丙型肝炎病毒逆向点杂交基因分型方法的建立及初步应用

目的 利用逆向点杂交技术建立丙型肝炎病毒(HCV)基因分型新方法。方法在HCV5’端非编码区(5’UTR)设计引物与分型探针，将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上，制成HCV基因分型逆向点杂交检测膜条。分离纯化血清中的HCV RNA，经逆转录反应和生物素标记引物聚合酶链反应(PCR)巢式扩增后，将扩增产物与检测膜条杂交，过氧化物酶和四甲基联苯胺显色，判断基因分型结果。最后，通过与基因测序结果比较确定新方法的有效性。从佛山地区丙型肝炎患者中随机抽取60份经荧光定量PCR方法对HCV RNA进行过定量分析的血清，用新建方法进行HCV基因分型检测。结果新建HCV逆向点杂交基因分型方法可对所有60份HCV RNA拷贝数在10。～10。／ml之间的抽检血清进行基因分型，发现1b型50例，占83．3％；1a型2例，占3．3％；2a型2例，占3．3％；1a、1b混合型5例，占8．0％；1b、2a混合型1例，占1．7％；未发现2b、3a和3b型。新方法基因分型结果与测序分型结果一致。结论PCR一逆向点杂交技术可以准确有效和简便经济地进行HCV基因分型．适用于临床检测与流行病学研究。在佛山地区人群中感染的HCV以1b型为主。     

应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究

[目的]建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法。[方法]首先合成医学真菌通用引物，用PCR扩增白色念珠菌18S rRNA基因，用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针，然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southern杂交检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染人鼠，建立念珠菌病的实验动物模型，验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性。[结果]通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等9种医学常见真菌的18S rRNA基因，扩增片段长度为621-687bp。此引物只扩增真菌DNA，不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度，实验证明后者的敏感性最高。[结论]本方法快速、敏感、不需放射性同位素，有较好的临床应用前景。     

膜芯片技术诊断乙型和丙型肝炎病毒与基因分型

[目的]利用膜芯片技术建立乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)联合诊断和基因分型新方法。[方法]根据HBV的前C区、X区及HCV的5'端非编码区(5'UTR)基因序列分别设计引物与分型探针。用生物素标记的引物进行HBV-DNA和HCV-cDNA扩增,将活性氨基标记的分型探针依次固定在尼龙膜上,制成HBV和HCV联合诊断和基因分型膜芯片条。扩增产物与膜芯片条杂交后,经过氧化物酶与底物显色,判断有无HBV和HCV感染并同时进行基因分型。通过经荧光定量PCR和基因测序确定的HBV和HCV单项阳性血清各30份以及HBV和HCV混合血清5份验证该方法的有效性。[结果]膜芯片对HBV和HCV单独感染和混合感染的诊断与荧光定量PCR结果相同,基因分型结果与测序分型结果一致。[结论]利用膜芯片技术可实现HBV和HCV联合诊断和基因分型,并具有准确有效和简便经济等特点,适合用于临床诊断和流行病学调查。     

荧光分光光度计液相快速观测发夹探针与katG基因463突变密码子的杂交荧光

目的针对结核分枝杆菌耐异烟肼katG基因463密码子设计发夹DNA探针,尝试运用荧光分光光度计直接观测液相中发夹DNA探针与katG基因463密码子扩增产物杂交后的荧光信号,从而检出该位点突变。方法运用软件Beacon designer设计katG基因包含463密码子的发夹DNA探针,应用荧光分光光度计检测扩增片段与探针杂交后荧光信号,同时对扩增产物测序并作比较。结果通过荧光分光光度计观测到结核标准株及耐异烟肼katG基因463密码子PCR产物与发夹DNA探针杂交后荧光信号差异有统计学意义;16株耐异烟肼组与10株H37RV标准株对照组荧光信号强度比较,耐异烟肼组katG基因463密码子突变检出率为34%,测序法突变检出率为37%。结论应用荧光分光光度计直接观测发夹DNA探针液相杂交荧光具简单、灵敏等优特点;katG基因463密码子突变是结核分枝杆菌耐异烟肼的主要原因之一。     

抗环斑病毒转基因番木瓜55-1的PCR检测

目的建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检测方法。方法采用改良十六烷基-三甲基．溴化铵（CTAB）法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取，根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因（35S-GUS）和调控基因（NOS-35S）序列设计合成特异性检测引物，采用PCR技术对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果内源Papain基因PCR扩增结果表明，改良CTAB法及试剂盒方法都可用于番木瓜种籽及果肉的DNA提取。实验中合成的引物及建立的PCR反应体系、反应参数能特异性地扩增转基因番木瓜55—1的外源基因35S—GUS序列和NOS-35S序列。该方法的绝对检测低限为8．15×10^-2ng，相对检测低限为0．14％。结论本检测方法有较高的稳定性，能有效地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定，该方法的检测灵敏度可完全满足转基因食品标识管理定性检测的需要。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因分子探针杂交荧光观测

目的针对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌mecA基因扩增片段,设计一种茎环结构的DNA分子探针,运用荧光显微镜观测DNA分子探针与mecA基因扩增产物杂交后的荧光信号。方法采用Beacon designer 7.0软件对mecA基因的特异性扩增片段设计茎环结构的DNA分子探针,应用荧光显微镜检测mecA基因扩增片段与探针杂交荧光信号。结果通过荧光显微镜观测出28株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和8株铜绿假单胞菌对照菌的特异性扩增片段,与DNA分子探针杂交后,荧光信号强度差异有统计学意义;该杂交条件优化:50℃为最佳杂交温度;10 h为最佳杂交时间。结论茎环结构DNA分子探针技术,结合荧光显微镜可高灵敏检测mecA基因的扩增片段,mecA基因是金黄色葡萄球菌耐甲氧西林的主要原因。     

植物源性转基因食品PCR检测技术研究

〔目的〕建立简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术。〔方法〕针对转基因植物技术中载体上常用花椰菜花叶病毒的 3 5S启动子和根农杆菌的NOS终止子特异基因序列 ,设计合成特异的引物对 3 5s -f/ 3 5s-r、Nos -f/Nos -r ,利用基因PCR扩增技术检测植物源性转基因食品。〔结果〕引物对 3 5s -f/ 3 5s -r、Nos -f/Nos -r分别成功从转基因大豆中扩增出 195bp和 180bp特异的DNA带。采用引物对 3 5s -f/ 3 5s -r进行PCR时检测灵敏度为每反应 10 4分子 ;采用Nos -f/Nos -r时检测灵敏度为 2× 10 4分子。最低可以对 0 .1μg转基因大豆进行检测。〔结论〕基于 3 5S启动子和NOS终止子基因序列的PCR扩增技术是一种简便、快速、灵敏、特异的植物源性转基因食品DNA检测技术     

人乳头状瘤病毒快速导流杂交与传统杂交法比较基因分型及临床应用

目的利用快速导流杂交法对人乳头瘤病毒进行快速基因分型,并探讨该技术临床应用前景. 方法 144例尖锐湿疣患者皮损脱落细胞或组织中提取DNA,PCR扩增后与9种常见HPV亚型探针进行反斑点印迹杂交(reverse dot blot, RDB)检测HPV DNA,通过与传统膜杂交结果做对比,评估导流杂交法的效果. 结果 144例样本中得到134例PCR阳性结果;HPV分型包括:高危HPV亚型16、18、31、33、58;低危亚型6、11、53;未知危险程度的亚型CP8304;68例样本中包括了2～4种亚型的混合感染. 结论两种杂交方法检测结果97%一致;快速导流法优势主要具有更高速度、操作更方便,和节省试剂用量;敏感性和特异性与传统杂交方法相同.     

PCR法筛选检测转基因食品

目的通过PCR检测花椰菜花叶病毒(camv)35S启动子和胭脂碱合酶(nos)终止子建立筛选食品中有无转基因成分的方法.方法用改良溴化十六烷三甲基铵(CTAB)法制备转基因抗除草剂[大豆RoundUp ReadyTMSoybean(RRS)]和转基因抗虫玉米系列标准品Bt176 Maximaizer的DNA,PCR检测其内参照基因及camv 35 S启动子和nos终止子.结果改良CTAB法制备的DNA用作PCR模板均可扩增出内参照基因,PCR扩增camv 35S启动子可检测出含量为0.5%的RRS和Bt176 Maximaizer,而PCR扩增nos终止子可检测出含1%RRS的食品样品.结论改良CTAB法制备的DNA可用作PCR模板,建立的PCR检测camv 35S启动子和nos终止子方法可用于筛选食品中有无转基因成分.     

PCR方法从脑脊液中检测脑膜炎奈瑟菌的实验

[目的]探索快速、可靠的检测脑膜炎奈瑟菌的方法。[方法]以煮沸法裂解细菌获取PCR反应模板,或以基因组DNA纯化试剂盒提取DNA后,用PCR法扩增脑膜炎奈瑟菌crgA基因;对PCR产物进行DNA测序。扩增siaD(C)基因确认C血清群脑膜炎奈瑟菌。[结果]煮沸法和试剂盒提取DNA法均可从1份标本中PCR扩增crgA基因阳性,PCR产物DNA序列与NCBI GenBankcrgA基因(登录号AF190471)序列一致。PCR扩增siaD(C)基因确认为C血清群脑膜炎奈瑟菌。[结论]建立的从脑脊液中检测脑膜炎奈瑟菌的PCR方法,可以更快速、可靠地诊断流脑。     

对医院护理管理队伍建设的几点思考

文章分析了当前医院护理管理队伍存在的主要问题：知识结构不合理；专业思想不纯正；接受继续教育不足：工作效能低下。提出了建设高素质护理管理人才队伍的思路：严格标准，搞好选才；加强思想教育和引导；加大培养力度；建立科学考评和激励机制；完善人才合理流动措施；合理编制，突出效率。     

医学科技成果信息资源网络开放利用的原则探析

医学科技成果信息资源网络开放利用，为资源的开放共享创造了良好条件，它使医学科技信息得到了高效传播和最大利用。网络开放利用医学科技成果信息资源，利用的主体和核心是其信息内容。信息内容是网络用户从中提取知识和所需资料的主要来源，同时也是信息破坏者发动攻击的主要目标之一，因而，信息内容的安全是信息安全的基本问题，主要包括信息内容的规范性、完整性与真实性、知识产权保护与利用的合理性等。要做好这些工作，应该遵循相应的原则和要求。     

政府公共财政支出分配公平性研究进展

政府公共财政支出是社会再分配的一种形式，其目的是促进社会公平。因此，政府的公共财政支出应该具有较强的目标针对性，应该向社会贫困人群倾斜，使其从中受益。本文通过查阅国内外政府公共财政支出分配公平性的相关文献资料。阐述了相关研究的进展情况，井着重探讨了政府公共财政支出分配公平性的内涵、研究范围、测算方法和研究意义。以及实际研究中存在的问题，最后提出我国政府公共财政支出分配公平性的研究方向和需要进一步完善的地方。     

长春新碱过量引起严重毒副反应1例的护理体会

报道1例霍奇金淋巴瘤患者因误用长春新碱（VCR）10mg一次性静脉推注后治疗护理情况。其出现间断性神志恍惚、眼睑闭合不全、言语不清、口腔黏膜糜烂、全身疼痛、麻痹性肠梗阻、尿潴留、手足麻木等症状,经积极解救,禁食,持续胃肠减压、胃管内注入麻油、开塞露、生理盐水灌肠,合理应用肠外营养,注重疼痛、心理护理,做好口腔、肛周护理,预防感染加重,患者病情得到控制好转出院。