞实验中的工作浓度,克隆形成实验测定不同处理组的Do、SER值.将细胞分为对照组(N)、单纯照射组(R)、单纯用药组(C)和放疗联合使用西妥昔单抗组(RC)4组,应用流式细胞技术(Annexin V/PI标记)检测西妥昔单抗在体外对鼻咽癌细胞凋亡的影响.结果:免疫细胞化学法检测鼻咽癌CNE-2Z细胞株EGFR呈高表达水平.克隆形成实验测出放疗联合西妥昔单抗组Do低于单纯照射组,SER为1.581 1±0.035 7,P＜0.05.放疗联合用药组的细胞凋亡率为(31.9±0.98)％,单纯放疗组的细胞凋亡率为(13.1±0.60)％,单纯用药组的细胞凋亡率为(6.4±0.95)％,对照组的细胞凋亡率为(2.5±0.51)％,放疗联合用药组的细胞凋亡率明显高于单纯处理组和对照组,P＜0.05.结论:西妥昔单抗增加了鼻咽癌细胞对放疗的敏感性,其机制可能与其诱导细胞凋亡有关.     

甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2 细胞的自噬增强其放疗敏感性

[摘要] 目的：探讨甘草素（licorice）对鼻咽癌CNE-2 细胞放疗增敏的影响及其作用机制。方法：体外培养构建放射抵抗性的鼻咽癌细胞株CNE-2-RR。MTT细胞实验检测不同浓度的甘草素对鼻咽癌细胞增殖活性的影响,透射电镜检测甘草素处理鼻咽癌细胞后自噬体的变化情况,Western blotting 检测甘草素对鼻咽癌细胞自噬蛋白水平的影响,彗星实验检测不同组鼻咽癌细胞DNA损伤修复情况,流式细胞术检测鼻咽癌细胞株凋亡率的变化。结果：成功构建放射抵抗细胞株CNE-2-RR,20 mmol/L甘草素对鼻咽癌细胞的最高抑制率为（58.86±5.02）%。甘草素处理鼻咽癌CNE-2-RR细胞后胞内自噬体数量增加,线粒体和细胞核形态异常;细胞中自噬体蛋白LC3-II 水平升高、LC3-I 水平降低（P<0.05）;甘草素作用CNE-2-RR细胞后彗星尾距长度大于对照组,表明对DNA损伤修复能力明显降低。甘草素作用导致CNE-2-RR细胞的凋亡率明显增加（P<0.05）。结论：甘草素通过影响鼻咽癌CNE-2-RR细胞的自噬行为及DNA修复能力增强其对放疗的敏感性。     

Inhibiting ERp29 expression enhances radiosensitivity in human nasopharyngeal carcinoma cell lines

ERp29 is an endoplasmic reticulum (ER) stress-inducible protein. It was found that ERp29 was highly expressed in several cancers and associated with resistance to oxidative and radiation stress, which may serve as a novel target for nasopharyngeal carcinoma (NPC) anticancer approach. In this study, we used immunohistochemistry to detect ERp29 expression in radioresistant and radiosensitive NPC tissues. As a result, ERp29 was up-regulated in radioresistant NPC tissues compared to radiosensitive NPC tissues. We also found that ERp29 knockdown attenuated radioresistance of NPC CNE-1 cells and ERp29 overexpression enhanced radioresistance of NPC CNE-2 cells. When exposed to radiation, ERp29 knockdown CNE-1 cells increased radiation-induced cell apoptosis and ERp29 overexpression CNE-2 cells reduced radiation-induced cell apoptosis. Further, we demonstrated that ERp29 up-regulated the expression of Hsp27. In conclusion, our study supports ERp29 could potentiate resistance to radiation in NPC cells, targeting of ERp29 is a rational strategy in treating radioresistant NPC.     

lncRNA LAMA5-AS1通过上调TFPI2表达抑制鼻咽癌细胞的增殖和迁移

目的:检测鼻咽癌组织和细胞株中长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）LAMA5-AS1的表达，观察lncRNA LAMA5-AS1对鼻咽癌细胞增殖和迁移的影响并探讨其作用机制。方法:荧光实时定量聚合酶链式反应（qPCR）分别检测lncRNA LAMA5-AS1在68例鼻咽癌组织及62例慢性鼻咽炎组织、鼻咽癌细胞株及永生化鼻咽上皮细胞中的相对表达。选择lncRNA LAMA5-AS1表达最少的细胞株，分别转染阴性对照质粒（对照组）或载有lncRNA LAMA5-AS1序列质粒（实验组）。MTS法和细胞划痕实验分别检测高表达lncRNA LAMA5-AS1对细胞增殖和迁移能力的影响。qPCR检测高表达lncRNA LAMA5-AS1对组织因子途径抑制物2（tissue factor pathway inhibitor 2，TFPI2）基因mRNA表达的影响，Western blotting检测TFPI2蛋白和ERK信号通路蛋白表达。结果:与慢性鼻咽炎组织比较，lncRNA LAMA5-AS1在鼻咽癌组织中表达明显降低（P＜0.01）。与人永生化鼻咽上皮细胞比较，lncRNA LAMA5-AS1在鼻咽癌细胞株中表达明显降低（P＜0.01），在CNE-2Z细胞中的表达最少（P＜0.01）。与对照组比较，实验组CNE-2Z细胞的增殖能力从第3天开始明显降低（P＜0.05），实验组CNE-2Z细胞迁移能力明显下降（P＜0.01）。与对照组比较，实验组CNE-2Z细胞中TFPI2在mRNA和蛋白水平的表达明显增加（P＜0.01），ERK信号通路蛋白p-ERK、MSK1、MNK和STAT3表达明显降低。结论:lncRNA LAMA5-AS1在鼻咽癌组织和细胞株中表达明显降低，高表达lncRNA LAMA5-AS1可通过上调TFPI2基因表达、下调ERK信号通路活性，抑制鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖和迁移能力。     

整合素αⅤ对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的:探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用,是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响,进而初步探讨其可能机制。方法:采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体(多细胞球)培养;血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性;AnnexinV/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果:(1)成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型;(2)CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后,并在一定的照射剂量下,其表达的整合素αV量,随着照射剂量的增加而增加;(3)阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论:以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况,证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性,抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

整合素αV对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

目的：探讨粘附分子整合素αV通过细胞间相互作用，是否对鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性产生影响，进而初步探讨其可能机制。方法：采用liquid overlay技术进行CNE-2Z细胞三维立体（多细胞球）培养；血球计数器计数法比较在阻断整合素αV作用前后CNE-2Z细胞的放射敏感性；AnnexinV／PI双标流式细胞术检测细胞凋亡。结果：（1）成功建立CNE-2Z多细胞球培养模型；（2）CNE-2Z多细胞球在接受X射线照射后，并在一定的照射剂量下，其表达的整合素αV量，随着照射剂量的增加而增加；（3）阻断整合素αV作用后CNE-2Z多细胞球放疗敏感性增强、细胞凋亡率上调。结论：以多细胞球培养模型模拟体内实体瘤情况，证实粘附分子整合素αV的表达情况可以影响鼻咽癌CNE-2Z细胞的放疗敏感性，抑制细胞凋亡是其可能的作用机制。     

Molecular and cytogenetic changes involved in the immortalization of nasopharyngeal epithelial cells by telomerase

Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is a common disease in Hong Kong and southern provinces of China. EBV infection is believed to play a critical role in the development of NPC. Previous studies on the transformation mechanism of EBV genes were mostly performed in either NPC or nonnasopharyngeal epithelial cells which may not be representative of premalignant nasopharyngeal epithelial cells. Establishment of a representative cell system would greatly facilitate the elucidation of the role of EBV infection in the development of NPC. Using telomerase alone, we were able to establish an immortalized nasopharyngeal epithelial cell line from primary nonmalignant nasopharyngeal biopsies. The telomerase-immortalized nasopharyngeal epithelial cells are largely diploid in karyotype. Interestingly, this newly immortalized nasopharyngeal epithelial cell line, referred as NP460hTert, harbors genetic alterations previously identified in premalignant and malignant nasopharyngeal epithelial cells. These include inactivation of p16 by homozygous deletion of the p16(INK4A) locus and downregulation of RASSF1A expression. The deletion of the p16(INK4A) locus appears to be the most crucial event for the immortalization of nasopharyngeal epithelial cells by telomerase and precedes RASSF1A downregulation. In addition, detailed analysis of the cytogenetic changes by conventional cytogenetics, spectral karyotyping (SKY) and array-based CGH revealed a gain of a 17q21-q25 fragment on 11p15 chromosome in all NP460hTert cells which occurred before deletion of the p16(INK4A) locus. Gain of 17q has been previously reported in NPC. In addition, activation of NF-kappaB was observed in immortalized NP460hTert cells at the later population doublings, and may play a role in the survival of immortalized NP epithelial cells. Id1 which is commonly expressed in various human cancers, including NPC, was also upregulated in the immortalized NP460hTert cells. Thus, the establishment of an immortalized nasopharyngeal epithelial cell line harboring common genetic alterations present in premalignant and cancerous nasopharyngeal epithelial cells may provide a valuable cell system to examine for early events involved in NPC carcinogenesis, particularly in elucidating the role of EBV infection in NPC development.     

抑制Polo样激酶1对鼻咽癌细胞辐射敏感性的影响

目的:探索抑制Polo样激酶1(Polo-like kinase 1,PLK1)对鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞CNE-1和CNE-2辐射敏感性的影响.方法:分别运用siRNA和小分子抑制剂BI2536抑制CNE-1和CNE-2细胞内PLK1的表达或磷酸化,通过MTT法检测抑制PLK1对NPC细胞增殖能力的影响,流式细胞技术检测对细胞周期和凋亡的影响,细胞免疫荧光检测对辐射后DNA损伤位点的影响,克隆形成实验及曲线拟合计算对辐射后细胞放射生物参数和放射增敏比(sensitizationenhancement ratio,SER)的影响.结果:与对照组相比,抑制PLK1可以明显抑制NPC细胞增殖,并诱导细胞发生G2-M期阻滞和有丝分裂灾难.抑制NPC细胞PLK1联合射线辐射后,NPC细胞克隆形成能力下降(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05),且随着BI2536浓度的增大克隆形成能力下降更加明显(CNE-1:P ＜0.05;CNE-2:P ＜0.05);细胞生存分数明显降低(均P＜0.05);核中γ-H2AX位点数目明显增加(P＜0.05);细胞凋亡率显著升高(均P＜0.05);siR-PLK1转染CNE-1和CNE-2后SER分别为1.1988和1.3198,BI2536处理CNE-1和CNE-2后SER分别为1.5508和1.2028.结论:抑制PLK1可以抑制NPC细胞增殖,诱导发生细胞周期阻滞和有丝分裂灾难,并能显著提高NPC细胞辐射敏感性.     

整合素α Ⅴ对鼻咽癌CNE-2Z细胞放疗敏感性的影响

Objective:To investigate whether the cell adhesion molecule integrin aV could influence the radiosensitivity of human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells via effecting intercellular effect.Methods:Human NPC cell line CNE-2Z was cultivated as three dimensional modef using liquid overlay technique.Cell counting was employed to detect the radiosensitivity of CNE-2Z cells by blood cell counter before and after blocking integrin aV function;cell apoptosis was detected by flow cytometry using Annexin V/PI label.Results:Three dimensional culture model of human NPC cell line CNE-2Z cells were successfully established The integrin aV expression of CNE-2Z multicellular spheroids elevated as the dosage of radiotherapy increased.Blocking of integrin aV function leaded to higher radiosensitivity and more apoptotic cells of CNE-2Z multicellular spheroids.Conclusion:Cell adhesion molecules integrin aV can influence the radiosensitivity of human nasopharyngeal carcinoma CNE-2Z cells and the inhibition of cell apoptosis might be its mechanism.proved by three dimensional culture model to mimic solid tumor in vivo.     

鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡的关系

目的评估人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性异质性与凋亡敏感性的相关性。方法用流式细胞仪、荧光显微镜、电镜、Western-blot检测H5和S1凋亡能力的不同及凋亡相关蛋白表达的差异。结果H5、S1两种细胞的凋亡率均随着照射后时间的延长而增加,但H5比S1高且差异有显著性(P<0.05)。结论人鼻咽癌细胞系CNE-2Z放射敏感性的异质性,与细胞受射线照射后凋亡呈正相关,对射线敏感的亚细胞系凋亡率高。     

DNA-PKcs 表达与鼻咽癌细胞株放射敏感性的关系

 目的 探讨不同放射敏感性鼻咽癌细胞株CNE-1（鼻咽高分化鳞癌细胞株）和CNE-2（鼻咽低分化鳞癌细胞株）中DNA依赖蛋白激酶（DNA-PK）的催化亚基DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞放射敏感性的关系。方法 通过克隆形成实验测定CNE-1、CNE-2不同剂量的存活分数，并用线性二次模型拟合剂量存活曲线求出放射生物学参数α、β,SF2、MID值，以及四氮唑蓝比色分析法（MTT法）检测60Co-γ线4Gy照射后12h细胞的存活率，以评价两株细胞的放射敏感性。逆转录实时荧光定量PCR技术（RTrFQPCR）检测照射前、后不同时间及不同剂量CNE-1、CNE-2细胞mRNA水平DNA-PKCS基因的定量表达。结果CNE-1在各个剂量点的存活分数均比CNE-2高，MID值分别为2．78、1．61，SF2值分别为0．627、0．341；4Gy照射后12h的存活率分别为88．2％、72．3％；RT-FQPCR显示两株细胞中均有DNA-PKCS基因的表达，其相对表达量之比为7．54±2．71（t=4．17，P=0．014），表达差异有统计学意义，DNA-PKCS基因在CNE-2细胞中存在时间、剂量依赖关系。结论实验验证了CNB2比CNE-1对射线更敏感，DNA-PKCS基因的表达与鼻咽癌细胞的放射敏感性有关。