裸花紫珠正丁醇提取物止血作用及其机制研究

目的:研究裸花紫珠(Callicarpa nudiflora)正丁醇提取物的止血活性及其可能的作用机制。方法:雌性KM小鼠50只,随机分为空白对照组、云南白药组(1.33g/kg)、裸花紫珠低(0.188 g提取物/kg)、中(0.375g提取物/kg)、高剂量组(0.750g提取物/kg),连续给药3d后测定受试动物的出血时间(Bleeding time,BT)和凝血时间(Clotting time,CT)。取雄性SD大鼠50只,随机分为空白对照组、云南白药组(0.93 g/kg)、裸花紫珠低(0.131g提取物/kg)、中(0.261g提取物/kg)、高剂量组(0.523g提取物/kg),连续给药10d。给药结束后分别测定血小板(Platelet,PLT)计数、二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)诱导的血小板聚集以及血小板中P-选择素(P-Selectin)含量,观察裸花紫珠提取物对血小板数量及活性的影响。采用Western Blot法,检测裸花紫珠提取物对血小板中p-Akt表达的影响。结果:给药后,裸花紫珠正丁醇提取物可显著缩短小鼠的出血时间和凝血时间。与正常组相比,0.131、0.523g裸花紫珠提取物/kg BW均可显著增加大鼠血小板计数。裸花紫珠正丁醇提取物可显著促进ADP诱导的血小板聚集;进一步研究表明,裸花紫珠提取物可显著增加血小板内P-selectin的表达,并促进Akt蛋白的磷酸化。结论:裸花紫珠提取物具有明显的止血作用,促进血小板PI3K/Akt信号转导、刺激血小板的活化可能是其止血作用的机制之一。     

裸花紫珠提取物的抗乳腺癌转移作用及其机制

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extracts from Callicarpa nudiflora,ECN)的抗乳腺癌转移作用及其作用机制。方法:采用尾静脉注射肿瘤细胞法建立裸鼠实验性肺转移模型,24 h后将实验动物随机分为空白组,ECN低、中、高剂量组(0.125,0.25,0.5 g·kg-1),空白组给予等量溶剂,每日ig给药1次,连续8周。给药结束后,采用巢式PCR法检测裸鼠肺组织中人细胞角蛋白19(CK19)基因的表达,以确定肿瘤细胞的肺转移程度(n=10)。建立肿瘤细胞体外迁移、侵袭模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94(阳性对照)处理MDA-MB-231细胞14 h(n=4),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外迁移、侵袭的影响;建立肿瘤细胞体外黏附模型,以100,200 mg·L-1ECN以及10 nmol·L-1BB-94处理MDA-MB-231细胞60 min(n=3),观察ECN对乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的体外黏附能力的影响;采用Western blot法,检测MDA-MB-231细胞分别经100,200 mg·L-1ECN处理24 h后p-锌指转录因子(p-Snail)和上皮性钙黏附蛋白(Ecadherin)的表达情况。结果:体内研究表明,ECN可显著降低裸鼠肺组织中人CK19 mRNA的表达(P0.01);体外迁移实验发现,ECN 100,200 mg·L-1组的迁移细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外侵袭实验显示,ECN低、高剂量组的侵袭细胞数与空白组相比显著减少(P0.01);体外黏附实验表明,ECN可干扰肿瘤细胞与细胞外基质蛋白之间的黏附(P0.01);Western blot实验结果表明,ECN可显著抑制p-Snail,并增加E-cadherin的表达。结论:ECN具有明显的抗乳腺癌转移作用。抑制细胞内p-Snail的活化可能是抗转移作用的机制之一。     

含有取代哌嗪及哌啶结构的噻吩并吡啶类化合物的合成及活性研究

 目的 设计合成一系列新型的含取代哌嗪及哌啶的噻吩并吡啶类衍生物,并对其体内抗血小板聚集活性进行了初步评价。 方法 从噻吩并吡啶 ( 1 ) 出发,与氯乙酰氯连接得到关键中间体（ 2 ）,再与一系列取代哌嗪及哌啶连接得到目标化合物（ 3-19 ）。 结果 得到 17 个新化合物,所有化合物结构都经过 ¹ H NMR 及质谱确证。这些化合物都进行了大鼠体内抑制血小板聚集活性测试。其中化合物 10-14 具有较高活性。 结论 该类噻吩并吡啶衍生物有可能成为新型结构的具有抗血小板聚集活性的先导化合物,值得进一步研究。     

血小板ADP受体及其拮抗剂的研究进展

二磷酸腺苷(ADP)是第1个已知的低分子血小板弱聚集诱导剂,ADP以较高的浓度储存在血小板致密颗粒中,当血小板受到刺激活化后,ADP从致密颗粒中释放出来,作为二次激动剂,通过作用于多种受体,可增强自身及其他诱导剂对血小板的诱导作用并有助于血栓的稳定化。ADP受体拮抗剂可以抑制ADP受体的表达、结合及其活性,从而有效地抑制了血小板的聚集,对治疗血栓性疾病具有重要的作用。目前,ADP受体拮抗剂类药物因为具有较好的抗栓活性和较高的安全性,已经被广泛的应用于临床。通过对血小板ADP受体的类型及重要的受体拮抗剂进行了综述,对该类药物的开发具有一定的参考价值。     

毛冬青总提取物的抗血栓作用及基于ADP的机制研究

目的:研究毛冬青总提取物的抗血栓作用。方法:采用家兔体外血凝块溶解实验,胶原-肾上腺素小鼠血栓实验,角叉菜胶小鼠血栓实验,Fe Cl3大鼠血栓形成实验,观察毛冬青提取物溶解血栓和抗血栓形成的作用。结果:毛冬青总提取物的0.2 mg/m L浓度对体外形成的家兔血凝块有明显的溶解作用;毛冬青总提取物(1、0.5、0.25 g/kg)剂量组均能减少胶原蛋白-肾上腺素诱发血栓形成小鼠的死亡数,增加保护率;能减少角叉菜胶诱导血栓形成小鼠的相对黑尾长度;毛冬青总提取物(195、97.5、48.75 mg/kg)各剂量组均减轻Fe Cl3颈动脉血栓模型大鼠的血栓的重量和内皮受损程度;降低ADP诱导的血小板聚集率;降低FIB的含量及抑制P2Y12受体的表达,对APTT、TT、PT的表达几乎无影响;提高c AMP的表达水平;减少TXB2和P-选择素的含量、不影响6-Keto-PGF1α的表达;并降低血小板胞浆Ca2+平均荧光强度及抑制GPⅡb/Ⅲa的表达。结论:毛冬青总提取物具有一定的抗血栓的作用,能改善血管内皮的受损程度,具有保护血管内皮的作用,并通过影响P2Y12受体αGi亚单位和βγ亚单位功能的表达,降低P2Y12受体的含量,抑制血小板的聚集,最终抑制血栓的形成。     

代谢组学研究复方柴归方超临界CO2提取物抗抑郁作用及其机制

采用小鼠悬尾试验（TST）、强迫游泳试验（FST）以及大鼠慢性温和不可预知应激（CUMS）模型评价复方柴归方超临界CO₂提取物（FFCGF）的抗抑郁作用;采用核磁共振代谢组学的方法,结合多元统计分析技术探讨FFCGF的抗抑郁作用机制。大鼠进行为期28 d的CUMS程序造模,药物干预28 d,与CUMS造模同时进行,造模过程中观察大鼠体重、糖水偏爱、穿越格数和直立次数的变化,造模结束后收集大鼠尿液,应用¹H-NMR技术结合多元统计分析方法分析大鼠尿液内源性代谢产物的变化规律,寻找潜在的生物标志物。结果显示FFCGF能明显减少小鼠悬尾试验和强迫游泳试验的不动时间,改善CUMS模型大鼠的体重、糖水偏爱、穿越格数和直立次数,说明FFCGF具有明确的抗抑郁作用。代谢组学结果显示空白组和模型组能明显区分,CUMS模型大鼠尿液中甘氨酸和丙酮酸含量显著升高,醋酸、琥珀酸、2-氧化戊二酸和柠檬酸含量显著降低（P < 0.05,0.01）,FFCGF能够明显调节CUMS程序引起的6种生物标志物的含量变化,使其恢复正常。FFCGF可能通过调节能量代谢、脂质代谢和氨基酸代谢发挥抗抑郁作用。     

五味子藤茎提取物抗大鼠肝纤维化作用及机制探讨

目的:观察五味子藤茎提取物抗四氯化碳(CCl4)及乙醇所致肝纤维化的作用及机制。方法:50只Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、五味子藤茎提取物高、中、低剂量组,采用ip CCl4,并饮用乙醇、饲用高脂饲料等复合因素制造肝纤维化模型,造模后,给药组分别ig高、中、低不同剂量(5.0,2.5,1.25 g·kg-1)五味子藤茎提取物,正常组和模型组灌服等量的生理盐水。末次给药后,检测血清丙氨酸转氨酶(ALT),天冬氨酸转氨酶(AST)活性,层粘蛋白(LN),透明质酸(HA),Ⅲ型前胶原(PCⅢ)水平,同时取大鼠肝组织,分别用于苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化,蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测转化生长因子-β_1(TGF-β_1),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清AST,ALT活性及HA,LN,PCⅢ水平均显著升高,肝组织TGF-β_1,α-SMA蛋白表达水平显著增高(P0.01);与模型组比较,五味子藤茎提取物能显著降低肝纤维化大鼠血清ALT,AST活性及HA,LN,PCⅢ水平,病理组织学检查结果显示,五味子藤茎提取物各剂量组大鼠肝组织结构明显改善,肝纤维化程度减轻,五味子藤茎提取物各剂量组均可显著降低肝组织TGF-β_1,α-SMA蛋白表达水平(P0.01)。结论:五味子藤茎提取物对CCl4及乙醇所致肝损伤有明显保护作用,其机制可能与降低肝组织TGF-β_1,α-SMA蛋白表达、抑制肝星状细胞活化有关。     

基于Nrf2/ARE信号通路探讨海南五指山裸花紫珠对鼻咽癌细胞顺铂诱导凋亡敏感性的作用及其机制

目的:探讨海南五指山裸花紫珠(LHZZ)对鼻咽癌(NPC)细胞顺铂(DDP)诱导凋亡敏感性的影响,并探究其作用机制.方法:细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测不同浓度DDP(0,2,4,8,16,32 mg·L-1)和不同浓度海南五指山裸花紫珠(0,25,50,75,100 mg·L-1)处理后的细胞存活率.实验分组...     

木豆叶提取物对H_2O_2诱导的H9c2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究木豆叶提取物(ECCL)对H2O2诱导的H9c2细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制。方法建立H2O2诱导的H9c2细胞氧化损伤模型,于H2O2刺激前加入PI3K信号通路阻断剂LY294002(LY)预处理10 min,加入20、50μg/m L ECCL预处理24 h。MTT法检测细胞存活率,比色法测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,Western blotting检测细胞内p-Akt、p-e NOS蛋白表达。结果与模型组比较,ECCL可明显增加H9c2细胞H2O2损伤后细胞存活率(P0.01),增加SOD活力,降低MDA、LDH水平,增加p-Akt和p-e NOS蛋白表达(P0.05、0.01),LY可阻断ECCL对H9c2的上述作用。结论 ECCL能够减轻H2O2所致的H9c2细胞损伤,可能是通过激活PI3K通路促进其下游因子Akt和e NOS磷酸化发挥作用。     

复方柴归方超临界CO_2提取物调控cAMP信号通路的抗抑郁作用机制研究

目的从环磷酸腺苷(c AMP)信号通路角度探讨复方柴归方超临界CO_2提取物的抗抑郁作用机制。方法采用慢性温和不可预知应激(CUMS)程序对大鼠进行造模,以高、中、低剂量复方柴归方超临界CO_2提取物及文拉法辛为干预药物,检测各组大鼠海马组织中c AMP、蛋白激酶A(PKA)、环磷酸腺苷反应原件结合蛋白(CREB)、脑源性神经生长因子(BDNF)水平及其相应m RNA水平。结果与对照组比较,模型组大鼠海马组织中c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平显著下降(P0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组比较,各剂量组c AMP、PKA、p-CREB、BDNF水平均出现回调(P0.05、0.01);同时,模型组大鼠海马组织中酪氨酸激酶B(TrkB)、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平显著下降(P0.05、0.01),复方柴归方干预后,与模型组相比,各剂量组Trk B、PKA、p-CREB、BDNF的m RNA水平均出现回调(P0.05、0.01)。结论复方柴归方超临界CO_2提取物可通过调控c AMP-PKA-CREB-BDNF信号通路发挥抗抑郁作用。     

FOLIN-酚比色法测定裸花紫珠中总酚含量

目的:建立裸花紫珠总酚的含量测定方法.方法:采用Folin-酚比色法测定裸花紫珠中总酚的含量,确定以没食子酸为对照品的最佳测定条件.结果:Folin-酚用量为0.5 mL,7.5％ Na2CO3用量为1.5 mL,反应条件为40℃下加热10 min,显色条件为25℃下显色60 min,没食子酸浓度在0～18 μμg时与其吸光度有良好线性关系,其回归方程Y=32.262X-0.001 2(n-7),r=0.999 9,根据此线性回归方程进行裸花紫珠总酚的含量测定.结论:该方法简单方便、稳定性好、准确度高,可用于裸花紫珠原料及其制剂的质量控制和定量分析.     

HPLC同时测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷和木犀草素

目的:建立同时测定裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷和木犀草素的方法。方法:采用高效液相色谱法,PhenomenexGemini C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,以甲醇(A)-0.3%磷酸水溶液(B)为流动相线性梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长350 nm,柱温30℃。结果:毛蕊花糖苷和木犀草素线性范围分别在29.6～740.0,1.0～25.0μg(r=0.999 9),平均回收率分别为99.08%,99.93%,RSD分别为1.53%,1.65%。结论:方法精密度高,重复性好,可用于裸花紫珠药材中毛蕊花糖苷和木犀草素的含量测定。     

聚酰胺树脂精制裸花紫珠总黄酮的工艺优选

目的：优选聚酰胺树脂分离纯化裸花紫珠总黄酮的工艺条件。方法：以总黄酮含量为指标,利用静态-动态吸附-洗脱试验考察聚酰胺树脂纯化总黄酮的行为,通过单因素试验考察饱和吸附量、pH、洗脱溶剂用量等工艺参数。结果：最佳精制工艺参数为上样液质量浓度0.073 g·mL^-1,上样量2 BV,上样液pH 3.0,加水3 BV洗脱杂质,用80%乙醇3 BV洗脱,收集乙醇洗脱液;总黄酮纯度由5.6%提高至42.3%,平均保留率89.6%（RSD 3.56%）。结论：采用聚酰胺树脂纯化裸花紫珠总黄酮的效果良好,为裸花紫珠新制剂的开发提供实验依据。     

裸花紫珠化学成分与药理活性研究进展

裸花紫珠为海南省的道地药材,并被录入《中国药典》2015年版新增中药品种。通过对国内外1996—2016年文献调研显示,其化学成分主要有苯丙素类、黄酮类、三萜类、二萜类、环烯醚萜类、酚酸类及其苷和甾醇等。现代药理活性研究表明其具有止血、抗炎、抑菌、增强免疫、细胞毒等作用。通过完成对裸花紫珠的化学成分系统总结和药理活性的概述,为其药材的质量控制、药理作用研究和深层次开发利用提供参考依据。     

GC-MS分析海南白沙产裸花紫珠叶挥发油的化学成分

目的:研究海南白沙产裸花紫珠叶挥发油中的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法从裸花紫珠叶中提取挥发油,并通过气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行鉴定,同时采用峰面积归一化法确定各成分的相对百分含量。结果:从海南白沙产裸花紫珠挥发油中共分离出76个组分,鉴定了其中的70种成分,所鉴定的成分占总挥发油成分的98.69%,其中相对百分含量较高的成分有β-蒎烯(20.70%),α-蒎烯(9.41%),石竹烯氧化物(6.90%),石竹烯(6.65%),邻伞花烃(6.62%),反式-4-侧柏醇(5.85%)和桃金娘烯醇(5.61%)等。结论:海南白沙产裸花紫珠挥发油的化学成分主要为单萜及其含氧衍生物。     

裸花紫珠联合万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌致大鼠肺炎模型的协同抗菌作用研究

目的观察裸花紫珠联合万古霉素对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)所致大鼠肺炎模型的协同抗菌作用,为临床上治疗MRSA所致的感染提供一种更安全有效的治疗方法。方法将80只健康雄性SD大鼠随机分成8组,10只作为对照组,其余大鼠从左侧鼻腔分别滴入200μL MRSA(1×108 CFU/m L)菌液造模。每天记录观察饮食、饮水量情况及大鼠活动度,持续给药10 d后观察大鼠血液白细胞数、肺部载菌量和组织病理学变化。结果裸花紫珠联合盐酸万古霉素各组与模型组相比,白细胞计数均下降明显(P0.05);大鼠肺部的载菌量明显降低(P0.05),肺组织病理损伤程度均明显减轻。结论裸花紫珠联合盐酸万古霉素对MRSA有协同抗菌作用,能更好地治疗MRSA引起的肺炎,可提高抗生素对耐药菌疗效,缩短疗程。     

裸花水竹草化学成分

目的:研究鸭跖草科裸花水竹草的化学成分。方法:采用硅胶柱色谱、重结晶等方法分离和纯化,并通过IR,EIMS及NMR等波谱学方法对分离得到的化学成分进行结构鉴定。结果:从裸花水竹草中共分离得到15个化合物,分别为正三十九烷(1),二十烷酸辛酯(2),胆甾-7-烯-3-酮(3),22,23-二氢菠菜甾酮(4),二十四烷酸(5),三十烷酸(6),谷甾醇(7),菜油甾醇(8),豆甾醇(9),麦角甾醇(10),豆甾-7-烯-3-醇(11),豆甾醇-3-O-葡萄糖苷(12),胡萝卜苷(13),二十七烷酸甘油酯(14),bracteanolide A(15)。结论:其中化合物1~15均为首次在该植物中分离得到。     

裸花紫珠叶中1个新的环烯醚萜苷

目的研究裸花紫珠Callicarpa nudiflora的化学成分。方法利用硅胶、MPLC柱色谱、高效制备液相色谱等色谱方法进行分离纯化,根据理化常数测定及波谱数据分析鉴定化合物结构。结果从裸花紫珠叶80%乙醇提取物中分离得到5个化合物,分别鉴定为6′-O-咖啡酰基益母草苷(1)、木犀草素(2)、5,4′-二羟基-3,7,3′-三甲氧基黄酮(3)、木犀草素-4′-O-(6″-E-咖啡酰)-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、2α,3α,19α,23-四羟基-12-烯-28-乌苏酸(5)。结论化合物1为新化合物,命名为裸花紫珠苷A1。     

裸花紫珠化学成分及细胞毒活性研究

综合运用HP-20大孔吸附树脂柱粗分、硅胶柱和Sephadex LH-20凝胶柱等色谱法分离纯化海南道地药材裸花紫珠Callicarpa nudiflora 中的化学成分,借助波谱数据解析化合物的结构。采用MTT法测定其粗提物和单体化合物的细胞毒活性。发现裸花紫珠醇提物50%,70%乙醇洗脱物对肿瘤细胞的增殖有较强的抑制作用。从上述活性部位分离和鉴定得到12个化合物,其中6个黄酮：木犀草苷（1）,木犀草素-4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2）,6-羟基木犀草素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（3）,木犀草素-7-O-新橙皮苷（4）,野漆树苷（5）,木犀草素-7,4'-二-O-葡萄糖苷（6）;3个苯乙醇苷：连翘酯苷（7）,类叶升麻苷（8）,alyssonoside（9）;3个环烯醚萜苷：梓醇（10）,nudifloside（11）,益母草苷（12）。化合物 3~6,10和12为首次从该属植物中分离得到,化合物9为首次从该种植物中分离得到。单体化合物的细胞毒活性实验显示,黄酮类化合物1~6整体均显示出对宫颈癌Hela,肺癌A549和乳腺癌MCF-7细胞不同程度的抑制作用,化合物3,5和11的细胞毒活性比较突出。综合分析表明,黄酮类化合物是裸花紫珠活性部位的主要化学成分,有抑制肿瘤细胞增殖的潜在功效;苯乙醇苷类化合物含量较高,但不表现细胞毒活性;环烯醚萜苷类成分少量存在,表现出微弱的细胞毒活性。     

广东紫珠正丁醇部位化学成分分析

目的:研究广东紫珠的化学成分。方法:利用硅胶、Sephadex LH-20、MPLC等色谱方法进行化合物的分离纯化,根据化合物的理化性质、波谱分析方法进行结构鉴定。结果:从广东紫珠正丁醇部位分离得到8个单体化合物,分别为6'-β-D-apiofuranosyl cistanoside C(1),acetyl forsythoside B(2),2'-乙酰基毛蕊花糖苷(3),毛蕊花糖苷(4),异毛蕊花糖苷(5),连翘酯苷B(6),金石蚕苷(7),arjunglucosideⅡ(8)。结论:化合物1~3,5,8均为首次从该植物中分离得到。