NF

目的了解不同刺激剂作用HL-60细胞后对NF-kB活化的特点,为人类功能基因的筛选提供新的方法.方法采用基因转染技术获得能稳定表达IkBa-EGFP融合蛋白的HL-60细胞系,定性和定量检测8种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化.结果定性结果发现,在所用的8种刺激剂中,除IL-1ra作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外,其它7种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低,尤以PHA作用后的变化更为典型.定量检测结果发现,稳定表达的HL-60细胞自身的荧光强度,随时间延长即有降低,IL-1ra作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别;其它7种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低,但它们作用后的特点并不相同.结论该真核转染的细胞可用于NK-kB活化刺激剂的初步筛选,可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术.     

NFkB活化诱导剂筛选细胞的建立

目的:了解不同刺激剂作用HL-60细胞后对NF-kB活化的特点,为人类功能基因的筛选提供新的方法.方法:采用基因转染技术获得能稳定表达IkBa-EGFP融合蛋白的HL-60细胞系,定性和定量检测8种刺激剂作用于该细胞系后荧光强度的变化.结果:定性结果发现,在所用的8种刺激剂中,除IL-1ra作用后的细胞荧光强度没有明显的变化外,其它7种刺激剂作用后都有不同程度的细胞荧光强度的降低,尤以PHA作用后的变化更为典型.定量检测结果发现,稳定表达的HL-60细胞自身的荧光强度,随时间延长即有降低,IL-1ra作用后细胞荧光强度的降低同没有刺激时相比没有明显区别;其它7种刺激剂作用后均有明显的荧光强度降低,但它们作用后的特点并不相同.结论:该真核转染的细胞可用于NK-kB活化刺激剂的初步筛选,可以作为功能基因组研究中新基因功能初筛的一个平台技术.     

逆转录病毒载体介导的IL-4基因修饰对HL-60细胞增殖及T细胞功能的影响

目的观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法采用逆转录病毒载体介导基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显抑制其增殖;与ｒＩＬ－４处理的ＨＬ－６０细胞比较,ＩＬ－４基因修饰的ＨＬ－６０细胞明显促进正常人ＰＢＭＣ增殖并合成ＩＬ－２、ＩＬ－６及ＩＦＮ－γｍＲＮＡ,其诱导的特异性ＣＴＬ杀伤活性明显高于野生型ＨＬ－６０、仅导入载体的ＨＬ－６０和加入ｒＩＬ－４共育的ＨＬ－６０细胞诱导者。结论ＩＬ－４基因转染在影响ＨＬ－６０细胞增殖和分化过程的同时,可能促进某些抗原（如ＭＨＣⅠ类抗原）的抗原性,从而有利于机体建立有效的抗肿瘤免疫反应。     

逆转录病毒载体介导的IL—4基因修饰对HL—60细胞？…

目的 观察ＩＬ－４基因转染对ＨＬ－６０增殖及Ｔ细胞功能的影响及其可能机制。方法 采用逆转病毒载体介民基因转染法将人ＩＬ－４基因导入髓系白血病细胞ＨＬ－６０,观察高表达外源性ＩＬ－４基因ＨＬ－６０株的增殖反应及其诱导的正常人ＰＢＭＣ增殖,ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＦＮ－γ基因表达及肿瘤特异性ＣＴＬ杀伤活性。结果 ｒＩＬ－４或瘤细胞产生的ＩＬ－４早期促进ＨＬ－６０细胞增殖,培养５天后则明显和抑制其增殖;与     

人B7—1分子对小鼠淋巴细胞活化的辅助刺激作用

本文用脂质体法将人Ｂ７－１基因导入小鼠前胃癌细系ＦＣ及人白血病细胞系ＨＬ６０，获得了稳定高效表达Ｂ７－１分子的ＭＦＣ和ＨＬ６０克隆（分别命名为Ｂ７和ＨＬ６０－Ｂ７）。在ＭＦＣ－Ｂ７及ＨＬ６０－Ｂ７刺激鼠脾淋巴细胞的增殖实验中，野生型肿瘤细胞中只能引起微弱的增殖反应，而转染Ｂ７－１分子的肿瘤细胞能非常显著刺激脾细胞的增殖（Ｐ＜０．００１）。这种效应能被抗Ｂ７－１单抗所阻断。结果表明人Ｂ７－１分子能为鼠淋巴细胞的活化增殖提供辅助刺激信号。     

IFN—γ对IL—2基因转染B16细胞治疗肿瘤的增强作用

本实验在完成ＩＬ－２基因转染瘤苗的基础上，探索了重组ＩＦＮ－γ对其效果的增强作用。结果表明，ＩＬ－２基因转染使Ｂ１６细胞成瘤性显著降低；小鼠经ＩＬ－２基因修饰的Ｂ１６细胞免疫后，对接种的亲代Ｂ１６细胞有保护作用；ＩＬ－２基因转染的Ｂ１６细胞对接种亲代Ｂ１６细胞的小鼠有一定的治疗作用，与重组ＩＦＮ－γ联合应用后，治疗作用加强。上述结果表明，佐以合适的重组细胞因子，有可能提高单基因转染瘤苗的作用，是一条值得探索的途径     

干扰素对IL—60细胞与维甲酸耐药IL—60细胞作用的研究

目的：探讨干扰素α对ＨＬ－６０细胞增殖发化与凋亡的作用及特点。方法：ＭＴＴ法测定细胞增殖性变化。ＮＢＴ方法测定细胞分化程度。流式细胞仪测定凋亡的发生程度。浓度递增法诱导ＨＬ－６０细胞的维甲酸耐药性。结果：ＩＦＮα体外抑制ＨＬ－６０细胞增殖,并与维甲酸产生协同抑制作用,ＩＦＮα可单独诱导ＨＬ－６０细胞分化,又能增加维甲酸诱导分化作用。单独ＩＦＮα无明显的诱导ＨＬ－６０细胞凋亡作用。维甲酸耐药ＨＬ－６     

抗氧化剂抑制内皮细胞的白细胞粘附不依赖它们的抗氧化特性

目的 探讨抗氧化剂能否抑制内皮细胞表面的粘附分子表达和内皮细胞与白细胞粘附,以及抗氧化剂调节ＮＦＥ－ｋＢ的活性是否通过一９种对氧化还原敏感的机制。方法 在一种液体流动小室中进行细胞粘附实验,抗氧化剂的抗氧化活性用２’－７’－二氯荧光素双醋酸盐（ＤＣＦＨ－ＤＡ）染色血管内皮细胞经流式细胞仪测量;内皮细胞ＮＦ－ｋＢ的活性用电泳迁移率分析测定,结果：ＰＤＴＣ和ｃｈｒｙｓｉｎ抑制ＨＬ６０往ＴＮＦα刺激的Ｕ     

白介素—1受体相关激酶—2调控白介素—1诱导的NK—kB活化

目的 研究白介素－１（ＩＬ－１）受体相关激酶－２（ＩＲＡＫ－２）在ＩＬ－１诱导ＮＦ－ｋＢ活化中的作用。方法 分别以逆转录ＰＣＲ法和Ｗｅｓｔｅｒｎ杂交法,检测Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导的反义Ｉ－ＲＡＫ－２寡核苷酸转染的人脐静脉内皮细胞中,ＩＲＡＫ－２ｍＲＡＫ－２寡核苷酸转染的人脐静脉内皮细胞中,ＩＲＡＫ－２ｍＲＮＡ和蛋白表达水平。用夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＮＦ－ｋＢ的活化。结果 反义ＩＲＡＫ－２寡核苷酸可     

HCMV感染对单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用细胞ＥＬＩＳＡ法，研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的影响。结果表明ＨＣＭＶ感染后１ｄ，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达显著增高（Ｐ＜０．０１），以后逐渐降低，ｄ５降至对照水平；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）．ＴＮＦ（２５０Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－６（５００／ｍｌ）、ＩＬ－１（５００／ｍｌ）均能不同程度地刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达；ＨＣＭＶ感染后，细胞因子刺激ＨＬＡ－ＤＲ表达的水平在感染后ｄ５，较对照组均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＩＬ－１＋ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ＋ＩＦＮ－γ在刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达时有协同作用；ＨＣＭＶ感染后，ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－１及ＴＮＦ＋ＩＦＮ协同刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：在ＨＣＭＶ感染引起免疫抑制过程中，其引起单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达降低是一重要机制。     

HCMV感染对单核细胞HLA－DR表达的影响

本文采用细胞ＥＬＩＳＡ法，研究发现人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染对单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ的影响。结果表明ＨＣＭＶ感染后１ｄ，单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达显著增高（Ｐ＜０．０１），以后逐渐降低，ｄ５降至对照水平；ＩＦＮγ（５００Ｕ／ｍｌ）．ＴＮＦ（２５０Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ－６（５００／ｍｌ）、ＩＬ－１（５００／ｍｌ）均能不同程度地刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达；ＨＣＭＶ感染后，细胞因子刺激ＨＬＡ－ＤＲ表达的水平在感染后ｄ５，较对照组均显著降低（Ｐ＜０．０１）；ＩＬ－１＋ＩＦＮ－γ及ＴＮＦ＋ＩＦＮ－γ在刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达时有协同作用；ＨＣＭＶ感染后，ＩＦＮ－γ＋ＩＬ－１及ＴＮＦ＋ＩＦＮ协同刺激单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达水平较对照组显著降低（Ｐ＜０．０１）。结果提示：在ＨＣＭＶ感染引起免疫抑制过程中，其引起单核细胞ＨＬＡ－ＤＲ表达降低是一重要机制。     

协同激活分子CD80（B7—1）在诱导人T细胞活化中的作用

现已证实ＣＤ８０（Ｂ７－１）是参与Ｔ细胞活化的重要分子，应用ＣＤ８０基因转染的人乳腺癌细胞观察了Ｔ细胞增殖的影响，结果表明ＣＤ８０分子在抗ＣＤ３模拟的第一信号下能协同刺激Ｔ细胞活化，ＰＭＡ，Ａ２３１８７能明显增强ＣＤ８０的协同作用，且可促进ＩＬ－２，ＩＦＮ－γ等细胞因子的产生。在第二信号的强度固定后，观察了第一信号的强弱对Ｔ细胞活化的影响，结果显示抗ＣＤ３单抗在１００ｎｇ／ｍｌ时刺激Ｔ细胞增殖最强     

成纤维细胞介导的人α5型干扰素基因治疗白血病的实验研究

人白血病细胞ＨＬ－６０在体外经ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋细胞培养上清作用后或与该细胞共育后其生长受到显著抑制，细胞形态出现空泡，核固缩等现象。给裸鼠皮下接种ＨＬ６０细胞（１×１０￣７／只），当皮下肿瘤结节长至５ｍｍ时，给荷瘤小鼠腹腔内埋植１×１０￣７ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋细胞或腹腔注射阿霉素，结果发现，其皮下肿瘤结节的生长受到非常显著的抑制，特别是当ＮＩＨ３Ｔ３－ＩＦＮ－α￣＋细胞与阿霉素联合应用时，肿瘤生长抑制作用最明显。表明成纤维细胞介导的人ＩＦＮ－α５基因疗法对人白血病有一定的治疗效果，当与适当化疗药物联合应用时疗效更佳。     

基因修饰肿瘤疫苗研究进展

近年来基因修饰肿瘤疫苗包括ＭＨＣ分子、共刺激信号Ｂ７分子及各种细胞因子基因修饰的肿瘤疫苗，在体内外试验和基础研究中取得了相当的进展，本文主要对其作用机理进行了小结。肿瘤细胞表达外源ＭＨＣ、Ｂ７分子，使宿主免疫系统能有效识别、杀伤肿瘤；表达某些细胞因子（如ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＧＭ－ＣＳＦ、ＴＮＦ－α等）能诱导产生ＣＴＬ，而某些细胞因子则激发非Ｔ细胞的杀伤作用（如ＩＬ－４、Ｇ－ＣＳＦ诱导中性粒细胞的炎症反应，ＩＬ－２诱导ＮＫ细胞的杀伤作用，ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＦＮ－γ等诱导肿瘤局部Ｍφ的浸润）。     

白介素12增强白介素4基因转染的肿瘤细胞诱导CTL的研究

ＩＬ－１２是一种具有广泛免疫调节作用和抗肿瘤作用的细胞因子研究了ＩＬ－１２对白介素４基因转染的小鼠Ｂ１６黑素瘤细胞（Ｂ１６－ＩＬ－４＾＋）诱导的ＣＴＬ的杀伤活性，ＩＦＮ－γ分泌水平和增殖能力的影响，结果发现ＩＬ－１２能显著增强体外诱导的ＣＴＬ的杀伤活性及提高ＩＦＮ－γ的分泌水平，并能促进ＣＴＬ的增殖，ＩＬ－１２与低剂量的ＩＬ－２（５０Ｕ／ｍｌ）合用能协同增强ＣＴＬ的杀伤活性，ＩＦＮ－γ分泌水平及肿     

DEFINITION AND MECHANISM RESEARCH OF NK CELLS AC-TIVATION THROUGH THE CD45 PATHWAY

为鉴定介导ＮＫ细胞激活的表面分子及其作用机制，本研究用一系列粘附分子单抗及配体体外刺激ＮＫ细胞，定量检测ＮＫ细胞ＩＦＮ－γ的分泌；检测了ＮＫ细胞经ＩＬ－２诱导后其异构体的变化及其不同异构体单抗对ＮＫ细胞的刺激作用；以ＣＤ２２α、ＣＤ２２β基因导入Ｂ７８Ｈ１细胞后观察转染细胞对ＮＫ细胞的粘附和刺激效应。结果表明：ＩｇＧ２ａ和ＩｇＧ１亚类ＣＤ４５单抗及其Ｆ（ａｂ）２均可独立刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＮＫ细胞经ＩＬ－２培养诱导后其表面ＣＤ４５分子异构体的表达呈ＲＯ逐渐增加，而ＲＡ逐渐减少的特征；ＣＤ４５ＲＯ单抗可刺激ＮＫ细胞释放ＩＦＮ－γ；ＣＤ２２α、ＣＤ２２β转染细胞可粘附，但不能刺激ＮＫ细胞激活。结果提示：ＮＫ细胞可经ＣＤ４５ＲＯ途径激活并释放ＩＦＮ－γ，该途径与ＣＤ１６分子无关，ＣＤ４５分子的特异性配体并非既往所报道的ＣＤ２２，尚待进一步鉴定     

再生障碍性贫血患者细胞因子水平观察

为进一步探讨细胞免疫对ＡＡ发病的影响，阐明细胞因子在ＡＡ患者中变化的基础与临床意义，采用酶联免疫试剂盒ＥＬＩＳＡ法对３８例ＡＡ患者及２０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＮＣ）培养上清诱生Ｇ－ＣＳＦ，ＩＬ－６，ＴＮＦα，ＩＦＮα及ＩＬ－８水平进行测定，同时采用改良ＡＰＡＡＰ法观察外周血Ｔ细胞亚群及ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达，结果ＡＡ患者ＰＢＭＮＣ培养上清中Ｇ－ＣＳＦ阳性率减低，ＩＬ－６，ＴＮＦαＩＦＮα及     

白细胞介素15的研究近况

白细胞介素１５（ＩＬ－１５）是白细胞介素类新发现的一种细胞因子，能促进Ｂ细胞的人化增殖，诱导ＮＫ细胞增殖、细胞毒活性、产生细胞因子，它与ＩＬ－１２协同可促使ＮＫ细胞产生ＩＦＮ－γ，对于调节ＮＫ细胞的功能和机体免疫力有重要作用，ＩＬ－１５广泛分布于人体组织和细胞，包括胎盘、骨胳肌、肾及活化的单核细胞／巨噬细胞，与ＩＬ－２有许多相似的生物学活性。与ＩＬ－２不同的是ＩＬ－１５诱导ＮＫ细胞的活性是利用ＩＬ     

TNF-α基因和IL-2基因共转染的肿瘤细胞体内致瘤性和瘤苗效果的观察

为了探讨两种具有协同作用的细胞因子共转染的瘤苗是否具有更好的抗肿瘤作用，我们将ＴＮＦ－α基因和ＩＬ－２基因转染Ｂ１６黑色素瘤细胞，获得同时分泌ＩＬ－２和ＴＮＦ的Ｂ１６细胞克隆株（命名为Ｂ１６－ＩＬ－２＋－ＴＮＦ－α＋细胞），并观察了其体内致瘤性和瘤苗效果。结果发现，Ｂ１６－ＩＬ－２＋－ＴＮＦ－α＋细胞的体内致瘤性显著低于ＴＮＦ－α基因或ＩＬ－２基因单独转染的Ｂ１６细胞；而且，事先接种Ｂ１６－ＩＬ－２＋－ＴＮＦ－α＋细胞的小鼠能抵抗再接种的野生型肿瘤细胞的生长，表明其具有更佳的瘤苗效果。     

bcl—2基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的：探讨ｂｃｌ－２基因反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响。方法：应用细胞培养，免疫标记及流式细胞仪技术，检测了ｂｃ１－２基因反义寡脱氧核糖核苷酸（ＡＳＯＤＮ）和阿糖胞苷（Ａｒａ－Ｃ）对白血病Ｋ５６２和ＨＬ－６０细胞作用和ｂｃｌ－２基因表达。结果：Ａｒａ－Ｃ（１０μｍｏｌ／Ｌ）与ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ同时作用比单独用Ａｒａ－Ｃ或Ａｒａ－Ｃ与正义寡脱氧核糖核苷酸（ＳＯＤＮ）细胞存活率显著减少（Ｐ＜０００１），并且流式细胞仪检测显示ｂｃｌ－２ＡＳＯＤＮ使ｂｃｌ－２蛋白阳性率降低。结论：ｂｃｌ－２基因反义寡核苷酸能抑制该基因表达，提高白血病细胞对Ａｒａ－Ｃ的敏感性