miR-124抑制多形性胶质母细胞瘤的生长

目的:研究下调miR-124和过表达miR-124对恶性胶质瘤细胞增殖的影响,在分子病因学方面阐述miR-124在调控胶质瘤细胞的生长中起到的重要作用.方法:在胶质瘤细胞系中应用RT-PCR定量方法检测下调miR-124来评价miR-124的作用.应用病毒转染的过表达miR-124的稳定细胞系U87-124和U373-124,用qRT-PCR方法检测过表达miR-124对胶质瘤细胞增殖的影响.结果:miR-124在4个胶质瘤细胞系(U87、U373、SW1088和SW1073)中与对照组细胞系相比呈明显低表达水平.U87-miR-124和U373-miR-124的胶质瘤细胞增殖明显低于对照组.结论:在分子病因学方面,miR-124能明显抑制脑胶质瘤细胞的增殖,在调控脑胶质瘤细胞的生长中起到了重要作用,同时也为miR-124用于脑胶质瘤的治疗提供了一个可能性.     

miR-124调控SOS1表达及对U87胶质瘤细胞增殖的影响

目的:探讨miR-124对胶质瘤细胞增殖的抑制作用及作用靶点.方法:应用生物信息整合分析,SOS1是miR-124负向调节胶质瘤细胞的靶点.应用细胞转染和荧光素酶检测分析证实miR-124对SOS1的作用关系.结果:SOS1是miR-124作用靶点,miR-124直接作用于SOS1 mRNA 3'端非编码区(UTR),但不作用于突变型的3(UTR).miR-124通过作用于靶点SOS1抑制了体外胶质瘤细胞的增殖.结论:SOS1在恶性胶质瘤细胞中呈正向调控,miR-124的含量上升可导致SOS1含量下降,miR-124通过调节SOS1/Raf/ERK信号通路在抑制细胞生长中起重要作用.     

MicroRNA-124靶向调控caveolin-1介导肝癌细胞恶性行为的研究

目的:检测miR-124、caveolin-1在肝癌组织及细胞系中的表达,探讨miR-124靶向调控caveolin-1对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:回顾性分析2012年8月至2014年7月32例于大连医科大学附属第一医院收治的行肝癌切除术患者的临床资料和标本,通过实时定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝癌、癌旁组织以及肝癌细胞系中miR-124、caveolin-1的表达;通过靶基因预测及双荧光素酶报告分析miR-124与caveolin-1的靶向关系;通过qRT-PCR、Western blot检测miR-124对caveolin-1表达的调控;分别用CCK8、平板克隆及Transwell检测细胞增殖和侵袭能力;通过绘制生存曲线,分析miR-124及caveolin-1表达与临床肝癌患者预后的相关性。结果:miR-124在肝癌组织中的表达低于癌旁组织,在高转移肝癌细胞MHCC97H中的表达低于低转移肝癌细胞MHCC97L,而caveolin-1呈现相反的趋势;caveolin-1为miR-124的靶基因,调控miR-124可影响caveolin-1水平;MHCC97H中导入miR-124 mimic可抑制该细胞增殖及侵袭能力,而上调caveolin-1促进该细胞增殖及侵袭能力;敲低低转移肝癌细胞MHCC97L中miR-124水平可增强该细胞的增殖及侵袭能力,下调caveolin-1抑制该细胞的增殖及侵袭能力;肝癌组织miR-124高水平、caveolin-1低水平的患者5年生存时间显著长于相应的miR-124低水平组、caveolin-1高水平组。结论:miR-124通过靶向调控caveolin-1介导肝癌的增殖与侵袭。     

miR-124 在乳腺癌中的表达及其作用机制研究

目的:探讨m iR- 124 表达与乳腺癌发生、发展的相关性及机制。方法:运用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测乳腺癌细胞系以及52例患者乳腺癌癌组织和对应的癌旁正常组织样本中miR-124 的表达水平。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231和T-47D 中过表达miR-124 后,测定细胞增殖活性以及侵袭转移能力。构建荧光素酶报告载体pMIR- 特异性蛋白1（specificityprotein 1,SP1）的3'UTR,利用荧光素酶活性检测鉴定miR-124 的预测靶基因SP1。qRT-PCR和Westernblot法分别检测SP1 的mRNA 和蛋白质的表达水平。结果:miR-124 在乳腺癌细胞系和癌组织中表达量下调,差异具有统计学意义（P < 0.01）,并与肿瘤的转移、分期、分级和预后相关。在乳腺癌细胞株MDA-MB-231 和T-47D 中过表达miR-124 后抑制乳腺癌细胞系的增殖、侵袭以及迁移（P < 0.01）。 转染miR-124 模拟物显著抑制荧光素酶的活性（P < 0.05）。 转染miR-124 模拟物显著下调MDA-MB-231 和T-47D 细胞中SP1 的mRNA（P < 0.05）和蛋白质的表达水平。结论:miR-124 在乳腺癌癌组织中低表达,miR-124 低表达与乳腺癌不良预后有关,且miR-124 可通过调控转录因子SP1 抑制乳腺癌癌细胞的增殖、侵袭和转移。miR-124 表达异常减少可能是乳腺癌发生、发展的重要因素。      

miR-124在宫颈癌中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响

目的:探讨miR-124在宫颈癌中的表达,及其对宫颈癌细胞增殖、迁移的影响。方法:收集宫颈癌组织和癌旁组织各13例,qRT-PCR法检测miR-124的表达,免疫组化检测STAT3的表达。生物信息学技术预测miR-124的靶基因,双荧光素酶报告基因、qRT-PCR、Western blot实验验证。每种宫颈细胞随机分为三组,一组转染miR-124 mimics,一组不转染,一组转染miR-124 inhibitor。CCK-8实验检测细胞增殖能力,细胞划痕实验检测细胞迁移能力。结果:miR-124在宫颈癌组织和细胞系中表达均降低(P均＜0.05),STAT3在宫颈癌组织中的表达明显增高(P<0.05)。STAT3是miR-124的直接靶基因,miR-124可靶向调节STAT3的mRNA和蛋白表达水平(P均＜0.05)。在Hela及Siha细胞中,miR-124 mimics转染组细胞增殖及迁移能力均降低(P均＜0.05),miR-124 inhibitor转染组细胞增殖及迁移能力均增加（P均＜0.05)。结论:miR-124在宫颈癌中低表达,可能通过靶向调节STAT3表达抑制宫颈癌细胞的增殖及迁移能力。     

miR-338通过靶向GPX4抑制非小细胞肺癌细胞增殖

目的:探讨miRNA-338（miR-338）通过靶向调控谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）表达在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)增殖中的作用及机制研究。方法:通过实时定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）检测非小细胞肺癌组织、癌旁、细胞系及对照细胞系中miR-338及GPX4 mRNA的表达水平;通过Western Blot检测非小细胞肺癌组织、癌旁、细胞系及对照细胞系中GPX4蛋白水平;通过荧光素酶报告基因时间验证miR-338直接靶向调节GPX4的表达;通过CCK-8探索miR-338是否通过调节铁死亡影响肿瘤细胞增殖;通过试剂盒检测细胞脂质氧化和活性氧水平。结果:NSCLC组织和细胞系中miR-338表达水平低于癌旁组织和对照细胞系;NSCLC组织和细胞系中GPX4 mRNA及蛋白表达水平高于癌旁组织和对照细胞系;Starbase软件分析发现GPX4 mRNA序列中含有miR-338特异作用位点,荧光素酶报告基因实验结果证实miR-338直接靶向调节GPX4表达;过表达miR-338提高肿瘤细胞中脂质氧化及活性氧水平,并抑制肿瘤细胞增殖;而铁死亡抑制剂预处理可以逆转miR-338的抑癌作用。结论:miR-338通过负向调控GPX4表达进而促进肿瘤细胞铁死亡,最终抑制NSCLC细胞增殖。     

miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖作用机制研究

目的 探讨 miR-125b抑制胶质瘤细胞增殖的分子作用机制。方法 选取2016年12月至2017年12月宁夏医科大学总医院收治的胶质瘤患者32例（男18例、女14例）,选择同期行脑内血肿清除术的脑出血或因颅脑损伤行颅内减压术的但脑组织正常患者31例为对照组（男15 例、女 16 例）。利用qPCR法检测miR-125b在胶质瘤组织和人胶质瘤细胞系 LN229的表达,通过转染miR-125b 模拟物,检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229增殖的抑制作用,采用Targetscan、miRanda等预测软件对miR-125b的作用靶点进行预测,以双荧光素酶报告基因系统分析miR-125b与STAT3的相互作用,运用Western blot法检测miR-125b对胶质瘤细胞LN229中STAT3表达的影响。结果 与正常癌旁脑组织相比较,胶质瘤组织中miR-125b的表达水平明显降低,胶质瘤细胞系LN229中miR-125b的表达与正常星形胶质细胞明显降低,相比于NC 模拟物,转染miR-125b 模拟物之后LN229细胞的增殖显著抑制,双荧光素酶报告基因系统检测显示,miR-125b 可直接调控STAT3 转录活性,而且miR-125b显著抑制LN229细胞STAT3表达。结论 miR-125b可靶向STAT3的表达从而调控胶质瘤细胞的增殖。     

人脑胶质瘤中miR-106b~25基因簇表达的研究

  目的  检测胶质瘤细胞系及组织中miR-106b~25基因簇成员miR-106b、miR-93、miR-25的表达情况。  方法  运用实时定量PCR的方法检测不同人脑胶质母细胞瘤细胞系及不同病理级别胶质瘤标本中miR-106b~25基因簇成员miR-106b、miR-93和miR-25的表达水平。原位杂交技术检测含不同病理级别及瘤旁正常脑组织的胶质瘤组织芯片中miR-106b~25基因簇成员的表达情况,进而分析该簇miRNAs的表达与胶质瘤病理级别的相关性。  结果  以正常脑组织表达量为基准,3种miRNA在所有检测细胞系中均有增高的趋势。收集43例胶质瘤标本中,RT-PCR结果显示,随着肿瘤病理级别的升高,3种miRNA在各组中的平均表达量也逐步升高。其中,miR-106b（F=4.479,P=0.018）和miR-93（F=3.493,P=0.040）各组间的表达差异均有统计学意义。而miR-25表达无明显的统计学差异（F=2.766,P=0.075）。原位杂交结果显示3种miRNA的表达在高级别胶质瘤中的表达量明显高于低级别肿瘤。Spearman等级相关分析表明3种miRNA的表达信号强度分布均与胶质瘤的WHO病理分级呈正相关,在miR-106b、-93、-25中的相关系数分别为r_s=0.617（P＜0.001）、r_s=0.438（P＜0.001）、r_s=0.463（P＜40.001）。  结论  miR-106b~25在胶质瘤中表达呈不同程度增高,并与肿瘤分级呈正相关。      

miR-423-5p调控PDCD5表达增强神经胶质瘤细胞替莫唑胺耐药性

目的：探讨miR-423-5p在人脑神经胶质瘤组织和细胞中的表达及其调控程序性细胞死亡蛋白5（programmed cell death protein 5,PDCD5）增强胶质瘤细胞对替莫唑胺（temozolomide,TMZ）的耐药性。方法：收集2017年1月至2018年12月北 华大学附属医院神经外科手术切除的20例脑神经胶质瘤患者的瘤及瘤旁组织标本,以及胶质瘤细胞系U251、 U87、SHG-44和人 脑小胶质细胞株HMC-3, 用qPCR法检测胶质瘤组织及细胞系中miR-423-5p和PDCD5的表达水平。用合成的miR-423-5p mimics 和miR-NC分别转染U251和U87细胞,同时用不同浓度（50、100、150和200 μmol/L）的TMZ处理细胞,检测转染细胞对TMZ的 耐药性,用MTT法、克隆形成实验检测转染细胞的增殖活力,用Western blotting检测U251、 U87细胞中c-caspase 3、Bcl-2和 PDCD5蛋白的表达。用双荧光素酶报告基因实验验证 miR-423-5p 与 PDCD5 的靶向关系。结果：miR-423-5p 在脑神经胶质 瘤组织和胶质瘤细胞系中均高表达（均P<0.01）。与miR-NC组比较,miR-423-5p mimics组U251和U87细胞的增殖能力明显增 强（均P<0.01）, 对TMZ的耐药性增强。双荧光素酶报告基因实验证实miR-423-5p可与PDCD5 3'' UTR结合,抑制PDCD5的表 达。结论：miR-423-5p高表达增强胶质瘤细胞对TMZ的耐药能力,其可作为临床胶质瘤治疗的潜在新靶点。     

miR-147对胶质瘤U87细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的:比较胶质瘤患者胶质瘤组织和瘤旁组织中miR-147表达水平的差异性,进一步分析miR-147与胶质瘤细胞生物学活性的相关性。方法:通过实时荧光定量PCR检测65例胶质瘤患者瘤组织和瘤旁组织中miR-147的表达水平;采用Lipofectamine 2000转染法转染胶质瘤细胞,分为miR-147 mimics组和NC组,检测两组转染效率;进一步通过CCK-8实验、流式细胞实验和Transwell实验比较两组细胞生物活性。结果:胶质瘤组织中miR-147表达水平显著低于瘤旁组织;与NC组比较,miR-147 mimics组细胞不论是增殖能力还是侵袭能力都明显降低,但是,miR-147 mimics组的细胞凋亡率升高。结论:胶质瘤组织中存在miR-147低表达的现象。miR-147在胶质瘤细胞中表达升高能够抑制细胞的增殖能力、降低其侵袭能力,并促使更多的细胞发生晚期凋亡。miR-147可能在胶质瘤中扮演着抑癌基因的重要角色。     

miR-138-5p靶向调控RAB22A表达抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

目的:探讨miR-138-5p对胶质瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响以及其作用机制。方法:U251细胞分为miR-NC组(对照组)、miR-mimics组、miR-inhibitor组以及miR-mimics+RAB22A-pcDNA3.1组。qRT-PCR检测miR-138-5p在胶质瘤细胞中的表达量;CCK8实验检测U251细胞的增殖能力;Transwell实验检测U251细胞的迁移和侵袭能力;Targetscan数据库预测miR-138-5p的下游靶基因;运用双荧光素酶报告基因实验验证细胞周期蛋白RAB22A是miR-138-5p的靶基因;RNA结合蛋白免疫沉淀实验进一步验证miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;运用蛋白免疫印迹实验检测组织和细胞中RAB22A的蛋白表达水平。结果:与正常人星形胶质细胞相比较,miR-138-5p 在胶质瘤细胞中表达量降低(P<0.05);CCK8和Transwell实验结果表明,在U251细胞中,过表达miR-138-5p能显著抑制细胞的增殖、迁移和侵袭能力(P＜0.05);运用Targetscan数据库预测miR-138-5p下游靶基因为RAB22A,miR-138-5p作用于RAB22A的3' UTR区域,双荧光素酶报告基因实验与蛋白免疫沉淀实验结果证实miR-138-5p与RAB22A之间的相互作用;RAB22A在胶质瘤细胞中明显高表达(P＜0.05),在U251细胞中过表达miR-138-5p明显抑制RAB22A的表达(P＜0.05)。结论:miR-138-5p在胶质瘤细胞中表达降低,miR-138-5p通过下调RAB22A表达而抑制细胞增殖、迁移和侵袭。     

下调miR-183靶向肿瘤抑制因子CPEB1增强脑胶质瘤细胞的 放射敏感性

目的：探讨 miR-183 对脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响。方法：2020 年 10 月至 2021 年 6 月,收集秦皇岛市第一医院 40 例脑胶质瘤组织标本,对 T98G 细胞进行梯度剂量 X 射线（0、2、4、6 Gy）照射。采用 qPCR 检测 miR-183、细胞质多腺苷酸化元件结合蛋白 1（cytoplasmic polyadenylation element-binding protein 1,CPEB1）在脑胶质瘤组织、T98G 细胞和经 X 射线照射的 T98G 细胞中的表达量。将 miR-183 inhibitor 转染 T98G 细胞后下调 miR-183 表达,经 6 Gy X 射线垂直照射,CCK-8 法、流式细胞术和 WB 法,分别检测 T98G 细胞增殖能力、细胞凋亡率及 BAX 和 Bcl2 蛋白表达量。Targetscan 软件预测和双荧光素酶报告基因实验检测 miR-183 与 CPEB1 的靶向关系。下调 CPEB1 表达后,经 6 Gy X 射线照射,分别用 CCK-8 法、流式细胞术和 WB 法检测 T98G 细胞增殖能力、细胞凋亡率及 BAX 和 Bcl2 蛋白表达量。将 pcDNA-CPEB1 或 CPEB1 siRNA 质粒转染T98G 细胞,分别下调或过表达 CPEB1 后,检测 miR-183 通过 CPEB1 对 T98G 细胞放射敏感性的影响。结果：脑胶质瘤组织和细胞中 miR-183 呈高表达,CPEB1 mRNA 呈低表达。T98G 细胞中 miR-183 的表达量随着 X 射线放射剂量增加而降低（P<0.05）,CPEB1 表达量随着 X 射线放射剂量增加而升高（P<0.05）。6 Gy X 射线照射 T98G 细胞后,下调 miR-183 可降低细胞增殖能力、增加细胞凋亡率,而过表达 miR-183 则起到相反作用（P<0.05）。miR-183 靶向 CPEB1 mRNA 且负调控 CPEB1 表达。下调 CPEB1 表达后,经 6 Gy X 射线照射可显著提高 T98G 细胞增殖能力（P<0.05）、降低细胞凋亡率（P<0.05）,miR-183 可逆转 CPEB1 过表达对细胞 T98G 放射敏感性的促进作用（P<0.05）。结论：下调 miR-183 的表达能够负调控 CPEB1,从而增强脑胶质瘤细胞的放射敏感性。     

miR-29a靶向调控CLDN1抑制肝癌细胞增殖的实验研究

目的:探讨miR-29a在肝癌组织中的表达水平,及其对人肝癌细胞增殖能力的影响。方法:通过RT-PCR测定肝癌组织及非肝癌组织中miR-29a的表达水平;将携带miR-29a的脂质体miR-29a mimic、空载体miR-NC以及miR-29a抑制剂anti-miR-29a转染入肝癌细胞系HepG2和HLE,通过RT-PCR方法检测miR-29a对肝癌细胞系HepG2、HLE增殖能力影响;通过Targetscan软件预测miR-29a靶基因,采用Western blot及荧光素酶实验验证。结果:与非肝癌组织比较,miR-29a在肝癌组织中表达下调,MTT实验提示:miR-29a高表达组肝癌细胞增殖能力较弱,miR-29a低表达组肝癌细胞增殖能力提高。Targetscan软件提示:CLDN1可能为miR-29a靶基因,Western blot及荧光素酶实验提示:与阴性对照组相比,miR-29a高表达组内CLDN1表达下降,相反miR-29a低表达组内CLDN1表达增加。结论:miR-29a在肝癌细胞及组织中表达下调,并且可能通过调控CLDN1影响肝癌细胞增殖能力。     

miR-369-5p抑制肝细胞癌细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨miR-369-5p在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）中的表达情况、临床意义,观察miR-369-5p对HCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:实时定量PCR检测miR-369-5p在HCC组织与相应癌旁组织、正常肝细胞（L02）与HCC细胞系中的表达情况;CCK-8实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞增殖能力;Transwell实验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞迁移及侵袭能力;Targetscan数据库预测p21活化激酶4（p21 activated kinase 4,PAK4）为miR-369-5p下游靶基因;用双荧光素酶实验检测荧光素酶活性;蛋白免疫印迹试验检测MHCC-97H及HCCLM3细胞中PAK4的蛋白表达水平。结果:miR-369-5p在HCC组织及细胞系中均明显低表达,低表达miR-369-5p与肿瘤大小、TNM分期、微血管浸润相关;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p抑制细胞的增殖、迁移及侵袭能力;通过生物信息学工具预测PAK4是miR-369-5p的下游靶基因;在MHCC-97H及HCCLM3细胞中过表达miR-369-5p下调PAK4蛋白的表达。结论:在HCC中miR-369-5p表达下调且其低表达与HCC恶性病理特征有关,在HCC中过表达miR-369-5p可通过下调PAK4表达抑制细胞增殖、迁移及侵袭。     

miRNA-184在胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨miRNA-184在胶质瘤组织中的表达及其对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响以及胶质瘤发生发展过程中的分子机制。方法:利用荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miRNA-184在患者胶质瘤组织以及癌旁组织中的表达水平；利用体外细胞培养实验向胶质瘤细胞中转染miRNA-184 mimics；利用CCK-8比色法和流式细胞仪分别检测转染miRNA-184 mimics后胶质瘤细胞的增殖能力和凋亡情况；利用Western blot检测转染miRNA-184 mimics后胶质瘤细胞中AKT蛋白的表达水平。结果:荧光定量PCR检测结果表明，miRNA-184在患者胶质瘤组织中的表达水平显著低于癌旁组织（P＜0.05）；细胞体外转染实验结果表明，转染miRNA-184 mimics后，胶质瘤细胞的增殖能力显著下降，凋亡率显著升高（P＜0.01）；Western blot检测结果表明，转染miRNA-184 mimics后胶质瘤细胞中AKT蛋白表达水平显著下降（P＜0.05）。结论:miRNA-184在胶质瘤组织中显著低表达，miRNA-184与胶质瘤的发生发展密切相关；过表达miRNA-184可以抑制胶质瘤细胞的增殖，促进胶质瘤细胞的凋亡；miRNA-184可能通过抑制AKT信号通路从而抑制胶质瘤的发生发展。     

miR-221/222 overexpession in human glioblastoma increases invasiveness by targeting the protein phosphate PTPμ

Glioblastoma is the most frequent brain tumor in adults and is the most lethal form of human cancer. Despite the improvements in treatments, survival of patients remains poor. In order to identify microRNAs (miRs) involved in glioma tumorigenesis, we evaluated, by a miRarray, differential expression of miRs in the tumorigenic glioma LN-18, LN-229 and U87MG cells compared with the non-tumorigenic T98G cells. Among different miRs we focused our attention on miR-221 and -222. We demonstrated the presence of a binding site for these two miRs in the 3' untranslated region of the protein tyrosine phosphatase μ (PTPμ). Previous studies indicated that PTPμ suppresses cell migration and is downregulated in glioblastoma. Significantly, we found that miR-221 and -222 overexpression induced a downregulation of PTPμ as analyzed by both western blot and real-time PCR. Furthermore, miR-222 and -221 induced an increase in cell migration and growth in soft agar in glioma cells. Interestingly, the re-expression of PTPμ gene was able to revert the miR-222 and -221 effects on cell migration. Furthermore, we found an inverse correlation between miR-221 and -222 and PTPμ in human glioma cancer samples. In conclusion, our results suggest that miR-221 and -222 regulate glioma tumorigenesis at least in part through the control of PTPμ protein expression.