清肺口服液对人喉癌细胞感染呼吸道合胞病毒后ICAM-1表达水平的影响

目的探讨清肺口服液对人喉癌细胞（Hep-2）感染呼吸道合胞病毒（RSV）后细胞间黏附分子-1（I-CAM-1）表达水平的影响。方法分时段以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预RSV感染的体外培养的Hep-2细胞,48h时及72h后收集各组细胞上清,采用酶联免疫吸附试验法（ELISA法）测定各组人喉癌细胞ICAM-1表达变化。结果 48h时及72h后病毒模型组ICAM-1的表达明显高于清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组及利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组;空白血清组与病毒模型组无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与利巴韦林Ⅱ、Ⅲ组比较,无显著差异。清肺口服液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组之间比较,无显著差异。72h后各组ICAM-1的表达与48h相比,无显著差异。结论清肺口服液可降低Hep-2感染RSV后ICAM-1的过度表达,减轻炎症反应,提前给药更可获得良好的效果,这可能是清肺口服液抗病毒的机制之一。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞间黏附分子(ICAM-1)、白细胞介素-8(IL-8)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞ICAM-1、IL-8 mRNA表达变化。结果:病毒感染后ICAM-1、IL-8以GAPDH为内参的△Ct值明显小于正常细胞组及生理盐水血清对照组,而清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清作用后△Ct值显著增大。结论:(1)RSV病毒作用后ICAM-1及IL-8 mRNA表达水平显著升高;(2)清肺口服液可以降低ICAM-1、IL-8的表达,缓解RSV感染后细胞的异常变化,起到间接预防RSV肺炎的作用。     

清肺口服液通过ERK1/2通路调控RSV所致呼吸道炎症损伤的机制

目的:通过研究清肺口服液对呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)感染后气道上皮细胞胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinases,ERK1/2)磷酸化蛋白及相关炎症因子表达的影响,探讨清肺口服液抗RSV感染及其继发炎症损伤的调节机制。方法:RSV体外感染人支气管上皮细胞(human bronchial epithelial cells,16-HBE)建立气道上皮炎症损伤模型,设置空白组,模型组(RSV),利巴韦林组(利巴韦林),清肺口服液高、中、低质量浓度组,共6组。其中空白组给予含2%FBS的RPIM 1640培养基进行培养,其余各组在空白组的基础上造模,模型组加入等量RSV(MOI=1),利巴韦林组加入等量利巴韦林注射液(0.2 mg·L-1),清肺口服液组给予清肺口服液高、中、低质量浓度(200,100,50 mg·L-1)进行干预。应用噻唑蓝(tetrazolium salt colorimetry,MTT)比色法检测清肺口服液对RSV感染16-HBE的毒性作用,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测清肺口服液对细胞中RSV复制的影响,并用蛋白免疫印迹法(Western blot)检验ERK1/2信号通路相关蛋白磷酸化表达变化,同时用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)水平。结果:与空白组比较,模型组RSV大量增殖,16-HBE出现典型的炎症损伤表现,ERK1/2磷酸化蛋白水平显著提高(P0.01),同时细胞上清中释放大量的炎症因子IL-6,IL-8(P0.01)。加入清肺口服液或利巴韦林后,16-HBE中的RSV复制水平显著降低(P0.01),且清肺口服液(200,100 mg·L-1)可显著下调ERK1/2磷酸化蛋白的表达(P0.01),并显著降低细胞上清中炎症因子IL-6,IL-8的表达水平(P0.01)。结论:清肺口服液能够抑制RSV病毒复制并减轻RSV感染所致的气道炎症损伤,其机制可能与下调ERK1/2磷酸化蛋白水平及降低气道炎症因子的表达有关。     

金欣口服液对感染RSV大鼠血清IL-6、IL-8的影响

目的：观察金欣口服液对感染呼吸道合胞病毒（RSV）大鼠血清中IL-6、IL-8的影响。方法：将56只SD大鼠随机分为7组,分别为正常组,模型组,金欣高、中、低剂量治疗组,预先给药组,利巴韦林治疗组。用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组SD大鼠血清中IL-6、IL-8的水平。结果：大鼠感染RSV后血清中IL-6、IL-8水平均高于正常组（P〈0．05）,金欣治疗组及利巴韦林组干预后IL-6、IL-8水平显著降低（P〈0．01）;与利巴韦林组相比,金欣高剂量组、预先给药组的IL-6的水平明显降低（P〈0．01）;预先给药组中,血清IL-6的水平低于中、低剂量组（P〈0．01）,而IL-8水平比高、中、低剂量组均显著降低（P〈0．01）。结论：金欣口服液能降低两者的水平,且以预先给药方式更为有效,推测可以预防和治疗感染RSV的大鼠。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA基因表达的影响

目的 探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法测定各组HELF TGF-β1表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组TGF-β1下降至1/3,清肺口服液含药血清组可显著升高TGF-β1水平至RSV感染细胞的2倍.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞TGF-β1 mRNA表达水平显著下降;清肺口服液可调节TGF-β1 mRNA表达,减缓RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染RAW264.7细胞Toll样受体3表达的调控作用

目的:通过研究金欣口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)活化诱导的Toll样受体3(TLR3)的干预作用,探讨其治疗RSV肺炎可能的免疫学机制。方法:RSV感染体外培养的RAW264.7细胞,采用金欣口服液含药血清进行干预,并设利巴韦林阳性对照,24h后收集细胞,Real time RT-PCR法测定TLR3 mRNA的表达变化;激光共聚焦显微镜观察免疫荧光细胞化学染色法处理的各组细胞TLR3表达水平;ELISA法检测各组细胞培养上清中白细胞介素-6(IL-6)含量,在核酸及蛋白水平探讨金欣口服液含药血清抗RSV感染的作用机制。结果:RSV感染RAW264.7细胞后24h,细胞中TLR3 mRNA和蛋白表达水平以及细胞培养上清中IL-6表达明显升高(P0.01),而金欣组TLR3及IL-6表达均显著低于RSV感染组(P0.01,P0.05),且效果优于利巴韦林组(P0.01,P0.05)。结论:金欣口服液含药血清能下调RSV活化诱导的TLR3及其下游炎症因子IL-6的高表达,推测其为金欣口服液抗RSV感染的机制之一。     

清肺口服液对RSV肺炎患儿血清中IL-6及TNF-α表达水平的影响

目的探讨清肺口服液如何通过调节细胞因子而起到抑制呼吸道合胞病毒(RSV)的作用机理。方法留取RSV肺炎住院患儿经清肺口服液治疗前后血样标本各8份,每份标本2 mL。离心分离血清,-70℃冻存,采用酶联免疫吸附分析法分别测定细胞上清液中IL-6及TNF-α的含量。结果 RSV肺炎患儿经清肺口服液治疗后血清中IL-6及TNF-α的质量浓度均较治疗前改善,其变化均有统计学意义。结论清肺口服液能有效降低RSV肺炎患儿血清中IL-6及TNF-α的质量浓度,减轻RSV对正常免疫细胞的损害,抑制其毒性作用。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的 观察清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响.方法 RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞PDGF-BB mRNA表达变化.结果 病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升3倍,清肺口服液含药血清可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5.利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对PDGF-BB表达有一定的影响.结论 RSV感染可使HELF细胞PDGF-BB mRNA表达水平显著升高;清肺口服液可调节PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一.     

截哮口服液对RSV感染小鼠IL-4,IL-5的影响

目的：观察截哮口服液对RSV感染小鼠血清中IL-4、IL-5的影响。方法：将70只小鼠随机分成截哮口服液高剂量组、中剂量组、低剂量组、病毒唑组、模型组、正常组，用双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组小鼠血清中IL-4、IL-5的水平。结果：截哮口服液各剂量组与病毒唑组比较IL-4均有显著差异（P〈0．05）；中剂量组、病毒唑组与模型组比较IL-4有显著差异（P〈0．05）。中剂量组与病毒唑组比较IL-5有显著差异（P〈0．05），中剂量组和病毒唑组与正常组比较IL-5有显著差异（P〈0．05），中剂量组与高剂量组、低剂量组、模型组比较IL-5有显著差异（P〈0．05）；高剂量组和低剂量组比较IL-5无显著差异。结论：截哮口服液对呼吸道合胞病毒感染小鼠血清中IL-4、IL-5有降低作用。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞TGF-β_1 PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒(RSV)感染的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:RSV攻击体外培养的HELF细胞后,以清肺口服液含药血清,利巴韦林含药血清及空白血清干预,采用实时荧光定量PCR法(RealTime-PCR)测定各组人胚肺成纤维细胞TGF-β1、PDGF-BBmRNA表达变化。结果:病毒对照组较正常细胞组PDGF-BB上升为3倍、TGF-β1下降为1/3,清肺口服液含药血清组可显著降低PDGF-BB至RSV感染细胞的1/5、升高TGF-β1至RSV感染细胞的2倍。利巴韦林含药血清和空白血清作用相似,对TGF-β1,PDGF-BB表达有一定的影响。结论:(1)RSV感染可使HELF细胞PDGF-BBmRNA表达水平显著升高,TGF-β1mRNA表达水平显著下降;(2)清肺口服液可调节TGF-β1、PDGF-BB等细胞因子的mRNA表达,缓减RSV感染后细胞的异常变化,这可能是其抗病毒作用机制之一。     

从TH1/TH2细胞平衡角度探讨清肺口服液对感染RSV小鼠内T-bet、GATA3水平的影响

目的:从TH1/TH2细胞平衡角度观察清肺口服液对感染RSV肺炎小鼠肺组织内T-bet、GATA3及IL-12的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法:将45只BABL/c小鼠随机分为5组,正常对照组,模型组,利巴韦林组,清肺(3.4 g/mL)组,清肺(10.2 g/mL)组。每组9只,用RSV(Long株)病毒予小鼠滴鼻造模,病毒激发24 h后,分给药72 h后处死小鼠,立即取小鼠肺组织行病理分析,及肺细胞中RT-PCR检测T-bet和GATA3蛋白表达水平,ELISA方法检测肺泡灌洗液(BALF)中IL-12的含量,流式细胞术方法检测小鼠脾脏细胞IL-4和INF-γ表达含量。结果:小鼠模型组与各给药组小鼠肺组织均有T-bet和IL-12(P<0.05,P<0.01)显著升高,GATA3显著降低。结论:清肺口服液具有调节TH1/TH2平衡,并对于感染rsv小鼠体内T-bet及IL-12细胞因子具有明显提升作用,而对GATA3则有明显抑制效果,从而进一步证明了清肺口服液治疗RSV病毒性肺炎有效性。     

清肺口服液对呼吸道合胞病毒感染人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子-α转化生长因子-β_1蛋白表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对呼吸道合胞病毒感染的人胚肺成纤维细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)、转化生长因子(TGF-β1)蛋白表达的影响。方法:用呼吸道合胞病毒Long株感染人胚肺成纤维细胞,用清肺口服液含药血清作用于该细胞,并设空白血清、和正常细胞做对照,24h后采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组细胞上清液TNF-α、TGF-β1蛋白水平。结果:清肺口服液含药血清组两种细胞因子明显升高(P0.01)。结论:清肺口服液含药血清可以在病毒感染早期升高TNF-α、TGF-β1蛋白表达,从而增加病毒清除,抑制过度的免疫反应,这可能是该药治疗呼吸道合胞病毒感染的机理之一。     

小儿喘咳液合苍耳子散对哮喘大鼠血清IFN-γ、IL-4、ECP表达影响的研究

目的：研究小儿喘咳液合苍耳子散对哮喘的疗效及作用的机制。方法：将90只大鼠随机分成空白组、模型组、西药组、喘咳液大、中、小剂量组与合方大、中、小剂量组9个组,每组10只,进行哮喘气道重塑模型制备,分别用采用不同的干预方案,观察各组大鼠症状及血清干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素4（IL-4）、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白（ECP）的变化。结果：与空白组比较,模型组大鼠血清IFN-γ水平明显下降,IL-4、ECP水平明显上升,IFN-γ／IL-4比值明显下降,差异均有非常显著性意义（P〈0．01）;与模型组比较,西药组、喘咳液各剂量组及合方各剂量组IFN-γ水平明显上升,IL-4、部分组别ECP水平下降,IFN-γ／IL-4比值明显上升,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论：小儿喘咳液合苍耳子散抑制气道炎症的直接作用机制为调整失衡Th1／Th2类细胞因子的比值,降低血清ECP水平。     

清肺口服液含药血清对小鼠肺上皮细胞TGF-β1及PDGF-BB mRNA基因表达的影响

目的:探讨清肺口服液含药血清对小鼠肺上皮细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)基因表达的影响。方法:用清肺口服液含药血清、利巴韦林含药血清及空白血清分别作用于体外培养的小鼠肺上皮细胞TC-1,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法测定药物作用前后各组TC-1细胞TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达水平。结果:清肺口服液血清作用于TC-1细胞后,使TGF-β1、PDGF-BB mRNA表达水平下调至原来的1/2;利巴韦林血清作用细胞后,细胞中TGF-β1 mRNA升高1倍、PDGF-BB mRNA升高2倍。结论:清肺口服液可能通过抑制TGF-β1与PDGF等细胞因子的过度表达,延缓肺泡炎及肺纤维化形成,在病毒性肺炎的治疗中发挥疗效。     

推拿配合躯干肌功能锻炼治疗慢性盘源性腰痛的临床分析

目的:观察推拿配合躯干肌功能锻炼治疗慢性盘源性腰痛的疗效,为该疗法的临床应用提供依据。方法:将123例慢性盘源性腰痛患者随机分为3组:Ⅰ组46例,采用推拿配合躯干肌功能锻炼法治疗;Ⅱ组41例,仅行推拿手法治疗;Ⅲ组36例,仅采用躯干肌功能锻炼治疗。分别于治疗前、疗程结束后及治疗后12个月,采用视觉模拟评分法和Oswestry腰椎功能障碍指数问卷表评价患者最大腰痛程度及腰痛对患者日常社会生活和劳动能力的影响。结果:①视觉模拟评分:3组VAS评分存在分组效应(F=131.727,P=0.000)、时间效应(F=570.366,P=0.000)、分组与时间交互效应(F=121.005,P=0.000)。不同时点3组间两两比较:治疗后Ⅰ组与Ⅱ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅰ组与Ⅲ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅱ组与Ⅲ组间差异无统计学意义(P=0.146);治疗后12个月,Ⅰ组与Ⅱ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅰ组与Ⅲ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅱ组与Ⅲ组间差异无统计学意义(P=0.543)。②Oswestry腰椎功能障碍指数:3组患者Oswestry腰椎功能障碍指数存在分组效应(F=126.032,P=0.000)、时间效应(F=136.665,P=0.000)、分组与时间交互效应(F=121.010,P=0.000)。不同时点3组间两两比较:治疗后Ⅰ组与Ⅱ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅰ组与Ⅲ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅱ组与Ⅲ组间差异无统计学意义(P=0.182);治疗后12个月,Ⅰ组与Ⅱ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅰ组与Ⅲ组间差异有统计学意义(P=0.000),Ⅱ组与Ⅲ组间差异无统计学意义(P=0.245)。结论:推拿疗法和躯干肌功能锻炼疗法的有机结合,避免了单独使用其中一种方法的弊端,对慢性盘源性腰痛有良好的治疗效果。     

左归丸及其组方对卵巢早衰小鼠卵巢细胞凋亡的影响

目的：比较左归丸及其组方对卵巢早衰的作用差异。方法：建立免疫性卵巢早衰小鼠模型,按中医药理论用撤药分析法分为Ⅰ-Ⅴ组,与模型对照组及空白对照组对比,观察各组方对模型小鼠卵巢细胞的凋亡率作用。结果：Ⅰ-Ⅴ组、己烯雌酚组卵巢细胞凋亡率均低于模型对照组（P〈0.01）,降低效果从大到小依次为Ⅴ组、己烯雌酚组、Ⅳ组、Ⅲ组、Ⅱ组、Ⅰ组,Ⅲ组与Ⅱ组比较无显著性差异（P〉0.05）,Ⅳ组与Ⅴ组比较无显著性差异（P〉0.05）。结论：左归丸治疗卵巢早衰配伍合理,熟地起到君药作用。