HIV-1整合酶酶联免疫吸附试验及其抑制剂的研究

目的　建立一种检测人类免疫缺陷病毒 1型 (HIV - 1 )整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法 ,用于筛选和研究HIV - 1整合酶抑制剂。方法　将质粒F1 85K C2 80SIN1 2 88转化到大肠埃希菌中 ,经IPTG诱导表达 ,柱亲和层析纯化 ,获得HIV 1整合酶融合蛋白。建立酶联免疫吸附试验方法测定其生物学活性 ,与3 2 P同位素标记方法比较 ,并用ELISA方法筛选HIV 1整合酶的抑制剂。结果　SDS PAGE电泳分析显示 ,相对分子质量 30 0 0 0上方有HIV 1整合酶融合蛋白条带出现。ELISA及3 2 P同位素标记法证实 ,此融合蛋白对于特异底物具有 3′切割和链转移活性。ELISA反应的平均P N值为 2 836± 0 1 61 ,批内及批间变异系数 (CV)分别为 4 63 %和 5 89%。检测到中药丹参提取物CEH等有抑制整合酶的活性 ,CEH的大孔树脂洗脱物CEHL活性提高。结论　ELISA法检测HIV 1整合酶活性技术简单 ,快速 ,重复性好 ,无同位素污染 ,可用于HIV 1整合酶为靶点的抑制剂的筛选及抗 HIV药物作用机理的研究。     

用酶联免疫吸附试验诊断脑囊虫病

本文报道用酶联免疫吸附试验(ELISA)和补体结合试验(CF)对比检测患者血清中抗猪囊虫抗体。 一、试验方法 (一)酶联免疫吸附试验:从猪肉螩虫囊幼中取出囊虫液经处理后为抗原,将1:250稀释的抗原,包被聚苯乙烯塑料板,置37℃3小时,继放4℃过夜。洗涤后,加入待检稀释倍数的不同血清,同时作阴性、阳性及空白对照。加辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG结合物,置37℃1小时。洗涤后,加底物溶液(联大茴香胺溶液),置37℃15分钟后,继     

麻疹IgM抗体行定量酶联免疫吸附试验检测应用效果分析

目的探讨对麻疹患者采用定量酶联免疫吸附试验测定IgM抗体的临床价值。方法回顾性分析在我院接种麻疹疫苗的100例儿童的临床资料,分别采用定量酶联免疫吸附试验和中和抗体试验测定血清IgM抗体水平,比较两者的符合率;同时统计ELISA与NT诊断的耗时、费用和阳性率。结果浓度≥200 IU/L样品ELISA检测与NT的符合率明显高于200 IU/L样品,其差异有统计学意义(P0.05)。两种检查手段阳性率无明显差异(P0.05),但ELISA法的耗时和费用明显低于NT法其差异有统计学意义(P0.05)。结论定量酶联免疫吸附试验在检测麻疹Ig M抗体时具有很高的准确性,且耗时和费用均较低,值得临床推广。     

国产K-ELISA酶免疫定量检测仪的研制及应用

K-ELISA酶免疫仪的研制 酶联免疫吸附试验(ELISA)属于免疫酶技术的一种,是一种简易、敏感和特异性强的免疫诊断方法。近年来广泛使用于诊断各种寄生虫病、细菌和病毒性疾病,也应用于激素测定及药物研究。为迅速推广该项技术,我们研究了快速、微量测定酶联免疫吸附试验的仪器——K-ELISA。 一、仪器的组成——包括测试系统和抽液系统(图1a)。 测试系统由光路部分、检测器和电源三部分组成。从光源W发出的光,经聚焦透镜     

酶标记A蛋白酶联免疫吸附试验(PPA-ELISA)检测日本血吸虫及弓形虫抗体

<正> 近年来酶联免疫吸附试验(ELISA)已广泛应用于寄生虫病的诊断。本研究应用过氧化物酶标记金葡菌 A 蛋白(PPA)代替羊抗人或羊抗兔 IgG 作 ELISA 试验检测日本血吸虫及弓形虫 IgG 抗体。     

辣根过氧化物酶直接标记小鼠腹水单克隆抗体

<正> 酶免疫试验灵敏、准确,广泛应用于各种病原及相应抗体的检测。用于酶免疫试验的酶有碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,但在酶联免疫吸附试验(ELISA)及免疫酶组织化学中使用最为广泛的是辣根过氧化物酶(HRP)。HRP与抗体分子或蛋白质抗原交联方法很多。常用的为戊二醛法和过碘酸钠     

HIV-1蛋白酶基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的为了研究HIV-1蛋白酶的生物学活性,制备HIV-1 PR蛋白及其特异性抗体。方法用PCR方法扩增编码PR的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a(+)中,并表达HIV-1 PR蛋白,用His抗体为一抗做Western blot鉴定目的蛋白。以纯化的目的蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体。通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性。结果原核表达载体pET28 a(+)-PR成功构建,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,得到的PR蛋白经SDS-PAGE和Western blot鉴定正确。用纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性。结论得到纯化的HIV-1PR蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白PR,为进一步研究HIV-1奠定了实验基础。     

HIV-1 p15(Gag)基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

目的 为了研究HIV-1 p15(Gag)的生物学活性,制备HIV-1 p15(Gag)蛋白及其特异性抗体.方法 用PCR的方法扩增编码p15(Gag)基因序列,将其克隆到原核表达载体pET28a( )中表达HIV-1 p15蛋白,分别用His抗体和HIV阳性血清做western blot鉴定目的 蛋白.以纯化目的 蛋白为抗原免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附实验(ELISA),免疫细胞化学法检测抗体滴度及其特异性.结果 原核表达载体pET28 a( )-p15(Gag)成功构建,可在大肠杆菌BL21 (DE3)中诱导表达,得到相对分子质量约20000的p15(Gag)蛋白经western blot鉴定正确.纯化蛋白免疫家兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫特异性.结论 得到纯化的HIV-1 p15蛋白,制备的多克隆抗体能够检测自然状态下病毒蛋白p15(Gag),为进一步研究HIV-1奠定了实验基础.     

第二代HIV-1整合酶抑制剂筛选靶点概述

<正>HIV-1整合酶是病毒复制所必需的酶[1]。在临床上,使用HIV-1整合酶(integrase,IN)抑制剂来治疗HIV感染被证明是非常有益的。目前,FDA批准上市的第一个HIV-1整合酶抑制剂raltegravir已作为一线药物用于临床[2-3]。与raltegravir作用机制相同的另外一个药物elvitegravir目前正处于III期临床试验阶段[4]。Raltegravir和elvitegravir作为第一代整合酶抑制剂,其作用机制是抑制HIV-1整合酶链转移反应[5-6],因此,它们被称为链转移反应抑制剂     

2008—2009年北京市男男性行为者HIV-1感染率与新发感染率调查

目的了解北京市男男性行为者（MSM）人群HIV-1感染率与新发感染率情况。方法对北京市2008—2009年三轮MSM人群进行横断面调查,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）与蛋白印迹实验（WB）对监测样本进行初筛与确证实验。再对血清学确认为HIV-1阳性的样本进行BEDHⅢ捕获酶联法（BED方法）检测。结果在1833份监测样本中共筛出96份HIV-1阳性样本,其中进行BED方法检测的样本数为68例,判定为新近感染的样本为36例。三轮MSM人群HIV感染率分别为5．9％、5．0％、4．9％;三轮MSM人群新发感染率分别为4．83％（2．36％～7．54％）、4．83％（2．36％～7．54％）、2．65％（0．82％～4．55％）。结论北京市2008～2009年度MSM人群HIV的感染率与新发感染率均达到较高水平。     

酶联免疫吸附试验检测肉毒中毒实验动物及患者肌红蛋白的研究

酶联免疫吸附试验(ELISA),具有特异、敏感、快速、简便和经济等特点,因而在医学领域内得到了广泛的应用。肉毒中毒是新疆的常见病,肌无力与肌麻痹是其临床特征之一。肉毒毒素对肌肉的作用机制尚未完全明瞭,为此,我们应用酶联免疫吸附试验对内毒中毒家兔实验动物模型及中毒患者血清中肌红蛋白(Myoglobin,Mb)进行了检测,     

鼠单克隆抗HBc检测病人血清抗HBc应用的研究

<正> 我们在建立分泌抗 HBc 杂交瘤细胞株后,将获得的鼠单克隆抗 HBc 进行纯化和辣根过氧化物酶标记作为酶联免疫吸附试验(ELISA)检测病人血清抗 HBc 诊断试剂(下称单克隆抗 HBc 试剂),并与多年来应用HBsAg 携带者血清纯化的抗 HBe IgG 及其酶标记物作为试剂(下称多克隆抗 HBc 试剂)的酶联免疫吸附试验及应用纯化 HBcAg的免疫粘连血凝试验进行了比较。现将结果报告如下。     

用双夹心酶联免疫吸附试验检测胃肠道癌症病人血清中肿瘤相关抗原的研究

用单克隆抗体Hb3作为固相和标记抗体,建立双夹心酶联免疫吸附试验(Sand-wich ELISA),检测胃肠道肿瘤病人血清中相关抗原CA-Hb3。以55u为阴性阈值,结果表明,正常献血员和消化道良性疾病阳性     

用生物素—抗生物素酶联免疫吸附试验作单纯疱疹病毒分型并与限制性核酸内切酶分析和应用单克隆抗体免疫荧光法的比较

应用捕捉法生物素-抗生物素酶联免疫吸附试验(Capture B/SA ELISA)测定单纯疱疹病毒(HSV)的型别是在用单克隆抗体(McAb)分型的基础上发展起来的。兔抗HSV IgG用作捕捉抗体,生物素连接的特异性鼠抗HSV-1单克隆抗体或兔抗HSV-1、HSV-2型特异性多克隆抗体作为     

一种新的、敏感的检测HBsAg方法-嵌合抗体红细胞免疫技术的建立及初步应用（一）

近年来，随着生物检验技术及单克隆抗体的进展，建立了各种检测HBsAg的方法，其中酶联免疫吸附试验(ELISA)的敏感性已接近放射免疫试验(RIA)。但由于酶和底物易受环境因素如温度、条件等影响，ELISA的不稳定性和局限性较大；而且传统的血凝方法和补体方法等敏感性又较低，因此需要建立一种既敏感特异又简便快速的免疫学方法，以弥补其不足。80年代初，Guesdon等用红细胞作为指示物来替代酶和底物，但又基于ELISA技术，建立了嵌合抗体红细胞免疫技术(CEIA)。     

ABC-ELISA法筛选抗-LSP McAb的探讨

<正> 随着B淋巴细胞杂交瘤技术的广泛应用,急需微量、简易、快速、敏感、特异、稳定和适于大规模筛选单克隆抗体的检测技术。目前常用检测肝特异性膜脂蛋白抗体(抗-LSP)的方法有间接血凝法(PHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、放射免疫分析(RIA)等。我们采用亲和素-生物素酶联免疫吸附试验(ABC-ELISA),作为筛选抗     

微粒子酶免疫化学发光法和ELISA定量检测CCP抗体的临床应用评价

目的:应用化学发光法、酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测类风湿性关节炎(RA)患者抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体的含量,探讨CCP抗体在RA早期诊断和治疗中的作用.方法:选取69例RA、30例强直性脊柱炎(AS)、33例干燥综合征(SS)患者、61例健康体检人群,分别用化学发光、ELISA检测其血清CCP抗体的含量....     

一种新的、敏感的检测HBsAg方法-嵌合抗体红细胞免疫技术的建立及初步应用(一)

近年来,随着生物检验技术及单克隆抗体的进展,建立了各种检测HBsAg的方法,其中酶联免疫吸附试验(ELISA)的敏感性已接近放射免疫试验(RIA)。但由于酶和底物易受环境因素如温度、条件等影响,ELlSA的不稳定性和局限性较大。而且传统的血凝方法和补体方法等敏感性又较低,因此需要建立一种既敏感特异又简便快速的免疫学方法,以弥补     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及其初步应用

目的：制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体（mAb），并建立一种可用于检测gp120的ELISA法。方法：采用基因工程抗原HIV-1gp120免疫BALB／c小鼠，通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1gp120的mAb。用ELISA法答定mAb的Ig亚类、效价及特异性。用饱和硫酸铵（SAS）纯化mAb，并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法。结果：筛选出10株稳定分泌抗HIV-1gp120 mAb的杂交瘤细胞株，9株为IgG，其中4株的腹水效价为32X10～256X10所得mAb与HIV-1gp41、HIV-1p24及HIV一2gp36Ag均无交义反应，仅与HIV-1gp120产生特异性反应。用mAb 6H9和9H12，建立了双夹心ELISA法，检测gp120抗原的灵敏度是10μg／L。结论：获得10株特异性强、效价高的机HIV-1gp120的mAb，并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法.     

HIV-1型整合酶蛋白的表达、纯化及复性研究

目的对HIV-1整合酶蛋白进行原核表达、纯化以及复性研究。方法从HIV-1HXB2中PCR扩增出全长的整合酶基因，连入原核表达载体pET-30a中，得到pET-30a整合酶表达质粒。再将质粒转入大肠杆菌BL21中诱导表达，经镍柱纯化后得到整合酶蛋白。纯化后蛋白在FoldIt复性液中进行稀释复性确定最佳复性液，然后蛋白在此条件下复性并用反相柱回收，最后通过对复性蛋白抽干及再溶分析复性蛋白的物理稳定性。结果HIV-1整合酶蛋白主要以包涵体形式表达，表达量占菌体总量的10％。经镍柱纯化后蛋白的总浓度为0．9mg／ml。蛋白的最佳复性液是：Tris—Cl55mrnol／L，NaCl264mmol／L，KCl11mmol／L，Gu—HCl550mmol／L，EDTA1．1mmol／L，以及附加成分中的GSH、GSSG。复性后蛋白抽干后再溶，溶液清亮透明，SDS-PAGE可见有寡聚体状态的蛋白。结论成功构建了pET-30a整合酶表达质粒。纯化后蛋白的浓度较高。确定了最佳的蛋白复性液。并且初步检测了复性蛋白的物理稳定性。这为蛋白体外活性研究和AIDS药物研究打下了基础。