抗氯喹伯氏疟原虫ANKA株过度表达的54kDa蛋白免疫电镜定位

抗氯喹伯氏疟原虫ANKA株过度表达的54kDa蛋白是我们首次发现的一种蛋白,本文应用免疫电镜技术对其在伯氏疟原虫ANKA株体内的定位进行了研究,结果表明54kDa蛋白主要散在分布于疟原虫滋养体及裂殖体胞质中;疟原虫寄生的红细胞中也有少量分布;抗氯喹伯氏疟原虫体内54kDa蛋白含量远高于氯喹敏感疟原虫。本文结果有助于理解疟原虫的抗氯喹机制。     

间日疟原虫的体外培养研究进展

间日疟原虫的研究由于体外培养技术的缺乏而进展迟缓。而体外连续性培养体系的建立由于间日疟原虫的本身特性及对侵入红细胞的特异性选择而受阻。近几年，研究用源自血色病患者血液和脐带血中的网织红细胞短期体外培养，可使间日疟原虫在体外生存达到一个月左右。目前，使用实验室源自脐带血造血干细胞分化的红系细胞能够不断的提供网织红细胞以及源于正常人肝组织的肝细胞株HC-04的新建立，完成了间日疟原虫体外连续性培养的目的。这里，我们着重介绍间日疟原虫的体外连续性培养技术。     

伯氏疟原虫氯喹敏感株和抗性株感染小鼠肝、肾、肺超微结构的比较

目的：研究伯氏疟原虫（Plasmodium berghei)氯喹抗性（RC）株与敏感（N）株致病力和宿主对不同虫株感染反应的差异。方法：比较伯氏疟原虫RC株和N株感染ICR小鼠后期、肝、肾、肺等重要脏器超微结构的病理学改变。结果：N株感染后期、肺血窦、肾间质和毛细血管、肺泡毛细血管含有较多的感染疟原虫红细胞,肺泡壁毛细血管内皮细胞有较多的突起与疟原虫感染红细胞相接触。较多的肝细胞、肾小球旁细胞、肾小管上皮细胞,肺泡Ⅰ型和Ⅱ型细胞出现膜破溃,细胞器和胞质流失等不可逆的坏死性病变,一些肝血窦、肾小管和肺泡内可见多量的细胞碎片。RC株感染后期,肝血窦、肾间质充血,含有较多的感染疟原虫红细胞。肝细胞、肾小管上皮细胞的病变以线粒体肿胀为主的变性,可见肝脏部分变性肝细胞出现恢复状态,肾小球毛细血管内皮细胞下、基膜、系膜区可见电子致密物沉着,肺泡隔内可见较多的单个核细胞。结论：N株毒力较强,对宿主`能和肺细胞超微结构的损害为不可逆的坏死性病变,呈急性变质性炎症过程;而RC株毒力明显减弱,对宿主肝、肾和肺细胞超微结构的损害以变性为主,呈慢性增生性炎症经过。     

恶性疟原虫红内期的体外培养及其影响因素

液氮内保存的FCC—1株恶性疟原虫红内期用蜡烛缸—平皿法体外连续培养40天。疟原虫复苏后培养的第3天原虫密度开始上升.第11天达到最高峰,其中一皿的红细胞含虫率高达20.56%。影响恶性疟原虫体外培养的有关因素如RPMI—1640培养液,血清和红细胞,本文进行了讨论。     

恶性疟原虫地理株体外培养及vat基因转录方法的建立

目的建立恶挫疟原虫地理株连续体外培养方法,并采用荧光定量PCR技术分析培养虫株var基因转录类型。方法采用常规RPM11640培养基和添加AlbumaxIl等成分,建立2株恶性疟原虫地理株的体外培养,并采用荧光定量PCR技术检测中晚期虫体var基因转录变化。结果成功体外连续培养2株恶性疟原虫野生株,并建立了荧光定量PCR检测var基因转录的方法,用该方法检测出该虫株var基因优势转录类别。结论建立的疟原虫体外培养方法和var基因转录检测技术可用于我国恶性疟原虫var基因致病作用的分析。     

棘阿米巴CB/S1内共生细菌的超微结构

目的:观察棘阿米巴内共生细菌的超微结构。方法:用地衣红-卡红染色确认棘阿米巴土壤分离株CB/S1内存在共生细菌,在透射电镜下观察其超微结构。结果:透射电镜下可见在棘阿米巴胞质内不规则分布的共生细菌,呈棒状,具有双层膜,膜外附着许多棘阿米巴宿主的核糖体。结论:内共生细菌的存在对宿主阿米巴的结构没有引起特殊的改变。     

低温保存恶性疟原虫分离株溶化10余天后复苏培养成活报告

目的 :了解恶性疟原虫分离株在液氮干涸虫血溶化 10余天后能否复苏培养成活。方法 :运用Trager等体外连接培养法。结果 :2分离株均培养成活 ,并正常传代繁殖。结论 :低温保存 2年的冰冻含虫红细胞经慢速溶化后在 10～ 2 5℃常温下 ,其寿命可长达 10天左右。     

鸡疟原虫在蚊体寄生各阶段发育规律和形态学观察

为了研究用免疫方法预防疟疾而取得抗原,必须大量培养繁殖疟原虫。目前国内外关于疟原虫的人工离体培养尚未成功,在培养过程中发育各阶段的形态变化规律也缺乏系统的完整资料。为了掌握这些规律以利进行人工培养,我们对疟原虫的发育各阶段的形态变化做了比较详细的观察。当前国内研究疟原虫的动物实验所用虫种有猴疟原虫、鼠疟原虫和鸡疟原虫,这三种虽媒介不同,但其在蚊体的发育规律基本相似,而其中以鸡疟的实验条件最为简便易行。因此我们对鸡疟原虫在伊蚊体内寄生阶段进行了以下实验观察。     

恶性疟原虫红内期体外同步化培养实验观察

本文定时观察了用秋水仙碱处理体外培养恶性疟原虫后的红细胞感染率及环状体、大滋养体和裂殖体各期的比例,并与用山梨醇处理进行了比较。结果发现,秋水仙碱处理后疟原虫可维持2～3个生物周期的同步化发育,并且处理后的红细胞感染率可在14％以上。山梨醇处理后疟原虫可维持2个生物周期的同步化发育,最高红细胞感染率为7.7％。     

虫库FCC_1/HN恶性疟原虫分离株某些生物活性鉴定

为了便于进行疟疾疫苗保护性观察及建立恶性疟原虫克隆株的需要,对虫库保存的恶性疟原虫FCC1/HN分离株进行某些生物特性鉴定。通过体外培养条件变更以观察现存FCC1/HN分离株恶性疟原虫的生长特性,以体外微量法测定该株原虫对氯喹的敏感性及用套式PCR/RFLP分析方法对该株原虫二氢叶酸还原酶基因型进行鉴定。结果显示,现存FCC1/HN株恶性疟原虫对体外培养条件适应性强,对氯喹高度敏感,DHFR基因的第108号编码为AAC突变型。建议对虫库保存的恶性疟原虫FCC1/HN分离株的生物活性定期进行鉴定。     

澜沧江下游航运区疟疾学调查

目的 了解澜沧江下游航运区疟疾流行情况和恶性疟原虫对氯喹、青蒿琥酯的敏感性。 方法 居民带虫普查、IFA检测、疟史访问、发热病人血检、媒介按蚊、社会经济等调查和恶性疟原虫对氯喹、青蒿琥酯敏感性测试。 结果 各种人群累计平均疟原虫率为8.36％(226／2 704),其中间日疟占58.85％,恶性疟占40.27％,混合疟占0.88％。发热病人疟原虫检出率为30.03％(106／353)。居民、搬运工人和船员的疟史率,2001年分别为38.39％、8.82％和1.06％。主要媒介微小按蚊占捕获10种244.只按蚊总数的10.66％,叮人率为0.75只／人工·h。恶性疟原虫对青蒿琥酯和氯喹的抗性率各为8.70％和96.15％;半数抑制量(ID50)分别为13.44和91.25nmoL／L。 结论 目前澜沧江下游航运区疟疾呈不同程度流行状态,防治工作薄弱,急待加强。氯喹仍不宜治疗恶性疟,青蒿琥酯的敏感性有所下降,应引起重视。     

恶性疟原虫单克隆抗体保护性机制的实验研究

用体外抑制试验、调理试验和细胞毒试验等方法,对抗恶性疟原虫红内期McAb之功能特性进行了研究。17株McAb中有7株对同步化培养的恶性疟原虫的体外增殖具有明显的抑制作用;抑制强度取决于剂量和作用时间。在McAb—IgG浓度为0.6mg/ml时,上述7株McAb的抑制活性均在94％以上。在6株McAb中,有4株能促进巨噬细胞吞噬疟原虫而发挥调理作用。在7株McAb中,有4株能加强腹腔细胞杀伤和杀死疟原虫而表现出细胞毒活性。结果提示,恶性疟原虫McAb似有“多功能”、“双功能”和”单功能”之分,用“多功能性McAb”纯化的疟疾抗原,在制备疟疾亚单位疫苗方面可能更有意义。     

Inadequate prophylaxis of malaria with dapsone-pyrimethamine

The dapsone-pyrimethamine combination (100 mg of dapsone, 12.5 mg of pyrimethamine [Folaprim; Maloprim, one tablet a week) is considered to provide adequate prophylaxis for Plasmodium falciparum malaria, but to be inadequate for the prevention of P. vivax malaria. Field trials and case reports, however, have shown the comparable efficacy of this combination in the suppression of parasitaemias caused by both parasites. In Lae, Papua New Guinea, 12 patients with clinical signs of malaria had serum concentrations of dapsone-pyrimethamine which were consistent with appropriate weekly use of this combination. The fact that 10 of these patients had P. vivax malaria supports the hitherto unsubstantiated view that dapsone-pyrimethamine can be ineffective in suppressing parasitaemias caused by this parasite. In the two patients with P. falciparum malaria, host factors rather than parasite resistance to dapsone-pyrimethamine were implicated in the development of the parasitaemias.     

Quinimax治疗非洲恶性疟疾的临床疗效研究

目的观察Quinimax对非洲恶性疟疾的临床疗效。方法用法国生产Quinimax静脉注射治疗非洲恶性疟疾213例。同时用国产蒿甲醚胶囊口服治疗恶性疟疾213例进行疗效比较，5d 1疗程。结果Quinimax组治疗有效率100％，其中临床治愈率56．3％，显效率43．7％，血内疟原虫清除率56．3％。复燃4．2％；蒿甲醚胶囊组治疗有效率100％，其中临床治愈率71．4％，显效率28．6％，血内疟原虫清除率71．4％。复燃5．6％。两组临床治愈率比较差异具显著性（P〈0．01）；血内疟原虫清除率比较差异具显著性（P〈0．01）。Quinimax组对疟原虫血内清除率低于蒿甲醚胶囊组差异具显著性（P〈0．01）。结论Quinimax和蒿甲醚胶囊对非洲黑人恶性疟疾的治疗均具有相当高的临床疗效，但5d疗法Quinimax对疟原虫血内清除率较低，该地区恶性疟疾对Quinimax可能产生了抗药性。     

In vitro susceptibility of Plasmodium falciparum isolates to halofantrine in the Central Province of Papua New Guinea

Halofantrine is a newer antimalarial drug which has not been approved for clinical use in Papua New Guinea. We assessed 21 Central Province isolates of Plasmodium falciparum for their in vitro susceptibility to halofantrine. The concentration required to inhibit 50% of parasite growth (IC50) ranged from 0.05 to 7.0 nM with a mean of 1.90 nM and a median of 1.50 nM. The minimum inhibitory concentration (MIC) values ranged from 2.5 to 50 nM with a median of 5.0 nM. All but one isolate had an MIC of 10 nM or less. These results indicate that halofantrine would be a suitable alternative for the treatment of P. falciparum malaria in the region in the future, if and when the need arises, provided that its use was carefully monitored.     

恶性疟原虫体外抑制实验方法的改进

以恶性疟原虫融合抗原PfCP-2.9免疫兔血清为待测血清,将起始原虫率从1%降至0.2%～0.5%,采用2种方法作对比,即一组每24 h更换培养液、加入免疫血清,另一组72 h内不更换培养液也不加免疫血清试验方法.培养至72 h,涂片,油镜下计数,计算原虫感染率和抑制率.结果2组的抑制率相近,经统计分析无显著差异.测定不同剂量抗原免疫血清的抑制率,结果显示抑制率与免疫血清中特异抗体滴度呈正相关,2种方法的结果无显著差异.研究表明通过降低起始原虫率可将常规体外抑制实验由需每天换液改为72 h不换液.     

Allelic diversity of merozoite surface protein 2 gene of P falciparum among children in Osogbo, Nigeria

The genetic diversity of Plasmodium falciparum (P falciparum) infections in humans is implicated in the pathogenesis of malaria. This study provides the first estimate of the genetic diversity and genotype multiplicity of Plasmodium falciparum infection in children with uncomplicated P falciparum malaria in Osogbo, Nigeria. One hundred and one isolates were used for analysis of parasite population polymorphism and genotyped by nested-PCR of merozoite surface protein 2 (MSP2) block 3. Amplicons were obtained for all the 101 genotyped samples in MSP2 PCR with 9 alleles varying in size between 300 and 800 base pair. Thirty-three (31.7%) samples had FC27 allele while 27 (26.7%) had 3D7 allele and 35 (34.7%) had mixed alleles (3D7+FC27). The Multiplicity of Infection (MOI) in the population was 1.6. Children in the age group of > 4-8 years had the highest number of different genotypes in their samples (1.8). The number of MSP2 bands per isolate was lower in the older age group (1.3) but the difference was not statistically significant. Children with parasite density range 5001-10 000 had the highest MOI of 2 while those with parasite density range 1000-5000 had the lowest of 1.5. In conclusion, the present study shows that the field isolates are highly diverse in respect of MSP2 and multiplicity of infection was neither age nor parasite density dependent in the study population.