扶正透邪方体外干预多重耐药铜绿假单胞菌研究

目的探讨扶正透邪方提取物及其组分和含药血清对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用。方法运用二倍稀释法检测扶正透邪方提取物、提取物纯化组分(粗多糖、精多糖、皂苷、酚酸+香豆素、黄酮+蒽醌)及给予大鼠1/2等效剂量、等效剂量、2倍等效剂量、8倍等效剂量提取物灌胃后所得含药血清的体外抑菌情况。结果扶正透邪方提取物、提取物纯化组分中的皂苷具有较好的体外杀菌作用,其余组分在此次实验所用浓度下没有抑菌作用;给予大鼠2倍等效剂量和8倍等效剂量扶正透邪方提取物灌胃后所得的含药血清具有较好的体外抑菌作用。结论扶正透邪方提取物及其部分组分和含药血清具有体外抑菌作用,并能影响多重耐药铜绿假单胞菌的耐药性,为其干预多重耐药铜绿假单胞菌的进一步研究提供了实验依据。     

芪归银方对抗生素体外抑制多重耐药铜绿假单胞菌作用的影响

目的:探讨芪归银方含药血清联合抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌的体外抑制作用。方法:运用二倍稀释法检测单用抗生素、空白血清、含药血清及血清联合抗生素的体外抑菌情况。结果:空白血清对多重耐药铜绿假单胞菌无体外抑菌作用,含药血清则具有明显的体外抑菌作用;抗生素联合含药血清较单纯抗生素和抗生素联合空白血清的抑菌情况有明显差异。结论:芪归银方含药血清能够降低抗生素的MIC值、MBC值,提高抑菌率,含药血清与抗生素具有体外协同抑菌作用。     

基于LC-MS/MS和靶点网络探讨扶正透邪解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌的干预机制

[目的] 从药物作用靶点层面探讨扶正透邪解毒化瘀方体外干预多重耐药铜绿假单胞菌的药效物质基础和直接/协同机制。[方法] 通过液相色谱-串联质谱联用（LC-MS/MS）、中药系统药理数据库和分析平台（TCMSP）筛选扶正透邪解毒化瘀方化学成分;通过Stitch数据库查找上述成分以及亚胺培南、头孢他啶、环丙沙星作用于铜绿假单胞菌的蛋白靶点;运用Cytoscape 3.9.1构建“中药—化学成分—作用靶点网络图”和“蛋白质-蛋白质互作网络”;筛选该方与抗菌药物共同作用靶点;借助DAVID数据库对靶点进行基因本体（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析。[结果] LC-MS/MS共鉴定出108个化学成分,TCMSP数据库共筛选出155个化学成分,去重后共得到162个化学成分,其中42个化学成分能够直接作用于铜绿假单胞菌240个靶蛋白;网络药理学筛选出17个核心成分,以黄酮类、甾醇类、萜类为主,其中β-谷甾醇、槲皮素、木犀草素度值较高;该方分别与亚胺培南、头孢他啶、环丙沙星有3/3/17个共同作用靶点,4种药物共同作用靶点2个,共同作用靶点主要作用于细菌能量和生化代谢、DNA复制、蛋白质功能、表面多糖形成等途径;GO和KEGG富集分析提示该方主要与调节细菌能量和生化代谢、调控DNA/蛋白质稳态、影响细菌胞质胞膜以及干预对细菌起保护作用的表面多糖和生物被膜合成等密切相关。[结论] 扶正透邪解毒化瘀方具有多成分、多靶点、多途径干预铜绿假单胞菌的特点,发挥主要干预作用的化学成分以黄酮类、甾醇类、萜类为主,直接/协同抗菌药物干预铜绿假单胞菌的机制与影响细菌遗传、代谢、生物被膜形成等相关。研究从药物作用靶点层面为从天然药物中开发抗菌药物提供了一定的思路和借鉴。     

扶正透邪方对耐药铜绿假单胞菌肺部感染大鼠免疫稳态的影响及机制

目的 探讨扶正透邪方及其不同功效在不同时点对耐药铜绿假单胞菌肺部感染大鼠免疫稳态的影响及其机制。方法 将168只大鼠随机分为空白组（n=8）,模型组（n=40）,单纯透邪组（n=40）,早期扶正组（n=40）和延迟扶正组（n=40）,空白组予蒸馏水灌胃;模型组在感染后予蒸馏水灌胃;单纯透邪组在感染后予清热透邪药物免煎颗粒（3.5 g·kg^-1）灌胃;早期扶正组在感染后予扶正透邪全方免煎颗粒（10.75 g·kg^-1）灌胃;延迟扶正组在清热透邪药物免煎颗粒灌胃的基础上于感染后第3天加扶正药物免煎颗粒［（3.5+10.75） g·kg^-1］灌胃;3个治疗组灌胃每日2次,每次2 mL。除空白组外将每个组根据3 h,1 d,3 d,5 d,7 d时间点分为5个小组（n=8）。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组大鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）,高迁移率族蛋白B1（HMGB1）,白细胞介素-10（IL-10）和肿瘤坏死因子-α诱导蛋白8样分子-2（TIPE2）的水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测HMGB1蛋白表达水平。结果 3 h时,与空白组和模型组比较,单纯透邪组、早期扶正组、延迟扶正组TNF-α含量均明显升高（P<0.05）。3 d时,与模型组比较,早期扶正组和延迟扶正组TNF-α含量明显降低（P<0.05）;与透邪组比较,早期扶正组和延迟扶正组TNF-α含量均明显降低（P<0.05）。1 d时,与模型组比较,单纯透邪组、延迟扶正组HMGB1含量均明显升高（P<0.05）。5 d时,与模型组比较,延迟扶正组HMGB1含量明显降低（P<0.05）。7 d时,与空白组比较,模型组HMGB1蛋白表达明显升高（P<0.05）;与模型组比较,早期扶正组HMGB1蛋白表达明显降低（P<0.05）。3 d时,与模型组比较,早期扶正组、延迟扶正组IL-10含量均明显升高（P<0.05）。5 d时,与单纯透邪组比较,早期扶正组IL-10含量明显升高（P<0.05）;7 d时,与单纯透邪组比较,早期扶正组、延迟扶正组IL-10含量均明显降低（P<0.05）。5 d时,与模型组比较,早期扶正组TIPE2含量明显降低（P<0.05）。7 d时,与模型组比较,单纯透邪组、延迟扶正组TIPE2含量均明显降低（P<0.05）。结论 扶正透邪全方或加用扶正药物在早期可促进炎症反应消除病原菌,晚期抑制炎症反应,避免炎症级联效应和肺组织损伤,说明扶正药物在感染后对维持机体免疫稳态具有重要作用。     

扶正解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达影响的研究

目的:研究扶正解毒化瘀方对多重耐药铜绿假单胞菌MexAB-OprM外排泵表达的影响。方法:针对筛选出的MexAB-OprM阳性的铜绿假单胞菌菌株,通过微量稀释法,测定哌拉西林-他唑巴坦的最小抑菌浓度和扶正解毒化瘀方水提物的最小杀菌浓度,从而确定荧光定量PCR细菌样本时培养剂中哌拉西林-他唑巴坦和扶正解毒化瘀方水提物的浓度。绘制细菌生长曲线,确定细菌样本的培养时间。利用实时荧光定量PCR技术检测药物干预前后mex B、oprM、mexR的表达量。结果:扶正解毒化瘀方水提物能降低MexAB-OprM外排泵阳性MDRPA菌株的mex B、oprM表达量(P 0. 05),同时能增加mexR的表达量(P 0. 05)。结论:扶正解毒化瘀方对MDRPA所致肺炎的作用机制之一可能是通过抑制MexAB-OprM外排泵的表达实现的。     

扶正解毒化瘀方通过NLRP3炎性体减轻多重耐药铜绿假单胞菌慢性肺炎肺损伤的作用机制

目的：观察扶正解毒化瘀方通过干预NLRP3炎性体减轻多重耐药铜绿假单胞菌（MDRPA）慢性肺炎肺损伤的作用机制。方法：将大鼠随机分为正常组、模型组、中药组、西药组、中+西组,通过经口气管插管法建立MDRPA慢性肺炎大鼠模型。中药组予扶正解毒化瘀方灌胃,每次1.4 g/mL,2次/d;西药组予哌拉西林他唑巴坦钠腹腔注射,每8小时1次;中+西组为两药联用。观察各时点肺组织病理变化。通过qPCR和Western blot观察NLRP3炎性体相关指标的基因和蛋白表达。结果：与模型组比较,中药组NLRP3 mRNA和Caspase-1 mRNA水平在第14天和21天显著降低（P<0.05）,中药组、西药组和中+西组第14天时NLRP3、IL-1β蛋白表达水平均显著下降（P<0.05）。与模型组比较,中药组在第7、14天肺泡结构更完整,免疫细胞浸润更少,第21天时免疫细胞浸润和纤维细胞形成也更少。结论：扶正解毒化瘀方能明显减轻MDRPA慢性肺炎大鼠肺组织损伤,可能是通过调节NLRP3炎性体的表达而发挥作用。     

铜绿假单胞菌耐药机制的研究进展

铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)是一种常见的医院内获得性感染条件致病菌,在医源性感染中检出率越来越高。铜绿假单胞菌的耐药机制极为复杂,主要包括产β-内酰胺酶、药物作用靶位的改变、酶的修饰钝化作用、外膜通透性降低、主动泵出作用等,而且它对不同抗生素有着不同的耐药机制,本文就近几年来有关的研究进展进行简要综述。     

铜绿假单胞菌对多药耐药肺结核患者的影响

目的：分析铜绿假单胞菌对多药耐药肺结核患者的影响;方法：回顾性分析我院2008年1月至2010年1月62例铜绿假单胞菌感染合并多药耐药肺结核患者的临床资料;结果：亚胺培南（IMP）、阿米卡星（AMK）、哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、头孢吡肟（FEP）的耐药率在11.11%～22.41%;妥布霉素（TOB）、替卡西林/克拉维酸（TCC）、环丙沙星（CIP）、庆大霉素（GEN）、头孢噻肟（CTX）的耐药率在29.03%～60.71%;氨苄西林/舒巴坦（AMS）、头孢唑林（CFZ）、呋喃妥因（NIT）、头孢曲松（CRO）、复方新诺明（SXT）的耐药率在83.87%～91.23%;结论：在进行多药耐药肺结核患者的治疗过程中应该尽量降低酶抑制剂的使用,防止产生诱导剂,避免出现质粒传播与交叉感染。     

痰热清注射液与抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌外排泵的作用

目的:研究痰热清与临床常用抗生素对多重耐药铜绿假单胞菌(multidrug resistant Pseudomonas aeruginosa,MDR-PA)的相互作用,以及对细菌外排泵的作用研究。方法:利用抗生素对细菌进行药敏实验。纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)结合外排泵抑制剂(50 mg·L~(-1))检测抑菌圈直径以及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测外排泵基因表达量筛选外排泵阳性菌株。KB法观察痰热清(终质量浓度3 g·L~(-1))与抗生素对抑菌圈直径的变化。菌株与痰热清、抗生素亚抑菌浓度共培养进行Real-time PCR检测。KB法观察痰热清持续作用外排泵阳性菌后对抑菌环直径的影响。结果:经鉴定筛选得到两株MDR-PA外排泵阳性菌株。痰热清与阿洛西林、氨曲南、美罗培南、头孢他啶、头孢哌酮、舒普深均有协同抗菌作用。在抑制细菌外排泵基因表达水平方面,4种药物按作用效果强弱比较为头孢哌酮痰热清头孢他啶舒普深。痰热清持续作用外排泵阳性菌株后与头孢他啶、头孢哌酮、舒普深联合用药疗效较好。结论:痰热清与头孢他啶,头孢哌酮,舒普深可通过下调细菌外排泵基因表达,使细菌耐药性减弱,降低抗生素临床使用剂量,从而起到抑菌作用。     

AL-1与抗生素联用对绿脓杆菌胞外多糖和蛋白水解酶的影响

目的探讨穿心莲内酯衍生物AL-1与阿奇霉素、红霉素、环丙沙星和磷霉素联合用药对绿脓杆菌胞外多糖和蛋白水解酶的影响。方法运用激光共聚焦显微镜观察各抗生素单用及和AL-1联用对PA胞外多糖的形成的影响;应用紫外可见分光光度计检测各抗生素单用及与AL-1联用对PA胞外蛋白水解酶含量的影响。结果 AL-1与抗生素联用可抑制PA胞外多糖形成及降低PA胞外蛋白水解酶含量,且效果强于AL-1与各抗生素的单独作用。结论 AL-1对各抗生素抑制PA胞外多糖的形成及减少胞外蛋白水解酶的含量具有协同作用。     

痂囊腔菌素A体外抑菌作用的探讨

目的探讨痂囊腔菌素A体外抑菌作用。方法采用纸片扩散法实验测定痂囊腔菌素A的抑菌活性,二倍稀释法测定痂囊腔菌素A抑菌浓度。结果痂囊腔菌素A具有光敏抑菌活性,浓度及光照量会影响痂囊腔菌素A抑菌活性。结论痂囊腔菌素A能抑制革兰氏阳性细菌的生长。     

铜绿假单胞菌医院感染的临床分布及耐药性分析

〔摘 要〕 目的：回顾性分析铜绿假单胞菌的临床分布特点及耐药性。 方法：收集 2019 年 1 月至 2019 年 12 月东莞市中西医结合医院住院患者送检的痰液、伤口分泌物、中段尿、全血及腹腔液等标本,分离培养出 122 株铜绿假单胞菌,并进行菌株鉴定,分析铜绿假单胞菌的科室分布、标本来源分布与不同年龄段的分布情况,及进行药敏试验分析。 结果： 分离培养出 122 株铜绿假单胞菌中,标本来源主要为痰液（占 63.2 %）,其次为伤口分泌物（占 32.8 %）。铜绿假单胞菌分布科室主要来自呼吸内科（占 43.5 %）,其次是普外科（29.5 %）和重症监护室（占 19.7 %）。感染患者中,18 岁以下儿童和青少年少见,以 70 岁以上的高龄患者（50 例,占 40.9 %）为主要易感人群。铜绿假单胞菌对阿米卡星、多黏菌素 B、庆大霉素、妥布霉素和美罗培南敏感率较高,分别为 97.5 %、96.7 %、95.9 %、95.9 %、95.2 %,对替卡西林 / 棒酸敏感率最低,为 43.5 %。 结论：呼吸道和伤口感染铜绿假单胞菌比例较高,临床科室要特别加强高龄患者的管理工作,预防铜绿假单胞菌的院内感染。氨基糖苷类、多肽类、喹诺酮类、碳青霉烯类抗菌药物作为铜绿假单胞菌预防和治疗的药物效果较好,需合理使用。     

蒙药嘎木朱尔的体外抑菌作用初步观察

目的：通过蒙药嘎木朱尔的体外抑菌作用，为临床使用提供理论依据。方法：采用K—B纸片扩散法。用蒙药嘎木朱尔的溶液浸泡的滤纸片对金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌、绿脓杆菌、炭疽杆菌、变形杆菌、甲型链球菌、乙型链球菌抑菌作用进行了初步实验观察与分析。结果：蒙药嘎木朱尔对以上7种菌均有抑菌作用。结论：蒙药嘎木朱尔体外有明显抑菌作用。     

痰热清注射液治疗下呼吸道多药耐药铜绿假单胞菌感染临床研究

目的：探讨痰热清注射液治疗下呼吸道多药耐药铜绿假单胞菌感染的临床疗效及安全性。方法：将68例下呼吸道多药耐药铜绿假单胞菌感染患者随机分为治疗组和对照组。两组患者均常规抗感染、化痰、扩张气道、营养支持对症治疗,必要时行无创或有创机械通气治疗。治疗组在常规治疗基础上予痰热清注射液20 mL加入质量分数5%葡萄糖注射液250 mL静脉滴注,每日1次。疗程为10～14 d。结果：治疗组有效率为91.67%,对照组有效率为68.75%;治疗组细菌清除率为86.11%,对照组细菌清除率为62.50%,且治疗组抗生素应用天数明显少于对照组,两组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：痰热清注射液治疗下呼吸道多药耐药铜绿假单胞菌感染疗效确切,安全性高。     

白头翁提取液对铜绿假单胞菌R质粒的消除作用

目的探讨中药白头翁提取液对铜绿假单胞菌R质粒的消除作用。方法对老年呼吸系统感染患者痰中分离的铜绿假单胞菌R质粒进行了检测,并选用中药白头翁提取液对该质粒进行了体外、体内消除试验。结果中药白头翁提取液体外作用24,48,72h后,R质粒消除率分别为0,1.8%,3.4%,十二烷基磺酸钠(SDS)对照组分别为0,0.8%,1.6%。中药白头翁提取液体内作用24,48,72h后,R质粒消除率分别为0,2%,12.8%,对照组均为0。结论中药白头翁提取液对铜绿假单胞菌R质粒在体外、体内均具有消除作用,体内消除作用强于体外。     

复方清热颗粒对铜绿假单胞菌外排泵作用机制的实验研究

目的探寻中药复方清热颗粒对耐环丙沙星铜绿假单胞菌外排泵影响的作用机制。方法建立急性耐环丙沙星铜绿假单胞菌腹腔感染兔动物模型,复方清热颗粒药液灌胃,每日2次,连续5d。末次给药后60min无菌心脏取血,离心分离出含药血清。应用外排泵抑制剂（CCCP）选择出外排泵阳性的耐环丙沙星铜绿假单胞菌9株,应用复方清热颗粒含药血清和环丙沙星（CIP）进行干预,将干预前后的铜绿假单胞菌分别行增菌培养,提取外膜蛋白,行蛋白电泳,紫外凝胶成像后分析外膜蛋白中OprM量的变化来推测复方清热颗粒对铜绿假单胞菌外排泵的作用机制。结果复方清热颗粒含药血清作用前后铜绿假单胞菌外膜蛋白O-prM量的变化相近。结论复方清热颗粒含药血清可抑制铜绿假单胞菌的外排泵,但不能改变其外排泵的含量。