华支睾吸虫成虫特异性诊断抗原分析

目的:寻找诊断华支睾吸虫病的特异性抗原.方法:应用SDS-PAGE和Western blot对华支睾吸虫成虫可溶性抗原中的蛋白组分进行分析,试验血清包括旋毛虫感染的大鼠和小鼠血清,正常大鼠和小鼠血清,旋毛虫病、华支睾吸虫病、并殖吸虫病、日本血吸虫病及囊虫病患者血清,斯氏狸殖吸虫感染的大鼠血清和正常人血清.结果:华支睾吸虫成虫可溶性抗原蛋白经SDS-PAGE后显示17条蛋白带,其中相对分子质量为65 000、54 000、31 000、25 000、13 000的为主带.Western blot结果显示,相对分子质量为108 000、94 000、71 000、65 000、56 000、53 000、43 000的蛋白带可被华支睾吸虫病患者血清识别,108 000、71 000、65 000、63 000、53 000的蛋白带可被并殖吸虫病患者血清识别,108 000、94 000、71 000可被日本血吸虫病患者血清、旋毛虫感染的大鼠血清及旋毛虫病患者血清识别;56 000的蛋白组分只能被华支睾吸虫病患者血清识别,而不与其他试验血清发生交叉反应.结论:华支睾吸虫成虫可溶性抗原中相对分子质量为56 000的蛋白组分为华支睾吸虫成虫的特异性抗原.     

华支睾吸虫成虫抗原纯化及鉴定

用葡聚糖凝胶Sephadex G-200柱层析法、三氯醋酸-乙醇提取物DEAE-Cellulose(DE52)柱层析法、尿素提取物Sepharose 4B柱层析法对华支睾吸虫成虫可溶性抗原进行部分纯化,获得8种不同的抗原活性组分.并用免疫电泳、聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳(PAGE)、薄层等电聚焦电泳、微板法动力学酶联免疫吸附试验进行鉴定.认为经纯化的抗原组分较粗抗原更适宜于临床诊断及考核疗效     

华支睾吸虫成虫CsRPEF基因的生物信息学分析

目的筛选华支睾吸虫的功能基因并进行相应的生物信息学分析。方法使用PCGENE软件、Antheprot-5软件、ExPASy在线分析工具、NCBI上的Blastx程序进行华支睾吸虫RNA聚合酶Ⅱ延长因子(CsRPEF)基因的生物信息学分析。结果获得了CsRPEF基因的序列特征,推测到了CsRPEF的同源蛋白并预测出CsRPEF编码蛋白的分子量、等电点、柔曲性、疏水性、功能性位点等二级结构特征。结论华支睾吸虫成虫CsRPEF基因是一新筛选的功能基因,CsRPEF蛋白是可能参与华支睾吸虫基因转录途径的重要因子。CsRPEF基因的生物信息学分析可为其进一步进行生物学功能的实验研究奠定基础。     

华支睾吸虫severin蛋白体外对HBV复制的影响

目的探索华支睾吸虫severin(Cs severin)蛋白体外对乙肝患者外周血单核细胞(PBMC)乙肝病毒(HBV)复制水平的影响及对干扰素-α(IFN-α)清除HepG2.2.15细胞内HBV的影响。方法采用逆转录荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测不同浓度(0、60、80、100μg/mL)Cs severin作用乙肝患者PBMC 48 h后HBV DNA拷贝数;采用RTqPCR法检测不同浓度(0、60、80、100μg/mL)Cs severin作用HepG2.2.15细胞以及不同浓度(0、60、80、100μg/mL)Cs severin与IFN-α同时作用下的HBV DNA拷贝数;RT-qPCR检测HepG2.2.15细胞中STAT1 mRNA水平。结果 Cs severin单独作用时不影响PBMC的HBV DNA拷贝,组间差异无统计学意义(P0.05)。在HepG2.2.15细胞中,Cs severin的存在增强了IFN-α清除HBV的作用,且在60～100μg/mL范围内,随着Cs severin浓度的升高,HBV DNA拷贝数下降(P0.05)。STAT1 mRNA水平在Cs severin存在的情况下高于对照组,各组间差异有统计学意义(P0.05)。且随着Cs severin浓度的提高,STAT1 mRNA水平也随之上升。结论 Cs severin不能直接影响HBV复制水平,但可能通过影响STAT1基因的表达而提高IFN-α清除HBV的能力。     

实验感染华支睾吸虫家兔血清抗体动态的初步观察

我们曾应用竦根过氧化物酶联葡萄球菌A蛋白(HRP—SPA)为第二抗体做酶联免疫吸附试验(ELISA)检测感染华支睾吸虫病人及感染动物血清的特异性抗体,已经取得较好效果。但对于感染华支睾吸虫后抗体水平的变化尚不了解。本文采用此法对家兔感染华支睾吸虫后血清抗体消长动态进行了初步观察,现将结果报告如下:     

华支睾吸虫成虫三种抗原的免疫学特性比较

对华支睾吸虫成虫代谢抗原(MA)、成虫盐水浸液抗原(SEA)和全虫抗原(AA)的免疫学特性进行了比较研究,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)提示三种抗原在分子量22～128KD的位置上有一些分子量相等的多肽成分。免疫扩散(ID)和免疫电泳(IE)结果表明,MA,SEA和AA有迁移带相等的沉淀带,进一步证实三种抗原有相同的抗原成分,MA的免疫性成分比SEA多。SPA-酶联免疫吸附试验(SPA-ELISA)显示MA与AA血清学敏感性差异有显著性(P<0.05),而与SEA比较则差异无显著性(P>0.05)。     

华支睾吸虫感染的调查

寄生虫病是危害我国人民健康的重要公共卫生同题之一。根据全国人体寄生虫分布调查结果，我省寄生虫总感染率为17．5％，其中，华支睾吸虫感染率为1．2％，居全国第2位。本文调查华支睾吸虫感染率为11．59％。为引起人们重视，应加强卫生宣传教育，以此作为我省开展防治的寄生虫病重点工作之一。     

华支睾吸虫的扫描电镜观察

本文应用扫描电镜对华支睾吸虫体表微细结构、感觉器的类型和分布等进行了观察。其中发现腹吸盘腔的底部有互相连接比较粗大的枝状物以及具纤毛的环状乳突和无纤毛的扁平乳突,这些都是过去文献未见报道过的。     

华支睾吸虫感染情况调查

目的 :分析肝吸虫的感染情况 ,为肝吸虫的防治提供依据。方法 :皮试法、直接涂片便检法。结果 :皮试法阳性率为 5 6.87% ,男女无显著性差异 ;便检法感染率为 68% ,男女感染率无显著性差异。结论 :吃生鱼是引起该地肝吸虫感染的主要原因 ,今后要加强肝吸虫病的宣传与治疗 ,改善不良饮食习惯     

大鼠抵抗华支睾吸虫重复感染的实验研究

华支睾吸虫也称肝吸虫,成虫寄生在人和哺乳动物,引起人体华支睾吸虫病(肝吸虫病).本病广泛流行于东南亚,我国近年估计有1 000多万人感染肝吸虫[1],已经成为严重的公共卫生问题.一般认为人体感染后无保护性免疫,流行区人群常常发生再感染和重复感染[2].近来发现初次感染治愈的大鼠产生很强的抵抗再感染力 [3,4].但有文献报道初次感染后未治疗大鼠对重复感染无明显抵抗[4,5].为了弄清大鼠是否能抵抗华支睾吸虫重复感染,我们将100个华支睾吸虫囊蚴分2～5次感染大鼠,结果发现大鼠能抵抗华支睾吸虫重复感染.此外,我们还观察了不同初感染时间对重复感染的影响,发现初感染后1周抵抗力开始出现,第4周时达到高峰,重复感染虫体发育比迟缓,现将实验研究报告如下.     

华支睾吸虫溶血磷脂酶对肝星状细胞体外作用的研究

目的探讨华支睾吸虫溶血磷脂酶(Cs LysoPLA)对肝星状细胞的作用。方法实验分为4组:PBS对照组为PBS孵育肝星状细胞系LX-2细胞24 h;Cs LysoPLA单独刺激组为Cs LysoPLA(10μg/mL)单独孵育LX-2细胞24 h;联合刺激组为不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)孵育LX-2细胞2 h后,IL-13(20 ng/mL)孵育24 h;IL-13单独刺激组为IL-13(20 ng/mL)单独孵育LX-2细胞24 h;逆转录荧光定量PCR(qRT-PCR)检测星状细胞活化指标分子α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)以及纤维化相关分子胶原蛋白Ⅰ型(Collagen-Ⅰ)、胶原蛋白Ⅲ型(Collagen-Ⅲ)以及促纤维化分子转化生长因子β1(TGF-β1)、血小板源性生长因子(PDGF)的mRNA水平。Western Blotting检测不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)联合IL-13(20 ng/mL)刺激时LX-2细胞α-SMA蛋白表达量。结果 Cs LysoPLA(10μg/mL)可直接抑制LX-2细胞α-SMA、Collagen-Ⅲ的转录,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P=0.014 2、0.002 7);并且Cs LysoPLA(10μg/mL)可刺激LX-2细胞TGF-β1、PDGF基因转录升高,与PBS对照组相比差异有统计学意义(P=0.009 1、0.003 4);Cs LysoPLA(10μg/mL)可以下调IL-13引起的α-SMA、Collagen-Ⅰ、Collagen-Ⅲ、TGF-β1的mRNA水平的升高,与单独IL-13刺激组相比差异有统计学意义(P=0.003 0、0.011 9、0.043 0、0.025 6);Western Bloting结果显示,不同浓度Cs LysoPLA(1、5、10μg/mL)均可以下调IL-13引起的星状细胞活化分子α-SMA的表达,与单独IL-13刺激组相比差异有统计学意义(P=0.008 0、0.000 5、0.000 2)。结论 Cs LysoPLA(10μg/mL)在高浓度下既可以直接抑制LX-2细胞纤维化,又可以抑制IL-13引起的LX-2细胞纤维化,可能在华支睾吸虫严重感染所致纤维化过程中发挥了抑制纤维化的作用。     

华支睾吸虫特异性抗原的筛选

华支睾吸虫特异性抗原的筛选田海生苏畅张耀娟（南京医科大学寄生虫学教研室，南京２１００２９）关键词华支睾吸虫；电泳；特异性抗原华支睾吸虫、血吸虫、肺吸虫、肝片形吸虫和姜片虫成虫间存在着共同抗原，并引起交叉反应，已为多年来中外学者的工作所证实［１～４］...     

华支睾吸虫神经系统的发育观察

通过硫代胆碱法定位华支睾吸虫的胆碱酯酶来展示神经系统的结构，观察了该虫神经系统发育过程。研究表明５天童虫就已初具成虫神经系统的雏形。１０天童虫显示与成虫基本相同的神经系统结构。２０天童虫及３０天性成熟时的虫体其神经系统未见明显发展。至９０天时神经系统则更加发达，其脑神经节、神经干、横向神经及各部分的神经分支相当粗壮，神经网络更为致密。     

华支睾吸虫感染的临床特征分析

目的探讨华支睾吸虫感染者临床表现特征,提高对该寄生虫病诊断和治疗的认识。方法收集2010年住院的906例华支睾吸虫感染者的临床资料,分析其临床特征。结果华支睾吸虫感染者占同期住院患者16.5%,其中男性797例,比例远高于女性（88.0%vs 12.0%）。70.4%患者无明显消化道症状。并发肝胆胰疾病患者总数为220例（24.3%）,以胆石症比例最高（16.0%）,其中胆囊结石伴胆囊炎78例,胆管结石伴胆囊炎67例。粪检虫卵阳性者占90.2%。结论华支睾吸虫感染症状隐匿,与肝胆胰疾病关系密切,粪便反复多次查虫卵简便易行,可作为筛查方法,戒除生食鱼虾习惯对减少感染有重要预防作用。     

华支睾吸虫囊蚴感染鸡鸭实验报告

对于家禽类能否作为华支睾吸虫保虫宿主的问题,迄今尚有争论,有人通过流行病学调查认为鸡、鹅、鸭可作为本虫的保虫宿主。江西易明华通过实验感染也曾二次报道鸡、鸭体内可查见成熟的华支睾吸虫成虫及虫卵。但更多的是持否定态度的文第报道。为弄清这一问题,我室于1987年11月对鸡、鸭作实验感染试验、现报道如下。材料和方法 1实验动物从广州郊区太和养鸭场购买童鸭六只,在菜市场购买健康本地鸡二只,经粪检均未发现华支睾吸虫虫卵。     

华支睾吸虫感染与胆囊结石研究报告

目的 探讨华支睾吸虫感染与胆囊结石的关系.方法 随机抽取2006年12月～2009年1月在该院普外科实施内镜保胆取石手术的204例患者的胆囊结石,将结石磨碎过滤后涂片镜检.同时随机抽取同期108例实施内镜保胆取石手术患者的胆汁,离心后将沉渣涂片镜检.结果 204例胆囊结石中163例检出华支睾吸虫卵,检出率79.9%,108例胆汁中,46例检出华支睾吸虫卵,检出率42.6%,两组相比较有统计学意义(P＜0.0001).华支睾吸虫卵在胆色素性结石、胆固醇性结石和混合性结石中的检出率分别为89.6%、57.9%和70.0%,三组相比较有统计学意叉(P＜0.0001);204例胆囊结石中,159例来自华支睾吸虫病流行区.如广东、广西(胆色素性结石占69.2%,胆固醇性结石占5.7%,混合性结石占25.2%),45例来自华支睾吸虫病非流行区,如甘肃(胆色素性结石占11.1%,胆固醇性结石占22.2%,混合性结石占66.7%),两组构成比差异有统计学意义(P＜0.0001).结论 结果第一次表明:华支睾吸虫感染与胆囊结石有密切关系;在华支睾吸虫病流行区,胆囊结石以胆色素性结石为主,在非流行区以胆固醇性结石和混合性结石为主;华支睾吸虫卵在胆囊结石中的检出率明显高于胆汁;胆囊结石磨碎过滤镜检是诊断华支睾吸虫感染简单而有效的方法.     

华支睾吸虫抗原纯化研究现况

随着华支睾吸虫防治工作的进展 ,其患病率及感染率逐步下降 ,而诊断的难度渐趋加大 ,原主要诊断方法——粪检固有的缺陷 (工作量大 ,工作效率低 ,易漏检 ,群众不乐意接受 )愈加突出 ,免疫诊断在临床辅助诊断和疫区流行病学调查中占据愈来愈重要的地位。诊断抗原的优劣决定着血清抗体检测、皮肤试验等免疫方法的诊断效果。目前所用的抗原主要为粗制成虫抗原 ,严重影响免疫诊断效果 ( 1)。因此 ,已有不少学者用不同方法对华支睾吸虫成虫粗抗原进行纯化研究。现按不同的研究方法综述如下。1　饱和硫酸铵沉淀法　　张夏英等( 2 ) 用 2 5%、50 %…     

华支睾吸虫致胆囊结石1例

华支睾吸虫又称肝吸虫，为可感染人和犬、猫等多种动物．肝吸虫病为人兽共患寄生虫病，肝吸虫常寄生于肝胆管内，引起肝胆组织的病理变化，临床上可表现为胆管炎、胆囊炎、胆石症和儿童发育障碍，重者可发生肝硬化，亦可诱发肝癌．目前中国除西北地区外，25个省、市、自治区均报告过肝吸虫病的流行或散发病例，已被卫生部列为中国重点预防与治疗的食源性寄生虫病之一。