异甘草酸镁对奥沙利铂引起荷瘤裸鼠肝脏损伤的干预研究

目的：研究异甘草酸镁对奥沙利铂导致荷瘤裸鼠肝损伤模型的保护作用。方法：建立结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成2组,每组8只,对照组为奥沙利铂组,实验组为奥沙利铂＋异甘草酸镁组。6天后处死裸鼠,腹主动脉取血测谷草转氨酶（AST）及谷丙转氨酶（ALT）的表达;取肝脏组织制作肝脏病理切片观察肝脏损伤情况,并制备肝脏组织匀浆,用比色法测量超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）及髓过氧化物酶（MPO）的表达情况。结果：成功建立了结肠癌HCT116细胞裸鼠皮下移植瘤模型;实验组肝窦血管损伤的发生率降低;血液中AST及ALT的表达实验组较对照组明显降低（P＜0．01）;肝脏SOD、GSH的表达实验组较对照组明显升高（P＜0．05）;MPO的表达实验组较对照组明显降低（P＜0．05）。结论：异甘草酸镁可以在一定程度上降低奥沙利铂引起的肝窦血管损伤发生率。     

贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

目的：探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法：利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果：贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力（P<0.01）,诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞（P<0.01）,降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平（均P<0.01）。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙（0.75 mg/kg）显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织...     

人结肠癌细胞系肿瘤干细胞特性的初步研究

目的:本研究对8种人结肠癌细胞系的干细胞特性进行初步检测,以寻找适合分选结肠癌干细胞的细胞系.方法:利用流式细胞术,RT-PCR检测8种结肠癌细胞中CD133的表达情况;利用条件培养观察8种细胞系的肿瘤细胞在无血清培养基中的生物学特性;利用裸鼠成瘤模型检测成瘤能力和转移能力.结果:CD133在8种细胞系中的表达有显著差异,最高的HCT116细胞系中CD133+细胞含量为(91.4±5.0)%;各种细胞系细胞均能在无血清培养基中增殖,但只有HCT116细胞能形成典型的"神经球样结构"且具有较高的成瘤能力和转移能力.同等细胞浓度下移植瘤体积HCT116(1.06±0.13) cm3, LOVO(0.22±0.09) cm3, P=0.01, 差异具有统计学意义.结论:相对于其他7种细胞系,HCT116细胞具有多种肿瘤干细胞的生物学特性,更适合于结肠癌干细胞的研究.     

过表达CDX2抑制裸鼠结肠癌移植瘤的生长

目的:探讨过表达CDX2对结肠癌LoVo细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制作用,为结肠癌生物治疗提供实验依据。方法:脂质体法介导pEGFP-C1-CDX2真核表达载体转染入结肠癌LoVo细胞,G418筛选出稳定表达CDX2的LoVo细胞(LoVo-CDX2细胞);接种LoVo-CDX2细胞制备裸鼠皮下移植瘤模型,观察CDX2过表达对LoVo细胞移植瘤生长的影响。结果:West-ern blotting结果显示,转染pEGFP-C1-CDX2组LoVo细胞中CDX2蛋白表达量高于pEGFP-C1组及未转染组。LoVo-CDX2、LoVo-C1和LoVo细胞接种裸鼠的第20天,LoVo-CDX2组移植瘤质量较LoVo组和LoVo-C1组移植瘤质量显著减轻[(0.62±0.22)vs(2.10±0.78)、(2.56±0.76)g,分别P<0.05和P<0.01〗。结论:CDX2过表达可以抑制结肠癌LoVo细胞裸鼠移植瘤的生长。     

不同剂量贝伐单抗联合伊立替康对荷人结肠癌DLD-1裸鼠皮下移植瘤生长的影响

[目的]观察不同剂量贝伐单抗与伊立替康联合对人结肠癌裸鼠皮下移植瘤生长及肿瘤血管生成的影响。[方法]接种人结肠癌DLD-1细胞的裸鼠21只,随机分为4组:无菌生理盐水对照组(A组),5mg/kg贝伐单抗联合伊立替康化疗组(B组),10mg/kg贝伐单抗联合伊立替康化疗组(C组)和单纯伊立替康化疗组(D组)(A、B、C组每组各5只,D组6只,各组伊立替康剂量均为66.7mg/kg)。于d1,5,9(q4d×3)分别给药,治疗第10d处死裸鼠,观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率,免疫组化法检测肿瘤组织微血管密度(MVD),评价肿瘤坏死情况。[结果]A、B、C、D组肿瘤体积分别为:646.24±397.33mm3、240.11±147.44mm3、346.21±298.59mm3、399.11±254.09mm3。B、C两组比较,肿瘤体积差异未达统计学意义(P=0.208)。与A组比较,B、C、D组抑瘤率分别为62.85%、47.91%、39.59%。A、B、C、D各组微血管密度(microvesseldensity,MVD)分别为7.000±0.71、4.940±0.58、5.080±1.25、5.557±2.04,经Dunnett检验,与A组比,B、C组肿瘤MVD均有显著性差异(P值分别为0.028、0.039),而D组与A组,及B组与C组在MVD表达上差异未达到统计学意义(P值分别为0.086、0.083)。移植瘤组织HE染色后发现各组肿瘤组织内均有不同程度的坏死。其中,对照组多以轻中度坏死为主,用药后坏死面积均增加,各组坏死分级经秩和检验,χ2=4.73,P=0.193。两两间比较,P值均大于0.05,各治疗组间的坏死差异并不明显。治疗组肿瘤细胞的凋亡较明显。[结论]不同剂量贝伐单抗联合伊立替康对荷DLD-1裸鼠移植瘤有抑制作用,联合用药有显著协同作用,推测其作用机制可能与抑制肿瘤微血管形成、诱导细胞凋亡和死亡增加有关。5mg/kg及10mg/kg贝伐单抗对移植瘤体积及MVD上的作用差异不显著。     

n-3PUFA联合5-FU对SW480细胞裸鼠皮下移植瘤的疗效观察

目的:建立人结肠癌SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型,观察n-3 PUFA联合5-FU对SW480细胞裸鼠皮下移植瘤的疗效.方法:SW480细胞裸鼠皮下移植瘤模型随机分成正常饲料组、5-FU组、n-3 PUFA高剂量组、n-3 PUFA低剂量组、n-3 PUFA对照组,除正常饲料组、5-FU组添加正常饲料外,其余各组添加不同含量的n-3 PUFA饲料,同时,各给药组腹腔注射5-FU(35 mg/kg),一周2次,连续3周,每次给药前称体重、测量肿瘤的长径和短径;末次给药后,处死动物,剥离肿瘤并称重;通过各组肿瘤的生长曲线和抑瘤率观察SW480细胞裸鼠皮下移植瘤的抑制效果.结果:与正常饲料组比较,n-3 PUFA高、低剂量组和5-FU组肿瘤平均体积显著性减小(P＜ 0.05);肿瘤平均重量明显减轻(P＜0.05).结论:n-3 PUFA联合5-FU对SW480细胞裸鼠皮下移植瘤有一定的抑瘤作用.     

沉默乙酰肝素酶基因对胃癌生物学行为的影响

目的 探讨乙酰肝素酶(HPA)沉默对人胃癌裸鼠移植瘤生长、转移和血管形成的影响.方法 利用人胃癌SGC-7901细胞和HPA被沉默的SGC-7901-HPA-细胞,分别建立6只裸鼠皮下移植瘤模型,观察成瘤的时间、肿瘤生长速度和体积.应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法分别检测皮下移植瘤组织中HPA mRNA和蛋白的表达,应用免疫组织化学SP法检测皮下移植瘤组织的微血管密度(MVD).将皮下移植瘤细胞分别注射入6只裸鼠腹腔,建立腹腔转移瘤,并观察成瘤情况.结果 SGC-7901细胞和SGC-7901-HPA-细胞在裸鼠皮下均能生长出移植瘤,分别在接种后第4天后和第7天后出现肉眼可见的肿瘤,接种SGC-7901-HPA-细胞的裸鼠移植瘤生长较慢,MVD为(11.35±1.94)个/高倍视野,明显低于接种SGC-7901细胞组[(20.69±1.20)个/高倍视野,P＜0.05].接种SGC-7901-HPA-细胞与接种SGC-7901细胞的裸鼠皮下移植瘤组织相比,HPA mRNA和蛋白的表达均降低.由SGC-7901细胞皮下移植瘤组织建立腹腔转移瘤的裸鼠,有3只成瘤,在肝脏、大网膜、肠系膜、右肾形成了4处转移灶,且体积较大.而接种SGC-7901-HPA-细胞皮下移植瘤组织的裸鼠,仅有1只在肝脏和右肾形成了转移灶,而且瘤体较小.结论 HPA沉默后抑制了人胃癌在裸鼠体内的生长、转移和血管形成,HPA有可能成为预防和治疗胃癌的一个新靶H点.     

伊马替尼通过PDGF/PDGFR通路对A549非小细胞肺癌裸鼠移植瘤的抑制作用及机制研究

目的 探讨伊马替尼对A549非小细胞肺癌裸鼠移植瘤生长及肿瘤组织和基质中PDGFB、PDGFRβ蛋白表达的影响，探究伊马替尼的抑瘤机制。方法 建立裸鼠A549非小细胞肺癌移植瘤模型，随机分为对照组（0.9%NaCl）、低、中、高剂量伊马替尼组（50、100、200 mg/（kg·d））。连续灌胃给药28天，观察不同浓度伊马替尼对肿瘤生长的影响；HE染色观察肿瘤组织的病理变化；Western blot法检测移植瘤组织中PDGF/PDGFR通路相关蛋白的表达及AKT、ERK1/2蛋白磷酸化水平；双重免疫荧光染色检测PDGFB、PDGFRβ蛋白在肿瘤基质中的表达。结果 伊马替尼组裸鼠A549非小细胞肺癌移植瘤的生长受到抑制，肿瘤组织中PDGFB的表达降低，PDGFRβ、AKT、ERK1/2的磷酸化水平降低。与对照组相比，给药组的肿瘤基质成纤维细胞中PDGFB、PDGFRβ表达显著减少。结论 伊马替尼对裸鼠非小细胞肺癌A549移植瘤具有显著的抑制作用，其抑瘤机制可能是下调肿瘤基质成纤维细胞中PDGFB和PDGFRβ的表达。     

结肠癌转移相关基因1对结肠癌细胞肝转移的影响

目的:研究结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer1,MACC1)的表达对结肠癌肝转移的影响。方法:将融合绿色荧光蛋白(green fluorescent proteins,GFP)的慢病毒表达载体分别感染具有不同转移潜能的人结肠癌细胞株SW1116和HCT116。给予BALB/c-nu/nu裸鼠脾脏注射感染后的结肠癌细胞,构建结肠癌肝转移模型。注射后35d,在荧光解剖显微镜下观察肝脏内结肠癌细胞的转移情况,计算肝转移率。应用蛋白质印迹法检测SW1116和HCT116细胞中MACC1蛋白的表达水平,评估MACC1的表达水平与肝转移率的关系。结果:SW1116细胞的肝转移率明显高于HCT116细胞。MACC1蛋白在HCT116细胞中呈低表达,而在SW1116细胞中呈高表达,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:MACC1蛋白的表达水平可能与结肠癌的肝转移能力呈正相关。     

以结直肠癌常用化疗药建立肝损伤动物模型的分析与探讨

目的:使用结直肠癌常用化疗药物（氟尿嘧啶、奥沙利铂、伊立替康）分别处理荷瘤小鼠,观察小鼠肝损伤的病理分型及严重程度。方法:C57/BL 小鼠接种Lewis 肺癌细胞建立皮下移植瘤模型,建模后第10天分别腹腔注射L-OHP（8mg/kg,qd×3d）、5-FU（25mg/kg,qd×5d）及CPT-11(20mg/kg,qd×5d),于给药结束后第2天处死动物,制作肝脏病理切片观察肝脏损伤情况。结果:成功建立了Lewis 肺癌细胞C57/BL 小鼠皮下移植瘤模型;各组肝脏组织学未见脂肪变性、纤维化及炎性浸润,偶见肝细胞水肿。结论:使用氟尿嘧啶、奥沙利铂、伊立替康分别腹腔注射处理荷瘤小鼠后,短时间内未造成荷瘤小鼠肝脏组织的明显损伤。     

端粒酶抑制剂1对裸鼠结直肠癌转移的影响

目的建立人结直肠癌裸鼠转移瘤模型，探讨端粒酶抑制剂1（PinX1）对结直肠癌转移的影响。方法分别通过PinX1干扰慢病毒、阴性对照慢病毒和空白对照细胞转染人结直肠癌细胞株HCT116；应用Western 印迹检测转染干扰慢病毒后PinX1蛋白表达量，筛选建立稳定干扰 PinX1基因表达细胞株、阴性对照细胞株和空白对照细胞株；将稳定干扰PinX1基因表达的结直肠癌细胞、阴性对照结直肠癌细胞和空白对照结直肠癌细胞分别注射到裸鼠尾静脉内，建立裸鼠实验性转移模型，定期称量裸鼠体质量并观察其摄食、活动及精神状况；45 d后处死裸鼠，从大体水平及显微镜下观察裸鼠各脏器转移情况，免疫组织化学方法检测PinX1蛋白表达情况。结果成功构建裸鼠结直肠癌转移模型，经组织病理学确认为结直肠癌肝转移。PinX1干扰组裸鼠体质量明显高于阴性对照组和空白对照组[ (19.42 ± 2.67) 比(16.24 ± 2.17)、（15.89 ±3.08），P<0.05]；PinX1干扰组肝转移瘤数目明显多于阴性对照组和空白对照组［(21.10± 7.50) 比(6.20 ± 5.51)、(6.40 ± 5. 10)，P<0.01］。PinX1干扰组免疫组化染色免疫反应性评分明显低于阴性对照组和空白对照组［(2.90± 2.77) 比(6.30 ± 2.95)、(6.10 ± 3.41)，P <0.05］。结论PinX1基因能够抑制人结直肠癌细胞在裸鼠体内转移能力。 结论端粒酶抑制剂1（PinX1）基因能够抑制人结直肠癌细胞在裸鼠体内转移能力。     

流式细胞术分析胃泌素对人结肠癌SW480裸鼠移植瘤的影响

目的：探讨胃泌素对人结肠癌裸鼠移植瘤的影响。方法：建立人结肠癌SW480裸鼠移植瘤模型,实验动物分为5肽胃泌素（PG）组及对照组,观察PG对移植瘤体积、重量的影响并进行流式细胞术分析。结果：移植瘤的体积重量、细胞内DNA、蛋白质含量、S期、G2M期细胞数、增殖指数PG组显著高于对照组,而G0／G1期细胞数则显著低于对照组。结论：胃泌素在体内具有促进人结肠癌SW480细胞分和增殖的作用,为结肠癌患者施行内分泌治疗提供了实验依据。     

AT1-R对非雌激素依赖型子宫内膜癌Hec-1A细胞增殖及凋亡的影响

目的 通过建立裸鼠子宫内膜癌模型,探讨敲除AT1-R基因对非雌激素依赖型子宫内膜癌细胞Hec-1A体内生长的影响以及对ERK1/2信号通路的调控.方法 将Hec-1A细胞、敲除AT1-R基因的Hec-1A细胞分别接种至裸鼠皮下,建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察各组细胞在裸鼠体内的成瘤时间和成瘤率,测量肿瘤体积、瘤质量并绘制肿瘤生长曲线;Western blot法检测瘤组织内ERK的蛋白表达;免疫组化方法检测瘤组织内Caspase-3表达.结果 与未转染组相比,敲除AT1-R基因组裸鼠移植瘤生长较慢,平均成瘤时间明显延长,成瘤率、瘤体体积和瘤质量显著减少(P<0.05);与未转染组相比,敲除AT1-R基因组的Hec-1A-si细胞ERK蛋白表达水平显著减少(P<0.05);与未转染组相比,敲除AT1-R基因组Hec-1A-si细胞Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05).结论 敲除AT1-R基因在裸鼠体内可抑制HEC-1A细胞增殖、促进HEC-1A细胞凋亡.     

FOXJ1调控AKT信号通路对结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响

目的 探讨叉头框转录因子J1(FOXJ1)对人结直肠癌细胞凋亡和侵袭能力的影响及机制.方法 应用Western Blot方法检测人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480及人正常肠上皮细胞FHC中FOXJ1的表达水平.细胞中转染pEGFP-N1-FOXJ1和pEGFP-N1,Western Blot检测细胞中FOXJ1、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、蛋白激酶B(AKT)、磷酸化的蛋白激酶B(p-AKT)的表达水平,流式细胞仪检测细胞的凋亡情况,Transwell小室检测细胞的侵袭能力.结果 人结直肠癌细胞HCT116、HT29、SW480中FOXJ1的表达水平均明显低于人正常肠上皮细胞FHC(P﹤0.01).人结直肠癌细胞HCT116中FOXJ1的表达水平下降最多,后续选用HCT116细胞继续研究.转染pEGFP-N1后的细胞凋亡率、侵袭细胞数目及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3、MMP-2、AKT、p-AKT的表达水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).转染pEGFP-N1-FOXJ1后的细胞凋亡率及细胞中FOXJ1、Cleaved Caspase-3的表达水平明显高于对照组(P﹤0.01);转染pEGFP-N1-FOXJ1后的侵袭细胞数目及细胞中MMP-2、p-AKT的表达水平明显低于对照组(P﹤0.01).结论 FOXJ1在人结直肠癌细胞中过表达.FOXJ1能够促进结直肠癌细胞凋亡,抑制结直肠癌细胞侵袭,其作用机制可能与AKT信号通路有关.     

E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响

目的 探讨E2F1基因过表达对人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT116/L多药耐药性的影响及作用机制。方法 HCT116/L细胞分为HCT116/L+E2F1组、HCT116/L+NC组和HCT116/L组，HCT116/L+E2F1组和HCT116/L+NC组分别转染E2F1过表达重组慢病毒载体（pCMA-E2F1-HA）及其阴性对照慢病毒载体（pCMA-HA）。Western blot检测E2F1蛋白的表达水平；MTT法检测各组对化疗药物（阿霉素、5-FU和顺铂）的敏感性；流式细胞仪检测各组细胞内阿霉素的泵出率和细胞凋亡情况；细胞划痕实验检测细胞迁移情况。Western blot进一步检测耐药相关基因MDR1蛋白的表达水平。结果 HCT116/L+E2F1组的E2F1蛋白表达水平明显高于HCT116/L+NC组和HCT116/L组（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组对阿霉素、5-FU和顺铂的IC₅₀值分别为（1.61±0.21） μg/mL﹑（5.22±0.12） μg/mL﹑（3.52±0.15） μg/mL，高于HCT116/L+NC组的（0.61±0.11） μg/mL、（3.93±0.54） μg/mL、（2.31±0.45） μg/mL和HCT116/L组的（0.69±0.13） μg/mL、（4.19±0.51） μg/mL、（2.51±0.42） μg/mL（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组阿霉素的泵出率为（22.51±0.12）%，亦高于HCT116/L+NC组的（10.92±0.09）%和HCT116/L组的（8.45±0.11）%（P＜0.05）；HCT116/L+E2F1组细胞凋亡率为（6.42±0.52）%，低于HCT116/L+NC组的（12.81±0.69）%和HCT116/L组的（11.45±0.31）%（P＜0.05），HCT116/L+E2F1组能增强细胞迁移能力（P＜0.05），并阻滞细胞于S期。HCT116/L+E2F1组中MDR1蛋白表达量为0.41±0.08，高于HCT116/L+NC组的0.19±0.08和HCT116/L组的0.15±0.07（P＜0.05）。结论 E2F1 基因过表达可降低人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L 对化疗药物的敏感性，上调MDR1基因表达，使化疗药物在结肠癌细胞内的蓄积浓度降低，从而增强人结肠癌耐奥沙利铂细胞HCT116/L的多药耐药性。     

下调REV7基因对于人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究下调REV7基因表达对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及其机制。方法 对HCT116细胞进行培养并运用RNA干扰技术实现REV7基因下调,将细胞分为空白组、转染阴性RNA oligo片段阴性对照组、转染REV7 RNA oligo的REV7基因下调组。克隆形成实验反映细胞增殖水平,蛋白印迹法检测相关基因表达水平、细胞凋亡发生水平和非同源末端连接途径发生水平。结果 6Gy照后REV7 siRNA组细胞克隆形成率降低(P<0.05)。REV7 siRNA组REV7基因下调效率>60%。REV7 siRNA组γH2AX、Caspase9表达升高(P<0.05),Ku80、XRCC4表达降低(P<0.05)。结论 下调REV7基因能提高HCT116细胞放射敏感性,其机制可能与下调REV7后非同源末端连接的发生被削弱有关。     

下调REV7基因对于人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及机制研究

目的 研究下调REV7基因表达对人结肠癌HCT116细胞放射敏感性影响及其机制。方法 对HCT116细胞进行培养并运用RNA干扰技术实现REV7基因下调,将细胞分为空白组、转染阴性RNA oligo片段阴性对照组、转染REV7 RNA oligo的REV7基因下调组。克隆形成实验反映细胞增殖水平,蛋白印迹法检测相关基因表达水平、细胞凋亡发生水平和非同源末端连接途径发生水平。结果 6Gy照后REV7 siRNA组细胞克隆形成率降低(P<0.05)。REV7 siRNA组REV7基因下调效率>60%。REV7 siRNA组γH2AX、Caspase9表达升高(P<0.05),Ku80、XRCC4表达降低(P<0.05)。结论 下调REV7基因能提高HCT116细胞放射敏感性,其机制可能与下调REV7后非同源末端连接的发生被削弱有关。     

Expression of the antiangiogenic factor 16K hPRL in human HCT116 colon cancer cells inhibits tumor growth in Rag1(-/-) mice

The M(r) 16,000 NH(2)-terminal fragment of human prolactin (16K hPRL) is a potent antiangiogenic factor inhibiting endothelial cell function in vitro and neovascularization in vivo. The present study was undertaken to test the ability of 16K hPRL to inhibit the growth of human HCT116 colon cancer cells transplanted s.c. into Rag1(-/-) mice. For this purpose, HCT116 cells were stably transfected with an expression vector encoding a peptide that included the signal peptide and first 139 amino acid residues of human prolactin (HCT116(16K)). Stable clones of HCT116(16K) cells secreted large amounts of biologically active 16K hPRL into the culture medium. Growth of HCT116(16K) cells in vitro was not different from wild-type HCT116 (HCT116(wt)) or vector-transfected HCT116 (HCT116(vector)) cells. Addition of recombinant 16K hPRL had no effect on the proliferation of HCT116(wt) cells in vitro. Tumor growth of HCT116(16K) cells implanted into Rag1(-/-) mice was inhibited 63% in four separate experiments compared with tumors formed from HCT116(wt) or HCT116(vector) cells. Inhibition of tumor growth of HCT116(16K) cells was correlated with a decrease in microvascular density by 44%. These data demonstrate that biologically active 16K hPRL can be expressed and secreted from human colon cancer cells using a gene transfer approach and that production of 16K hPRL by these cells was capable of inhibiting tumor growth and neovascularization. These findings support the potential of 16K hPRL as a therapeutic agent for the treatment of colorectal cancer.     

The histone deacetylase inhibitor PXD101 increases the efficacy of irinotecan in in vitro and in vivo colon cancer models

Purpose

Histone deacetylase inhibitors (HDACIs), such as PXD101 and suberoylanilide hydroxamic acid, inhibit proliferation and stimulate apoptosis of tumor cells. The enhanced effectiveness of chemotherapy or radiotherapy when combined with HDACIs has been observed in several cancers. In this study, we investigated the antitumor effect of PXD101 combined with irinotecan in colon cancer.

Methods

HCT116 and HT29 colon cancer cells for cell viability assay were treated with PXD101 and/or SN-38, the active form of irinotecan. Antitumor effects of HCT116 and HT29 xenografts treated with these combinations were evaluated. [¹⁸F]FLT-PET was used to detect early responses to PXD101 and irinotecan in colon cancer.

Results

PXD101 and SN38 possessed dose-dependent antiproliferative activity against HCT116 and HT29 cells and exerted a synergistic effect when used in combination. In xenografted mice, PXD101 in combination with irinotecan dramatically inhibited tumor growth without causing additive toxicity. Apoptotic effects on xenograft tumors were greater with combined treatment than with irinotecan alone. [¹⁸F]FLT-PET imaging revealed a 64% decrease in [¹⁸F]FLT uptake in tumors of HCT116 xenograft-bearing mice treated with a combination of PXD101 and irinotecan, indicating a decrease in thymidine kinase 1 (TK1) activity. These results were supported by Western blot analyses showing a decrease in tumor thymidine kinase 1 protein levels, suggesting that [¹⁸F]FLT-PET can be used to non-invasively detect early responses to these agents.

Conclusions

These data show that PXD101 increases the cytotoxic activity of irinotecan in in vitro and in vivo colon cancer models and suggest these agent combinations should be explored in the treatment of colon cancer.