p53基因在人食管诱发癌中的突变

目的 :了解抑癌基因p5 3在人食管癌及其癌旁组织中的突变和致癌作用。方法 :采用PCR SSCP和DNA序列分析等方法对 2 4例人食管鳞状细胞癌术后标本和 2 1例移植到重度完全性免疫缺陷 (severecombinedimmunodefi cient,SCID)小鼠并用或不用N -戊基 -N -甲基亚硝基胺 (N amyl N methylnitrosamine ,AMN)处理的人食管正常组织标本 ,进行了p5 3基因外显子 4～ 8的突变研究分析。结果 :在食管癌组织及癌旁组织均检测出p5 3基因突变 ,其中食管癌组织标本中有 18个突变 ,癌旁组织标本中有 10个 ( 10 /17,5 8 8% )突变 ,主要的突变为G A转换。在 14例用AMN处理的人食管正常组织标本中出现 6个 ( 4 2 9% )突变 ;其中密码子 2 83的突变为G A转换。在人食管癌及其癌旁组织中p5 3基因的突变概率差异无统计学意义。结论 :环境因素或内源性AMN可能是河南林县食管癌高发的主要原因之一     

p53基因第72位密码子突变与食管鳞癌临床病理特征关系的研究

目的研究p53基因第72位密码子（p53 codon72）突变与人食管鳞癌临床病理特征的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度（PCR-RFLP）方法检测118例人食管鳞癌组织及癌旁正常食管黏膜组织的p53 codon72的突变及其差异，并分析其与食管鳞癌临床病理特征的关系。结果p53 codon72的Arg／Arg和Pro／Pro或Arg基因型在癌组织和癌旁正常食管黏膜组织的频率分别为11．0％和38．1％、4．2％和7.60A。p53 codon72Arg／Pro基因型在癌组织和癌旁正常食管黏膜组织分布差异具有显著性（χ^2=55.75，P〈0.01），p53 codon72突变与p53蛋白表达有关（χ^2=15．21，P〈0．01）；且p53 codon72的Pro等位基因与食管癌的TNM分期、分化程度和淋巴结转移均呈显著相关（P〈0．01）。结论抑癌基因p53第72位密码子突变在食管癌发生、发展中可能起重要作用。     

Livin蛋白在食管癌中的表达及与p53蛋白相关性研究

目的:探讨凋亡抑制蛋白Livin在食管癌组织中的表达及其与p53蛋白之间的关系。方法:采用免疫组织化学S-P法检测Livin蛋白和p53蛋白在食管癌组织和癌旁正常食管组织中的表达情况。结果:Livin在食管癌组织中的表达明显高于癌旁正常食管组织(P<0.01)。Livin表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移呈正相关(P<0.05),而与癌组织分化程度无关(P>0.05)。p53在食管癌组织中表达明显高于癌旁正常食管组织(P<0.01)。在食管癌组织中Livin与p53表达无关(P>0.05)。结论:Livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。抑癌基因p53的失活与凋亡抑制基因Livin在食管癌的发生方面无相互促进作用。     

食管上皮癌变过程中cyclin E和p21WAF1的表达及其意义

目的研究细胞周期调控因子cyclinE和p21^WAF1基因在食管上皮癌变过程中的表达及其意义。方法应用免疫组化S—P方法和原位杂交方法分别检测48例食管癌组织和相应癌旁组织(正常黏膜17例，非典型增生组织31例)中cyclinE和p21^WAF1蛋白及mRNA表达。结果从食管正常黏膜到非典型增生组织和癌组织，cyclinE蛋白和mRNA阳性表达率皆呈逐渐升高的趋势，食管癌组织和癌旁组织之间差异有显著性。高分化鳞癌中蛋白阳性表达率显著高于其它各组，mRNA阳性表达率显著高于正常黏膜和非典型增生Ⅰ级。p21^WAF1蛋白及mRNA在癌旁组织和癌组织中表达皆较高，两者差异无显著性。cyclinE和p21^WAF1基因表达无显著相关性。结论食管癌变过程中，细胞周期蛋白cyclinE表达水平增高，和组织分化程度显著相关，其异常是食管癌变过程中的早期事件，可能作为食管高分化鳞癌的诊断标志物之一。p21^WAF1基因在食管癌组织中高表达，可能与细胞周期调控的反馈机制有关。     

Livin蛋白在食管癌中的表达及与p53蛋白相关性研究

目的：探讨凋亡抑制蛋白Livin在食管癌组织中的表达及其与p53蛋白之间的关系。方法：采用免疫组织化学S-P法检测Livin蛋白和p53蛋白在食管癌组织和癌旁正常食管组织中的表达情况。结果：Livin在食管癌组织中的表达明显高于癌旁正常食管组织（P〈0.01）。Livin表达与癌组织浸润深度和淋巴结转移呈正相关（P〈0.05）,而与癌组织分化程度无关（P〉0.05）。p53在食管癌组织中表达明显高于癌旁正常食管组织（P〈0.01）。在食管癌组织中Livin与p53表达无关（P〉0.05）。结论：Livin在食管癌组织中异常表达,有望成为食管癌诊断和基因治疗的新靶点。抑癌基因p53的失活与凋亡抑制基因Livin在食管癌的发生方面无相互促进作用。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

p53 、MDR 基因在食管癌及癌旁组织中表达的分析

 目的 探讨食管癌和癌旁组织中p53、MDR基因的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化ABC法及逆转录酶-聚合酶链反应的方法，对50例食管癌和37例癌旁组织中p53、MDR基因的表达情况进行检测。结果 p53基因蛋白在食管癌中有显著表达为68％（34／50），癌旁组织中有表达为59％（22／37）；其中在癌旁正常组织中占54％（13／24），在癌旁非典型增生中占69％（9／13）。MDR基因在食管癌高、中、低分化中的表达水平有极显著意义，癌与正常组织有极显著意义。在不同年龄、性别、肿瘤大小上p53、MDR基因的表达无显著意义。结论 p53、MDR基因在食管癌中均呈高水平表达，癌旁组织中MDR有表达，p53基因突变早于组织形态学改变。     

p73基因在食管癌中的转录表达及其意义

目的：检测p73 mRNA在食管癌中的表达情况，探讨p73基因在食管癌发生、发展中的角色和作用机制。方法：采用逆转录多聚酶链反应技术（RT－PCR）检测37例食管鳞状细胞癌肿瘤组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73 mRNA的转录表达，并探其与食管癌临床病理特性的关系。结果：37例食管肿瘤组织中有21例（15．8％）p73 mRNA过度表达，其过度表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常组织（P＜0．05），但与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05）。结论：食管肿瘤组织中存在p73基因的过度转录表达，可能参与了调控食管癌的发生过程，它的存在并没有阻止食管癌的进展，在食管癌中可能没有担当起主要的抑癌作用。     

食管脱落上皮细胞中p53基因突变的检测

目的 探讨在食管拉网细胞中进行食管癌基因检测的方法及可行性,了解食管癌前期病变细胞中p53基因的突变与癌变的关系。方法 对四川省盐亭县1982年进行食管癌普查的食管拉网脱落细胞涂片标本,应用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)方法,检测其p53基因第5外显子及第7外显子的突变情况。结果 全组48例标本中,食管正常上皮和重度不典型增生上皮各24例,p53基因检测均获成功。食管重度不典型增生上皮细胞中有5例检测到突变,均为p53基因第7外显子突变,而第5外显子未检测到突变;正常食管鳞状上皮拉网脱落细胞中未发现突变。检测到突变的5例食管上皮重度不典型增生者,有3例分别在10年、12年和14年后转变为食管癌。结论p53基因突变的食管上皮不典型增生细胞具有明显的癌变趋势;对食管拉网脱落细胞涂片标本进行微量DNA的提取、扩增和基因检测,可作为研究食管癌前期病变的一种新方法。     

胆管癌p53-bax线粒体凋亡通路的甲基化研究

目的探讨胆管癌p53-bax线粒体凋亡通路中多个基因的甲基化状态及其在胆管癌发生过程中的意义。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP），对胆管癌组织和癌旁组织中的p14^ARF、DAPK和TMS1／ASC基因启动子的甲基化状态进行检测，并对胆管癌组织中p53基因外显子5～8进行DNA序列分析。结果36例胆管癌组织标本中，有24例（66．7％）至少存在1个抑癌基因的甲基化，其中p14^ARF、DAPK和TMS1／ASC基因甲基化的比率分别为25．0％、30．6％和36．1％；癌旁组织中，有5例（13．9％）存在抑癌基因的甲基化，其中TMS1／ASC3例（8．3％），DAPK2例（5．6％）。36例胆管癌组织标本巾，有22例（61．1％）存在p53基因的突变。p53突变伴1个以上抑癌基因甲基化者共14例，占38．9％，其发生率与胆管癌的病理类型、分化程度和浸润深度有关（P〈0．05）。结论p53-bax线粒体凋亡通路中，DNA甲基化是胆管癌中常见的分子事件。癌旁组织中，DAPK和TMS1／ASC基因的甲基化率虽然较低，但可能有早期诊断意义。p53突变伴抑癌基因的甲基化与胆管癌的病理生物学行为有关，并趋向于较高的恶性程度。     

食管鳞状上皮细胞癌中P53基因突变的PCR-SSCP检测

应用PCR－SSCP银染技术检测了40例食管鳞状细胞癌p53基因第5、6、7和第8外显于的突变情况。结果显示：13例（32．5％）有p53基因突变，突变主要发生在第5和第8外显子，与癌分化程度无明显关系，但伴淋巴结癌转移病例中p53基因的突变率明显高于无转移者（P＜0．05）。本研究提示，p53基因突变存在于中、晚期食管癌中，并可能与食管鳞癌的进展与转移有关。     

组织芯片应用于原发性鼻咽癌中p53表达的高通量分析

目的：通过对不同临床分期鼻咽癌(NPC)中p53蛋白表达的进一步研究，探讨高通量组织微阵列技术(high—throughput tissue microarray)应用于大规模临床标本高效筛查的可行性。方法：用组织阵列仪(tis—sue arrayer)制备连续系列分区排列的组织芯片，然后用p53单抗免疫组织化学法检测一张组织芯片上320例各类型的鼻咽活检组织标本中p53蛋白表达，并分析p53表达在不同鼻咽组织的分布状况及其与临床分期的相关性。结果：在正常鼻咽黏膜组织、癌旁组织及癌组织中p53蛋白的检出率分别为0(0／29)、16．7％(4／24)及61．4％(164／267)，NPC组织中p53蛋白表达率明显高于其他鼻咽非癌组织，P＜0．001，其中癌旁4例全为弱阳性，癌组织中164例中弱阳性为112例，占41．9％(112／267)，而强阳性为52例，占19．5％(52／267)；p53表达与鼻咽癌的临床分期无显著相关性，P=0．078，而p53过表达(强阳性)却与鼻咽癌的临床中晚期密切相关，P=0．0071。结论：鼻咽癌中p53蛋白的高频核积累提示p53蛋白功能的抑制在鼻咽癌的发生发展中起重要作用；应用组织芯片(tissue chip)大规模高效筛查临床组织标本是可行性的，具有快速、方便、经济的特点。     

P~(53)突变产物在睑板腺癌中的增强表达及其意义

我们采用免疫组化S－P法，对17例石蜡包埋睑板腺癌及癌旁组织标本的P53突变蛋白表达进行了检测。结果：17例癌组织有12例表达阳性，阳性率71％。其中分化型7例，6例呈阳性（86％）表达。在一组原发灶及淋巴结转移癌配对标本中，同一病人之两个部位P(53)突变蛋白表达差异无明显意义。癌旁（睑缘）组织17例中5例上皮有异常增生，且同时伴有P(53)突变蛋白呈强阳性表达。以上结果提示：抑癌基因P53的突变在睑板腺癌的发生中是一个比较常见的基因改变，且在分化型癌的发生中表现明显；P(53)基因异常发生在肿瘤转移之前且在淋巴道转移中可能起重要作用；P(53)突变蛋白在癌旁上皮异型增生组织中的过度表达具有十分重要的意义。     

食管癌及癌旁组织中p53、MDR基因表达的临床意义

目的 探讨食管癌和癌旁组织p53,MDR基因的表达及其临床意义。方法 采用免疫组化，ABC法及逆转录酶-聚合酶链反应的方法，对50例食管癌和37例癌旁组织中p53,MDR基因的表达情况进行检测。结果 p53基因蛋白在食管癌中表达为68%（34/50），癌旁组织中表达59%（22/37），其中在正常组织中占54%（13/24），在非典型增生中占69%（9/13），MDR基因在食管癌高，中，低分化中的表达水平有极显著意义。癌与正常组织有极显著意义，在不同年龄，性别，肿瘤大小上p53,MDR基因的表达无显著意义。结论 p53,MDR基因在食管癌中均呈高水平表达，癌旁组织中MDR有表达，p53基因突变早于组织形态学改变。     

胃癌组织中p53基因突变及p53和mdm2蛋白表达的研究

目的：探讨mdm2和p53基因异常在胃癌发生发展中的作用以及两者相关性。方法：应用免疫组化技术检测58例胃癌组织以及相应癌旁组织中mdm2和p53蛋白的表达；PCR-SSCP银染技术检测p53基因exon5～8突变情况。结果：胃癌组p53和mdm2蛋白阳性率分别为86．21％（50／58）和29．31％（17／58），癌旁组织组p53和mdm2蛋白均为阴性，胃癌组p53和mdm2蛋白阳性率明显高于癌旁组织组，两两间差异有统计学意义，P=0．0000、P=0．0001。胃癌组织中p53和mdm2蛋白表达率与肿瘤大小、组织学类型、分化程度、淋巴结转移以及患者年龄等无显著相关性，P〉0．05。mdm2蛋白阳性表达与p53蛋白过表达呈显著正相关,X^2=11．1839，P=0．0008，r=0．4391。2例胃癌组织检测到p53基因突变，突变均位于exon5，58例相应癌旁组织均禾检测到p53基因突变。结论：mdm2和p53蛋白异常表达与胃癌发生有关，p53基因突变可能并非胃癌组织中p53蛋白异常累积的主要原因，mdm2蛋白在胃癌发生发展中的作用可能与p53蛋白密切相关。     

p53基因与原发性肝癌临床特征的关系

目的 探讨p53基因在原发性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达及其与临床特征的关系.方法 应用免疫组化(PV-9000二步法)检测50例HCC组织、30例痛旁组织和10例正常肝组织中p53的表达.结果 HCC组织中p53表达阳性率为42.0%(21/50).HCC组织巾p53的阳性表达率高于癌旁组织及正常肝组织(P<0.05).p53基因的表达与肿瘤转移相关(P<0.05).结论 p53的突变可能在HCC的发生和发展中起重要作用.     

食管癌中DNA修复基因MGMT启动子区CpG岛过甲基化研究

目的：探索O~0-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(O~6-methylguanine-DNA methyltransferase,MGMT)基因启动子区过甲基化状态与食管癌的关系。方法：采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)分析食管癌、癌旁和正常食管黏膜细胞中MGMT基因启动子区过甲基化状态。用免疫组织化学SP法检测上述组织中MGMT蛋白表达情况。结果：76例食管癌组织中有26例(34.2%)MGMT基因启动子过甲基化,相应的癌旁组织中有8例发生甲基化,而正常食管黏膜细胞中均无甲基化。所有甲基化的癌组织中均无MGMT蛋白表达,而所有非甲基化的癌组织、相应癌旁组织和8例正常组织中均有MGMT蛋白表达。结论：MGMT基因启动子区过甲基化而使其蛋白表达缺失,可能是食管癌发生的重要因素。     

食管鳞状细胞癌及癌前病变组织中p16基因甲基化的研究

目的：探讨食管鳞状细胞癌及癌前病变纽织p16基因CpG岛的甲基化情况．及其在食管癌发生和早期诊断中的价值。方法：采用MSP方法，对食管癌前病变不同阶段、鳞状细胞原位癌和浸润癌的病变组织进行了甲基化检测．并与其相应的正常组织和慢性食菅炎组织的甲基化情况进行对比分析。结果：轻、中、重度不典型增生、鳞状细胞原位癌和浸润癌的甲基化频率分别为22．73％(5/27)、46．15％(6/13)、77．78％(7/9)、78．57％(11/14)和64．86％(24/37)。67例正常对照组织中3例(4．48％)p16基因甲基化，与病变组织相比，差异有统计学意义，P=0．000。10例慢性食管炎组织中1例(10％)p16基因甲基化。结论：p16基因甲基化可能是食管癌发生的最早期事件之一。     

高发区食管癌患者p16基因甲基化及其表达的比较研究

目的:比较p16基因甲基化在食管癌高发区河南林州(北方组)和广东揭阳(南方组)之间的异同,探讨p16基因甲基化在不同气候环境条件下的两地食管鳞癌(ESCC)发生中的作用。方法:采用甲基化特异性PCR方法(MSP)分别检测两地食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用EnVision免疫组化法检测两地食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果:南方组75例标本中,食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因甲基化率分别为41.3%(31/75)、13.3%(10/75)和6.67%(5/75);癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为29.3%(22/75)和56.7%(17/30);31例p16基因甲基化阳性标本中有2例(6.4%)检测到p16蛋白的表达,而44例p16基因甲基化阴性标本中有20例(45.5%)检测到p16蛋白的表达。北方组65例标本中,食管癌组织、癌旁组织、切缘组织p16基因甲基化率分别为52.3%(34/65)、16.9%(11/65)和7.69%(5/65);食管癌组织和癌旁组织p16蛋白的阳性表达率分别为32.3%(21/65)和66.7%(20/30);34例p16基因甲基化阳性标本中有4例(11.8%)检测到p16蛋白的表达,而31例p16基因甲基化阴性标本中有17例(54.8%)检测到p16基因的表达。两地组内癌组织p16甲基化率均显著高于癌旁组织和切缘组织,p16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关(P<0.01)。两地同类组织比较p16甲基化率和p16蛋白表达率均无显著性差异(P>0.05)。结论:p16基因异常甲基化后功能失活可能是南、北两地食管癌癌变过程的重要事件,在我国南北环境气候条件不同的两地高发区食管癌的发生中均起着重要的作用。本研究为环境因素和p16基因功能之间的生物学关联在食管癌的发生中提供了一定的证据。     

p73蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨p73蛋白与食管癌临床病理特征的关系及其临床意义。方法 采用免疫组化技术检测37例食管鳞状细胞癌组织、癌旁组织、区域淋巴结和相应正常食管组织中p73蛋白的表达情况。结果 37例食管癌组织中有18例（48．6％）p73蛋白呈过度表达，其阳性表达率显著高于相应的癌旁组织、区域淋巴结和正常食管组织（P＜0．05）；食管癌组织中p73蛋白过表达与食管癌TNM分期、细胞分化程度和病理类型均无明显关系（P＞0．05）。结论 p73蛋白在食管癌组织中呈高水平表达，p73蛋白可能参与了食管癌的发生、发展过程。