香菇多糖柱前衍生化高效液相色谱指纹图谱研究*

摘要目的建立香菇多糖1 苯基 3 甲基 5 吡唑啉酮（PMP）柱前衍生高效液相色谱（HPLC）指纹图谱。方法采用水提醇沉法提取香菇多糖,经三氟乙酸（TFA）水解和PMP柱前衍生后,HPLC 法测定香菇多糖的单糖组成。结果在所建立的指纹图谱中,共标示出13个特征共有峰,鉴别主要色谱峰6个,分别是甘露糖、D 葡萄糖醛酸、D 葡萄糖、半乳糖、木糖和L 岩藻糖,其中葡萄糖比例最高,其次是甘露糖、半乳糖及岩藻糖。结论该方法稳定、简便、重复性好,可为香菇的质量控制提供参考。     

柱前衍生化法测定丽江产玛咖中18种氨基酸含量

目的测定丽江产玛咖中必需氨基酸的含量。方法以2,4-二硝基氟苯为衍生试剂,与丽江产玛咖中18种氨基酸柱前衍生,用Waters600高效液相色谱仪,菲罗门公司Symmetry C18色谱柱,以含1％N,N-二甲基甲酰胺的0．05mol／L醋酸钠-醋酸缓冲液（pH=6．4）及乙腈：水（1：1）进行梯度洗脱,检测波长为360nm,柱温为35℃,进样量为20μL。结果18种氨基酸的线性回归方程r值为0．9995～1．0000（n=5）,平均回收率为99．54％-101．84％,RSD值为0．38％～1．82％,n=6。结论本法快速、简便,结果准确。     

丙戊酸钠充填导管促进大鼠外周神经再生的实验研究

目的 观察丙戊酸钠(VPA)充填导管对缺损外周神经再生的促进作用.方法 通过建立大鼠坐骨神经缺损模型.用硅胶管(1 cm)进行缺损神经段(0.8 cm)的桥接,局部应用8%VPA注射液10ul,观察VPA对神经再生和运动神经功能恢复的影响.30只大鼠随机分成2组,实验组在硅胶管局部注射VPA注射液;对照组在硅胶管局部注入生理盐水. 结果 术后每只大鼠每2周进行坐骨神经功能指数(SFI)检测,每4周做电生理检查,最后术后12周处死所有大鼠,对坐骨神经进行组织形态学分析.用数字图像分析软件检测有髓神经纤维髓鞘厚度.并对再生神经纤维轴突计数.通过统计软件分析发现SFI,电生理检查,神经组织性形态上两组差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 局部使用VPA于神经缺损的大鼠,可以促进损伤神经的轴突再生和运动功能恢复.因此VPA有望在临床上应用于外周神经损伤病例的治疗.     

应用丙戊酸钠抗休克的研究进展

在战争、突发事故与灾害现场,由于交通破坏、后送延迟、医疗资源匮乏等原因造成常规静脉液体复苏难以实施或延迟实施,致使90％的休克伤员在被送往有条件实施常规抗休克治疗地点之前已经死亡。     

丙戊酸钠血药浓度监测在脑外伤后早期癫痫治疗中的应用

目的研究应用丙戊酸钠（VPA）治疗外伤后早期癫痫时血药浓度与疗效的关系。方法本组55例脑外伤住院的外伤后早期癫痫患者。初始治疗均静脉应用VPA治疗,剂量为7.5～30mg/kg·d,在第12天以荧光偏振免疫法测定VPA血药浓度。按照不同VPA血药浓度分为3组,观察血药浓度与疗效的关系。结果共监测VPA血药浓度55次。疗效比较：血药浓度〈40μg/ml与其它二组有统计学差异（P〈0.05）;血药浓度在40～80μg/ml与〉80μg/ml无统计学差异（P〉0.05）。结论应用VPA治疗外伤后早期癫痫时,血药浓度在40～80μg/ml有较好疗效。     

柱前衍生高效液相色谱法测定灵芝孢子粉中氨基酸的含量

目的:建立用于测定灵芝孢子粉中氨基酸含量的柱前衍生化高效液相色谱方法.方法:采用邻苯二甲醛(OPA)和9-氯甲酸芴甲酯(FMOC)联用对灵芝孢子粉中的氨基酸进行衍生,色谱条件为:Advance Bio AAA(100 mm×4.6 mm,2.7μm)色谱柱,流动相A为0.01 mol/L磷酸氢二钠和0.01 mol/L...     

丙戊酸钠联合拉莫三嗪治疗成人难治性癫痫的疗效分析

目的探讨丙戊酸钠联合拉莫三嗪治疗成人难治性癫痫的临床疗效及安全性。方法将笔者所在医院收治的118例难治性癫痫患者随机分为治疗组和对照组,各59例。对照组单纯给予VPA,治疗组在此基础上加用LTG。结果治疗组总有效率为96.6%,显著优于对照组的84.8%,差异有统计学意义（P〈0.05）;且未见明显不良反应。结论 VPA联合LTG治疗成人难治性癫痫疗效确切,安全性高,可提高患者的生存质量。     

丙戊酸钠诱导人脑胶质瘤细胞分化的靶细胞与靶分子研究

目的探讨丙戊酸钠诱导人脑胶质瘤细胞分化时作用的靶细胞和靶分子。方法丙戊酸钠治疗位于裸小鼠皮下的可移植性人脑胶质瘤,半定量RT-PCR检测移植瘤中HDAC1和Tob的表达;CD133免疫磁珠分离胶质瘤组织中的CD133^＋细胞,在分别含血清或不含血清加生长因子培养的条件下,加丙戊酸钠作用21d,流式细胞仪检测和共聚焦显微镜观察分化标志物表达。结果丙戊酸钠能明显抑制位于裸小鼠皮下移植瘤的增殖（P〈0．05）,使HDAC1表达下降（P〈0．01）,Tob表达升高（P〈0．05）。流式细胞仪检测丙戊酸钠作用21d的细胞,在含血清条件下,GFAP或β-tubulinⅢ阳性细胞数显著增加（P〈0．01）,而无血清加生长因子条件下两标志物表达均无显著差异（P〉0．05）;共聚焦显微镜观察显示上述的GFAP^＋或β-tubulinⅢ^＋细胞共表达Nestin。结论丙戊酸钠逆转人脑胶质瘤细胞分化抑制的靶分子有HDAC1和Tob,靶细胞为处于分化过程中的脑肿瘤干细胞。     

丙戊酸钠增强免疫细胞对人膀胱癌细胞的杀伤作用

目的:探讨丙戊酸钠(VPA)对膀胱癌细胞MICA表达的影响以及所产生的肿瘤免疫作用,以期为防治膀胱癌复发和浸润提供新的治疗方法。方法:采用不同浓度VPA处理人膀胱尿路上皮癌T24细胞后,用半定量RT-PCR和流式细胞术检测癌细胞中MICA mRNA和蛋白表达。用乳酸脱氢酶法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对经VPA处理的T24细胞的杀伤作用。结果:VPA从mRNA和蛋白水平诱导T24细胞表达MICA,并增强T24细胞对PBMCs细胞毒作用的敏感性。结论:VPA能增强膀胱癌对免疫细胞杀伤作用的敏感性,可作为防治膀胱癌的辅助药物。     

丙戊酸钠联合癫痫平序贯治疗癫痫的临床观察

目的：观察丙戊酸钠联合癫痫平序贯治疗癫痫的临床疗效,探讨其有效性及安全性,以期更有效地控制癫痫发作。方法76例癫痫患者随机分为治疗组和对照组,治疗组在常规治疗基础上联合癫痫平的剂量调整,对照组为丙戊酸钠常规疗法。观测两组患者临床疗效、不良反应、治疗时间与发作频率的相互关系。结果治疗组（40例）有效控制发作,较对照组（36例）临床疗效显著提高,不良反应发生率降低;两组治疗后癫痫发作严重程度积分值比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论在抗癫痫治疗过程中,丙戊酸钠联合癫痫平序贯疗法,中西药作用机制协同、时间互补、效应增强,疗效优于单用丙戊酸钠。     

丙戊酸钠对体外培养许旺细胞增殖及相关蛋白GAP-43、MAG和MBP表达的影响

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对体外培养的大鼠坐骨神经许旺细胞的影响,探讨其促进周围神经再生的作用机制.方法 取SD幼鼠坐骨神经体外培养许旺细胞,应用免疫荧光技术鉴定许旺细胞纯度.将体外培养的许旺细胞分为实验组和对照组,分别给以含与不含VPA( 1.0 mmol)的血清培养液,处理后分别于0、12、24、36、48和72 h采用4-甲偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,免疫组化法检测雪旺细胞特异性蛋白(S-100)、生长相关蛋白(GAP-43)、髓鞘相关蛋白(MAG)和髓鞘碱性蛋白(MBP)表达,以及蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测GAP-43、MAG和MBP表达.结果 与对照组相比,在24、36 h和48 h实验组许旺细胞增殖率显著增加,以48 h两组差别最为明显(P＜0.01);在24、36 h和48 h实验组GAP-43和MAG蛋白表达水平显著增加(P＜0.05);在36 h和48 h实验组MBP蛋白表达水平显著增加(P＜0.05).结论 临床使用剂量的VPA促周围神经再生的作用机制可能与其诱导许旺细胞增殖、上调GAP-43、MAG和MBP蛋白表达水平有关.     

硼替佐米联合丙戊酸钠对胰腺癌细胞株SW1990的生长抑制作用

目的 探讨硼替佐米联合丙戊酸钠对人胰腺癌细胞株SW1990的协同凋亡作用及其机制.方法 以浓度为100 nmol/L的硼替佐米联合3 mmol/L的丙戊酸钠干预SW1990细胞株,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;膜联蛋白V(Annexin V)/碘化丙锭(PI)双染法检测细胞早期凋亡;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞凋亡因子生存素(Survivin)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3的mRNA表达水平;Western blot法检测Survivin、Caspase-3前体(pro-Caspase-3)、裂解的Caspase-3(cleaved-Caspase-3)蛋白表达水平.结果 硼替佐米单药对SW1990的生长抑制作用较弱,而丙戊酸钠单药可有效抑制SW1990细胞的增殖,硼替佐米单药组干预SW1990细胞48 h的早期凋亡率为(13.47 ±2.21)％,而丙戊酸钠单药组为(26.73±2.36)％,两药联合组为(47.06±2.76)％.硼替佐米单药组Survivin mRNA及蛋白水平表达无明显改变、而丙戊酸钠单药组及两药联合组的Survivin、Caspase mRNA及蛋白表达水平均明显下调,cleaved-Caspase-3蛋白表达水平明显上调,各项检测指标联合用药组与单药组比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且两药联合有协同作用,可提高SW1990对硼替佐米的敏感性.结论 硼替佐米联合丙戊酸钠对诱导人胰腺癌细胞株SW1990凋亡有协同增效作用,其机制可能与下调Survivin的表达水平相关.     

丙戊酸钠对胰腺癌细胞株SW1990增殖和凋亡的影响及机制

目的 观察丙戊酸钠(VPA)对胰腺癌细胞株SW1990增殖、凋亡的影响,探讨丙戊酸钠诱导SW1990凋亡的机制.方法 应用1、2、3、4、5 mmol/L的丙戊酸钠干预SW1990细胞,以未干预的细胞作为对照组.采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;取3 mmol/L丙戊酸钠干预SW1990细胞24、48、72 h,流式细胞仪检测细胞凋亡;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测SurvivinmRNA的表达.结果 丙戊酸钠对SW1990细胞有明显的生长抑制作用,呈现明显的浓度依赖性和时间依赖性,不同浓度组、不同时间组间生长抑制率差异有统计学意义(P＜0.05).3 mmol/L丙戊酸钠干预SW1990细胞不同时间的凋亡率分别为(15.79 ±2.18)％、(26.73±2.36)％、(38.74±1.83)％,与对照组早期凋亡率[(2.99±0.87)％]比较,不同时间比较差异有统计学意义(P＜0.05).未经丙戊酸钠干预的SW1990细胞高表达Survivin基因(5.152±1.835),在经3 mmol/L丙戊酸钠干预24、48、72 h后,Survivin基因的表达水平分别为3.977±1.531、2.639±1.017、1.034±0.239,随药物干预时间的延长Survivin基因的表达水平逐渐下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 丙戊酸钠可抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖、诱导凋亡,其机制可能与激活线粒体内源性凋亡途径,下调Survivin基因有关.     

柱前衍生反相高效液相色谱法分析碱性氨基酸

采用柱前衍生反相高效液相色谱法 (RP HPLC)测定碱性氨基酸含量 ,衍生化试剂为 2 ,4 二硝基氯苯 (CDNB) ,流动相为 0 .2mol/L的醋酸 醋酸盐缓冲液 ( pH 5 .2 0 )和甲醇的混合溶液 ,其体积配比为 75∶2 5 ,不需梯度洗脱 ;采用C18柱 ,在波长 36 0nm条件下进行紫外检测 ,碱性氨基酸质量浓度与峰面积呈良好的线性关系 ,相关系数均在 0 .98以上 ,分离效果较好 .     

反相高效液相色谱-柱后衍生法分析检测鱿鱼中的生物胺

建立了水产品中多组分生物胺的反相高效液相色谱-柱后衍生-荧光检测方法。采用荧光试剂邻苯二甲醛（OPA）为柱后衍生化试剂,在Capcell Pak MG-C18色谱柱上,通过梯度洗脱使酪胺、腐胺、尸胺、组胺、胍丁胺、精胺和亚精胺等7种生物胺得到良好分离,在给定的浓度范围内,各组分生物胺呈现良好线性相关（R^2〉0.999）。在水产品中添加生物胺混合标准溶液,平均回收率为88.3%～110.1%,相对标准偏差RSD小于10%。结合水产品的感官鉴定、pH值和TVBN值测定等方法检测水产食品的新鲜程度,分析了鱿鱼在不同保藏温度、保藏时间下的生物胺种类及含量的变化。其中胍丁胺和尸胺在鱿鱼的保藏过程中发生最显著变化,可以作为其质量变化的参考指标。     

常规剂量口服丙戊酸钠引起严重肝损害一例

患儿男,4岁。因“反复抽搐1年,发热4d,全身及眼睑黄染2d”入院。表现为无热抽搐,双眼凝视、面色发白、双手握拳、流涎、意识不清。无口吐白沫、大小便失禁,持续约5min缓解。行常规脑电图检查提示枕区节律慢,大量快波节律;睡眠背景欠佳,额区为主不规则棘-尖波、棘-尖-慢波单发或短．中程爆发,可全导同步。已明确诊断为癫痫,先后给予“托吡酯片25rng,每日2次口服”、“苯巴比妥15mg,每日2次口服”抗癫痫治疗1年余,效果较差,抽搐发作频繁,服药期间多次查肝功能、血常规均正常。     

HPLC法测定吉祥草中β-胡萝卜素

目的:建立吉祥草中β-胡萝卜素的高效液相色谱测定方法.方法:以丙酮-石油醚(1∶1v/v)的混合溶液浸提吉祥革中β-胡萝卜素.色谱条件:色谱柱为DiamonsilC18柱(200mm×4.6mm,5μm),流动相:乙腈-甲醇-乙酸乙酯-三乙胺(80∶10∶10∶0.05);流速:1.0ml·min-1;柱温20℃;检测波长为450nm.进行了线性关系、精密度、稳定性、重复性、回收率等项的考察.结果:β-胡萝卜素的质量浓度在0.0074～0.0666μg范围内线性关系良好(r=0.9999),平均回收率(n=6)为99.33%,稳定性400分钟内RSD=1.94%.结论:该法专属性强,结果准确,重现性好,可用作吉祥草中β-胡萝卜素的含量测定方法.     

HPLC法测定盐酸二甲双胍片的含量

目的建立测定盐酸二甲双胍片含量的方法。方法采用HPLC法,C18柱（250mm×6．0mm,5μ）;流动剌为0．01mol／L磷酸二氢钾缓冲液（内含0．015mol／L高氯酸,pH为3．0）;检测波长为218nm。结果盐酸二甲双胍在8．07～80．74μg／mL浓度范围内线性关系良好（r=0．9991）,平均回收率为98．02％,RSD=0．76％。结论本方法简便、快速、准确,专属性强,可作为盐酸二甲双胍片的含量测定方法。     

丙戊酸钠对羰基氰化物间氯苯腙诱导的成骨细胞氧化应激损伤的保护作用研究

目的 探讨丙戊酸钠（sodium valproic acid,VPA）对羰基氰化物间氯苯腙（carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone,CCCP）诱导的成骨细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法 新生SD大鼠10只,取颅骨采用组织块法分离培养成骨细胞并传代,对第1代细胞行ALP和茜素红染色鉴定。取第3代成骨细胞以2～18μmol/L CCCP分别培养2～18 min,细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)检测细胞成活率,并基于半抑制浓度原理选择合适浓度及培养时间用于制备成骨细胞氧化应激损伤模型;采用0～2.0 mmol/mL VPA培养12～72 h后,CCK-8检测细胞活性,选择合适浓度进行下一步处理。将第3代细胞随机分为4组,包括空白对照组（正常培养细胞）、CCCP组（参照选择的浓度及培养时间行CCCP处理）、VPA+CCCP组（参照选择的浓度及培养时间行VPA预处理+CCCP处理）、VPA+CCCP+ML385组（VPA预处理前用10μmol/L Nrf抑制剂ML385预处理2 h,其余处理方法同VPA+CC...     

HPLC法测定双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量

目的:建立双黄消炎片中盐酸小檗碱含量的测定方法.方法:采用高效液相色谱法,十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱( 250nm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调pH3.0)( 27:73)为流动相检测波长为265nm,进样量为10μl.结果:盐酸小檗碱在1.5 ～ 30 μg范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.9993,盐酸小檗碱平均回收率为98.28％,RSD =1.74％( n=5).结论:本方法可靠性高,准确性和重复性好,适用于双黄消炎片中盐酸小檗碱的含量测定.