肌肉特异性microRNAs在失神经肌肉萎缩中表达变化的研究

目的 探讨miR-1、miR-133和miR-206等3种肌肉特异性microRNAs在失神经支配所致骨骼肌萎缩中的表达变化情况.方法 采用坐骨神经离断术建立小鼠腓肠肌失神经支配模型,采用失神经前后腓肠肌湿质量、肌纤维横截面积百分比对模型进行评价,应用Northern blot方法检测失神经支配不同时间点肌肉特异性microRNAs的表达变化.结果 成功建立小鼠腓肠肌失神经萎缩模型,在该过程中,随着失神经支配时间的延长,骨骼肌特异性miR-206表达明显上调,miR-1、miR-133表达先快速下调后逐渐回升.结论 随着失神经支配时间的延长,骨骼肌特异性microRNAs表达发生明显变化,骨骼肌特异性microRNAs可能在失神经介导的骨骼肌萎缩中发挥了一定作用.     

胚胎脊髓细胞移植至失神经骨骼肌内预防肌萎缩的研究

失神经支配骨骼肌的萎缩是神经修复术后功能恢复欠佳的主要原因 ,目前尚无满意的疗法。研究证明 ,运动神经元与其效应器 -骨骼肌之间存在着相互的营养联系。运动神经元如与靶组织失去联系 ,则可能发生营养障碍甚至退变死亡 ;骨骼肌组织如失去神经支配 ,则会因失去神经营养而发生萎缩、变性和纤维化。为此 ,我们设计将胚胎脊髓细胞移植至大鼠失神经支配骨骼肌内 ,以观察其存活情况及其对失神经骨骼肌有否营养作用 ,为失神经肌萎缩的防治打下基础。1　材料与方法1.1　胚胎脊髓运动神经元的分离与制备 :按照汪华侨等 (1999)提供的方法进行胚胎…     

细胞生长因子对失神经骨骼肌萎缩的作用机制分析

外伤、神经病变等多种疾病可引起神经损伤,骨骼肌失神经支配后不可避免地发生萎缩,而轴突再生需要相当长的时间,在肌肉获得神经再支配前,肌肉已经发生不可逆转的萎缩。研究表明,细胞生长因子可促进细胞再生,抑制骨骼肌萎缩。然而,单个因子对骨骼肌萎缩的抑制效果并不明显。通过对生长因子作用机制的理论分析,提出多种生长因子协同作用失神经骨骼肌萎缩的可能性。对多种生长因子协同作用的研究将促进肌萎缩的临床治疗。     

黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白活性的影响

目的:对黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡以及凋亡相关蛋白活性的影响进行分析探讨,为今后的实验研究提供可靠的参考依据。方法:抽取SD大鼠69只,建立右下肢腓肠肌神经支配模型,随机分成3组,分别定义为失神经对照组、失神经黄芪干预组和阴性对照组,对术后2、14、28天时大鼠腓肠肌骨骼肌细胞凋亡细胞核以及凋亡的相关蛋白水平进行检测,并对检测结果进行对比分析。结果:失神经对照组、失神经黄芪干预组大鼠细胞凋亡较阴性对照组发生显著增加(P<0.05);术后14天和28天时黄芪干预组大鼠的腓肠肌湿重较同时期失神经组发生显示升高(P<0.05),然而凋亡细胞核、凋亡相关蛋白Caspase-8,Caspase-9活性则较失神经对照组发生显著降低(P<0.05)。结论:由以上研究可证实黄芪具有对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡产生显著的延缓作用,并且对Caspase-8,Caspase-9活性也能够产生一定的抑制效果,值得关注。     

大鼠失神经支配骨骼肌退变的实验研究

目的观察大鼠失神经支配骨骼肌组织形态学及运动终板退变,寻找反映肌肉萎缩形态学指标。方法选用４２只ＳＤ大鼠,切断胫神经建立失神经支配腓肠肌实验模型。运用电子天平测定肌肉湿重,图像分析仪测定肌细胞直径及截面积,氯化金压染法及透射电镜观察失神经支配骨骼肌超微结构及运动终板变化。结果萎缩肌肉湿重４周内下降最快,以后逐渐减慢并维持于一定水平,肌细胞直径及截面积呈持续性下降;运动终板４周内改变不明显,６周后退变逐渐加重,１６周后消失,超微结构变化与光镜观察结果基本一致。结论肌肉湿重、肌细胞直径及截面积可作为反映肌肉萎缩形态学指标,后两者更为可靠。周围神经损伤后修复手术越早越好,力争在运动终板消失前进行。     

FoXO3a通路调控失神经肌萎缩的作用机制及银杏叶提取物的治疗作用

目的观察银杏叶提取物(EGB761)在实验性大鼠失神经肌萎缩中的治疗效果,探讨银杏叶提取物对大鼠腓肠肌细胞中FoxO3a/MAFbx信号通路的影响。方法选用成年雌性Wistar大鼠54只,每组6只,切断右侧坐骨神经随机分为失神经组(30只)和药物干预组(24只),药物干预组每日银杏叶提取物(100mg/Kg体重)灌胃,在去神经第0、2、7、14、28d分别处死大鼠取其两侧腓肠肌。称肌湿重求出肌湿重比;以WEST BLOT检测右腓肠肌标本中p-FoxO3aS253、FoxO3a、MAFbx蛋白的表达量;RT-PCR检测FoxO3a、MAFbXmRNA的表达量。结果药物干预组各组肌湿重比比失神经组高,差异具有统计学意义(P<0.05)。药物干预组FoxO3a基因表达和蛋白表达较失神经组减少,在7、14、28d差异具有统计学意义(P<0.05)。药物干预后p-FoxO3aS253的磷酸化水平显著高于同期失神经组。药物干预组MAFbx基因和蛋白表达较失神经组下降,在第7、14、28d差异具有统计学意义(P<0.05)。结论大鼠失神经骨骼肌萎缩早期,银杏叶提取物可能是通过FoxO3a通路来防治失神经早期的骨骼肌萎缩。     

黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白活性的影响

目的:对黄芪对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡以及凋亡相关蛋白活性的影响进行分析探讨,为今后的实验研究提供可靠的参考依据。方法:抽取SD大鼠69只,建立右下肢腓肠肌神经支配模型,随机分成3组,分别定义为失神经对照组、失神经黄芪干预组和阴性对照组,对术后2、14、28天时大鼠腓肠肌骨骼肌细胞凋亡细胞核以及凋亡的相关蛋白水平进行检测,并对检测结果进行对比分析。结果:失神经对照组、失神经黄芪干预组大鼠细胞凋亡较阴性对照组发生显著增加(P0.05);术后14天和28天时黄芪干预组大鼠的腓肠肌湿重较同时期失神经组发生显示升高(P0.05),然而凋亡细胞核、凋亡相关蛋白Caspase-8,Caspase-9活性则较失神经对照组发生显著降低(P0.05)。结论:由以上研究可证实黄芪具有对大鼠失神经早期骨骼肌细胞凋亡产生显著的延缓作用,并且对Caspase-8,Caspase-9活性也能够产生一定的抑制效果,值得关注。     

异丙肾上腺素防治失神经骨骼肌萎缩机制的分析

目的探讨异丙肾上腺素对失神经骨骼肌萎缩机制的防治情况。方法选取60只wista大鼠,制作成标准的腓肠肌失神经支配、右侧坐骨神经离断模型,随机分成观察组30只和对照组30只,应用Western Bloting和RT-PCR检测不同时间段蛋白质、mRNA、MuRF、1NF-JB的表达水平。结果两组在肌湿重维持率、NF-JBP65、MuRF1等方面相比差异均具有显著性(P<0.05)。结论异丙肾上腺素在抑制NF-JB/MuRF1通路中成效显著,能够达到防治失神经骨骼肌萎缩的目的。     

大鼠胫神经损伤腓肠肌组织中Myostatin的表达变化

目的：分析myostatin（MSTN）在大鼠胫神经夹伤后腓肠肌失神经萎缩与神经再支配过程中的表达变化，探讨myostatin在失神经肌萎缩过程中的可能作用。方法：建立大鼠胫神经夹伤模型；采用RT—PCR法检测失神经与神经再支配不同时FB3段腓肠肌中myostatin mRNA含量。结果：失神经支配早期，腓肠肌myostatin mRNA水平迅速上升，在第2周达到高峰，随后表达又逐渐下降，至第4周与正常组相比差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：成功建立大鼠胫神经夹伤模型，腓肠肌失神经肌萎缩过程中，myostatin基因表达有明显变化．提示myostatin在失神经肌萎缩过程中扮演重要角色。     

大鼠肌卫星细胞移植失神经骨骼肌的形态学观测

目的 探讨大鼠肌卫星细胞移植能否延缓失神经骨骼肌萎缩.方法 将16只成年Wistar大鼠分为实验组与对照组,两组均切断大鼠右后肢胫神经,建立腓肠肌失神经动物模型.实验组:将体外培养的同种异体肌卫星细胞悬液0.2 mL缓慢注射到失神经腓肠肌内、外侧头中;对照组:则缓慢注射等量的生理盐水于相同部位.术后第4周,采用肌湿重、肌纤维横截面积形态学观测的方法,检测失神经骨骼肌的萎缩变化情况.结果 成功地对成年大鼠肌卫星细胞进行了分离、纯化、鉴定、培养和移植.发现实验组与对照组相比,失神经腓肠肌湿重残存率(由手术侧与自身健侧的肌湿重测定值之比得出):实验组为0.48±0.050,对照组为0.33±0.059,二者存在显著性差异(P＜0.01);腓肠肌纤维横截面积残存率(由手术侧与自身健侧的肌纤维横截面积测定值之比得出):实验组为0.58±0.011,对照组为0.50±0.018,二者存在显著性差异(P＜0.01).结论 本实验表明将肌卫星细胞异体移植到失神经骨骼肌内可明显延缓骨骼肌的萎缩进程,为再生神经到达靶器官提供较多的时间,进而为解决再生神经延伸到靶器官前,靶器官已发生不可逆性萎缩,严重制约再生神经效果的临床难题提供一个新的研究思路.     

自噬在电针对大鼠失神经性肌肉萎缩的肌细胞形态计量学影响中的作用

周围神经损伤会带来肌肉失神经性萎缩,我们通过前期研究已证实低频电针能有效促进失神经支配的萎缩肌肉形态和功能恢复。由于失神经性肌肉萎缩过程中必然发生自噬来保证肌细胞在营养不足的情况下存活,故我们认为,探索自噬在电针治疗神经损伤和肌肉萎缩中的具体作用及其可能机制,具有重要的研究价值。因此,前期基础上,我们将100只无菌级Wistar雄性大鼠随机分为正常组、模型组、电针组、电针联合自噬抑制剂3-MA组,每组各25只通过手术造成大鼠实验性坐骨神经钳夹伤模型,采用电针治疗、自噬抑制剂三甲基腺嘌呤(3-MA)干预等措施,术后第1、2、7、28天取材进行大鼠腓肠肌组织学观察和腓肠肌肌细胞截面积的测算。腓肠肌肌组织的HE染色切片显示,第1、2天时,各组大鼠腓肠肌组织形态大小正常;第7天时,除正常组外,其余各组腓肠肌组织形态明显萎缩变小;第28天时,电针组大鼠的腓肠肌组织形态完整性较好,而电针联合自噬抑制剂组大鼠的腓肠肌组织形态大小和完整性较其他各组要差。腓肠肌肌细胞截面积的组间比较显示,第1、2天时,正常组大鼠腓肠肌肌细胞截面积与其它各组比无差异;第7、28天时,正常组大鼠腓肠肌肌细胞截面积与其它各组比明显变小,P<0.01,有显著性差异;第7、28天时,电针联合自噬抑制剂组大鼠肌细胞截面积与电针组比小,P<0.05,有差异。组内比较显示,模型组、电针组和电针联合自噬抑制剂组大鼠在第7、28天时的肌细胞截面积较第1天比明显变小,P<0.01,有显著性差异。以上结果表明,大鼠坐骨神经损伤后腓肠肌短期不萎缩,但中长期萎缩明显,在此过程中,电针可延缓腓肠肌萎缩,使大鼠腓肠肌保持形态相对完整;在相同电针情况下,抑制自噬反应会对维持腓肠肌正常形态造成一定负面影响,说明电针可能通过促进细胞自噬来改善大鼠腓肠肌组织形态。     

白细胞介素1β对失神经肌肉保护作用的实验研究

目的研究白细胞介素1β(IL-1β)对失神经支配骨骼肌的作用。方法将36只健康SD大鼠制备失神经支配腓肠肌模型,随机分成实验组和对照组,每组18只。A组于腓肠肌不同的5个点注射IL-1β0.1mL(浓度1ng/mL),B组注射同等剂量的生理盐水,术后每天注射1次。于术后2、4、8周各取6只大鼠处死,取右侧腓肠肌观察,测定肌湿质量维持率、肌细胞横截面积、肌肉蛋白总含量,检测运动终板,细胞凋亡等指标。结果术后2、4、8周实验组的肌湿质量维持率、肌细胞截面积、肌肉蛋白含量均明显高于对照组(P<0.05)。术后8周两组的运动终板平均灰度值和平均光密度值差异有统计学意义(P<0.05)。实验组肌细胞凋亡率明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论靶肌肉局部注射IL-1β能减轻失神经骨骼肌形态的改变,对失神经骨骼肌和运动终板具有保护作用,能在短时间内有效延缓失神经支配骨骼肌萎缩。     

异丙肾上腺素防治失神经骨骼肌萎缩机制的分析

目的探讨异丙肾上腺素对失神经骨骼肌萎缩机制的防治情况。方法选取60只wista大鼠,制作成标准的腓肠肌失神经支配、右侧坐骨神经离断模型,随机分成观察组30只和对照组30只,应用Western Bloting和RT-PCR检测不同时间段蛋白质、mRNA、MuRF、1NF-JB的表达水平。结果两组在肌湿重维持率、NF-JBP65、MuRF1等方面相比差异均具有显著性(P0.05)。结论异丙肾上腺素在抑制NF-JB/MuRF1通路中成效显著,能够达到防治失神经骨骼肌萎缩的目的。     

川芎嗪对大鼠失神经骨骼肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响

目的探讨川芎嗪对失神经骨骼肌细胞凋亡及bcl-2、bax表达的影响,寻找延缓失神经骨骼肌萎缩的新途径。方法将54只Wistar大鼠,随机分为9组,分别为正常对照组（A）、失神经对照组（B、C、D、E）、川芎嗪干预组（F、G、H、I）。失神经对照组、川芎嗪干预组建立右下肢失神经腓肠肌动物模型。正常对照组（0d）不做任何处理;川芎嗪干预组于腹腔注射川芎嗪注射液80mg.kg-1.d-1;失神经对照组腹腔注射等剂量生理盐水。在术后第0、2、7、14、28d分别处死1组大鼠取其两侧腓肠肌并称肌湿重。采用RT-PCR、Western Blot检测各时段bcl-2以及bax的蛋白表达水平。使用TUNEL法检测肌细胞凋亡。结果川芎嗪干预组肌湿质量比显著高于失神经对照组（P〈0.05）。川芎嗪干预组bcl-2的蛋白表达水平均高于失神经对照组（P〈0.05）,而bax的蛋白表达水平均低于失神经对照组（P〈0.05）。失神经组凋亡率逐渐升高,且与正常对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,采用川芎嗪治疗2d时,细胞凋亡率显著低于同期失神经对照组（P〈0.05）。结论川芎嗪可以通过促进bcl-2抑制bax的表达来延缓失神经骨骼肌萎缩。     

成肌调节因子MyoD和Myf-5在人体失神经骨骼肌中的表达及其临床意义

目的　研究人体骨骼肌失神经支配后成肌调节因子MyoD和Myf 5蛋白的表达变化 ,了解骨骼肌的再生状态。方法　 2 0例不同时间人体失神经骨骼肌与 3例正常骨骼肌标本 ,HE染色和透射电镜观察肌卫星细胞形态变化 ;抗MyoD和Myf 5多克隆抗体免疫组织化学染色 (ABC法 ) ,统计阳性染色细胞核数。 结果　抗MyoD和Myf 5抗体阳性染色细胞核数在人体骨骼肌失神经 1～ 2月时的肌卫星细胞中最多 ;3个月后急剧下降 ,并维持在一低水平 ;1年后几乎无表达。结论　人体骨骼肌失神经支配后早期肌卫星细胞通过MyoD和 (或 )Myf 5途径激活、开始增殖分化并被耗竭     

异丙肾上腺素防治失神经骨骼肌萎缩机制研究

目的：研究异丙肾上腺素对失神经骨骼肌萎缩中NF—κB、MuRF1表达变化的影响,探讨其防治失神经骨骼肌萎缩的机制。方法：选用wista大鼠54只,制作成标准右侧坐骨神经离断、腓肠肌失神经支配模型,随机分为对照组和药物组,应用RT—PCR和Western Bloting检测不同时段的NF—κB、MuRF1 mRNA和蛋白质表达水平,联合肌湿重分析其相关性。结果：失神经支配后腓肠肌NF—κB、MuRF1 mRNA和蛋白质表达持续增加（P〈0．05）。药物组肌湿重和肌细胞横截面积比对照组同时间点明显增加（P〈0．05）,NF—κB、MuRF1 mRNA和蛋白质表达则明显降低（P〈0．05）。结论：异丙肾上腺素可以通过抑制NF—κB／MuRF1途径有效防治失神经骨骼肌萎缩。     

手法对家兔骨骼肌失神经支配后雪旺氏细胞S-100蛋白表达的影响

目的：通过观察推拿手法家兔骨骼肌失神经支配后肌湿重、雪旺氏细胞S-100蛋白表达水平,探讨推拿手法对受损神经及失神经支配骨骼肌的影响。方法：新西兰家兔120只,分为四大组：正常对照组30只、模型观察组30只、神经生长因子(NGF)治疗组30只、手法治疗组30只,分别于手法干预2周、3周、1月、2月、4月后,每组各取6只家兔,称量肌湿重,计算术侧与健侧的肌湿重比值;测定雪旺氏细胞S-100蛋白表达水平。结果：①腓肠肌肌湿重比：NGF治疗组在2周、3周、1月、2月及手法治疗组在2周、3周、1月、2月、4月均高于模型观察组(P＜0.05)。手法治疗组在2周、3周低于NGF治疗组(P＜0.05),4月时则高于NGF治疗组(P＜0.05)。②雪旺氏细胞S-100蛋白表达：NGF治疗组、手法治疗组在各个时期均高于模型观察组(P＜0.05)。手法治疗组在1月、2月均高于NGF治疗组(P＜0.05)。结论：推拿手法可以延缓周围神经损伤后骨骼肌萎缩、变性,促进损伤神经的修复。     

葡萄籽抑制肌细胞凋亡延缓失神经骨骼肌萎缩的实验研究

目的通过应用抗氧化剂葡萄籽初步探讨其能否通过抑制肌细胞凋亡来延缓失神经支配后骨骼肌的萎缩现象。方法选择8周龄Vistar大鼠40只,随机分为A组（对照组）、B组（去神经14d组）、C组（去神经28d组）、D组（去神经14d干预组）、E组（去神经28d干预组）等5组,A组做假手术,B、C、D、E组制作坐骨神经切断后失神经支配的腓肠肌模型。术后D、E组用葡萄籽200mg.kg-1.d-1空腹灌胃,A、B、C组用等量生理盐水灌胃。术后分别于14d、28d处死大鼠,用流式细胞仪检测腓肠肌细胞活性氧（ROS）的含量,激光共聚焦显微镜检测腓肠肌细胞线粒体通透性转化孔（MPTP）的开放情况,脱氧核糖核苷酸转移酶介导的缺口末端标记（Tunel）法检测腓肠肌细胞凋亡,肌湿重之比评价骨骼肌萎缩情况。结果大鼠失神经支配后,B、C、D、E组肌细胞中的ROS、MPTP及凋亡率与正常对照组比较,表达随去神经支配时间的延长（〈28d）而持续增加,且差异具有统计学意义（P〈0.05）,D、E组肌细胞ROS、MPTP及肌凋亡率分别与B、C组比较,表达有所减少,差异具有统计学意义（P〈0.05）;B、C组肌湿重之比较A组显著减小（P〈0.05）,D、E组肌湿重比分别与B、C组相比,有所升高,且差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 ROS为调控失神经支配后骨骼肌萎缩的重要分子,葡萄籽可以通过减少ROS的含量进而抑制肌细胞凋亡并最终延缓骨骼肌萎缩。     

建立大鼠失神经支配骨骼肌萎缩模型适宜方法的研究

目的：探讨建立大鼠失神经支配骨骼肌萎缩动物模型的适宜方法。方法：选取雄性Wistar大鼠48只随机分为两组,无菌条件下,分别切断左后肢坐骨神经和左后肢胫神经。术后观察动物的生活状态,并于术后1、2、4、8周分别测定手术侧与健侧腓肠肌的肌湿重、肌纤维横截面。结果：术后动物全部存活,但切断坐骨神经组有3只动物手术侧肢体远端出现皮肤溃疡。切断坐骨神经或胫神经2周后,大鼠肌湿重、肌纤维横截面积的测定值,手术侧与健侧相比较即出现显著性差异,术后4周内肌萎缩进程较快,随后趋缓。结论：建立失神经支配骨骼肌萎缩的动物模型,两种方法比较,切断坐骨神经对动物损害较大,建议采用切断胫神经这种方法较为适宜。     

大鼠肌卫星细胞移植对失神经骨骼肌张力的影响

目的探讨大鼠肌卫星细胞移植能否延缓失神经骨骼肌萎缩。方法将16只成年Wistar大鼠分为实验组与对照组，两组均切断大鼠右后肢胫神经，建立腓肠肌失神经动物模型。实验组：将体外培养的同种异体肌卫星细胞悬液注射到失神经腓肠肌内；对照组：则注射等量的生理盐水于相同部位。术后第4周，采用电刺激方法，检测失神经骨骼肌的张力变化情况。结果实验组与对照组相比，失神经腓肠肌收缩张力的差异有统计学意义。结论本实验表明将肌卫星细胞异体移植到失神经骨骼肌内可明显延缓骨骼肌的萎缩进程，为再生神经到达靶器官提供较多的时间，进而为解决再生神经延伸到靶器官前，靶器官已发生不可逆性萎缩，严重制约再生神经效果的临床难题提供一个新的研究思路。