miR-200a对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移、侵袭调控作用观察及其靶向mRNA和lncRNA预测分析

目的 观察微小RNA-200a(miR-200a)对宫颈癌细胞系HeLa增殖、迁移和侵袭的调控作用,对miR-200a的靶向mRNA及靶向长链非编码RNA(lncRNA)进行预测分析。方法 取人宫颈癌细胞系HeLa分为1、2、3及4组,分别转染miRNA模拟物miR-200a mimics、miRNA抑制物miR-200a inhibitor、对照物mimics NC及inhibitor NC。培养48 h时采用qRT-PCR法检测各组细胞miR-200a表达;采用CCK8法检测各组细胞增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,采用Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力。使用miRNA数据库在线预测miR-200a靶向mRNA和靶向lncRNA,采用基因本体论功能注释和京都基因和基因组百科全书富集分析法分析宫颈组织中miR-200a的靶向mRNA和靶向lncRNA的生物学功能。结果 与3组比较,1组细胞miR-200a相对表达量高;与4组比较,2组细胞miR-200a相对表达量低（P均<0.05）。与3组比较,培养72、96 h时1组细胞增殖...     

microRNA-99b过表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响

目的：探讨上调microRNA-99b（miR-99b）表达对宫颈癌细胞增殖、侵袭及化疗敏感性的影响。方法选取24例宫颈癌患者，采用qRT-PCR法分别检测宫颈癌组织、癌旁组织、正常宫颈上皮组织及宫颈癌细胞（ HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系）中miR-99b的表达；将miR-99b转染至宫颈癌细胞株，采用CCK-8法、Transwell法分别检测转染后宫颈癌细胞的增殖、侵袭能力，CCK-8法检测转染后宫颈癌细胞对顺铂、卡铂的半数有效抑制浓度（IC50）。结果宫颈癌HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系中miR-99b的表达水平分别为0．64±0．08、0．31±0．06、0．45±0．07、0．23±0．04，均低于正常宫颈上皮组织（1．00±0．00）（P均＜0．05），C4-1细胞系和SiHa细胞系中miR-99b的表达水平较HeLa细胞系和CaSki细胞系更低。转染miR-99b后宫颈癌HeLa细胞系、C4-1细胞系、CaSki细胞系、SiHa细胞系增殖能力降低、侵袭能力被明显抑制，细胞对顺铂、卡铂的敏感性明显增强。结论上调miR-99b表达能够抑制宫颈癌细胞的增殖和侵袭能力，增强肿瘤细胞的化疗敏感性。     

miR-324-5 p通过靶向TRIP13基因调控宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡

目的 探讨miR-324-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移和凋亡的影响及调控机制.方法 培养正常宫颈细胞Ectl/E6E7和宫颈癌细胞系Hela、C-33A、CaSki、SiHa,实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测细胞中miR-324-5p和甲状腺激素受体因子(TRIP)13 mRNA表达,Western印迹...     

沉默miR-135a-5p对宫颈癌细胞增殖、侵袭的影响及作用机制

目的 探究沉默微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)对人宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响，重点分析miR-135a-5p在宫颈癌HeLa细胞中的作用机制。方法 将宫颈癌HeLa细胞经培育后分为对照组、过表达组、沉默组，对照组不做处理，过表达组转染miR-135a-5p mimics上调载体，沉默组转染miR-135a-5p inhibitor下调载体。使用实时荧光定量法检测每组宫颈癌HeLa细胞中miR-135a-5p表达量；四甲基偶氮唑盐法检测每组宫颈癌HeLa细胞增殖水平；Transwell小室法检测每组宫颈癌HeLa细胞侵袭水平。结果 与对照组比较，过表达组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、miR-135a-5p、宫颈癌HeLa细胞迁移数、侵袭数明显升高，宫颈癌HeLa细胞凋亡能力明显降低(P<0.05);与对照组比较，沉默组(24 h、48 h、72 h)宫颈癌HeLa细胞增殖能力、迁移数、侵袭数、miR-135a-5p明显降低，凋亡能力明显升高(P<0.05);与过表达组比较，沉默组(24 h、48 h、72 ...     

miR-188-5p靶向Nek6对宫颈癌细胞的影响及机制

目的探究微小RNA-188-5p(miR-188-5p)对宫颈癌细胞增殖、侵袭、凋亡、迁移的影响及其作用机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)对33例宫颈癌患者的癌组织及癌旁组织中的miR-188-5p的表达水平进行检测。常规培养宫颈癌HeLa细胞,利用脂质体分别将miR-188-5p模拟物(mimics)及阴性对照转染至HeLa细胞。采用甲基噻唑基四唑(MTT)与平板克隆形成实验检测细胞存活率及克隆数目。流式细胞仪分析细胞凋亡;Transwell小室法分析侵袭与迁移;利用Targetscan及双荧光素酶报告基因实验分析miR-188-5p对NIMA相关激酶(Nek)6的靶向性作用;构建Nek6小干扰RNA(si-Nek6),观察抑制Nek6的表达对细胞生物学行为的影响。结果宫颈癌组织、癌旁组织中miR-188-5p的相对表达量差异有统计学意义(P<0.05);转染miR-188-5p mimics或转染si-Nek6可降低细胞增殖、克隆形成能力,减少迁移和侵袭细胞数,并增加细胞凋亡率;miR-188-5p与Nek6基因的3′UTR结合,抑制Nek6的蛋白表达(P<0.05);Nek6过表达可逆转miR-188-5p对HeLa细胞生物学行为的调控作用。结论miR-188-5p可能靶向下调Nek6抑制宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭,促进细胞凋亡。     

PGM5-AS1抑制miR-4728-5p对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响

目的 研究长链非编码RNA(lncRNA)葡萄糖磷酸变位酶样蛋白5反义(PGM5-AS)1对微小RNA(miRNA)-4728-5p的靶向调控及对宫颈癌细胞侵袭、转移的影响。方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测宫颈癌组织中PGM5-AS1表达。在宫颈癌SiHa细胞中转染pcDNA3.1-PGM5-AS1或anti-miR-4728-5p。采用噻唑蓝(MTT)法检测SiHa细胞的增殖,平板克隆形成实验分析细胞的克隆形成,Transwell小室法评估细胞的侵袭迁移,Western印迹测定细胞中细胞增殖抗原Ki67、E钙黏蛋白(E-cadherin)、N钙黏蛋白(N-cadherin)蛋白表达。生物信息学预测与双荧光素酶报告实验验证PGM5-AS1对miR-4728-5p的靶向调控。qRT-PCR检测miR-4728-5p的表达。结果 宫颈癌组织中PGM5-AS1的表达量明显减少(P<0.05)。转染pcDNA3.1-PGM5-AS1显著降低SiHa细胞的细胞存活率、克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数、Ki67和N-cadherin蛋白水平,并明显提高E-cadherin蛋白...     

miR-520f-3p靶向LAMA3对结直肠癌细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨miR-520f-3p靶向层黏连蛋白(LAMA)3对结直肠癌(CRC)细胞增殖、迁移的影响。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)分别检测病理组织样本、正常结直肠细胞FHC及CRC细胞SW480、LOVO、HCT116、HT29中miR-520f-3p表达;Western印迹检测病理组织样本中LAMA3蛋白表达。将对数生长期的LOVO细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-520f-3p inhibitor组、mimics NC组、miR-520f-3p mimics组、miR-520f-3p mimics+pcDNA组、miR-520f-3p mimics+pcDNA-LAMA3组;qRT-PCR检测各组细胞中miR-520f-3p表达;CCK-8法检测各组细胞增殖;划痕实验检测各组细胞迁移;Western印迹检测各组细胞中LAMA3、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白(Cyclin)D1、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达;荧光素酶报告基因实验检测miR-520f-3p与LAMA3的靶向关系;采用裸鼠皮下注射上述LOVO细胞以构建裸鼠体内...     

miR-9-5p通过靶向FOXO1基因调控食管癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的 探讨miR-9-5p通过靶向叉头框转录因子O1(FOXO1)对食管癌Eca-109细胞体外增殖、侵袭和迁移能力的调控作用。方法 在食管癌Eca-109细胞中分别转染miR-9-5p inhibitor和NC-inhibitor,分别设置为anti-miR-9-5p组和NC组,并设置未转染的细胞为Blank组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组细胞中miR-9-5p的表达水平,噻唑蓝(MTT)法、Transwell实验分别检测细胞增殖、侵袭和迁移能力。通过生物信息学在线软件预测miR-9-5p与FOXO1互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证二者靶向关系。采用qRT-PCR和蛋白免疫印迹法(Western blotting)分析miR-9-5p对FOXO1的调控作用。结果 anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中miR-9-5p的表达水平、OD值、侵袭和迁移细胞数均显著低于NC组和Blank组(P0.05)。miR-9-5p与FOXO1存在互补结合位点,双荧光素酶报告基因实验分析结果显示,miR-9-5p和FOXO1能够靶向结合。anti-miR-9-5p组Eca-109细胞中FOXO1 mRNA和蛋白表达水平明显高于NC组和Blank组(P0.05)。NC组和Blank组细胞中以上指标均无明显改变(P0.05)。结论 干扰miR-9-5p的表达可通过靶向FOXO1基因抑制食管癌Eca-109细胞的体外增殖、侵袭和迁移能力。     

MiR-32对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及机制

目的探讨miR-32靶向CCNE2调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的增殖、迁移和侵袭的机制。方法实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测30例NSCLC患者癌组织及其匹配癌旁组织和支气管上皮细胞株16-HBE及NSCLC细胞株A549、H460和H1299中miR-32 mRNA表达水平;选择A549和H1299细胞为研究对象,将细胞随机分8组:NC组(转染miR-NC)、miR-32组(转染miR-32 mimics)、NC inhibitor组(转染miR-32-NC)、miR-32 inhibitor组(转染miR-32 inhibitor)、si-NC组(转染对照干扰RNA)、si-CCNE2组(转染CCNE2干扰RNA)、miR-32+vector(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1)、miR-32+CCNE2组(共转染miR-32 mimics和pcDNA3.1-CCNE2),转染按照Lipofectamine^TM2000试剂进行。qRT-PCR检测转染效果,qRT-PCR和Western印迹分别检测CCNE2 mRNA和蛋白...     

miR-183靶向DDR1调控乳腺癌细胞迁移侵袭的分子机制

目的研究miR-183对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其潜在机制。方法运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)、Western印迹检测乳腺癌细胞MDA-MB-231、正常细胞MCF-10A中miR-183、盘状结构域受体(DDR)1的表达;将miR-183组(转染miR-183 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、si-TCF7组(转染si-TCF7)、si-con组(转染si-con),miR-183+pcDNA组(共转染miR-183 mimics和pcDNA)、miR-183+pcDNA-DDR1组(共转染miR-183 mimics和pcDNA-DDR1)均用脂质体法转染至MDA-MB-231细胞;MTT和Transwell法检测各组细胞增殖、迁移和侵袭;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与正常细胞MCF-10A相比,乳腺癌细胞MDA-MB-231中miR-183表达显著降低,DDR1表达显著升高(P0.05);过表达miR-183、敲减DDR1均可明显抑制MDA-MB-231细胞的增殖、迁移和侵袭;miR-183可靶向负调控DDR1表达;过表达DDR1可逆转miR-183对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论 miR-183可抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向DDR1有关,可为乳腺癌的治疗提供新靶点。     

miR-151a-3p对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响

目的探讨miR-151a-3p在胰腺癌细胞中的表达及miR-151a-3p表达对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-151a-3p在三种胰腺癌细胞系的表达情况;利用脂质体转染技术将miR-151a-3p mimic和mimic NC转染至胰腺癌BxPC-3细胞中,qRT-PCR检测转染后miR-151a-3p在BxPC-3细胞中的表达水平;CCK-8法检测转染后BxPC-3细胞的增殖能力;Transwell实验检测转染后BxPC-3细胞的迁移及侵袭能力;流式细胞术检测转染BxPC-3细胞的凋亡能力。结果 qRT-PCR结果显示,3种胰腺癌细胞系中miR-151a-3p表达水平均显著升高(P0.01),其中,BxPC-3细胞中miR-151a-3p表达水平最高;转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞中miR-151a-3p表达水平显著高于mimic NC和空白组(P0.001);CCK-8实验结果显示,转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞增殖能力显著高于mimic NC和空白对照组(P0.01);Transwell实验结果显示,转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞迁移及侵袭能力显著高于mimic NC和空白对照组(P0.01);流式细胞术结果显示,转染miR-151a-3p mimic的BxPC-3细胞凋亡率显著低于mimic NC和空白对照组(P0.001)。结论 miR-151a-3p在胰腺癌细胞中高表达,过表达miR-151a-3p促进胰腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,抑制细胞凋亡。     

miR-126抑制非小细胞肺癌细胞系A549细胞的增殖、转移和侵袭

目的探讨miR-126在非小细胞肺癌(NSCLC)株A549细胞中的表达和生物学作用。方法通过qRT-PCR检测正常人肺上皮细胞16-HBE和A549细胞中miR-126的表达。将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126过表达组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126过表达组分别转染control-mimics和miR-126 mimic。并将A549细胞分为空白组、对照组和miR-126抑制剂组,空白组不作任何处理,对照组和miR-126抑制剂组分别转染control-inhibitors和miR-126 inhibitor。通过噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力,通过细胞划痕实验检测细胞迁徙能力,通过Transwell实验检测细胞侵袭能力。结果 A549细胞株中miR-126水平明显低于16-HBE细胞(P0.01)。与空白组和对照组相比,miR-126 mimic可明显降低A549细胞的增殖率,而miR-126 inhibitor可明显增加A549细胞的增殖率(P0.01)。miR-126 mimic转染后24 h的A549细胞的迁移和侵袭能力下降,转染miR-126 inhibitor后,A549细胞的迁移和侵袭能力提高(均P0.01)。结论 miR-126在肺癌细胞中表达下调,体外过表达可明显抑制A549细胞体外增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-200通过靶向PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的研究

目的探讨miR-200对非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭的影响及其与程序性死亡受体配体-1(Programmed death-ligand 1,PD-L1)的靶向关系。方法选取非小细胞肺癌细胞株A549,正常肺成纤维细胞HLF-1为研究对象,根据A549细胞转染物质的不同,分为NC组(未进行任何处理的A549细胞)、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-200组(转染miR-200-mimic)、si-NC组(转染si-NC)、si-PD-L1组(转染si-PD-L1)、miR-200+pEGFP组(转染miR-200-mimic+pEGFP)及miR-200+pEGFP-PD-L1组(转染miR-200-mimic+pEGFP-PD-L1)。采用实时荧光定量PCR法检测细胞中miR-200表达水平;MTT检测细胞增殖能力;Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测细胞PD-L1表达水平;荧光素酶实验验证miR-200与PD-L1的靶向关系。结果与HLF-1相比,A549细胞胞miR-200表达水平降低,PD-L1基因、蛋白表达升高(P0.05)。48和72 h时,miR-200组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、miR-NC组(P0.05)。48和72 h时,si-PD-L1组细胞活力、迁移和侵袭数量明显低于NC组、si-NC组(P0.05)。miR-200+pcDNA-PD-L1组细胞48、72 h时细胞活力、细胞迁移和侵袭数量高于miR-200+pcDNA组、miR-200组(P0.05)。与对照组相比,A549细胞PD-L1野生型质粒组荧光素酶活性明显降低(P0.05),PD-L1突变型质粒组荧光素酶活性无明显变化(P0.05)。结论 miR-200可负性调控PD-L1抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-21靶向调控TET1促进结直肠癌HCT15和HT29细胞增殖、侵袭及迁移

目的探究miR-21对结直肠癌细胞生物学行为的影响以及潜在调控机制。方法利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结直肠癌组织中miR-21和TET1的表达水平并分析其相关性;利用生物信息学网站预测miR-21潜在靶基因TET1,利用双荧光素酶实验进行验证;利用细胞转染实验对两种结直肠癌细胞株进行miR-21 mimics、miR-21 inhibitor、si-TET1及相关对照的细胞转染,采用CCK-8分析、Transwell实验及细胞划痕实验检测转染后细胞增殖、侵袭及迁移能力的变化;利用Western blotting实验检测转染后细胞中TET1蛋白的表达。结果 qRT-PCR结果显示,结直肠癌组织中miR-21呈高表达水平,TET1 mRNA呈低表达水平,且两者表达水平呈负相关。靶基因预测及验证实验结果显示TET1是miR-21的靶基因,miR-21表达引起结直肠癌细胞中TET1表达下调。细胞转染实验结果显示,miR-21促进细胞增殖、侵袭及迁移。Western blotting实验结果显示,转染miR-21 mimics抑制TET1蛋白表达,转染miR-21 inhibitor促进TET1蛋白表达。结论 miR-21通过靶向调控TET1促进结直肠癌细胞的增殖、侵袭及迁移。     

miR-130a调控肿瘤抑制因子对结直肠癌细胞生物学行为的影响

目的通过检测miR-130a的表达情况及miR-130a与肿瘤抑制因子(CYLD)的靶向关系,探讨miR-130a是否可通过调控CYLD对结直肠癌SW480细胞生物学行为产生影响。方法将结直肠癌SW480细胞设置为对照组、阴性转染组、miR-130a inhibitor组,采用qRT-PCR检测各组miR-130a的表达; MTT法、Transwell法、流式细胞术分别检测各组SW480细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移情况;双荧光素酶报告基因检测miR-130a与CYLD靶向关系; Western blot检测各组细胞CYLD、增殖、凋亡、侵袭迁移相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,miR-130a inhibitor组的miR-130a表达水平显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组SW480细胞凋亡率显著增加,而存活率、侵袭迁移数显著降低(P 0.05)。与对照组相比,miR-130a inhibitor组c-Myc、CyclinD1、MMP7、Bcl-2表达水平显著降低,Bax、Caspase-3、CYLD表达水平显著增加(P 0.05)。靶基因预测结果显示,CYLD是miR-130a的潜在目标基因,与pmirGLO-CYLD-wt+miR-NC组相比,pmirGLO-CYLD-wt+miR-130a mimics组荧光素酶活性显著降低。结论 miR-130a表达沉默可能通过促进CYLD表达抑制SW480细胞的增殖、侵袭、迁移,促进细胞凋亡。     

慢病毒载体介导的miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响研究

目的探讨miR-342-3p对非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及分子机制。方法用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌组织及细胞中miR-342-3p和NUCKS1的表达水平;构建慢病毒介导的miR-342-3p过表达载体(LV-miR-342-3p),将LV-miR-342-3p和阴性对照空病毒载体(LV-NC)转染至肺癌细胞A549、H1299中,采用蛋白质印迹(Western blot)法检测蛋白表达,双荧光素酶报告实验检测miR-342-3p和NUCKS1的靶向关系,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭。结果肺癌组织及肺癌细胞A549和H1299中miR-342-3p表达水平降低,NUCKS1表达水平升高(P0.05)。miR-342-3p靶向调控NUCKS1。miR-342-3p过表达后,细胞活力降低,迁移和侵袭细胞数降低,NUCKS1表达水平降低(P0.05)。结论 miR-342-3p通过靶向下调NUCKS1抑制非小细胞肺癌细胞增殖、侵袭迁移。     

下调miR-421靶向Sirt3调控HepG2肝癌细胞生长和侵袭的机制研究

目的探讨下调miR-421靶向Sirt3调控肝癌细胞生长和侵袭的机制。方法 RT-PCR方法测定肝癌细胞和正常肝细胞中miR-421表达变化。在肝癌细胞中转染miR-421 inhibitor,MTT测定细胞增殖变化,Transwell小室检测细胞侵袭和迁移能力变化,Western blotting检测细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达变化。在线靶基因预测软件发现Sirt3可能是miR-421的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在肝癌细胞中共转染miR-421 inhibitor、Sirt3 siRNA,利用上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移能力和MMP-9、MMP-2蛋白表达水平。结果 miR-421在肝癌细胞中的表达水平高于正常肝细胞。miR-421 inhibitor转染后的肝癌细胞增殖能力下降,细胞侵袭和迁移能力降低,细胞中MMP-9和MMP-2蛋白表达减少。Sirt3受到miR-421的靶向负调控作用。Sirt3 siRNA能够逆转miR-421 inhibitor对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移和MMP-9、MMP-2表达的抑制作用。结论下调miR-421靶向Sirt3抑制HepG2肝癌细胞生长和侵袭。     

miR-204靶向GPRC5A对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨微小RNA-204(miR-204)对结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法 体外培养人正常结肠上皮细胞(FHC)和人结肠癌肿瘤细胞(HCT116);将HCT116细胞随机分为对照组、miR-204 mimic组和miR-204 NC组;利用实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测各组HCT116细胞miR-204及G蛋白耦联受体C型家族(GPRC)5A表达情况;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组HCT116细胞的增殖情况;划痕实验检测各组HCT116细胞的迁移能力;Transwell法检测各组HCT116细胞的侵袭能力;Western检测各组HCT116细胞GPRC5A蛋白的表达情况;采用双荧光素酶报告实验验证miR-204与GPRC5A的靶向关系。结果 与正常组相比,各组HCT116细胞miR-204表达水平显著降低(P<0.05)。与对照组和miR-204 NC组相比,miR-204 mimic组HCT116细胞miR-204表达水平显著升高(P<0.05),细胞存活率、划痕愈合率、侵袭数量、GPRC5A mRNA及GPRC5A蛋白表达水平显...     

重楼皂苷Ⅱ干预后肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力变化及其与miR-16-5p表达的关系

目的 探讨重楼皂苷Ⅱ对肺癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的抑制作用及其可能的机制。方法 取对数生长期的肺癌A549细胞，分为高浓度组、中浓度组、低浓度组和对照组，分别加入3、2、1μmol/L重楼皂苷Ⅱ及等量二甲基亚砜溶液，干预24 h。采用CCK-8法检测细胞增殖能力（以细胞增殖活力表示），细胞划痕实验检测细胞迁移能力（以细胞迁移率表示），Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力（以侵袭细胞数表示），Western blotting法检测凋亡相关蛋白[Cleave-Caspase-3、Bax、Bcl-2、基质金属蛋白酶2(MMP-2)]表达，实时荧光定量PCR法检测miR-16-5p表达。取对数生长期的A549细胞，分为miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组和阴性对照组，miR-16-5p inhibitor组和miR-16-5p NC组分别转染含有绿色荧光标记的miR-16-5p inhibitor和miR-16-5p inhibitor NC，并加入2μmol/L重楼皂苷Ⅱ溶液，阴性对照组未进行细胞转染并加入等量二甲基亚砜溶液，干预24 h，参照上法检测...     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。