造血干细胞测定在异基因骨髓移植中的应用

本文研究了23例异基因骨髓移植病人,所输入骨髓的造血干细胞(CFU—MIX)及红,粒系祖细胞(BFU一E、CFU—GM)的总量与移植后病人血粒细胞恢复的关系。发现移植后血粒细胞恢复的速度与接受CFU—MIX和CFU一GM的总量密切相关、而与输入的骨髓有核细胞、BFU—E总数无关。提示输入的CFU—MIX和CFU一GM在造血重建中起重要作用,测定其含量可预测移植后造血重建的速度及体外去除与移植无关细胞操作的效应。     

放射及复合烧伤大鼠腹腔灌洗液对骨髓造血祖细胞生长的影响

目的　观察放射损伤、烧伤及放烧复合伤腹腔灌洗液对骨髓体外造血的影响。方法60 Coγ射线全身照射 1 2Gy、5kW溴钨灯致大鼠背部 30 %TBSAⅢ度烧伤。伤后 3 ,1 2 ,2 4 ,48和 72h无菌抽取腹腔灌洗液 ,按 40 μg ml加入到骨髓红系、粒系培养体系中培养。 结果　伤后 3 ,1 2 ,2 4 ,48和72h,烧伤组和复合伤组的CFU E、BFU E和CFU GM培养集落数均显著高于正常对照组 (P <0 0 1 ) ,且以伤后 2 4h最高 ,烧伤组高达 2 1 5 7%、2 0 2 3 %和 2 4 1 2 % ,复合伤组为 1 88 1 %、1 4 7 7%和2 0 4 6 %。但当加入放射损伤大鼠腹腔灌洗液时 ,仅有很少的CFU E、BFU E和CFU GM集落生长。结论　烧伤与放烧复合伤后的腹腔灌洗液对骨髓红系、粒系造血均有明显的促进作用 ,照射组则显示明显的抑制作用     

E803药物对^60Co—γ射线照射小鼠造血系统的防护作用

目的 观察E803对^60Co-γ射线照射小鼠造血系统的辐射防护作用。方法 C57小鼠一次全身照射前灌胃给药E803和523，测定脾指数、CFU—S(7．5Gy)、外周血象(5．5Gy)、造血祖细胞集落形成(3．5Gy)。结果 7．5Gy照后第7d测定各给药组的脾指数、CFU—S明显较照射组增多。5．5Gy照射引起的小鼠的外周血细胞数量的降低以白细胞发生最早，照后24h给药组的WBC数量均比照射对照组有不同程度的升高，以E803各给药组最为明显，药物未能使照射引起的外周血细胞最低值升高，而有降低的趋势。但给药对照射后期外周血象的总体恢复有较好的促进作用。3．5Gy照后第7d观察给药组的造血祖细胞集落的形成能力强于照射对照组，并且E803组明显优于523组。结论 E803对^60Co-γ射线引起的小鼠造血系统损伤有保护作用。     

5Gy60Coγ线照射后小鼠骨髓中红系祖细胞损伤和恢复的动态观察

用体外微量甲基纤维素培养方法观察了LACA小鼠受5Gy⁶⁰Coγ线一次全身照射后0～25灭骨髓中红系祖细胞(CFU—E和BFU—E)损伤和恢复的动态过程。与以往测得的5Gy照射后CFU—E(D), CFU—GM、CFU—S变化的结果进行了比较分析, 结果说明急性照射后CFU.E和CFU—E(D)的变化一致。照后即刻CFU—E明显减少, 照后10天恢复正常。BFU—E变化特点是先下降后上升, 照后20天恢复正常。CFU—E与CFU—GM的变化在时间上一致。CFU—E与CFU—S变化的相关系数为0.8428, BFU—E与CFU—S变化的相关系数为0.9717.     

再生障碍性贫血与急性白血病骨髓纤维母细胞集落生成细胞体外培养的初步观察

目前研究的结果提示骨髓基质细胞对于调节造血干细胞的增殖与分化有重要作用。由骨髓培养生长的纤维母细胞可反映基质细胞的一个结构成分。这种纤维母细胞对造血的调节是复杂的,它不仅可释放一种,可溶性因子,使小鼠造血干细胞(S—CFu)或人类造血祖细胞(GM—CFu)在体外的存活延长,且其形成的集落也刺激粒系祖细     

胚胎期受辐射对子鼠造血基质细胞功能的影响

目的　研究胚胎期 2 0Gy137Csγ射线照射后对子鼠造血基质细胞的远期影响。方法　建立胚胎期受辐射小鼠模型 ;以细胞计数检测股骨骨髓有核细胞 (BMNCs)数 ;用免疫组化ABC法检测基质细胞粒单系集落刺激因子 (GM CSF)和干细胞因子 (SCF)的表达 ;用体外小鼠骨髓细胞培养法以粒单细胞系祖细胞集落形成单位 (CFU GM )为指标观察基质细胞对正常骨髓造血的支持功能。结果　胚胎期受辐射小鼠BMNCs数明显低于正常小鼠 (P <0 0 1) ,其骨髓基质细胞生长因子GM CSF和SCF的表达均高于正常小鼠 (P <0 0 5 ) ,同时 ,胚胎期受辐射小鼠骨髓基质细胞对正常骨髓造血的支持能力也高于正常小鼠 (P <0 0 5 )。结论　 2 0Gy137Csγ射线对发育中的小鼠胚胎的造血基质细胞产生了明显影响。     

胎肌条件培养液的生物效应

众所周知,胎肌条件培养液(FMCM)能在体外刺激粒单系造血祖细胞(CFU—GM)的增殖分化.用体外培养的方法,作者证实FMCM①可在体外对抗化学因素(阿糖胞苷、三尖杉酯碱)和物理因素(γ射线、高温、低温)对CFU—GM的抑制效应.②促进深低温保存后的爆式红系造血祖细胞(BFU—E)、混合式造血祖细胞(CFU—Mix)与CFU—GM恢复其受损的造血活力.证明了FMCM具有抗损伤效应.并初步发现这种效应可能来自一种分子量大于10000的蛋白质.通过对粒细胞功能的检测,发现FMCM对它们具有增强作用.通过对白血病细胞株的实验,证明FMCM不仅对HL—60细胞有一定的抑制效应,还可增强该细胞对阿糖跑苷的敏感性.将FMCM用于接受化疗、放疗的病人可能是合理的.     

rhIL-11对外周血小板数及造血祖细胞增殖的影响

观察rhIL-11在体外对人骨髓造血祖细胞集落形成和对3.0Gy照射猕猴的外周血小板数及骨髓造血祖细胞恢复的影响。结果显示，rhIL-11可明显提高照射猴外周血小板数的最低值，缩短血小板最低值的持续时间，加速血小板数的恢复，但未见到血小板数与rhIL-11剂量间的明显关系。rhIL-11不仅直接刺激CFU－MK增殖和分化，而且还可促进CFU－GM、CFU－e、BFU－e及早期的CFU－Mix的增殖。提示rhIL-11可能是治疗血小板减少和骨髓再生不良的一个有效药物。     

白蛋白融合型G-CSF对3.0 Gy ~（60）Co γ射线照射恒河猴造血损伤的作用

目的：观察重组人血清白蛋白-粒细胞集落刺激因子融合蛋白（HSA-G-GSF）对3.0Gy 60 Coγ射线照射恒河猴造血系统损伤的作用。方法：18只成年恒河猴给予3.0Gy 60 Coγ射线照射,随机分为照射对照,HSA-G-CSF,吉粒芬对照3组。吉粒芬对照组动物照射后0~13d每天1次皮下注射吉粒芬5μg/kg。HSA-G-CSF组动物分别于照射后0和7d皮下注射HSA-G-CSF 150μg/kg。观察各组动物外周血象、造血祖细胞数、造血组织病理学。结果：HSA-G-CSF可显著提高照射后恒河猴外周血中白细胞、中性粒细胞、网织红细胞和造血祖细胞的数量,可促进骨髓造血功能恢复,有效保护脾脏和淋巴结组织结构和细胞完整。结论：HSA-G-CSF融合蛋白可明显促进急性辐射损伤猴造血功能恢复,与吉粒芬相比,对3.0Gy 60 Coγ射线照射恒河猴造血损伤有更显著的治疗作用。     

高原缺氧大鼠急性放射损伤血清造血活性的改变

目的：探讨高原缺氧条件下,急性放射损伤大鼠血清造血活性的变化特点;方法;大鼠在模拟5000m高原缺氧条件下喂饲3天后,接受6Gy一次性γ射线全身照射,照后继续在缺氧条件下饲养,3天后处死动物收获血清,ELISA法测定TGF-β1和EPO的含量;造血集落法检测血清对CFU-GM和CFU-E集落形成的影响;结果与结论;发现模拟高原5000m缺氧条件下,骨髓红系和粒系造血均受抑制,但骨髓粒系造血损伤为主。     

Protective effect of an extract from Periplaneta americana on hematopoiesis in irradiated rats

Purpose: To investigate the protective effect of W₁₁-a₁₂, an extract from Periplaneta americana, on hematopoiesis in irradiated rats.

Materials and methods: Wistar rats receiving total body irradiation of ⁶⁰Co γ-rays alone or with combined radiation and skin wound injury were used in this study. W₁₁-a₁₂ was applied either topically into the skin wounds or systemically by intraperitoneal injection. The numbers of white blood cells in peripheral blood, the nucleated cells and the colony-forming unit of granulocyte/macrophage progenitors (CFU-GM) in bone marrow were measured, respectively.

Results: Topical application of W₁₁-a₁₂ into skin wounds in rats with combined 6 Gy total body irradiation and skin wound injury could increase the neutrophils and macrophages in the wounded area and the nucleated cells in bone marrow at 24 h and 48 h, while the peripheral white blood cells did not show significant change. However, in rats with 4 Gy total body irradiation alone, the peripheral white blood cells, bone marrow nucleated cells and the number of colony-forming unit of granulocyte-macrophage progenitors were all significantly higher in the treatment groups by intraperitoneal injection of W₁₁-a₁₂ than those in the control groups by injection of normal saline at days 3 and days 5 after radiation.

Conclusions: W₁₁-a₁₂ showed a protective effect on hematopoiesis after total body irradiation and could increase the inflammatory cells in wounded tissues at the initiation stage after irradiation, which will benefit the management of combined radiation and skin wound injury.     

G-CSF和IL-6联合应用协同促进受照小鼠造血功能恢复的实验研究

目的 探讨G-CSF和IL-6联合应用协同促进受辐射小鼠造血功能恢复的作用及机理。方法 采用F800血细胞自动计数仪计数红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白等指标。常规法进行骨髓集落培养、内源性脾结节计数。琼脂糖电泳方法检测骨髓细胞程序性死亡。结果 G-CSF和IL-6联合应用促进受辐射小鼠外周血细胞的恢复, 促进脾脏内源性脾结节的形成, 增加骨髓细胞含量和促进骨髓细胞GM-CFU的形成, 提高受辐射小鼠的生存率。结论 G-CSF和IL-6联合应用的效果优于单用的效果, 其促进辐射后机体造血功能恢复的机理是通过刺激骨髓残余造血干细胞的恢复, 该过程需要一段较长的时间, 而不是通过抑制照后即刻骨髓细胞的程序性死亡。     

抗CD49d McAb联合rhG-CSF动员的PBSC救治放射损伤小鼠

目的观察抗CD49d单克隆抗体(McAb)联用重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的外周血干细胞(PBSC)救治放射损伤小鼠的效果.方法8.5 Gy60Co γ射线照射的BALB/c小鼠,分别接受经rhG-CSF(1组)、抗CD49d McAb(2组)、rhG-CSF联合抗CD49d McAb(3组)动员的PBSC移植.并以生理盐水组为对照,观察受体小鼠的4周存活率、外周血白细胞(WBC)、骨髓有核细胞(BMNC),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标.结果实验3组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于对照组、1组和2组,差异具有显著性或非常显著性(P＜0.05或P＜0.01).结论抗CD49d McAb联合rhG-CSF使用能协同动员小鼠PBSC,并能成功救治放射损伤小鼠.     

rhIL-11联合rhG-CSF和CTX动员小鼠外周造血干/祖细胞的实验研究

为研究rhIL 11联合rhG CSF和CTX对C5 7BL/ 6小鼠外周造血干细胞的动员作用 ,将 48只C5 7BL/ 6小鼠随机分为 4组 ,3组d0给予一次腹腔注射 2 0 0mg/kg的CTX ,其中 2组d1d15分别皮下注射rhIL 11、rhIL 11加rhG CSF ,观察不同时间外周血白细胞、血小板计数、CD34 细胞比例、CFU GM、CFU MK及CFU E的数量变化。结果发现 ,rhIL 11或联合rhG CSF可明显促进CTX骨髓抑制小鼠外周血血小板和白细胞的恢复、提高外周血CD34 细胞比例及三系造血细胞集落数量。证明rhIL 11具有外周血造血干细胞动员作用 ,而与rhG CSF和CTX联合动员效果更佳。     

G—CSF和IL—6联合应用协同促进受照小鼠造血功能恢？…

目的 探讨Ｇ－ＣＳＦ和ＩＬ－６联合应用协同促进受辐射小鼠血血功能恢复的作用及机理。方法 采用Ｆ８００血细胞自动计数仪计数红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白等指标。常规法进行骨髓集落培养,内生脾结节计数,琼脂糖电泳方法检测骨髓细胞程序性死亡。结果 Ｇ－ＣＳＦ和ＩＬ－６联合应用促进受辐射小鼠外周血细胞的恢复,促进脾脏内源性脾结节的形成,增加骨髓细胞含量和促进骨细胞ＧＭ－ＣＳＦ的形成,提高受辐射小鼠的生存     

骨髓基质细胞输注对外周血干细胞移植造血恢复的影响

为观察骨髓基质细胞输注对外周血干细胞移植（PBSCT）后造血恢复的影响，经放、化疗预处理的BALB／c小鼠，分别输入动员的外周血干细胞（PBSCT组）、外周血干细胞联合扩增的骨髓基质细胞（实验组），观察受体鼠4周的生存率、骨髓有核细胞（BMNC），粒细胞巨噬细胞集落形成单位（CFU－GM）、成纤维细胞集落形成单位（CFU－F）、外周血白细胞计数等指标。结果显示，实验组的生态率，BMNC、CFU－GM、CFU－F较PBSCT组显著升高（P＜0．005）；白细胞的最低值较PBSCT组高（P＜0．01），白细胞恢复较PBSCT组块（P＜0．01）。提示骨髓基质细胞输注有促进外周血干细胞移植造血恢复的作用。     

Evaluation of cryopreserved murine and human hematopoietic stem and progenitor cells designated for transplantation

The influence of five different cryopreservation protocols on the quality and/or quantity of frozen cells was investigated on mouse bone marrow cells and human peripheral blood mononuclear cells (MNC). The efficiency of the protocols was evaluated on the basis of the recovery of very primitive pluripotent hematopoietic stem cells (MRA), pluripotent progenitors (CFU-Sd12), committed granulocyte-monocyte progenitors (CFU-GM) of mouse cells after thawing. The recovery of MRA, CFU-Sd12 and CFU-GM varied depending on the type of freezing procedure and cryoprotector (DMSO) concentrations used. It was shown that the controlled-rate protocol was more efficient, enabling better recovery of all categories of progenitor cells in frozen samples. The most efficient was the controlled-rate protocol of the cryopreservation designed to compensate for the release of fusion heat, which enabled the best recovery of CFU-GM (73.0 +/- 8.8%) and CFU-Sd12 (90.0 +/- 15.9%) when combined with 5% DMSO concentration (protocol 4). On the contrary, a better recovery (79.8 +/- 13.5%) of very primitive stem cells (MRA) was achieved only when the higher concentration (10%) DMSO was used in combination with a five-step protocol of cryopreservation (protocol 1). These results pointed out the adequately used controlled-rate freezing to be essential for a highly efficient cryopreservation of some of the categories of hematopoietic stem and progenitor cells. At the same time, it was obvious that a higher DMSO concentration was necessary for the cryopreservation of MRA, but not for more mature progenitor cells (CFU-S, CFU-GM). These results imply the existence of a mechanism that decreases the intracellular concentration of DMSO in MRA cells, which is not the case in less primitive progenitors. For human MNC, the recovery and viability of the cells, as well as the engraftment potential of cryopreserved cells after thawing were investigated. Cryopreservation protocol 1 resulted in better MNC recovery (82.7 +/- 10.4%) than protocol 3 (49.9 +/- 15.1%). The mean recovery of MNCs (collected from patients for autologous transplantation) was 78.5 +/- 7.3% (protocol 1) and 53.1 +/- 26.2% (protocol 3). The obtained favorable recovery of thawed cells and rapid reconstitution of hematopoiesis (on the day 11th following the transplantation) in patients confirmed that the controlled-rate freezing in combination with optimal DMSO concentration was able to obtain sufficient progenitor cryoprotection.     

小鼠15%Ⅲ度烧伤时骨髓基质细胞对粒单系祖细胞生长的影响

目的 研究烧伤情况下骨髓造血基质细胞支持粒单系造血的功能变化。方法 采用体外小鼠骨髓基质细胞融合培养和粒单系祖细胞集落（ＣＦＵ－ＧＭ）培养的方法,动态观察１５％Ⅲ度烧伤时骨髓基质细胞对粒单系祖细胞生长的影响。结果 当在烧伤组基质细胞层上培养正常骨髓细胞的ＣＦＵ－ＧＭ时,其集落生成能力在伤后１,３,５,７,１０天均明显低于正常对照组,而同时培养的烧伤小鼠骨髓细胞ＣＦＵ－ＧＭ时,其集落生成能力在伤后１     

西格列汀对小鼠造血系统辐射损伤的治疗作用

目的 探讨西格列汀对7 Gy γ射线照射后小鼠造血系统损伤的治疗作用。 方法 将15只C57BL/6小鼠按照区组随机法分为对照组、照射组、西格列汀+照射组,每组5只。照射组和西格列汀+照射组小鼠接受7 Gy 137Cs γ射线一次性全身照射,后者于照射后2 h开始灌胃西格列汀,给药剂量为10 mg/kg,连续给药7 d;对照组和照射组给予等量生理盐水。照射后第30天取外周血进行血象测定,颈椎脱位处死小鼠后取骨髓细胞测定有核细胞数、造血干细胞（HSC）和造血祖细胞（HPC）数量及其活性氧水平、粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU-GM）。2组间的比较采用独立样本t检验。 结果 与对照组比较,照射组小鼠的骨髓有核细胞、白细胞、红细胞、血小板计数和血红蛋白、红细胞比容水平均明显减少、下降（t=3.476~12.200,均P<0.05）;HSC和HPC的数量及百分比均明显减少、降低（t=3.174~5.287,均P<0.05）;HSC中活性氧水平明显升高（1980.6±309.3对3994.5±1119.0,t=3.904,P<0.05）,骨髓细胞CFU-GM显著减少（66.2±5.3对30.8±3.9,t=13.240,P<0.05）。与照射组相比,西格列汀+照射组小鼠骨髓有核细胞[（8.0±1.0）×106个对（11.0±0.4）×106个,t=4.593,P<0.05]、白细胞数量[（3.0±0.2）×109个/L对（3.9±0.3）×109个/L,t=7.020,P<0.05]均增多;HPC数量[（33 724.4±10 594.9）个对（101 637.6±17 240.5）个,t=5.951,P<0.05]及百分比[（5.6±1.0）%对（11.5±3.0）%,t=4.163,P<0.05]均上升,HSC中活性氧水平降低（3994.5±1119.0对2415.7±122.9,t=2.375,P<0.05）,骨髓细胞CFU-GM增加（30.8±3.9对38.2±4.4,t=2.964,P<0.05）。 结论 西格列汀对7 Gy γ射线照射后小鼠造血系统损伤有一定的治疗作用。     

白细胞介素－11基因治疗促进放射损伤小鼠造血恢复的实验研究

白细胞介素－１１（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１１，ＩＬ－１１）是一种新的造血生长因子，体内、外实验结果显示ＩＬ－１１具有显著的造血促进作用，它能作用于早期的造血干细胞及祖细胞，促进其增殖和分化。为了探讨ＩＬ－１１基因治疗放射损伤后造血恢复的促进作用，我们构建了含人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体，并转染小鼠成纤维细胞系ＮＩＨ－３Ｔ３，经筛选获得３株高表达ＩＬ－１１的转染细胞亚克隆，用高表达ＩＬ－１１的转染细胞作为载体细胞，进行了ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤小鼠造血系统影响的实验研究。结果表明ＩＬ－１１基因治疗能明显缩短亚致死量放射损伤小鼠白细胞降低的时间，促进外周血白细胞、血小板和红细胞压积的恢复。提示ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤造成的造血功能低下具有潜在的应用价值。