COX-2介导MDR1/P-gp调控人结肠癌细胞多药耐药的研究

背景与目的:肿瘤多药耐药(multidrug resistance,MDR)是导致临床上结直肠癌化疗失败的重要原因之一,环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)过表达与肿瘤多药耐药的发生密切相关,但其引起多药耐药的作用机制尚不清楚.本研究通过调节人结肠癌HCT8/V多药耐药细胞COX-2的表达,以探讨COX-2对人结肠癌细胞多药耐药性的影响及其对P-糖蛋白(P-glycoprotein,p-gp)的调控作用.方法:应用COX-2基因重组慢病毒载体和COX-2特异性抑制剂NS-398(20 μ mol/L)上调及抑制人结肠癌HCT8细胞和多药耐药细胞HCT8/V的COX-2的表达,MTT法检测COX-2对HCT8和HCT8/V细胞化疗药敏感性的影响,Real-time PCR(RFQ-PCR)、Westernblot等方法检测多药耐药基因MDR1和P-gp的表达.结果:人结肠癌耐药细胞HCT8/V对多种化疗药具有耐药性,其COX-2、MDR1 mRNA和P-gp的表达水平明显高于HCT8细胞(P<0.01).感染COX-2过表达慢病毒(COX-2-GFP-Lentivirus)后,HCT8细胞对长春新碱的半数抑制浓度(IC50)由(18.2±7.1)μg/mL上升至(122.5±13.4)μg/mL长春新碱(t=11.9,P<0.01),MDRI mRNA和P-gp的表达水平显著增加(P<0.01);抑制COX-2表达后,HCT8/V细胞对VCR的半数抑制浓度IC50由(191.1±18.2)μg/mL下降至(32.2±7.5)μg/mL(t=14.0,P<0.01),MDR1 mRNA和P-gp的表达水平分别下降了53.3%和42.5%(P<0.01).结论:COX-2通过介导MDR1/P-gp的表达调控人结肠癌细胞多药耐药,抑制COX-2过表达对于逆转结肠癌多药耐药具有重要意义.     

HIF-1α及多药耐药相关基因在结肠癌中的表达及意义

背景与目的肿瘤微环境缺氧在实体肿瘤中是普遍存在的一种现象,本研究拟体外观测缺氧条件下结肠癌细胞系中缺氧诱导因子-1α和多药耐药相关基因的表达变化及其相互作用,探讨微环境缺氧对结肠癌化疗耐药的影响及其可能机制.方法人结肠癌细胞株SW620置入缺氧环境持续培养12,24和48 h,以常氧培养组为对照.逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Western blot检测HIF-1α及耐药相关基因mdr1/P-Gp、LRP mRNA及蛋白表达.结果随着缺氧时间延长,HIF-1α及LRP mRNA的转录未见明显变化,而mdr1的mRNA转录呈时间依赖性增高(P＜0.05),其光密度比值从常氧下的0.0522±0.012上升至缺氧48 h下的0.145±0.017.随着缺氧时间延长,LRP的蛋白表达未见明显变化,而HIF-1α及P-Gp的表达则呈时间依赖性增高(P＜0.05),其光密度比值分别从常氧下的0.16±0.05,0.260±0.006上升至缺氧48 h下的0.49±0.04,0.86±0.20.HIF-1α及P-Gp的蛋白表达呈正相关.结论研究证明结肠癌微环境缺氧是诱导其产生多药耐药性的重要原因之一.缺氧可通过HIF-1α调控结肠癌细胞内多药耐药相关mdr1/P-Gp基因的表达,从而使结肠癌存在以基因水平改变为基础的获得性耐药.     

NS-398逆转结肠癌细胞多药耐药性的作用

目的 观察COX-2选择性抑制剂NS-398对结肠癌耐药细胞HCT-8/Fu多药耐药的逆转作用及其对P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）、多药耐药相关蛋白（multi-drug resistance related protein, MRP）的调控,以初步探讨其作用机制。方法 （1）CCK-8法检测NS-398对HCT-8/Fu的毒性作用及对HCT-8/Fu细胞多药耐药（multi-drug resistance, MDR）的逆转作用;（2）将NS-398、5-Fu、NS-398+5-Fu分别作用于HCT-8/Fu 24 h,酶标仪检测Caspase -3活性、Hoechst33342染色观察药物诱导细胞凋亡情况;（3）0、10、20 μmol/L NS-398分别作用癌细胞24 h后ELISA法检测培养液中PGE2含量;0、20 μmol/L NS-398作用癌细胞24 h后,免疫细胞化学检测癌细胞P-gp、MRP的表达。结果 （1）10、20 μmol/LNS-398作用癌细胞24 h,抑制率分别为6%、8%,与各浓度5-Fu联用后,耐药逆转倍数分别为3.42、7.50,且呈剂量依赖性;（2）20 μmol/LNS-398+320 μg/ml 5-Fu组Caspase-3活性增加百分比为386.11%,较320μg/ml 5-Fu组的179.94%、20 μmol/LNS- 3 9 8 组的1 2 5 . 2 3%明显增高;Hoechst33342染色从形态学上也得出相一致的结论;（3）20 μmol/L NS-398作用24 h后,癌细胞P-gp、MRP表达较0μmol/L NS-398显著减少;同时在10、20 μmol/L NS-398作用24 h,细胞培养上清液中PGE2含量分别为189.50、151.25ng/L,较0 μmol/L NS-398时的340.13 ng/L明显下降。结论 COX-2选择性抑制剂NS-398对结肠癌耐药性有显著逆转作用,并呈剂量依赖性,其逆转机制可能是通过抑制P-gp、MRP的表达及抑制PGE2生成而发挥逆转作用的。     

慢病毒介导的miRNA逆转胃癌细胞耐药性研究

目的:利用慢病毒介导的RNA干扰技术(RNAi),沉默SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞株的多药耐药基因1(MDR-1)表达,逆转该细胞株对顺铂(DDP)的耐药性.方法:将前期筛选获得的MDR-1基因最佳干扰片段构建慢病毒表达载体,包装成慢病毒,感染SGC-7901/DDP耐药株,通过逆转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印迹法验证干扰效果后进行DDP药物敏感度实验和细胞凋亡检测.结果:慢病毒介导的基因沉默效果较前期干扰质粒效果更明显,MDR-1mRNA表达抑制率为(51±3)％,且P糖蛋白表达下调至(47±8)％,干扰后的SGC-7901/DDP细胞IC50值下降至1.1 μg/mL,并且细胞株的凋亡率显著增加.结论:慢病毒介导的RNAi可有效抑制SGC-7901/DDP胃癌耐药细胞株的MDR-1基因表达,实现其DDP耐药性逆转.     

小分子HIF-1α干扰RNA逆转鼻咽癌细胞耐药的实验

目的探讨小分子HIF-1α干扰RNA对人鼻咽癌耐药细胞株CNE2/DDP耐药性的影响。方法采用药物大剂量冲击和逐渐增加剂量相结合的方法建立人鼻咽癌顺铂耐药细胞株CNE2/DDP,瞬时转染法将HIF-1α小片段RNA导入CNE2/DDP细胞沉默HIF-1α基因,MTS法及流式细胞仪分别检测顺铂对CNE2/DDP细胞增殖、凋亡的影响,Western blot法分析细胞HIF-1α及MDR1表达水平。结果成功建立了人鼻咽癌顺铂耐药细胞株CNE2/DDP,耐药系数达16。当顺铂≥1.0μg/ml时,CNE2组与siHIF-1αsiRNA组细胞抑制率均明显高于CNE2/DDP组与siCtrl-siRNA组(P<0.05);同样,CNE2组与siHIF-1αsiRNA组细胞凋亡率也明显高于CNE2/DDP组与siCtrl-siRNA组(P<0.05);Westernblot显示siHIF-1αsiRNA组HIF-1α及MDR1蛋白的表达低于CNE2/DDP组。结论小分子HIF-1α干扰RNA沉默HIF-1α提高了人鼻咽癌顺铂耐药细胞CNE2/DDP对顺铂的敏感度,逆转了CNE2/DDP对顺铂的耐药性。     

MDR1基因短发卡样RNA表达载体逆转K562/A02人白血病细胞多药耐药的研究

目的构建MDR1基因短发卡样RNA(shRNA)真核表达载体,观察对K562/A02人白血病细胞株MDR1基因的沉默作用以及对P-糖蛋白(P-gp)表达及功能的影响。方法以基因重组技术构建表达质粒,转染重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B至K562/A02细胞株,通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法,检测MDR1基因表达及P-gp表达水平的变化;以MTT法检测阿霉素(ADM)对K562/A02细胞的半数抑制浓度(IC_(50));高效液相色谱(HPLC)法检测细胞内ADM含量。结果构建的2种重组质粒pEGFP-C1/U6/MDR1-A和pEGFP-C1/U6/MDR1-B均明显抑制K562/A02细胞株MDR1基因表达,抑制率最高为48．2%±2．5%;同时抑制P-gp蛋白的表达,抑制率最高为50．67%。对ADM药物敏感性的相对逆转效率分别为40．8%和62．4%;同时使K562/ A02细胞内ADM含量增加。结论shRNA表达载体可明显抑制K562/A02细胞MDR1 mRNA的转录和P-gp蛋白的表达,增加K562/A02细胞内ADM含量,恢复K562/A02细胞对化疗药物的敏感性,逆转MDR1基因编码蛋白P-gp介导的多药耐药。     

miRNA调控肿瘤多药耐药的研究进展

耐药导致肿瘤化疗失败的分子机制至今尚未完全阐明.多项研究发现miRNA广泛参与了肿瘤增殖、转移、凋亡等多个生物学过程.近年来研究证实,miRNA在多种肿瘤耐药过程中发挥重要调节作用.通过阅读文献,本文旨在汇总miRNA调控肿瘤耐药的分子机制.     

结肠癌组织HIF-1α和VEGF-C的表达及临床意义

 目的 探讨结肠癌中缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子C（VEGF-C）的表达及其临床意义。 方法 应用SP免疫组织化学技术检测45例结肠癌中HIF-1α和VEGF-C的表达,并分析其与临床病理特征的关系。 结果 HIF-1α在结肠癌中的阳性表达率为66.7％,其中淋巴结转移阳性组的阳性表达率为84.2%,淋巴结转移阴性组的阳性表达率为53.8%,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。VEGF C在结肠癌中的阳性表达率为53.3％,其中淋巴结转移阳性组的阳性表达率为73.7%,淋巴结转移阴性组的阳性表达率为38.5%,两者比较差异有统计学意义（P<0.05）。结肠癌中HIF-1α和VEGF-C的表达与肿瘤淋巴结转移和浸润深度有关,而与肿瘤大小、患者性别、年龄无关。HIF-1α与VEGF-C的表达呈正相关。 结论 结肠癌中HIF-1α和VEGF-C的表达与淋巴结转移相关。     

P-糖蛋白抑制性纳米载体逆转肿瘤多药耐药的研究进展

P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的过表达导致细胞外排泵活性增强,将抗肿瘤药物泵出胞外,从而导致多药耐药(multidrug resistance,MDR)的产生和化疗的失败.纳米药物载体的优势表现在减少药物外排、增加药物在肿瘤部位的蓄积、增强药物的靶向作用、下调P-gp的表达、协同逆转多药耐药等.本...     

缺氧诱导因子1α在微环境诱导的肝癌多药耐药形成过程中的作用

目的探讨缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在微环境诱导的肝癌多药耐药(MDR)表型形成过程中的作用和地位,并为预防和逆转肝癌耐药提供有效的新的分子靶点。方法运用免疫细胞化学技术分别检测在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合HBX基因的HepG2细胞内HIF-1α蛋白的表达及定位。应用荧光定量PCR技术和Western-blot技术检测上述不同条件下HepG2细胞内HIF-1α在mRNA和蛋白水平的表达。转染 pcDNA3/HIF-1α质粒于HepG2细胞,检测转染细胞中多药耐药相关基因mdr1、LRP、MRP1的表达。结果在缺氧、低糖环境下生长或稳定整合了HBX基因的HepG2细胞中HIF-1α的mRNA和蛋白均不同程度地高表达,并发生了核转位。pcDNA3/HIF-1α质粒转染HepG2细胞中多药耐药相关基因mdr1、MRP1、LRP的mRNA水平较未转染组分别增加了2．4± 0．2*、2．2±0．3#、2．3±0．4&倍(*t=3．75,P<0．01;#t=3.42,P<0．01;&t=3．26,P<0．01),它们在蛋白水平的改变与之一致。结论肝癌生长的微环境可通过核转录因子HIF-1α在转录水平调控多药耐药相关基因的表达,从而诱导肝癌多药耐药表型的形成;HIF-1α的表达上调是微环境诱导肝癌多药耐药彤成的中心环节;HIF-1α有望成为预防和逆转肝癌耐药的新的分子靶点。     

MGC803细胞中MAPK信号传导系统与 MDR1关系的研究

目的:探讨在人胃癌细胞系MGC803中促分裂原激活的蛋白激酶(mitogen-activatedproteinkinase,MAPK)信号传导系统与MDR1基因表达的关系。方法:通过westernblot验证MGC803细胞在长春新碱(vincristine,VCR)作用下MDR1基因编码的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达及特异性MAPK抑制剂PD098059对P-gp表达的抑制,通过流式细胞术对VCR及PD098059作用下的细胞进行周期解析,同时用MTT法验证VCR诱导后及PD098059作用下的药物敏感性。结果:MGC803细胞在VCR短期作用下,P-gp表达增加,在PD098059的作用下其表达受到抑制。通过细胞的周期解析发现VCR和PD098059共同作用的细胞凋亡比例为35.61%,显著高于VCR单独作用引起的凋亡(18.41%)(P<0.05)。VCR刺激后MGC803细胞的IC50为284ng/ml,分别为阴性对照组(127ng/ml)的2.24倍,为VCR+PD098059组(191ng/ml)的1.48倍。结论:MGC803细胞在VCR的短期作用下可诱导产生P-gp,而PD098059可抑制P-gp的表达和逆转其耐药性,从而增加MGC803细胞的凋亡。MAPK有可能通过调节MDR1的转录和翻译而影响细胞的耐药性。     

UGCG通过调控MDR1/P-gp参与人结肠癌奥沙利铂耐药的初步研究

目的 建立人结肠癌耐奥沙利铂（L-OHP）细胞株,检测该细胞株的多药耐药性并初步探讨其可能的耐药机制。方法 以人结肠癌细胞HCT116为对象,采用药物浓度梯度递增诱导法建立人结肠癌耐奥沙利铂细胞株HCT-116/L-OHP。CCK-8法检测L-OHP、顺铂（DDP）、5-氟尿嘧啶（5-Fu）对亲本细胞和耐药细胞株的半数抑制浓度（IC50）。使用UDP-葡萄糖神经酰胺糖基转移酶（UGCG）siRNA转染HCT-116/L-OHP细胞,实时荧光定量 PCR和Western blot检测干扰前后UGCG基因和多药耐药基因1（MDR1）mRNA及其编码的蛋白表达水平。结果 HCT-116/L-OHP对L-OHP的耐药指数为10.5,与DDP有一定程度的交叉耐药,耐药指数为4.61,但对5-Fu无交叉耐药。耐药细胞HCT-116/L-OHP中UGCG、MDR1 mRNA和UGCG、P-糖蛋白（P-gp, MDR1编码的蛋白）表达均增加,相比HCT-116细胞,差异具有统计学意义（P<0.05）。UGCG siRNA成功抑制HCT-116/L-OHP细胞中UGCG的表达,各干扰组MDR1 mRNA、P-gp表达减少,与对照组相比差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 成功构建了人结肠癌耐药细胞株;UGCG基因通过调控MDR1/P-gp的表达参与人结肠癌奥沙利铂的耐药机制的形成。     

多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的：检测乳腺癌组织中多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白的表达,并探讨其表达与临床病理因素的关系及MDR1与P-gp的相关性.方法：采用荧光定量RT-PCR （FQ-RT-PCR）法检测61例乳腺癌、22例对照组（包括11例乳腺良性疾病、11例癌旁正常组织）中MDR1基因的表达,同时采用免疫组化法检测上述标本中P-gp蛋白的表达.结果：乳腺癌组织中MDR1基因扩增率为50.82%（31/61）,与正常对照组相比差异有统计学意义,P=0.000 6.乳腺癌中P-gp蛋白阳性率为42.62%（26/61）,其表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、ER、PR、月经状况无关;MDR1基因扩增率高于P-gp蛋白表达,二者呈高度相关,但并不完全相符.结论：乳腺癌中存在多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白的表达,且其表达呈正相关.检测上述基因及其蛋白的表达,可预测乳腺癌的多药耐药.     

Fas,P-糖蛋白和多药耐药1基因在急性白血病的表达及相关性的临床研究

 目的 探讨Fas,P-糖蛋白（P-gp）、多药耐药1（mdr1）基因在急性白血病（AL）的表达及三者在多药耐药（MDR）中相关性的临床研究。方法 对59例初发AL患者,应用流式细胞仪和半定量RT-PCR法分别检测治疗前后Fas和P-gp及mdr1表达情况。结果 Fas在不同类型AL表达有差异;Fas+与P-gp+呈显著负相关,Fas+与mdr1+呈负相关,P-gp+与mdr1+呈显著正相关;COX分析结果显示：Fas和mdr1有判断预后价值;Fas+与Fas-组、P-gp+与P-gp-组、mdr1+与mdr1-组的CR率差异均有统计学意义。结论 Fas高表达可能是AL预后良好因素;P-gp,mdr1高表达为预后不良重要因素。     

肺癌多药耐药功能显像研究进展

探讨SPECT和PET研究肺癌各种多药耐药(MDR)机制的不同功能显像方法，针对不同的MDR表型选择最佳的示踪剂、显像时间、显像方式、有效参数及进行适当的药物介入。     

MDR1和Ki67在胃癌中的表达及临床意义

[目的]探讨MDR1和Ki67在胃癌中表达的临床意义。[方法]应用免疫组织化学方法检测100例胃癌组织中MDR1及Ki67的表达。[结果]MDR1和Ki67在胃癌组织中的表达高于癌旁组织，而与年龄、性别、组织学类型、浸润深度以及淋巴结转移均无相关性。MDR1与Ki67之间也无明显相关性。[结论]MDR1和Ki67都不能作为胃癌病人判断预后和临床化疗耐药的单一指标。方达与疗     

辐射对人鼻咽鳞癌CNE1细胞系HIF-1α及MDR1表达影响的研究

目的:建立辐射诱导的人鼻咽鳞癌CNE1/R细胞系,检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和多药耐药基因(MDR1)及P-糖蛋白(P-gp)的表达.方法:采用直线加速器对体外培养进入指数增长期的CNE1细胞进行外照射,输出剂量率2Gy/min,2 Gy/次,隔日1次,3次/周,累积总剂量50 Gy,取照射完成后培养21 d的细胞进行检测;以来照射CNE1细胞作为对照.利用RT-PCR检测照射前后HIF-1α及MDR1 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测照射前后细胞HIF-1α及P-gp蛋白的表达.结果:RT-PCR法检测结果显示,未照射组与照射组鼻咽鳞癌细胞系CNE1中HIF-1α mRNA的半定量值分别为0.23±0.02和0.37±0.04 (t=5.42,P=0.01),MDR1 mRNA的半定量值分别为0.17±0.01和0.54±0.04(t=15.54,P=0.00),照射组较未照射组明显增高,P＜0.05;蛋白印迹法检测结果显示,未照射组与照射组鼻咽鳞癌细胞系CNE1中HIF-1α蛋白的半定量值分别为0.05±0.01和0.08±0.01(t=3.67,P=0.02),P-gp蛋白分别为0.01±0.01和0.04±0.01(t=3.67,P=0.02),照射组较未照射组明显增高,P＜0.05.结论:照射组人鼻咽鳞癌CNE1细胞系中HIF-1α和MDR1基因/P-gp蛋白表达均增高,提示核转录因子HIF-1α可能促进细胞内MDR1/P-gp的表达.     

多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的检测乳腺癌组织中多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白的表达,并探讨其表达与临床病理因素的关系及MDR1与P-gp的相关性。方法采用荧光定量RT-PCR(FQ-RT-PCR)法检测61例乳腺癌、22例对照组(包括11例乳腺良性疾病、11例癌旁正常组织)中MDR1基因的表达,同时采用免疫组化法检测上述标本中P-gp蛋白的表达。结果乳腺癌组织中MDR1基因扩增率为50.82%(31/61),与正常对照组相比差异有统计学意义,P=0.0006。乳腺癌中P-gp蛋白阳性率为42.62%(26/61),其表达与年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、ER、PR、月经状况无关;MDR1基因扩增率高于P-gp蛋白表达,二者呈高度相关,但并不完全相符。结论乳腺癌中存在多药耐药基因MDR1及P-gp蛋白的表达,且其表达呈正相关。检测上述基因及其蛋白的表达,可预测乳腺癌的多药耐药。     

α-干扰素对肝癌多药耐药株SMMC-7221/ADM的逆转及其机制研究

目的:研究α-干扰素对SMMC-7221/ADM的逆转作用.方法:用MTT法检测常用化疗药物对SMMC-7221/ADM的毒性.用流式细胞仪(FCM)检测SMMC-7221/ADM细胞的P-糖蛋白(P-gp)的表达及细胞内柔红霉素的相对浓度.结果:α-干扰素可提高SMMC-7221/ADM细胞内化疗药物的浓度,增加阿霉素等化疗药物对SMMC-7221/ADM的毒性作用.结论:α-干扰素可逆转人肝癌多药耐药株SMMC-7221/ADM.     

TNF-α增强多药耐药基因1 对骨髓保护的研究*

目的:探讨通过采用肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-alpha ,TNF-α）预处理靶细胞,增强腺病毒转染小鼠单个核细胞的效率,从而增强多药耐药基因保护骨髓的能力,实现化疗中对骨髓的保护。方法:采用AdEasy-1 腺病毒载体系统重组表达MDR1 的重组腺病毒Ad-MDR 1,通过Ad5-MDR 1 感染不同浓度TNF-α 预处理后的小鼠单个核细胞,荧光倒置显微镜结合流式细胞仪监测转染率,RT-PCR 及Western blot检测TNF-α 干预后MDR1基因在靶细胞中的表达。结果:最适浓度TNF-α 预处理后,流式细胞仪检测TNF-α 预处理组腺病毒转染率（26.26%）明显高于未处理组（11.96%）;RT-PCR 和Western blot检测TNF-α 预处理组MDR1 mRNA 和P-糖蛋白（P-gp）的表达均明显高于未处理组。结论:适合浓度的TNF-α 可以明显增强腺病毒对小鼠单个核细胞的转染率,增强多药耐药基因在靶细胞中的表达,实现化疗中对骨髓的有效保护。