艾塞那肽抑制高糖诱导内皮细胞凋亡的作用机制

在正常糖浓度(5.5 mmol/L)和高糖(33 mmol/L)培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别加入不同浓度的艾塞那肽并干预不同时间后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞活力,应用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)磷酸化、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果显示,HUVECs经高糖培养48和72 h后,细胞活力明显下降(P＜0.01).经1、10和100 nmol/L艾塞那肽干预48 h后,细胞活力明显增加,并呈浓度依赖性(P＜0.01).与正常糖浓度组比较,高糖组细胞凋亡率升高,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01).艾塞那肽干预后,细胞凋亡率下降,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01),而艾塞那肽的作用可被磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002所对抗(P＜0.01).提示艾塞那肽可通过PI3 k/Akt信号通路调节Bcl-2/Bax蛋白表达来抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,起到保护内皮细胞的作用.     

艾塞那肽与胰岛β细胞凋亡的相关性研究

目的研究胰高血糖素样肽-1类似物艾塞那肽(Exendin-4)抑制胰岛β细胞凋亡的可能机制。方法将大鼠胰岛素瘤RIN-m5f细胞分为对照组、高糖组、高糖+艾塞那肽组3组,分别用含有正常糖(11.1 mmol/L)、间歇性高糖(11.1 mmol/L、33.3 mmol/L交替使用)、间歇性高糖+艾塞那肽(100 nmol/L)的培养基进行细胞培养,连续培养7 d后通过MTT法检测各组细胞活力及Western blotting方法检测各组细胞中内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)标志分子(CHOP、BIP)、磷酸化的c-jun氨基末端激酶(p-JNK)、凋亡分子Caspase-3的表达水平。结果对照组胰岛β细胞中CHOP、BIP、p-JNK、Caspase-3表达水平较低;高糖组胰岛β细胞中CHOP、BIP、p-JNK、Caspase-3表达水平较对照组明显升高(P0.05);高糖+艾塞那肽组胰岛β细胞中CHOP、BIP、p-JNK、Caspase-3表达水平较高糖组则明显降低(P0.05)。结论长时间间歇性高糖刺激可使胰岛β细胞活力下降,并可诱发RIN-m5f细胞发生ERS,而艾塞那肽则可抑制ERS,并通过调控细胞JNK信号通路来抑制胰岛β细胞凋亡。     

前列腺素E_1对高糖培养小鼠肾足细胞整合素及整合素连接激酶影响的研究

目的研究前列腺素E_1(PGE_1)对高糖培养小鼠足细胞整合素及整合素连接激酶(ILK)的影响。方法体外培养和分化小鼠肾小球足细胞,按培养条件不同分为:5.6 mmol/L葡萄糖组(Con),5.6 mmol/L葡萄糖+24.4 mmol/L甘露醇组(5.6 mmol/L+24.4 mmol/L),15 mmol/L葡萄糖组(15mmol/L),30 mmol/L葡萄糖组(30 mmol/L)。每个培养条件分别以0、1、10、20 ng/ml的PGE_1进行干预,24 h后收集足细胞。Western blot检测整合素β1(Integrinβ1)、ILK、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况。结果依次增高葡萄糖浓度下足细胞Integrinβ1蛋白表达相对量依次降低,ILK、α-SMA蛋白表达相对量依次升高。30 mmol/L组足细胞Integrinβ1、ILK、α-SMA蛋白表达相对量为(0.32±0.04)、(1.20±0.02)、(1.24±0.02),与Con组比较差异有统计学意义(P0.05);添加20ng/ml的PGE_1对高糖引起的足细胞上述蛋白异常表达有逆转作用,Integrinβ_1、ILK、α-SMA蛋白相对表达量分别为(0.91±0.02)、(0.26±0.02)、(0.42±0.02),较各组中PGE_1=0时差异有统计学意义(P0.05)。结论 PGE_1对高糖环境中足细胞ILK、α-SMA蛋白表达上调具有抑制作用,对Integrinβ1蛋白表达具有上调作用,对高糖引起的足细胞转分化有抑制作用。     

高糖及核因子κB通路诱导足细胞上皮间充质转分化的研究

目的:探讨高糖对小鼠足细胞上皮间充质转分化(EMT)与迁移的影响及其分子机制。方法:以永生化小鼠足细胞株(足细胞)为研究对象,设置正常糖组(5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L葡萄糖+25mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L葡萄糖)、核因子κB(NF-κB)特异性抑制剂小白菊内酯(PTL)+高糖组,作用时间24h。采用Transwell检测细胞迁移能力,Western Blot检测蛋白表达,q PCR检测mRNA表达情况,免疫荧光检测NF-κB入核情况。结果:与正常糖及甘露醇组比较,高糖刺激足细胞24h后细胞的迁移能力明显增强(P0.05),足细胞特征性蛋白nephrin明显下调(P0.05),纤连蛋白(FN)及mRNA表达显著增加(P0.05),而E钙黏蛋白(E-cadherin)及其mRNA表达明显下降(P0.05)。同时,与上述对照组比较,高糖明显上调p-IκBα(P0.05)下调IκBα(P0.05)促使足细胞胞质中的NF-κB入核同时上调p-p65的表达;干预细胞PTL后,足细胞的EMT和迁移得到明显抑制(P0.05),nephrin蛋白表达明显上升(P0.05)。结论:高糖通过激活NF-κB通路诱导足细胞发生EMT及迁移。     

龙胆苦苷通过调控miR-218表达减轻高糖诱导的小鼠肾脏足细胞损伤

目的 探讨龙胆苦苷(GPS)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞(MPC5)损伤的影响及其可能的作用机制。方法 高糖诱导MPC5细胞建立细胞损伤模型(HG组),正常培养的MPC5细胞记为Con组，用不同剂量(8、40、200μg/μl)GPS处理高糖诱导的MPC5细胞(HG+GPS-L组、HG+GPS-M组、HG+GPS-H组),anti-miR-NC、anti-miR-218转染至MPC5细胞后加入30 mmol/L D-葡萄糖处理24 h(HG+anti-miR-NC组、HG+anti-miR-218组),miR-NC、miR-218 mimics分别转染至MPC5细胞后加入200μg/μl GPS与30 mmol/L D-葡萄糖共同处理24 h(HG+GPS+miR-NC组、HG+GPS+miR-218组);流式细胞术检测细胞凋亡率；qRT-PCR法检测miR-218相对表达量；Western印迹法检测肾素(nephrin)、足突蛋白(podocin)、剪切的胱天蛋白酶(cleaved-caspase)3、cleaved-caspase9蛋白相对表达量。结果 HG组nephrin、podo...     

远志皂苷调控miR-325-5p/GADD45B对高糖诱导小鼠足细胞损伤的影响及其机制

目的 探讨远志皂苷(TEN)对高糖诱导的小鼠肾脏足细胞MPC5损伤的影响及分子作用机制。方法 将MPC5细胞分为正常对照(NG)组、高糖刺激(HG)组、TEN低中高3个浓度实验组,NG组用5 mmol/L D-葡萄糖处理,HG组用30 mmol/L D-葡萄糖处理,实验组用低中高(50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L)TEN进行处理,实时荧光定量(qRT)-聚合酶链反应(PCR)检测MPC5细胞中miR-325-3p和GADD45BmRNA的表达,Western印迹检测GADD45B、podocin和nephrin蛋白表达,流式细胞术测定细胞凋亡率,双荧光素酶报告系统验证miR-325-3p与GADD45B的关系。结果 TEN可使高糖诱导的小鼠足细胞MPC5中miR-325-3p、podocin、nephrin和B细胞淋巴瘤(Bcl)-2含量显著升高(P<0.05),GADD45B、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量及细胞凋亡率显著降低(P<0.05),抑制高糖诱导的小鼠足细胞MPC5损伤和凋亡;miR-325-3p靶向负调控GADD45B的表达;...     

mTOR抑制剂PP242对高糖诱导足细胞损伤保护机制的实验研究

目的探讨高糖诱导的小鼠肾足细胞增殖、凋亡和Podocin蛋白表达的变化以及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)抑制剂PP242的干预效应。方法以体外培养的条件永生性的小鼠肾足细胞为研究对象,将足细胞分为4组。正常组给予葡萄糖5.5 mmol/L;高糖组给予葡萄糖30 mmol/L;PP242干预1组给予葡萄糖30 mmol/L、1μmol/L PP242; PP242干预2组给予葡萄糖30 mmol/L、10μmol/L PP242。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测PP242对高糖诱导的足细胞增殖的影响,用流式细胞仪检测PP242对高糖诱导的足细胞凋亡的影响,用Western Blot方法检测PP242对高糖诱导的足细胞Podocin蛋白表达。结果高糖诱导足细胞48 h后,与正常组比较,高糖组细胞增殖减少,细胞凋亡增加,Podocin蛋白表达降低,差异均有统计学意义(P0.05)。高糖诱导经PP242干预后,与高糖组比较,PP242干预1组、PP242干预2组足细胞增殖增加,足细胞凋亡减少,Podocin蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论 PP242可以部分减少高糖诱导的足细胞损伤,具有潜在的足细胞保护作用。     

丝胶通过调节miR-346表达对高糖致足细胞损伤的保护作用

目的 探讨丝胶通过调节miR-346表达对高糖致足细胞损伤的保护作用。方法 以条件永生化小鼠足细胞为研究对象,实验分为正常(NG)组、高渗(MG)组、高糖(HG)组、丝胶低剂量(LS)组、丝胶中剂量(MS)组及丝胶高剂量(HS)组,分别采用5.5 mmol/L葡萄糖、5.5 mmol/L葡萄糖+24.5 mmol/L甘露醇、30 mmol/L葡萄糖、30 mmol/L葡萄糖+150μg/ml丝胶、30 mmol/L葡萄糖+300μg/ml丝胶、30 mmol/L葡萄糖+600μg/ml丝胶的含血清及双抗培养液培养足细胞48 h。采用免疫印迹法检测各组足细胞Nephrin蛋白表达,以确定高糖致足细胞损伤模型是否成功建立;采用Real time PCR法检测各组足细胞miR-346及白细胞介素(IL)-18 mRNA表达,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组足细胞IL-18蛋白表达,以确定丝胶的最佳作用浓度。采用miR-346抑制剂(MicrOFF mmu-miR-346-5p inhibitor)转染足细胞抑制miR-346的表达后,给予最佳浓度的丝胶进行干预,观察足细胞IL-18...     

红景天苷通过调控PI3K/AKT/Nrf2通路对高糖诱导的心肌细胞的保护作用及机制研究

目的 探究红景天苷（SAL）对高糖诱导的心肌细胞的保护作用并进一步研究其可能的机制。方法 体外培养H9c2细胞,分为空白组、高糖组、高糖+SAL组、高糖+SAL+LY294002（特异性PI3K抑制剂）组。空白组细胞用含有5.5 mmoL/L葡萄糖的培养液常规培养;其余三组细胞用含有33.3mmoL/L葡萄糖的培养液培养;另外高糖+SAL组在更换为高糖培养液前2 h加入29.6 mmol/L SAL预处理,而高糖+SAL+LY294002组则在加入SAL前加入10μmol/L LY294002预处理2 h。CCK-8实验和TUNEL实验检测细胞增殖和凋亡情况。细胞内丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的含量用相应的酶联免疫试剂盒检测,活性氧簇（ROS）水平通过荧光法检测。蛋白免疫印迹法（western blot）检测细胞中蛋白激酶b(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、核因子促红细胞生成素2相关因子2(Nrf2)蛋白表达和磷酸化水平。结果 与空白组相比,高糖组H9c2细胞的存活率降低,而细胞凋亡率、细胞内ROS合成量和MDA含量增加,...     

厄贝沙坦通过核转录因子κB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡的研究

目的探讨厄贝沙坦通过抑制核转录因子κB(NF-κB)的表达减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。方法将H9C2细胞分为:对照(Con)组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、二甲基亚砜(DMSO)组(5.5 mmol/L葡萄糖+1‰二甲基亚砜)、高糖(HG)组(33 mmol/L葡萄糖)、厄贝沙坦(Ir)组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L厄贝沙坦),每组3个细胞。检测细胞增殖抑制率;IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TNF-α、Bax、Bcl-2 mRNA;核转录因子κB(NF-κB)、caspase-3蛋白表达及细胞凋亡率。结果 Ir组低于高糖诱导的Bax[(50.31±2.18)vs(61.96±4.08)]、IL-6[(7.67±1.53)vs(25.33±4.16)]、MCP-1[(26.67±6.11)vs(43.33±3.06)]、TNF-α[(35.33±3.06)vs(44.67±4.16)]、NF-κB[(2.19±0.52)vs(3.58±0.53)]及caspase-3[(2.28±0.10)vs(2.86±0.12)]表达及细胞凋亡[(10.73±1.78)vs(16.46±2.24)],差异均有统计学意义(P0.05);上调高糖抑制的Bcl-2[(0.62±0.04)vs(0.45±0.06)]的表达(P0.05)。结论厄贝沙坦通过NF-κB信号通路,可减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。     

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/核转录因子E2相关因子2信号通路对高糖状态下人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的作用及机制

目的研究核转录因子E2相关因子2(Nrf2)及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对高糖状态下人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖的影响,并探讨糖代谢相关酶在Nrf2及PI3K/Akt影响K1细胞增殖中的作用。方法根据不同处理因素将K1细胞分为5组:正糖组(正糖5.5 mmol/L培养48 h)、高糖组(正糖5.5 mmol/L培养24 h后,换25 mmol/L高糖继续培养24 h)、Nrf2siRNA组(正糖条件下siRNA转染细胞24 h后,换高糖继续培养24 h)、NcsiRNA组(正糖条件下阴性转染细胞24 h后,换高糖继续培养24 h)、LY294002组(正糖条件下培养24 h后,加50μmol/L LY294002预孵育0.5 h再换用高糖培养24 h)。K1细胞按照上述分组处理后分别用以下方法检测相关指标:MTT法检测细胞增殖,细胞免疫荧光法检测Nrf2蛋白的分布,Western blot检测PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、丙酮酸激酶M2(PKM2)蛋白的表达水平。两组数据比较采用独立样本t检验,多组数据比较采用单因素方差分析。结果与正糖组比较,高糖组K1细胞增殖率、PI3K、p-Akt/Akt、Nrf2、G6PD、PKM2表达显著升高[分别为(87.31±3.67)%比(126.64±5.41)%、0.272±0.039比0.425±0.019、0.168±0.035比0.446±0.021、0.308±0.026比0.597±0.014、0.421±0.024比0.626±0.026、0.198±0.023比0.314±0.023,t=6.109~16.951,均P<0.05],Nrf2在细胞核分布的比例显著升高[(21.6±4.5)%比(91.2±3.5)%,χ2=98.497,P<0.01];与高糖组比较,Nrf2siRNA组K1细胞增殖率明显下降,G6PD、PKM2的蛋白表达明显下调,差异有统计学意义(t=8.936、7.056、8.843,均P<0.01),LY294002组也呈现相似的趋势(t=7.228、6.351、7.910;均P<0.01);与高糖组比较,LY294002组K1细胞PI3K、Akt蛋白水平无明显改变,而p-PI3K、p-Akt、核Nrf2、浆Nrf2蛋白水平及Nrf2核浆蛋白比值均被显著抑制(t=5.748~23.572,均P<0.01)。结论高糖可激活PI3K/Akt信号通路,上调Nrf2表达与核转位,上调磷酸戊糖和糖酵解途径相关酶PKM2、G6PD的表达,促进K1细胞增殖。     

褪黑素通过激活Akt信号通路缓解高糖诱发的原代心肌细胞损伤

目的 明确高糖对心肌细胞损伤的影响;揭示褪黑素（Mel）在高糖诱发乳鼠原代心室肌细胞损伤中的作用及机制。 方法 体外培养乳鼠原代心室肌细胞,分为4组:正常葡萄糖浓度组(NG)、高糖组(HG,HG=25 mmo/L)、高糖+褪黑素组（HG+Mel,HG=25 mmo/L;Mel=30 μmo/L）、高糖+褪黑素+ PI3K/Akt抑制剂组（HG+Mel,HG=25 mmo/L;Mel=30 μmo/L;LY294002=50 μmo/L）组,采用Western Blotting、RT-PCR和免疫荧光技术检测心肌细胞凋亡相关蛋白以及PI3K/p-Akt等指标,评价褪黑素对高糖诱发心肌细胞凋亡的作用及机制。 结果 与NG组比较,HG组心肌细胞Cl -Caspase3、Caspase9的mRNA及蛋白表达明显升高,伴有p-Akt的mRNA及蛋白表达降低和PI3K蛋白表达降低;与HG组相比,HG+Mel组心肌细胞Cl-Caspase3、Caspase9的mRNA及蛋白表达下调伴有p-Akt的mRNA及蛋白表达回升和PI3K蛋白表达升高;与HG+Mel组相比,HG+Mel+LY294002组心肌细胞的Cl-Caspase3、Caspase9的mRNA及蛋白表达上升伴有p-Akt蛋白表达水平显著降低和PI3K蛋白表达降低。免疫荧光的结果与Western Blotting、RT-PCR的结果趋势一致。 结论 褪黑素通过激活PI3K/Akt信号通路缓解高糖诱导的原代心肌细胞损伤。     

Syk对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 探讨脾酪氨酸激酶(Syk)对高糖诱导的H9c2心肌细胞凋亡的影响及其机制.方法 将体外培养的H9c2心肌细胞分为5组:对照组(5.5 mmol/L葡萄糖,NG组)、高糖组(33 mmol/L葡萄糖,HG组)、Syk抑制剂对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+1μmol/L BAY,NG+ BAY组)、Syk抑制剂高糖组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L BAY,HG+ BAY组)、甘露醇高渗透压对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇,OC组).采用Western印迹方法检测磷酸化Syk(p-Syk)、cleaved-caspase-1及Bax、Bcl-2的蛋白水平;逆转录PCR检测caspase-1、Bax、Bcl-2 mRNA的表达;流式细胞仪检测H9c2心肌细胞凋亡率;MTT比色法检测细胞活力.结果 与NG组相比,HG组H9c2心肌细胞活力下降(F=37.3,P<0.05)、凋亡率增加(F=46.5,P<0.05),OC组、NG+ BAY组细胞凋亡率与细胞活力差异均无统计学意义(P均>0.05);且HG组p-Syk、cleaved-caspase-1及Bax表达增加,Bcl-2表达降低(F=8.4、80.5、7.6、37.4,P均<0.05),caspase-1及Bax mRNA表达升高,Bcl-2 mRNA表达降低(F=130.7、17.8、7.18,P均<0.05);与HG组相比,HG+ BAY组细胞活力升高(F=37.3,P <0.05)、细胞凋亡率降低(F=46.5,P<0.05),且cleaved-caspase-1及Bax表达降低,Bcl-2表达水平升高(F =80.5、7.6、37.4,P均<0.05),caspase-1及Bax mRNA表达降低,Bcl-2 mRNA表达升高(F=130.7、17.8、7.18,P均<0.05).结论 在高糖条件下,Syk可诱导心肌细胞凋亡,其作用是通过调控Bax、Bcl-2的表达.     

Notch胞内域1对高糖诱导小鼠肾小球足细胞凋亡的影响

目的通过体外高糖培养小鼠肾小球足细胞,检测Notch胞内域1（NICDl）的表达与肾小球足细胞凋亡的关系并了解其他信号通路是否介导高糖对Notch通路的激活,以探讨治疗糖尿病肾病的潜在方向。方法高糖培养小鼠足细胞,于刺激0、12、24、48、72h后收集细胞,检测NICDl蛋白表达情况。将细胞分为7组：正糖组、高糖组、高糖＋1分泌酶抑制剂（GSI,抑制NICDl活化）组、高糖＋p38细胞分裂素活化蛋白激酶抑制剂组、高糖＋Janus激酶2抑制剂组、高糖＋转化生长因子B,I型受体抑制剂组和高糖＋磷酸肌醇3激酉每／蛋白激酶B抑制剂组。分别采用免疫细胞化学和Westernblotting法检测NICDl的表达,流式细胞术和原位缺口末端标记法（TUNEL）观察足细胞凋亡情况。两组间数据比较采用t检验,多组间数据比较采用单因素方差分析。结果高糖培养足细胞NICDl蛋白较正糖组（0．079±0．010）增加,12h开始增加（0．443±0．075）,48h达峰（0．746±0．034）,72h略下降（0．658±0．056,F=6．235,P〈0．01）。流式细胞术及TUNEL显示48h时足细胞凋亡率升高,给予GSI后抑制NICDl的活化及足细胞凋亡（P〈0．01）;给予Janus激酶2（0．193±0．096）和转化生长因子B,I型受体抑制剂（0．225±0．067）可抑制高糖对NICDl蛋白的活化（t=6．781、4．287,均P〈0．叭）。结论高糖通过Notch通路诱导足细胞凋亡,高糖对Notch通路的激活可能通过Janus激酶／转录激活因子和转化生长因子β1／Smad通路。     

脑缺血预处理对神经元神经钙调磷酸酶及磷酸化蛋白激酶B表达的影响

目的研究脑缺血预处理(CIPC)对神经元神经钙调磷酸酶(CaN)及磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)表达的影响。方法雄性SD大鼠108只,随机分为假手术组、脑缺血组、CIPC组、尼莫地平组、环孢素A组及LY294002组,每组18只。评价各组大鼠神经功能缺损;计算脑梗死体积;检测CaN及p-AKT蛋白表达。结果与脑缺血组比较,CIPC组、尼莫地平组和环孢素A组神经功能缺损评分和脑梗死体积明显降低(P<0.05,P<0.01)。与假手术组比较,其他5组CaN蛋白表达明显升高(P<0.01);与脑缺血组比较,CIPC组、LY294002组CaN蛋白表达降低(P<0.05);与CIPC组比较,尼莫地平组和环孢素A组CaN蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。除LY294002组外,余各组p-AKT蛋白表达与CaN蛋白相反。结论 CIPC降低神经元CaN表达,提高p AKT表达,提供神经保护。尼莫地平和环孢素A增强了神经保护。LY294002抵消了CIPC的保护作用。     

PAI-1引起2型糖尿病合并NAFLD小鼠肝脏炎性反应和纤维化的机制研究

目的探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)对2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂质沉积,炎性反应,纤维化等的影响。方法以C57BL/KSJ-Lepdb雄性小鼠作为T2DM合并NAFLD组(db/db组),同周龄C57BKS db/m雄性小鼠作为对照组(db/m组)。采用苏木素-伊红染色,油红О染色等方法检测小鼠肝组织切片脂质沉积;采用ELISA检测肝组织甘油三酯含量。以小鼠正常肝细胞NCTC1469作为研究对象,分为5组:对照组给予25 mmol/L葡萄糖(NG组)高渗对照组给予25 mmol/L葡萄糖+25 mmol/L甘露醇(HMA组)、高糖高脂组给予50mmol/L葡萄糖+0.75 mmol/L棕榈酸(HG+PA组)、高糖高脂+RNA干扰对照组(HG+PA+Si-NC组)用NC siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预,高糖高脂+PAI-1沉默组(HG+PA+Si-PAI-1组)用PAI-1的siRNA瞬时转染细胞并给予高糖高脂干预。采用实时定量PCR和Western印迹方法检测炎性因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白细胞介素-1β(IL-1β),肝纤维化相关指标转化生长因子-B(TGF-3),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(Col I)以及PAI-1的表达情况。结果与db/m组相比,db/db组小鼠肝组织中出现明显脂质聚集和纤维组织增生,甘油三酯含量增加,且MCP-1,IL-1β、TGF-β,a-SMA,ColⅠ和PAI-1的mRNA和蛋白水平均明显上调(均P<0.05)。与NC组细胞相比,HG+PA组MCP-1、IL-1β、TGF-β、α-SMA、Col Ⅰ、PAI-1表达量均明显上调(均P<0.05);与HG+PA组相比,HG+PA+si-PAI-1组PAI-1、MCP-1、IL-β、TGF-β、α-SMA和ColⅠ等表达量均明显下调(均P<0.05)。结论T2DM合并NAFLD小鼠模型肝组织中PAl-1表达明显增加,抑制PAI-1表达可明显改善肝组织炎性反应和纤维化水平。     

Elevated glucose activates protein synthesis in cultured cardiac myocytes

Diabetes mellitus results in chronic hyperglycemia, a serious metabolic disorder associated with a markedly increased risk of cardiovascular disease. However, the effects of high glucose (HG) on cardiac myocyte growth have not been fully clarified. In this study, the effect of glucose on cardiac myocyte growth was examined using leucine incorporation as an index of protein synthesis. High glucose (HG, 25 mmol/L) increased leucine incorporation (167% +/- 0.2% over normal glucose, n=4, P<.01) compared with a physiological glucose concentration (5.5 mmol/L, normal glucose). The HG-induced increase in leucine incorporation was time- and dose-dependent and was not due to osmotic changes because 25 mmol/L mannitol did not change leucine incorporation. High glucose also significantly reduced elongation factor 2 phosphorylation, an effect known to result in increased protein synthesis at the elongation step. Western blot analysis showed that HG-activated protein kinase B (PKB), also called Akt (PKB/Akt), at 18 hours. High glucose-induced leucine incorporation was attenuated with phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) inhibition using wortmannin and LY294002 and by rapamycin, a mammalian target of rapamycin (mTOR) inhibitor, 72%, 64%, and 65% (P<.05), respectively. High glucose also activated extracellular signal-regulated kinase 1/2 activity with peak stimulation at 5 minutes. In addition, PD98059, an inhibitor of mitogen-activated protein kinase kinase, attenuated HG-induced leucine incorporation. These data show for the first time that elevated glucose increases protein synthesis in cardiac myocytes. The increase appears to be mediated by activation of PI3K-PKB/Akt and/or PI3K-mTOR as well as extracellular signal-regulated kinase 1/2. These results provide new evidence for a direct effect of glucose independent of insulin on cardiac myocyte growth.     

艾塞那肽对糖尿病肾病小鼠足细胞的保护作用

目的:探讨艾塞那肽对糖尿病肾病小鼠足细胞的作用。方法:通过给予C57BL/6J小鼠高脂饮食并注射链脲佐菌素建立糖尿病肾病模型,按随机数字表法将其分为糖尿病肾病对照组(DN组, n＝8)、艾塞那肽干预组(DN＋Ex组, n＝8)。同时将普通饲料喂养的C57BL/6J小鼠作为正常对照组(NC组, ...     

雷公藤甲素对高糖刺激足细胞转分化的影响

目的 探讨雷公藤甲素（TP）对高糖刺激的足细胞转分化的影响及可能机制.方法 将体外培养的小鼠永生化足细胞分为正常组（加入D-葡萄糖5.5 mmol/L）、高糖组（加入D-葡萄糖30 mmol/L）、TP低剂量组（加入D-葡萄糖30mmol/L＋ TP 3 ng/mL）、TP高剂量组（加入D-葡萄糖30 mmol/L＋ TP 10 ng/mL）及甘露醇组（加入D-葡萄糖5.5 mmol/L＋甘露醇24.5 mmol/L）,采用荧光定量PCR法和Western blot法分别检测各组足细胞Smad3、Smad7、Ssynaptopodin、Ddesmin mRNA及蛋白的表达量.结果 TP低剂量组、TP高剂量组Smad3、Desmin mRNA及蛋白表达均低于高糖组（P＜0.05）,Smad7、Synaptopodin mRNA及蛋白表达均高于高糖组（P＜0.05）.结论 TP可抑制高糖刺激引起的足细胞转分化,其机制可能为在转录水平和蛋白水平调节足细胞Smad3、Smad7表达异常.     

Tetrahydroxy Stilbene Glucoside Alleviates High Glucose-Induced MPC5 Podocytes Injury Through Suppression of NLRP3 Inflammasome

Background

Tetrahydroxy stilbene glucoside (TSG) is an active ingredient of Heshouwu and is an antioxidant. The underlying mechanisms of the renoprotective effect of TSG in diabetic nephropathy have not been previously reported. In this study, we investigated the mechanisms of TSG in preventing podocytes injury in high glucose (HG) condition.