HBV NAT和HBsAg供者检测灵敏度比较

背景 为了评估混合样品HBV NAT能否有效地增加检出HBV感染血液数量,作者进行了以下研究:将新的HBsAg检测方法、混合NAT和单一样品NAT与现行许可使用的HBsAg检测方法比较,评估出增加的HBV感染血液检出数。方法 在10份HBV血清转换盘(SC)中每份血清盘取10份样品,这些样品处于“上升前”(早期感染,病毒含量低)和“上升”(病毒含量增加)     

Hesse红十字会输血服务中心HBV NAT血液筛查结果

背景 为了完善输血相关病毒的NAT筛查程序,作者所在单位从1997年1月起常规进行HBV PCR血液筛查。方法 使用Tecan Genesis automates将96份血液样品进行混合。混合前未将HBsAg有反应性的样品除去。采血后当天HBV NAT和抗原检测同时进行。NAT前,以48,000g离心浓缩混合样品中的HBV质粒。传统的非巢式PCR和5'—核酸酶(Taq)inhouse—PCR可有效地扩增HBV。两者的灵敏度可达到1000基因组/ml     

小混合核酸放大技术检测B型肝炎病毒比较化学发光免疫技术检测B型肝炎病毒表面抗原筛选的优势

背景和目的 日本红十字会已开发出全自动多重(MPX) 核酸放大技术(NAT),可以用于检测B型肝炎病毒(HBV)、C型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷1型病毒(HIV-1),用于筛选自愿无偿献血血清学阴性的血液。此NAT筛选系统每小混合由50份样品组成。与已经很敏感HBsAg检测方法比较,检测HBV的敏感性更高。材料和方法 自2000年2月1日至2001     

核酸检测技术与酶联免疫检测技术在血液筛检中的初步应用比较

目的了解山东地区献血者的乙肝病毒感染状况并为今后开展常规核酸检测技术(NAT)检测提供实验依据。方法使用ELISA和NAT检测法筛选无偿献血者血液样本11334份,应用实时荧光定量PCR仪检测样本的HBV DNA含量。结果在11334份血液样本中发现HBsAg EIA和NAT同时阳性的样本237份,HBsAg EIA阴性但NAT阳性的样本7份和HBsAg EIA阳性但NAT阴性的样本23份。结论核酸检测能够提高HBV的检测灵敏度,荧光定量PCR仪可以应用于献血者的大规模筛选。     

无偿献血者血液HBV核酸筛查研究

目的 评估大连地区HBV-DNA检测对于输血安全的重要性.方法 对无偿献血者的血液标本进行血清学检测(HBsAg、HCV抗体、HIV抗原/抗体、梅毒特异性抗体、谷丙转氨酶和血型),同时进行HBV、HCV、HIV的三联检核酸检测(NAT);对ELISA(-)NAT(+)的标本采用电化学发光法进行HBV血清标志物补充试验,同时对献血者进行追踪检测.结果 22416份无偿献血者样本发现35例ELISA(+)NAT(+)、3例ELISA(+)NAT(-)、12例ELISA(-)NAT(+).跟踪5位ELISA(-)NAT(+)的献血者,1例可能是免疫“窗口期”;其余4例可能是OBI.结论 核酸血液筛查可大大提高血液安全性,对提高HBsAg阴性血液标本中HBV感染检出率具有重要价值;但核酸与血清学二者检测结果存在不一致,二者对于降低输血传播HBV.     

无偿献血者乙肝表面抗原弱阳性标本不同检测方法结果比较

目的比较酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析技术(GICA)、电化学发光免疫分析(ECLIA)、核酸检测(NAT)共4种方法检测乙肝表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的结果符合率,分析探讨4种方法的特异性与灵敏度。方法采用高灵敏度进口和国产ELISA试剂对重庆地区2013年1~12月无偿献血标本共116 351份进行HBsAg血液定性筛查,选取0.8≤S/COl范围的弱阳性标本150份进行ELISA双孔复检、GICA、ECLIA、NAT进行定量检测。结果以上4种方法检测HBsAg的结果符合率为74%,其中,GICA与ECLIA结果符合率为78.7%;ELISA与ECLIA结果符合率为91.2%;NAT与ECLIA结果符合率为85.5%,GICA检测HBsAg弱阳性标本的符合率比其他3种方法较差。结论 (1)GICA的灵敏度和特异性与其他3种方法相比较低,检测HBsAg弱阳性标本时存在比较高的假阴性率和假阳性率,建议只作初筛检测。(2)ECLIA的灵敏度和特异性略高于ELISA,当ELISA检测出现弱阳性结果时,最好用ECLIA进行复检。(3)NAT和ELISA灵敏度和特异性接近,NAT与ELISA技术的方法学差异主要是检测的对象不同,且ELISA与NAT检测各有优劣,因此2种方法进行双检可以有效提高灵敏度和特异性。     

HBsAg阴性献血者人群HBV感染的检测和输血残余风险分析

目的 了解献血人群乙型肝炎病毒(HBV)感染状况和血液经酶免疫法(EIA)筛查乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)后经血传播HBV感染的残余风险.方法 采用国产和进口两种EIA试剂对献血者血液进行HBsAg筛查,罗氏诊断COBAS Ampliscreens NAT血筛系统检测EIA检测合格标本中HBV DNA,对HBV DNA阳性标本进行半套式PCR检测,并对PCR扩增产物进行测序和病毒基因亚型分析.结果 共筛查1998～2008年的献血者232 305例,发现HBsAg阳性2 999例,阳性率为1.3%;对2002～2007年EIA检测合格的113 639例献血者血液标本进行NAT检测,检测出13份HBV DNA阳性、HBsAg阴性的献血者血液,HBV残余风险高达1.1/10 000.结论 EIA筛查后血液安全性有了很好的保障,经血传播HBV残余风险依然处于较高的水平,NAT应用对提高血液安全,降低输血传播HBV残余风险意义重大.     

早期乙肝病毒表面抗原及其突变体检测:五种试验方法比较

概 述 乙肝病毒(HBV)表面抗原(HBsAg)血清学检测是了解献血者和肝炎患者是否感染HBV的基础。HBsAg的检测方法现面临两方面的挑战:即现行乙肝病毒DNA检测技术敏感性程度与存在的HBsAg变异体检出。为研究当前HBsAg检测方法敏感性,我们对11种血清转化的系列样品和3种经系列稀释的标准HBsAg样品以及9种“a”决定簇有多个变异的重组HBsAg样品进行了检测,并对HBsAg检测的5种方法进行了比较。     

献血者 HBsAg ELISA弱阳性NAT阴性标本的乙肝感染确证研究

目的调查深圳市无偿献血者HBsAg弱阳性NAT-HBV感染情况,分析血清学和分子生物学特征,探讨形成的分子机制。方法收集HBsAg弱阳性NAT阴性标本,用雅培化学发光微粒子免疫法(CMIA)和中和试验检测HBsAg,用罗氏电化学发光免疫法(ECLI)检测乙肝两对半,采用大容量提取巢式PCR扩增病毒BCP/PC和S区,分析HBV序列。同时进行病毒载量qPCR测定。结果 109 752份血样中有104(0.095%)份HBsAg弱阳性NAT阴性血液标本参与本研究。由CMIA和ECLI确证为HBsAg+的有33例(31.7%),包括30例(90.9%)HBV DNA+。HBsAg阳性浓度与HBV DNA载量间成很弱相关性(R~2为0.4187)。在18个可分型的标本中,B型占88.9%,C型和D型仅检出1例(5.6%)。在S基因区发现Q129H,M133L/S/T,T143M、L175S和V177A影响HBsAg检测的高频变异。结论献血者HBsAg弱阳性NAT阴性标本中确有一定比例为乙肝病毒感染。有必要在血液筛查中应用灵敏度更高的HBsAg和NAT检测方法。     

NAT不能检出窗口期献血传播HBV、HCV、HIV危险的数学模型

背景 世界各地的血液中心基本上都引入了小混合样品NAT检测以减少窗口期献血传播HBV、HCV、HIV危险。本研究的目的是了解用单个样品NAT代替混合样品NAT能降低多少残余危险呢。研究设计和方法 本研究提出了一个数学模型以评估NAT筛查方法用于病毒学安全检测时输血传播病毒的可能性。研究使用了三种假设:1)在窗口早期病毒核酸浓度倍增期为2.8(HBV)天、0.74(HCV)天和0.90(HIV)天。2)筛查方法对病毒低拷贝数的DNA或RNA检出能力符合正规偏差模式;     

HBV NAT检测和抗-HBc检测增加血液安全

背景 从1997年1月起,作者所在协会对捐献血液常规进行HBV PCR检测,并完善了对输血相关病毒进行NAT筛查程序。检测范围扩展到输血服务机构的消费者,每年检测样品130万份。研究设计和方法 使用自动移液器将96份供血者样品进行混合,样品中包括HBsAg有反应的样品。以离心法对混合样品进行HBV浓集。接着用传统和内部应用的Taq Man PCR进行扩增。对于每个单独的样品而言,该方法的灵敏度为1000equ基因/mL。而单一样品PCR和单一样品浓缩PCR的灵敏度分别为300和5～10equ基因/mL。结果 对360万份供者样品筛后发现6例HBV PCR阳性、HBsAg阴性样品。两份样品为无血     

乙型肝炎血清标志物与HBV DNA含量的相关性分析

目的 探讨乙型肝炎病毒(HBV)DNA检测结果与血清标志物检测结果的相关性.方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和酶联免疫吸附(ELISA)法同步检测125份血清标本HBV DNA含量和HBV标志物.结果 125份血清标本中,47例HBsAg( )、HBeAg( )、抗-HBc( )患者血清HBV DNA检测阳性率为95.7%;35例HBsAg( )、抗-HBe( )、抗-HBc( )患者血清中HBV DNA检测阳性率为65.7%,血清HBeAg阳性组HBV DNA检测含量明显高于HBeAg阴性组.结论 结论 FQ-PCR法检测HBV DNA具有良好的特异性和灵敏度,为临床了解病毒的复制情况,选择制定治疗方案的和疗效观察提供了有力的依据.     

携带乙型肝炎病毒产妇血清与初乳HBV DNA载量关联性研究

目的 研究产妇血清与其初乳汁乙型肝炎病毒(HBV) DNA载量的关联性.方法 选取住院分娩产妇共522例,依据HBV五项血清学指标,分为A组:乙肝"HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性"103例,B组:乙肝"HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性"221例,C组:HBsAg、HBeAg阳性20例,D组:HBsAg、HBcAb阳性43例,E组:乙肝其他血清模式49例,另选F组:HBV模式全阴性的产妇86例作为对照组;均采用ELISA法检测产妇血清、乳汁中HBV标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb,阳性者采用该项目胶体金标试纸复核,同时采用实时荧光定量PCR检测产妇血清和乳汁HBV DNA载量,对相关数据进行统计分析.结果 对年龄18～44岁围产期妇女体检乙肝感染指标,A组乙肝"HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性"产妇血清和乳汁HBV DNA诊断灵敏度分别为100.00%(103/103)和86.41%(89/103)、血清HBV DNA载量平均为4.11×108 copies/ml;B组乙肝"HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性"产妇血清和乳汁HBV DNA诊断灵敏度分别为19.46%(43/221)和2.71%(6/221),血清HBV DNA载量平均为6.85×104 copies/ml ;C组乙肝HBsAg、HBeAg阳性产妇血清和乳汁HBV DNA诊断灵敏度分别为100.00%(20/20)和80.00%(16/20),血清HBV DNA载量平均为8.27×106 copies/ml ;D组HBsAg、HBcAb阳性产妇血清和乳汁HBV DNA诊断灵敏度分别为65.12%(28/43)和25.58%(11/43),血清HBV DNA载量平均为2.89×105 copies/ml ;E组HBV其他模式产妇血清和乳汁HBV DNA诊断灵敏度分别为10.20%(5/49)和2.04%(1/49),血清HBV DNA载量平均为1.59×104 copies/ml ;F组乙肝五项全阴性产妇血清和乳汁HBV DNA诊断灵敏度分别为1.16%(1/86)和0(0/86),血清HBV DNA载量＜1.00×103 copies/ml.A组与B组间乳汁HBV DNA实验诊断阳性差异有统计学意义(χ2=237.45,P＜0.01).HBV携带者乳汁HBV DNA载量与其血液HBV DNA载量呈正相关(r=0.721).结论 携带HBV产妇乳汁HBV DNA载量远低于血液HBV DNA载量;乳汁中HBV传染性也低于血液传染性;研究证实A组产妇经母乳HBV传染性是"HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性"产妇的87.45倍,HBV其他模式者乳汁传染性与乙肝"HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性"产妇乳汁传染性相近.     

乙型肝炎病毒血液核酸筛查及阳性献血者追踪的研究

目的了解沈阳地区献血者中乙肝病毒感染状况,探讨采用核酸扩增检测(NAT)对血液进行筛查的可行性。方法应用酶联免疫法(EIA)结合实时荧光定量PCR-NAT方法对50190人份无偿献血者血液标本进行筛查,以确定血液标本中是否含HBV DNA。结果在50190人份血液标本中发现HBsAgEIA阴性但HBV DNA NAT检测阳性的标本5份,经追踪检测证实其中1例为HBV血清转换窗口期感染。结论核酸检测(NAT)能够显著提高HBV的检测灵敏度,在献血者大规模筛查中发现HBV低水平窗口期感染的标本。     

献血者HBsAg阴性NAT可疑结果标本乙肝感染状况的调查分析

目的了解献血者应用ULTRIO PLUS核酸检测(NAT)后,初始反应性,鉴别实验阴性(NAT可疑结果)标本HBV DNA感染情况,分析其血清学和分子生物学特征,提高输血安全性。方法本中心2017年1—12月的97 577人(份)无偿献血者标本经常规和NAT检测后,收集HBsAg ELISA(-)/HBV DNA可疑标本,进行乙肝两对半检测与HBV DNA大容量提取,采用巢氏PCR方法扩增BCP/PC和S区基因序列,并对所得序列做基因型分析,同时采用实时荧光定量PCR检测(qPCR)和分析。结果 97 577(人)份献血者标本,通过ELISA和NAT初筛检出205(0.21%)份NAT可疑标本,经血清学、巢氏PCR和qPCR检测,93/205(45.4%)确证HBV DNA阳性, 92/93(98.9%)为隐匿性乙肝感染(OBI)标本。病毒定量范围(5—65.2)IU/mL,中位数为8.1 IU/mL。在可分型的35例标本中,HBV基因型B型18例(51.4%)、C型17例(48.6%)。结论 NAT可疑标本中仍能检出近半数标本为HBV DNA阳性,应提高目前NAT检测灵敏度,确保输血安全。     

四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染的研究

目的了解四川地区供血浆人群隐匿性乙型肝炎病毒感染(OBI)情况,分析现行标准下原料血浆的HBV残余风险。方法采用实时荧光PCR和ELISA法,对四川地区10个单采血浆站2007年7月～2009年7月筛查合格的56 620名次供浆者的135 542份原料血浆标本作HBV NAT和HBsAg同步筛查,对筛查阳性的标本以进口试剂复核、作中和试验及HBV DNA定量测定,并对阳性血浆的供血浆者追踪分析,确认OBI标本。结果共检出HBV DNA阳性12份(9人),四川地区原料血浆HBV DNA检出率为0.008 9%(12/135 542);HBV DNA载量均<1 000 IU/ml;采用国产ELISA试剂检测该12份标本HBsAg均为阴性,而用进口试剂检测并经中和试验确认了其中5份(3人)为HBsAg阳性,其余7份(6人)为OBI血浆,血清学模式均为HBsAg-/HBeAg-/HBcAb+;对供血浆者2～9个月的追踪分析显示ELISA和NAT检测结果无变化,与筛查结果一致。结论 HBsAg阴性供血浆人群中存在OBI感染者,四川供浆人群中OBI感染率为0.010 6%(6/56 620),低于现有报道的我国无偿献血者的OBI感染率;按照现行要求采用ELISA法检测原料血浆,灵敏度较低的国产试剂检测HBsAg的残余风险(0.0089%)高于进口试剂(0.005 2%)。增加HBV NAT能有效降低原料血浆OBI的漏检风险。     

应用核酸扩增技术对血液中HBV、HCV和HIV-1检测

目的探讨采用核酸扩增技术(NAT)对血液进行HCV、HBV和HIV1核酸检测的可行性。方法采用手工法将血清学检测HBsAg、抗HCV、抗HIV1/2和TPHA呈阴性,以及ALT<40U的血浆标本进行48份×50μl混合;超速离心浓缩病毒后提取病毒核酸,采用RocheCOBASAmplicor分析系统对微量血浆混合标本进行HBVDNA、HCVRNA和HIV1RNA的检测;阳性反应的混合标本进行交叉混合和单份确认检测。结果18621份血清学检测合格的血液中,发现5份HBsAg阴性、HBVDNA呈阳性的血液,阳性率为0.027%(5/18621)。经进一步随访6～20月显示,2名献血者为HBV低水平感染,1例为HBV血清转换窗口期感染。结论NAT检测能够发现HBV低水平和窗口期感染的标本。     

输血后乙型肝炎对健康和经济影响以及成本-效益分析:在欧盟范围内的研究

背景 在常规供血者检测中采用HBV NAT或新的灵敏度升高的HBsAg检测方法可以进一步降低输血后乙型肝炎(PT-HB)的风险,然而,有人怀疑这些安全措施的成本-效益,因为在西方国家中成人中感染B型肝炎并不认为是一种严重的疾病。研究设计和方法 设计一种机算计模型以评估PT-HB患者健康情况和相关成本。这种模型和HBV感染风险评估的结果、由     

化学发光和酶免2种检测系统检测HBsAg情况分析

目的通过对日常献血者标本(3 031份)和血清盘的平行检测,评估化学发光(CLIA)和酶免(ELISA)2个检测系统检测HBsAg各项性能指标。方法分别采用ELISA(国产A试剂)、ELISA(进口B试剂)和CLIA(国产)对3 031份日常献血者标本进行HBsAg的检测,将阳性标本送卫生部临检中心进行确认实验;分别采用ELISA2种厂家试剂和CLIA(国产)对HBsAg血清盘进行平行检测,将上述数据汇总整理分析,比较ELISA和CLIA2种检测体系的灵敏度、特异性、阳性预期值、批内与批间精密度以及不同血清型标本和突变株的检出能力等指标。结果 ELISA与CLIA平行检测日常献血者标本(3 031份)复检符合率CLIA(国产)为83.33%、ELISA(进口B试剂)为33.33%、ELISA(国产A试剂)为14.28%,CLIA高于ELISA(2种试剂)且P0.01。ELISA和CLIA平行检测HBsAg血清盘情况:CLIA本中心实验室与其它实验室整体检测的灵敏度、特异性、阳性预期值,P0.05。ELISA(国产A)和CLIA(国产)的灵敏度分别为77.39%和89.17%,P0.05,阳性预期值和特异性,P0.05;ELISA(进口B)和CLIA(国产)的灵敏度、特异性、阳性预期值,P0.05。A盘弱阳性质控批内CV:CLIA(4.869%)A(7.269%)B(8.428%);H盘弱阳性质控批内CV:CLIA(4.949%)B(7.157%)A(13.712%);H盘强阳性质控批内CV:CLIA(4.486%)B(11.543%)A(46.454%)。弱阳性质控批间CV:CLIA(8.108%)B(15.288%)A(33.585%);强阳性质控批间CV:CLIA(6.410%)A(10.285%)B(12.673%)。血清盘HBV 3种血清型ayw1、adw2和adrq+的检出下限分别为:CLIA(国产)0.09 IU/mL、0.05 IU/mL、0.05 IU/mL;ELISA(进口B试剂)均为0.05 IU/mL;ELISA(国产A试剂)为0.18 IU/mL、0.09 IU/mL、0.05 IU/mL。针对HBsAg突变类型的检测能力多家血站整体数据显示,应用进口试剂的ELISA检测系统要优于应用国产试剂的CLIA检测系统。结论对于HBsAg的检测虽然从方法学上化学发光要优于酶联免疫,但是从我们的评估情况看其各项性能指标的检测水平2种检测系统却各有优劣,由此可见我们认为针对HBsAg的检测,各实验室应通过综合分析选择最适合自己的筛查策略。     

9例核酸反应性标本与对应ELISA、CLIA法检测HBV的关联分析

目的为保障临床输血的安全性,比较已知酶联免疫吸附试验(ELISA)、ALT阴性合并核酸检测(NAT)反应性标本与对应化学发光(CLIA)法检测HBV的结果,对三种检测方法进行相关性分析。方法对17508例无偿献血者(排除ELISA法初复检公共阳性、ALT阳性等)进行NAT,并对NAT反应性标本进行CLIA检测。结果经核酸检测出9例HBV DNA反应性标本,未检出HCV RNA和HIV RNA反应性标本,其中1例为ELISA法"阴性高值"标本;对应CLIA法HBV"两对半"检测出现2例HBsAg(-)抗-HBs(-)抗-HBc(+)及5例HBs Ag(-)抗-HBs(+)抗-HBc(+)血清型,可能为OBI,2例均无反应性,可能为窗口期标本。结论无偿献血者的现有血液筛查方法 NAT检测和ELI SA法具有互补性,NAT检测可弥补ELISA法检测的"窗口期"问题;NAT与CLIA法检测结果具有一致性;OBI可能是本地区NAT检测HBV DNA献血者的主要类型;对可能影响血液质量的ELISA法"阴性高值"标本的淘汰,会降低输血感染风险。