套式聚合酶链式反应（Nested PCR）检测肺炎衣原体

肺炎衣原体（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ，ＣＰｎ）可引起人类急性呼吸道炎症，临床表现以肺炎为主，已在世界上许多国家和地区引起流行，本文介绍通过套式ＰＣＲ检测ＣＰｎ，共检测１０９例呼吸道感染者之咽拭标本，检出１３例阳性（阳性率１２％），提示ＣＰｎ的呼吸道感染有我国并不少见。实验结果表明，套式ＰＣＲ用于ＣＰｍ检测方法的建立，在敏感、特异、简便、快速的特点，具有良好的应用前景。     

PCR检测肺炎患儿咽拭子肺炎支原体

本文应用ＰＣＲ技术检测了２７５例肺炎患儿之咽拭子标本中的肺炎支原体特异性ＤＮＡ，结果为７１例患儿之咽拭子阳性，阳性率２５．８％，与国内其他作者的报道相近。本文并就肺炎支原体感染的特异性诊断方法作了复习与讨论。     

聚合酶链反应在肺炎支原体检测和研究中的应用

肺炎支原体（ＭＰ）是呼吸道感染的常见病原之一。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对２３５例肺炎患儿作ＭＰ－ＤＮＡ的检测，其结果６３例阳性，占２６．８％。对１５例ＭＰ－ＤＮＡ阳性者同时检查血冷凝集试验，仅５例阳性，占３３．３％，提示ＰＣＲ法检测ＭＰ感染具有特异性强、灵敏度高、操作简单、耗时少的优点，对ＭＰ的早期诊断有很大的帮助，并且把ＭＰ感染的病因学诊断提高到分子生物学的水平。     

聚合酶链式反应（PCR）及其应用

聚合酶链式反应(简称PCR),又称体外基因放大技术,是用DNA聚合酶在体外系统中诱发一对引物间的DNA双链的合成过程。经过20～30次循环后,可使目的基因片段成百万倍地扩增,使得对该基因片段的分析研究更为便利。PCR技术自1985年创立以来,经过不断改进,目前已成为分子生物学研究的重要手段。PCR技术已经应用于遗传病的基因诊断和产前诊断,病原体的鉴定,癌基因的分析研究等。最突出的是经PCR放大后的DNA片段可以直接进行顺序分析。     

反复呼吸道感染儿肺炎支原体PCR检测及免疫功能研究

本文对１５２例对复呼吸道感和肺炎支原体ＰＣＲ及免疫功能进行检测。结果咽拭子肺炎支原体ＰＣＲ阳性２５例，阳性率１６．５％。     

套式（Nested）PCR检测肺炎支原体与肺炎衣原体研究

本文报告根据肺炎支原体（Mp）和肺炎衣原体（Cpn）的16SrRNA基因序列，建立了套式（Nested）PCR检测方法。灵敏度试验表明，Mp套式PCR和Cpn套式PCR灵敏度分别高出Mp普通PCR和Cpn普通PCR二个数量极。     

聚合酶链反应在小儿支原体肺炎诊断中的应用价值

为探讨ＰＣＲ在小儿支原体肺炎诊断中的实际应用价值，对４７例临床疑诊支原体肺炎的病儿做了咽拭子ＰＣＲ－ＭＰ测定，同时做了血冷凝集试验（ＣＡＴ）。结果：ＰＣＲ－ＭＰ阳性２１例，真阳性１５例，假阴性１例，敏感度为９３．８％。假阳性６例，占检测标本的１２．８％，占检测报告阳性总数的２８．６％，ＣＡＴ阳性１２例。确诊支原体肺炎１６例，其中１５例经ＰＣＲ早期确诊。结论：ＰＣＲ－ＭＰ测定有利于支原体肺炎的早期诊     

反复呼吸道感染患儿肺炎支原体PCR检测及免疫功能研究

本文对152例反复呼吸道感染患儿肺炎支原体PCR及免疫功能进行检测。结果咽拭子肺炎支原体PCR阳性25例，阳性率16．5％。血清IgG、IgA明显降低。CD3＋、CD4＋细胞、CD8＋细胞和CD4＋／CD8＋值均较对照组降低，而可溶性白细胞介素－2受体（SIL－2R）水平明显升高。资料表明反复呼吸道感染患儿存在着免疫功能紊乱。     

聚合酶链式反应法检测血HBsAg阳性产妇乳汁中的HBV-DNA

我们应用PCR技术检测了24例血HBsAg阳性产妇初乳中的HBVDNA,结果发现,24例中19例乳汁HBV_-DNA为阳性(阳性率高达79.2％),表明该19例乳汁是排毒的。HBV可通过体液排出体外,除乳汁外,还有唾液、泪液、月经、精液、尿以及汗等。过去较为重视的是唾液和月经。本研究表明血HBsAg阳性产妇乳汁HBV排出率颇高,为此,以往认为HBV携带者产妇只要乳头不破溃可以哺乳的观点值得再商讨。本文作者建议乳汁HBV-DNA阳性,而其婴儿血HBV标志物检测阴性者行人工喂养。     

多聚酶链式反应（PCR）检测细胞因子基因表达

多聚酶链式反应（ＰＣＲ）检测细胞因子基因表达钟飞，李晓玉（中国科学院上海药物研究所，上海２０００３１）杨胜利（中国科学院上海生物工程研究中心，上海２００２３３）细胞因子由细胞分泌产生以后，作用于靶细胞受体，维持靶细胞的存活、生长或促进其增殖和分化，研...     

肺炎支原体肺炎和哮喘患儿肺炎支原体特异性IgE检测的分析

通过免疫手段 (SDS PAGE及Westernblot)分析MP引起变态反应的抗原成分 ,比较有哮喘史及无特应症的MP感染者特异性IgE阳性率 ,并探讨与MP特异性IgE产生的有关因素。MP IgM阳性的支气管肺炎患儿 35例 (平均年龄 6 0± 3 4岁 )及支气管哮喘患儿 32例 (平均年龄 6 7± 3 3岁 ) ,MP IgM、IgA均为阴性的正常健康者 2 7例 (平均年龄 7 0± 3 6岁 )作为对照组 ;采用免疫印迹技术观察上述各组待测血清针对所分离MPFH株菌体粉碎后蛋白成分的杂交条带 ,并对其出现频度进行统计分析 ;同时应用ELISA方法检测血清总IgE。结果SDS PAGE显示MP蛋白成分有十几条。与IgE反应的抗原多肽的相对分子质量为 2 16 0 0 0、 2 0 5 0 0 0、 170 0 0 0、 6 80 0 0、 5 6 0 0 0 ,其中前三者抗原性最强 ,不同组别、病程及年龄出现率明显高于后两者 (P <0 0 5 )。MP IgE阳性率 :MP感染组 71 4 %、哮喘组 78 13%、对照组 19 2 3% ,前两组间无明显差异 ,均显著高于对照组 (P <0 0 0 5 )。MP IgE阳性率在感染 8d后上升 ,2 8d后逐渐下降。与MP IgM滴度、血清T IgE无明显直接关系。结论 :(1)MP菌体粉碎后蛋白成分复杂 ,与IgE反应的抗原相对分子质量为 2 16 0 0 0、 2 0 5 0 0 0、 170 0 0 0、 6 80 0 0、 5 6 0 0 0 ,高分子成分抗原性强     

小儿肺炎支原体肺炎临床特点（232例）

目的分析小儿肺炎支原体肺炎(MPP)的临床特点、支原体抗体检测最佳时间和糖皮质激素的疗效,为小儿支原体肺炎的诊治提供依据。方法收集我院确诊的232例MPP入院患儿临床资料,回顾性分析临床特征并分组。比较发热组与非发热组住院天数;比较激素组与非激素组住院时间和入院后热退天数;分析发病1w内和1w后肺炎支原体抗体阳性率。结果 MPP主要临床症状为发热及干咳。肺部明显阳性体征仅见于36.6%的患儿。发病1w以后特异性 IgM抗体阳性率（94.05%）明显高于1w内（70.37%）（P<0.01）;激素组热退天数（3.88d）与非激素组（3.27d）无差异（P﹥0.05）。结论小儿支原体肺炎发热咳嗽症状明显而肺部体征相对较少;糖皮质激素可减轻发热症状;发病第2w后查支原体抗体阳性率高。     

多重聚合酶链式反应技术及其应用

标准的聚合酶链式反应是使用一对引物扩增一个特定的核酸序列,即单一引物对的PCR。但是在具体工作中有时需要同时对多个核酸序列进行扩增分析。显然,单引物对PCR要完成这类工作,需要耗费较多的时间和金钱。1988     

聚合酶链反应（PCR）新一代临床检测技术

本文综述了ＰＣＲ技术的有关方法学进展及其应用。     

多重聚合酶链式反应（MPCR）用于霍乱弧菌检测的研究

本文首先从实用的角度探讨用三对特异的引物对不同血清群霍乱弧菌进行ＭＰＣＲ检测的可能性。这三对引物具有很大的应用价值，从一次扩增反应中可以得出有关菌株的毒力因子和血清群的信息。检测的敏感性可达到１０ＣＦＵ。实验还提示将引物数量改为五条寡核苷酸链来进行ＭＰＣＲ能得出同样的结果。对Ｐ３、Ｐ４引物扩增形成的６１７ｂｐ的ＤＮＡ片段进行酶切分析表明，埃尔托型霍乱弧菌Ｏ１３９群霍乱弧菌的ｔｃｐＡ基因有很大的相似性，至少在ＰｓｔⅠ和ＢｇｌⅡ酶切位点上表现相同，但两者均与古典型霍乱弧菌不同。     

聚合酶链式反应法检测婴儿肝炎综合征患者尿人巨细胞病毒特异脱氧核糖核酸

人巨细胞病毒(HCMV)是广泛感染人类的重要病原之一。胎儿、新生儿以及免疫力低下者(器官移植者、免疫缺陷者)感染HCMV可致严重疾患,甚至是死亡的直接原因。聚合酶链式反应法(PCR)检测病毒核糖核酸是当今最灵敏的方法。本文应用PCR法检测了20例婴儿肝炎综合征患者尿HCMV脱氧核糖核酸,结果阳性者为17例。阳性率达85％。     

用PCR技术检测喘息性疾病患儿肺炎支原体的研究

本文应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５６例喘息性疾病患儿咽拭子标本的肺炎支原体（ＭＰ），阳性率为１２．２％，对照组为同期３８例肺炎患儿的咽拭子标本，ＭＰ阳性率为１７．３％，二组ＭＰ感染率无显著性差异（ｘ２＝１．７７，Ｐ＞０．０５）。提示：ＭＰ不仅是肺炎也是喘息性疾病患儿常见的致病微生物。因此，对喘息性疾病患儿应常规用ＰＣＲ技术检测ＭＰ，以提高诊断和治疗水平     

应用聚合酶链式反应鉴定实验细胞的来源种属

目的 应用聚合酶链式反应(PCR)鉴定常见细胞的种属来源,以判断培养细胞是否存在种间的交叉污染.方法 根据文献报道和NCBI数据库我们得到了32对种属特异性引物,并分别针对10种常见的细胞种属,对这些引物进行特异性和敏感性的筛选;以待检测细胞的基因组DNA为模板进行PCR及后续的琼脂糖凝胶电泳;以不同种属来源细胞的DNA混合物作为阳性对照模板,以水作为阴性对照模板.结果 针对上述10种常见细胞来源的种属分别得到了1对特异性和敏感性均较好的引物,经PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳后可以准确鉴定待检测细胞的种属来源,并判断该细胞是否存在种间污染.结论 应用聚合酶链式反应可以简便、快速地鉴定实验细胞的种属,并判断该细胞是否存在种间的交叉污染.