乙型肝炎病毒蛋白及环氧合酶在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用

目的探讨乙型肝炎病毒蛋白及环氧合酶(COX)-2在乙肝相关性肝细胞癌发展与转移中的作用及机制。方法选取53例手术切除的人肝细胞癌组织,采用免疫组化法检测乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2、CD34的表达水平,Werdner法计算微血管密度;分析上述因子与乙肝相关性肝细胞癌组织微血管生成的相关性。RT-PCR和Western印迹检测人肝癌细胞系Hep G2和稳定转染乙型肝炎病毒X蛋白的Hep G2-X细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中PGE2表达水平和不同浓度COX-2抑制剂西乐葆作用后PGE2水平。结果乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中COX-2阳性率明显高于乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和非乙型肝炎相关性肝癌组织(P0.01)。乙型肝炎病毒X蛋白阳性表达组织中早期肝癌组织中微血管密度明显低于进展期肝癌组织,乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织中微血管密度明显低于阳性表达组织(P0.01);COX-2阳性表达组织中微血管密度明显高于COX-2阴性表达组织(P0.01);非乙型肝炎相关性肝癌组织中微血管密度明显低于乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2阳性表达组织(P0.01),乙型肝炎病毒X蛋白阴性表达组织和COX-2阴性表达组织差异无统计学意义(P0.05);乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙型肝炎相关性人肝细胞癌组织微血管生成呈正相关。Hep G2-X细胞中COX-2 mRNA和蛋白表达水平明显高于空载体对照Hep G2细胞,并且细胞培养上清液中PGE2水平明显增加;与Hep G2细胞相比,西乐葆对Hep G2-X细胞分泌PGE2具有更强的抑制作用。结论乙型肝炎病毒X蛋白、COX-2在乙肝相关性肝细胞癌组织中高表达,促进癌组织微血管生成;乙型肝炎病毒X蛋白可通过COX-2/PEG2信号通路促进肝癌的发生和发展。     

凋亡基因Bcl-2,Fas及Bax在慢性肝病的表达及临床价值

目的观察凋亡调节基因Bcl-2,Fas及Fax在慢性肝病中发病中的意义.方法95例慢性肝病肝脏或癌组织石蜡包埋标本.其中慢性肝炎69例,肝硬变11例,原发性肝癌15例.均取连续切片HE染色及Bcl-2,Fas,Bax免疫组化检测.对其中10例慢肝取外周血单个核细胞(PBMC)进行上述免疫组化染色.结果肝组织Bcl-2阳性表达63例(66.3%),其表达阳性率依次为肝癌>肝硬变>慢性肝炎,各组相比差异显著(P<0.01).强阳性表达率依次为肝癌>慢性肝炎>肝硬变.Fas表达的慢性肝炎的阳性率为100%,Bax为95.2%,但Bcl-2仅为33.4%,慢性肝炎时以Fas及促凋亡因子Bax的表达为主,而在肝癌时以抗凋亡因子Bcl-2的表达为主.结论三种凋亡基因的异常表达与肝癌发生密切相关,在肝组织或PBMC中联合检测可能对肝硬变癌变的早期诊断和预后判断有指导意义.     

Stathmin/Oncoprotein 18(Op18)在肝细胞癌中的表达及其意义

目的探讨Stathmin／oncoprotein18（Op18）mRNA和蛋白在肝细胞癌中的表达程度及其与肝癌临床病理特征的关系。方法应用RT—PCR技术检测33例肝癌、相应癌旁组织和肝癌细胞株SMMC7721和HepG2中Stathmin mRNA的水平，同时应用免疫组织化学方法检测了上述组织和细胞株中Stathmin蛋白的表达。结果肝癌组织Stathmin mRNA的表达水平高于相应的癌旁组织（P〈0．05）。肝癌组织Stathmin蛋白的阳性表达率为51．5％，癌旁组织为6％，阳性染色位于胞质内。两种肝癌细胞株中亦有Stathmin表达。Stathmin过表达与肿瘤大小、门脉受侵、TNM分期及Edmondson分级有关（P〈0．05）。结论Stathmin在肝癌中过表达，可能与肝癌的发生及进展有关。     

胰岛素样生长因子Ⅱ在乙型肝炎、肝硬化和原发性肝细胞癌中的表达:它与HBVX基因表达的关系

为研究胰岛素样生长因子Ⅱ(IGF-Ⅱ)在肝癌发生与 HBV 持续感染中是否起有重要作用,作者对419例乙型肝炎、肝硬化和肝癌患者的肝组织标本及两个 HCC 细胞株采用免疫组化和电镜技术进行染色,观察 IGF-Ⅱ和 HBV x 基因的表达及两者之间的关系。结果表明:两个 HCC 细胞株能够表达IGF-Ⅱ,并且表达 IGF-Ⅲ的细胞也大量地表达HBxAg 和 AFP。肝结构正常者及急性肝炎患者的肝组织中无 IGF-Ⅱ阳性的细胞,随着病理改变从 CPH 到癌组织周围组织(PCLT)的发展,IGF-Ⅱ阳性肝细胞的数量     

乙型肝炎病毒X蛋白和环氧合酶-2与乙型肝炎相关肝癌微血管生成和转移的关系及其可能机制

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBX)、环氧合酶-2(COX-2)在乙型肝炎相关性肝细胞肝癌(HCC)组织微血管生成和转移中的关系及其可能的调节机制. 方法选择84例乙型肝炎相关性肝细胞肝癌组织和22例非乙型肝炎相关性肝细胞肝癌组织,免疫组织化学法检测HBX、COX-2及血管内皮细胞表面抗原(CD34)的表达,光镜下记录微血管计数(MVD).Spearman相关性分析HBX、COX-2与乙型肝炎相关性HCC组织微血管生成及转移中的关系; Western blot和RT-PCR检测稳定转染HBX肝癌细胞HepG2(HepG2-X)中COX-2的变化;酶联免疫吸附法检测HepG2-X培养上清液中前列腺素E2(PGE2)表达水平及不同浓度(10、30、50 μ mol/L和70 μmol/L)COX-2选择性抑制剂塞来昔布作用后PGE2的表达水平;锥虫蓝拒染法检测细胞生长速度.结果 乙型肝炎相关性HCC组织中HBx、COX-2均高表达,HBx阳性表达组中COX-2阳性率为88.87%(55/62),明显高于HBx阴性组的31.82%(7/22,x2=27.188,P＜0.01)和非乙型肝炎相关性HCC组40.91%(9/22,x2=20.453,P＜0.01);HBx阴性表达的乙型肝炎相关性HCC组和非乙型肝炎相关性HCC组中COX-2阳性表达率差异无统计学意义(x2=0.393,P=0.531); HBx和COX-2在转移组表达高于无转移组(P＜0.01);HBx及COX-2的阳性表达组平均MVD值均明显高于HBx阴性组和非乙型肝炎相关性HCC组(P＜0.05),且转移组MVD高于无转移组(P＜0.01);门静脉侵犯组高于非侵犯组(P＜0.01);Spearman相关性分析结果提示HBx、COX-2在乙型肝炎相关性HCC组织微血管生成及转移中的表达呈正相关(Rs=0.568,P＜0.01);在HepG2-X细胞中,COX-2蛋白及mRNA表达水平与转染空载体的对照肝癌细胞HepG2 (空载体转染HepG2细胞,HepG2-PC)相比,均显著提高,并且细胞培养上清液中PGE2表达水平也显著提高;和转染空载体的对照细胞相比,塞来昔布对转染HBx基因的细胞分泌PGE2具有更强的抑制作用.结论 HBx、COX-2在乙型肝炎相关性HCC中有较高的表达水平,二者呈正相关,与HCC微血管生成和侵袭转移密切相关.COX-2可能是HBx促使肝癌组织微血管生成和转移的一个重要中间分子,其可能的调节机制是通过HBx、COX-2及PGE2作为信号转导通路在HCC的浸润与迁移,在微血管生成与转移的过程中发挥双重作用.     

Bax、Bcl—2及FHIT在胰腺癌中的表达及意义

目的：研究胰腺癌组织及细胞中Bax／Bcl-2蛋白和FHIT mRNA的表达，探讨FHIT与凋亡相关因子在胰腺癌中的关系。方法：应用ABC免疫组织化学方法检测胰腺癌细胞和组织标本中Bax与Bcl-2蛋白，RT－PCR检测其中FHITmRNA的表达。结果：38例胰腺癌中Bax蛋白阳性17例（45％），Bcl-2蛋白阳性表达22例（58％），FHITmRNA异常表达为21例（56％），转染有外源性FHIT的1990细胞（1990pFHIT)Bax表达阳性率有升高，Bcl-2／Bax比值下降，结论：Bax、Bcl-2及FHIT都通过调控凋亡参与胰腺癌的病理过程，FHIT诱导凋亡可能与Bax上调表达有关。     

乙型肝炎,肝硬化及肝癌的免疫组化研究

本文应用抗人肝细胞癌单克隆抗体HAb_(13)(简称HAb_(13))和抗细胞角蛋白单克隆抗体HK_2(简称HK_2),经免疫组化PAP法染色,对10例正常肝、10例乙型肝炎、20例肝硬化及42例原发性肝癌进行研究,结果发现HAb_(13)相应抗原在肝癌的阳性率为78.6% 提示HAb_(13)是肝癌较好的标志物。HK_2在正常肝仅见汇管区胆管上皮细胞阳性,肝细胞均为阴性;在乙型肝炎及肝硬化组织中,除成熟及增生的胆管上皮外,部分肝细胞也出现HK_2阳性,其阳性率分别为30%和60%;在肝癌HK_2的总阳性率为92.9%,其中肝细胞型癌36例,33例呈弱阳性,胆管型肝癌6例全部为强阳性表达。     

丝氨酸/苏氨酸激酶、Wnt2通路相关蛋白及C-myc基因在肝癌中的表达及诊断价值

目的:探讨丝氨酸/苏氨酸激酶(Aurora-A)、Wnt2通路相关蛋白(Wnt2)和C-myc基因(C-myc)与肝癌发生及疾病进展的关系。方法:应用SP法检测Aurora-A、Wnt2和C-myc在60例早期肝癌、50例中期肝癌、50例晚期肝癌及40例正常肝组织中的表达情况。结果:Aurora-A在正常肝组织、早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率分别为0、30%、60%、76%;Aurora-A在肝癌组织中的阳性表达和肝癌是否存在淋巴结转移紧密相关,在没有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率显著低于存在淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率(P0.05);Aurora-A在高、中、低分化肝癌中的表达率分别为40%、70%、85%,分化程度越低,则Aurora-A表达程度越高(P0.05)。Wnt2在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织,与早期肝癌组织相比,中期、晚期肝癌组织中Wnt2明显增加(P0.05);Wnt2阳性表达率在有淋巴结转移的肝癌组织中高于无淋巴结转移组,但两者比较差异没有统计学意义(P0.05);低分化肝癌组织中Wnt2阳性表达率高于中、高分化肝癌组织(P0.05)。C-myc在早期肝癌组织、中期肝癌组织、晚期肝癌组织中的阳性表达率均高于正常肝组织(P0.05),但早、中、晚期肝癌组织中C-myc表达比较,差异无统计学意义(P0.05);C-myc在有淋巴结转移的肝癌组织中的阳性表达率高于无淋巴结转移的肝癌组织(P0.05);C-myc在低分化、中分化肝癌组织中的阳性表达率均高于高分化的肝癌组织(P0.05)。结论:Aurora-A、Wnt2及C-myc的过表达跟肝癌的发生、侵袭和转移、分化高度相关。通过综合检测Aurora-A、Wnt2和C-myc蛋白的表达对肝癌的早期诊断及预后判断具有重要价值。     

ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中的表达及意义

目的: 探讨干细胞标志物ABCG2在肝细胞性肝癌组织和肝癌细胞株中表达的意义.方法: 应用免疫组化SP方法检测ABCG2在30例肝细胞性肝癌组织和8例癌旁肝硬化组织中的表达、分布, 并采用细胞免疫荧光技术检测ABCG2在两种肝癌细胞株HepG2、PLC/PRF/5中的表达, 采用流式细胞技术测试出两种细胞株中ABCG2阳性细胞的比例.结果: 免疫组化中, ABCG2阳性染色定位于癌细胞胞膜, 部分病例胞质也有分布. 免疫组化显示ABCG2在肝细胞性肝癌组织和癌旁肝硬化组织中的表达阳性率分别为63.33%(19/30)和25%(2/8). ABCG2蛋白在HepG2、PLC/PRF/5这两个肝癌细胞株中均有表达, HepG2中, ABCG2阳性染色定位于细胞胞质中, 而在PLC/PRF/5中, ABCG2阳性染色定位于细胞胞质和细胞膜上. PLC/PRF/5细胞株中, 通过流式细胞仪能检测出表达ABCG2的细胞( P<0.05), 而在HepG2细胞株中, 通过流式细胞仪不能检测出表达ABCG2的细胞.结论: ABCG2在肝细胞性肝癌的发生发展过程中可能起着非常重要的作用, 有可能成为临床治疗肝细胞性肝癌的分子靶标.     

抑癌基因PTEN及p53在肝细胞肝癌中表达的免疫组化研究

为探讨肝细胞肝癌组织中抑癌基因PTEN及p53蛋白的表达情况及临床病理意义。应用免疫组织化学技术检测了41例肝细胞肝癌及其相应的癌旁组织中PTEN和p53蛋白的表达情况。41例癌旁组织PTEN全部阳性表达,肝细胞肝癌组织中PTEN阳性表达率39％,阳性信号显示于胞浆中。p53阳性表达率51％,PTEN蛋白在肝细胞肝癌组织中的阳性表达与组织分化程度明显相关,高分化癌的阳性率为73％,低分化癌阳性率27％。肝细胞肝癌细胞中存在较高比例的PTEN蛋白阴性表达,说明在肝细胞肝癌的发生发展中PTEN基因失活起着重要作用,它的阳性表达可能有一定的预后意义。     

The regulation of apoptosis by Bcl-2, bcl-X(L), Bcl-2alpha and Bax in chronic liver disease]

OBJECTIVE: To analyse the expression of Fas and Fas ligand (FasL) in patients of chronic hepatitis, liver cirrhosis and hepatocellular carcinoma and to study the regulation of apotosis by Bax and Bcl-2 subfamilies. METHODS: The subfamily of Bcl-2 in the liver tissue was studied by immunohistochemistry. RESULTS: In 156 cases of chronic liver disease the expression levels of Fas and FasL in the chronic hepatitis group were significantly higher than that in hepatocellular carcinoma group(P < 0.01). The expression level of Bax subfamily in the chronic hepatitis group was significantly higher than that of Bcl-2 subfamily. CONCLUSION: It is suggested that Bcl-2 family is involved in the regulation of apoptosis in the chronic liver diseases.     

Expressional analysis of anti-apoptotic phospho-BAD protein and mutational analysis of pro-apoptotic BAD gene in hepatocellular carcinomas

BACKGROUND: It has become clear that, together with proliferation, deregulation of apoptosis plays a pivotal role in tumourigenesis. BAD is a pro-apoptotic Bcl-2 family protein and regulates the intrinsic apoptosis pathway. Phosphorylation of BAD inhibits the apoptosis function of BAD. AIMS: To investigate whether alteration of the phospho-BAD protein and somatic mutation of BAD gene are characteristics of human hepatocellular carcinoma. PATIENTS AND METHODS: We analysed the expression of phospho-BAD in 20 hepatocellular carcinomas by immunohistochemistry. Also, we analysed the BAD gene for the detection of somatic mutations by a single-strand conformation polymorphism assay in 69 hepatocellular carcinomas. RESULTS: Phospho-BAD expression in the non-tumour hepatocytes was seen in all of the hepatocellular carcinomas, while the expression in the cancer cells was observed in 15% (3 of the 20) of the hepatocellular carcinomas. There was no somatic mutation of BAD Bcl-2 homology 3 (BH3) domain in the 69 hepatocellular carcinomas. CONCLUSIONS: The data showed that loss of phospho-BAD expression, but not BAD gene mutation, is a feature of hepatocellular carcinomas. The decreased expression of phospho-BAD in the hepatocellular carcinoma cells compared to the non-tumour hepatocytes suggests that loss of phospho-BAD expression may play a role in hepatocellular tumourigenesis.     

凋亡相关基因caspase-3及Bcl-2在人类大肠腺瘤和大肠癌中的表达及意义

目的　探讨凋亡相关基因caspase 3和Bcl 2在大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达及其意义。方法　应用免疫组织化学ABC法检测 2 0例大肠正常黏膜、3 0例大肠腺瘤及 40例大肠癌组织中caspase 3和Bcl 2的表达。用TUNEL法检测细胞凋亡。结果　大肠正常黏膜、腺瘤和大肠癌组织中caspase 3的阳性表达分别为 95 %、70 %、65 %。Bcl 2的阳性表达分别为 15 .0 0 %、86.67%、62 .5 %。正常黏膜组织caspase 3的表达高于大肠腺瘤和大肠癌 (P <0 .0 5 ) ,而Bcl 2表达低于后两者 (P <0 0 5 )。caspase 3及Bcl 2的表达与凋亡指数密切相关 (r =0 73及 -0 89　P <0 0 0 1) ,但均与大肠癌临床病理分期无关。结论　大肠腺瘤及大肠癌组织中caspase 3低表达和Bcl 2的高表达与细胞凋亡异常密切相关 ,可能在大肠腺瘤癌变及大肠癌的发生和发展过程中起重要作用     

大肠癌中胃泌素、生长抑素mRNA的表达与细胞凋亡及Bcl-2、Bax的关系

目的:探讨大肠癌组织中胃泌素(GAS)、生长抑素(SS) mRNA及蛋白的表达与大肠癌细胞凋亡指数(AI)和 Bcl-2、Bax的相关性．方法:采用巢式RT-PCR方法检测62例大肠癌组织中 GAS、SS的基因表达,用TUNEL法检测细胞凋亡情况, 大肠癌组织中GAS、SS、Bcl-2、Bax的蛋白表达采用免疫组织化学S-P法. 结果:大肠癌组织中GAS、SS mRNA的表达与其蛋白表达基本一致．在大肠癌组织SS高表达组、中表达组的AI明显高于SS低表达组(q=5．06,q=3．95, 均P<0．01);而在GAS各表达组中的AI变化与此相反 (q=:6．66,q=6．33,均P<0．01)．Bax、Bcl-2阳性表达率在SS和GAS低表达组、中表达组、高表达组三组间相比较存在着明显差别(x2=9．24,x2=6．91; x2=7．17,x2=13．83,均P<0．05),其中Bax在SS高表达组(80％,8／10)、中表达组(76．5％,13／17)的阳性表达率明显高于低表达组(40．0％,14／35)(x2=5．24,x2= 6．09,均P<0．05);Bcl-2与其相反(x2=4．71,x2=4．70,均 P<0．05)．Bcl-2在GAS高表达组(90．9％,10／11)、中表达组(86．7％,13／15)的阳性表达率明显高于低表达组 (44．4％,16／36)(x2=5．60,x2=7．69,均P<0．05);Bax 在GAS高表达组(27．3％,3／8)的阳性表达率明显低于低表达组(69．4％,25／36)(x2=4．59,P<0．05);而Bax 在GAS中表达组(46．7％,7／15)的阳性表达率低于低表达组,但其无明显差别．GAS／SS积分比值变化与 Bcl-2呈正相关(r=0．34,P<0．01),与AI、Bax呈负相关 (r=-0.546,P<0．01;r=-0．299,P<0．05)．结论:GAS、SS对大肠癌细胞凋亡的调控可能与 Bcl-2、Bax的异常表达有关．     

肝癌组织中survivin、VEGF的表达及意义

目的探讨survivin与血管内皮生长因子（VEGF）在肝细胞肝癌（HCC）组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化法检测50例HCC组织和20例正常肝组织中survivin、VEGF蛋白的表达,并分析其与HCC临床病理参数的关系。结果50例HCC组织中survivin、VEGF蛋白的阳性表达率分别为64.0%、68.0%,在正常肝组织中的表达率分别为0、10%,两者相比,P均〈0.05;survivin、VEGF蛋白表达与HCC临床分期及淋巴结转移相关（P〈0.05）;HCC中survivin、VEGF蛋白表达呈正相关（r=0.886,P〈0.05）。结论survivin和VEGF蛋白在HCC中表达率较高,为肝癌的分子靶向治疗提供了新的靶点;survivin和VEGF在HCC中的表达关系密切,对肝癌的发展可能有协同作用;测定HCC中survivin、VEGF蛋白的表达,对判断患者预后及指导治疗有较大帮助。     

Nodal在肝细胞癌组织的表达与意义

目的研究上皮-间质转化现象调节基因Nodal在肝细胞癌中的表达及其意义。方法采用免疫组织化学染色法检测Nodal蛋白在肝癌组织、肝炎肝硬化组织和癌旁肝组织的表达。结果在95例肝细胞癌组织中,59例(62.1%)Nodal蛋白阳性,20例癌旁肝组织中4例(20.0%)阳性,12例肝炎肝硬化组织中2例(16.7%)阳性;Nodal蛋白表达的患者,肿瘤组织直径较大、血管侵袭率较高、Edmondson分级较高、TNM分期较晚(P<0.05)。结论Nodal与肝细胞癌的发生发展有关,可能作为肝细胞恶性变的重要预测指标。     

Survivin在大肠癌组织中表达的意义及其与Bcl-2的关系

目的:探讨凋亡抑制蛋白Survivin在大肠癌组织中表达的意义并分析其与Bcl-2的关系.方法:用免疫组化方法检测52例大肠癌组织中Survivin和Bcl-2的表达,运用统计学方法分析Survivin表达与预后的关系以及Survivin在凋亡抑制机制方面与Bcl-2的关系.结果:Survivin在大肠癌组织中表达的阳性率为51.9%(27/52),Survivin表达与患者年龄、性别、生长部位、肿瘤病理类型、大小、淋巴结转移、组织分化程度等无关(P＞0.05).但是Survivin高表达患者的5 a生存率明显低于Survivin低表达患者,二者差别有统计学意义(52.94% vs 83.33%,P=0.0304).Survivin的表达与Bcl-2的表达无关(P=0.5524).结论:Survivin在大肠癌中的表达能强烈抑制凋亡,高表达者预后较差.Survivin的表达与Bcl-2的表达无关.