中药露蜂房蛋白对人红白血病K562细胞影响的实验研究

研究中药露蜂房蛋白(NVP)抗白血病作用的机制,为治疗白血病的临床应用提供实验和理论依据. 1 材料与方法 应用层析、透析等技术常规制备NVP溶液.按临床用药的最大血药浓度配制实验用药.露蜂房口服常用量为12g,按下式计算其临床最大血药浓度为2.50 g*L-1.算出所提取的NVP总量为8.756 mg,然后换算出每克NVP的含量,得出NVP的最大血药浓度0.08756 mg*L-1.     

髓系白血病患者骨髓单个核细胞β-连环蛋白mRNA的表达

目的观察急慢性髓系白血病患者骨髓单个核细胞β-连环蛋白的表达及其意义。方法 41例髓系白血病患者,其中25例急性髓系白血病（AML）,16例慢性髓系白血病（CML）。同时选择18例非恶性血液病患者作为对照。肝素抗凝骨髓2 ml,Ficoll液分离骨髓单个核细胞,荧光定量逆转录聚合酶链反应法检测β-连环蛋白的表达。结果β-连环蛋白在AML组表达量明显高于CML组及对照组（P〈0.01）;CML组表达量高于对照组表达量,差异有统计学意义（P〈0.05）;CML组4例急变患者的β-连环蛋白表达量也较高。β-连环蛋白表达量与患者年龄、性别无关;与骨髓原始细胞含量有关,含量≥30%的患者β-连环蛋白表达量较高。结论β-连环蛋白在AML和CML急变的患者骨髓单个核细胞中异常高表达,Wnt/β-连环蛋白通路在AML和CML急变病例中异常激活可能与白血病细胞的异常增殖有关。     

MTT比色法检测露蜂房蛋白对白血病细胞增殖的影响

目的:研究露蜂房蛋白对白血病细胞增殖的影响,为白血病的治疗提供新的药物。方法:制备红白血病小鼠模型,采用MTT法检测露蜂房蛋白对白血病细胞增殖的作用。结果:露蜂房蛋白低浓度处理组与生理盐水组相比无明显差别,中浓度处理组与生理盐水组比较对白血病细胞有抑制作用,两组间具有统计学意义,与化疗药物(柔红霉素)相比还有差距。结论:露蜂房蛋白对白血病细胞具有抑制增殖的功效。     

白血病及骨髓增生异常综合征患者骨髓细胞凋亡的研究

目的研究白血病及骨髓增生异常综合征(MDS)患者骨髓细胞的凋亡状态。方法采用流式细胞术DNA含量和(或)膜联蛋白(AnnexinV)法检测了48例急性白血病(AL)、14例MDS及16例非白血病、非MDS贫血患者骨髓细胞的凋亡,并对上述两种凋亡的检测方法进行相关性比较。结果(1)白血病骨髓细胞自发凋亡率为(4.04±2.25)％低于MDS(7.42±6.39)％及贫血组(7.58±5.86)％(P＜0.05)。在AL中,急性早幼粒细胞白血病(AML-M3)患者凋亡呈一致性低水平(2.92±1.17)％,低于急性髓性白血病(AML)中的其他亚型(P＜0.05)。影响预后的因素及预后本身与自发性凋亡水平无相关性(P＞0.05)。全反式维甲酸(ATRA)治疗有效的AML-M3在用药期间以及AL完全缓解(CR)后,凋亡水平明显上升。(2)用流式细胞术DNA含量法及AnnexinV法检测凋亡有较好的相关性。结论细胞凋亡在白血病中减低而在MDS中相对增高;AL中骨髓细胞自发性凋亡水平的高低与预后无直接关联;治疗因素可以影响凋亡。     

急性髓系白血病的药物治疗

急性白血病(AL)按细胞形态学、细胞化学染色可分为急性淋巴系白血病(ALL)和急性髓系或非淋巴系白血病(AML、ANLL)两大类;按病因可分原发性和继发性,前者病因不明,后者继发于慢性白血病急变、骨髓增殖异常综合征(MDS)转化、慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)转化和治疗相关性(放疗、药物)所致,均为造血干细胞克隆性疾病.     

XPO1抑制剂塞利尼索治疗急性髓系白血病的研究进展

急性髓系白血病(AML)是以骨髓和血液中的骨髓原始细胞克隆性增殖为特征的血液系统恶性肿瘤。尽管研究者们不断提出新的治疗方案,但患者的总体预后并没有产生显著改善。核输出蛋白1(nuclear export protein 1,XPO1)抑制剂通过抑制导致肿瘤发生的关键物质穿过癌细胞核膜而在癌症中发挥重要作用,其能促进AML细胞的细胞周期停滞和凋亡,与其他靶向药物或化疗方案组合能发挥广泛的抗癌作用并有较好的安全性。该文主要对XPO1抑制剂塞利尼索治疗AML的研究进展进行综述。     

蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂MG132对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞增殖与凋亡的影响。方法 qRT-PCR检测9株血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达。利用shRNA干扰HL60细胞内ADRM1表达,将不同浓度的MG132作用于ADRM1干扰前后的HL60细胞24 h,CCK-8法检测各组细胞增殖与活力;Western blot检测各组细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达;流式细胞仪分析不同浓度MG132作用下,HL60、NB4细胞凋亡情况。结果血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA表达上调。成功构建ADRM1 shRNA与scrambled shRNA HL60细胞株。ADRM1基因干扰及给予MG132后,各实验组细胞增殖抑制,活力下降,此时细胞内ADRM1、UCH37蛋白表达下调。随着MG132浓度提高,HL60、NB4细胞凋亡增加;MG132对HL60细胞的促凋亡作用强于NB4细胞。结论血液肿瘤细胞株内ADRM1 mRNA过表达;ADRM1蛋白下调后,UCH37蛋白亦下调,细胞增殖抑制;MG132通过下调ADRM1、UCH37蛋白表达,诱导AML细胞凋亡,抑制细胞增殖与活力;MG132对不同分型AML细胞的促凋亡作用存在个体差异。     

黄芪对老年急性髓系白血病患者BCL-2家族凋亡因子的相关影响

目的：本研究探讨黄芪（astragalus）对老年急性髓系白血病患者疗效评估,并检测其对患者Bcl-2家族凋亡相关因子的影响,从而探讨黄芪对老年急性髓系白血病患者治疗的作用机制。方法随机分配42例老年急性髓系白血病患者,分为对照组和治疗组,两组均予以化疗,治疗组在此基础上给予黄芪,统计两组病患治疗后完全缓解率,患者治疗后白血病细胞凋亡情况运用流式细胞仪检验,患者治疗前后Bcl-2,Bax、Bak、BCL-xl的mRNA表达状况运用RT-PCR方法进行检测,统计两组患者治疗后疗效情况。结果治疗组患者明显优于对照组,治疗组患者完全缓解率高于对照组（P<0.05）。治疗组患者给予黄芪后,白血病细胞凋亡较对照组明显增高,治疗组治疗后Bcl-2、Bcl-xl、Bax、Bak的表达较治疗前差异有统计学意义（P<0.05）,其中Bcl-2、Bcl-xl较治疗前明显下降,Bax、Bak较治疗前明显升高;对照组治疗后Bcl-2、Bax、Bak、BCL-xl表达水平较对治疗前差异无明显统计学意义（P>0.05）。结论黄芪能促进白血病细胞的凋亡,提高患者疗效,其机制可能是通过减低Bcl-2、BCL-xl的表达,增加Bax、Bak的表达来完成。     

骨髓单个核细胞移植对大鼠脊髓全横断损伤后髓鞘碱性蛋白表达影响

目的:探讨同种异体骨髓单个核细胞(BMMNCs)移植对脊髓全横断损伤区局部微环境中髓鞘碱性蛋白表达的影响。方法:取8周龄Wistar大鼠45只,雌雄不限、每只体重200~220g,随机分为3组:实验组(n=15)、对照组(n=15)、假手术组(n=15)。对实验组和对照组大鼠建立脊髓全横断损伤动物模型。实验组造模后对脊髓横断处上下两端立即注入骨髓单个核细胞;对照组对脊髓横断处上下两端注入磷酸盐缓冲液(PBS);假手术组不损伤脊髓,仅剪除T8~10棘突和椎板后逐层缝合。于细胞移植后的1d,5d,1w,2w,4w和6w分别行BBB大鼠后肢功能评估来判断脊髓神经功能恢复情况,并采用免疫组织化学检测观察大鼠脊髓髓鞘碱性蛋白的表达。结果:(1)BBB评分结果显示各时间点假手术组均为正常范围,实验组和对照组分值随时间均逐渐增加,且实验组较对照组高(P<0.05),但均未达到正常组水平,术后4周实验组BBB评分较对照组增加显著,差异有统计学意义(P<0.05);(2)免疫组织染色结果显示各时间点实验组和对照组大鼠脊髓中髓鞘碱性蛋白的表达量高于假手术组,且实验组高于对照组(P<0.05)。结论:同种异体的骨髓单个核细胞移植可能改变了局部的微环境并上调了脊髓内髓鞘碱性蛋白的表达。     

双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植对中国小型猪心肌梗死的影响

目的：研究中药双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植对中国小型猪心肌梗死的影响。方法：利用心导管技术建立中国小型猪冠状动脉栓塞心肌梗死模型，建立经心导管冠状动脉内骨髓单个核细胞移植的新方法，通过心电图、定量组织学、超声心动图、心肌酶及生化检查、心肌小血管密度、梗死区内骨髓单个核细胞观察等综合评价双龙方、自体骨髓单个核细胞经心导管移植及两者合用的疗效。结果：双龙方与自体骨髓单个核细胞经心导管移植可减小心肌梗死范围，超声心动图检查显示心功能明显改善，并可增加心肌梗死区小血管密度，对心肌酶及生化指标亦有不同程度改善作用。自体骨髓单个核细胞移植及合用双龙方后均有助于心肌侧枝循环的建立，心肌供血明显改善。自体骨髓单个核细胞可在移植区内存活，并部分分化为心肌细胞及心肌小血管，补充了心肌细胞的数量。结论：双龙方与自体骨髓单个核细胞移植对中国小型猪心肌梗死有明确的治疗作用。     

重组人红细胞生成素对骨髓间充质干细胞红细胞生成素受体的上调作用

目的研究重组人红细胞生成素(rhEpo)处理骨髓间充质干细胞(MSCs)后对Epo受体(EpoR)的影响。方法含rhEpo0,5及10kU.L-1的培养基培养MSCs24,48及72h后,MTT法检测细胞增殖;6d后,免疫荧光染色检测EpoR阳性的细胞百分率。rhEpo预处理24h,再缺氧处理48h,Hoechst染色,通过形态变化检测细胞凋亡率;rhEpo预处理6d,再缺氧处理48h,Western蛋白印迹法检测EpoR,磷酸化Janus激酶2(p-Jak2),磷酸化转导及转录活化蛋白(p-Stat5)及缺氧诱导因子-1a(Hif-1a)蛋白表达。结果MTT结果显示,rhEpo处理的MSCs增殖能力增强;免疫荧光结果显示,随rhEpo浓度的增加,EpoR阳性细胞数增加;对照组,rhEpo5及10kU.L-1组EpoR阳性细胞百分率分别为(8.3±4.2)%,(24.7±8.1)%和(30.8±10.5)%。rhEpo预处理能增强MSCs抗缺氧凋亡的能力,缺氧处理后,对照组、rhEpo5及10kU.L-1组细胞核固缩率分别为(42.2±8.7)%,(21.9±8.0)%和(20.1±7.9)%。Western蛋白印迹结果显示,rhEpo预处理及预处理后行低氧培养的MSCs,随rhEpo浓度的增加,EpoR及下游抗细胞凋亡蛋白p-Jak2,p-Stat5和Hif-1a蛋白表达增加。结论rhEpo可以促进MSCEpoR的表达,并增加EpoR下游抗细胞凋亡蛋白的表达。     

大蒜素抗白血病作用的研究

目的研究大蒜素(allicin)对急性髓系白血病(AML)患者骨髓单个核细胞(BMMNC)的作用并探讨其机制。方法采用大蒜素在体外作用于AML患者BMMNC,经MTT法、TdT缺口末端标记(TUNEL)技术、RT-PCR等方法检测大蒜素对AML患者BMMNC的影响。结果不同浓度大蒜素对AML患者BMMNC有不同程度的生长抑制、诱导凋亡和抑制iNOSmRNA表达的作用。①MTT法检测大蒜素对细胞的增殖抑制作用,发现大蒜素在3个浓度范围内对细胞均有增殖抑制作用,并呈量效关系。②TUNEL检测见阳性细胞核深染,大蒜素处理组与对照组比较,凋亡细胞明显增多。③RT-PCR检测发现大蒜素能显著抑制iNOSmRNA表达。结论大蒜素可抑制AML患者BMMNC生长、诱导期凋亡及抑制iNOSmRNA表达。     

五羟色胺对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的探讨五羟色胺（serotonin,5-HT）对人骨髓间充质干细胞（human bone marrow mesenchymal stem cells,hBM-MSCs）体外增殖的影响。方法从捐赠者髂骨穿刺抽取骨髓细胞,采用密度梯度离心和贴壁培养法进行培养和纯化hBM-MSCs,取生长良好的P3或P4代hBM-MSCs,通过用含不同浓度5-HT的条件培养基分组对hBM-MSCs进行干预,观察24、48及72h,MTS检测评估细胞增殖情况,流式细胞仪检测hBM-MSCs凋亡率。结果 （1）MTS检测结果显示随着观察时间延长,5-HT浓度增加,细胞存活率逐渐降低。在无血清情况下,存活率最低可达59.5%（P〈0.05）。（2）流式细胞仪检测结果显示5-HT作用hBM-MSCs 48h后,随着浓度增加,细胞凋亡率升高。在5-HT为1000μM时,凋亡率为21.42%。结论 5-HT对体外培养的hBM-MSCs具有凋亡作用,在无血清情况下,凋亡作用愈明显。     

三氧化二砷治疗急性早幼粒性白血病患者骨髓和血液中砷分布的临床检测

目的检测使用三氧化二砷(As2O3)治疗急性早幼粒细胞性白血病(APL)后患者骨髓和血液中砷的浓度,分析砷暴露及暴露时间对机体的影响。方法对30名砷暴露患者及28名非砷暴露患者进行调查,对30名暴露者,其中包括砷暴露1年半以上(13人)、一年半以内(17人)以及未暴露组进行调查研究;同时随机抽取7名暴露者,采用氢化物发生原子吸收分光光度法检测骨髓和血液中砷代谢产物,对其骨髓和血液中砷浓度进行对比。结果 7例暴露组患者的骨髓与血液中砷浓度对比,骨髓砷浓度(7.99±0.15)μg/L;血液中的砷浓度(7.98±0.15)μg/L,差异无统计学意义(P>0.05);同时对暴露一年半以上,暴露一年半以内及对照组进行单因素分析t检验的方法,其两两之间进行比较发现暴露一年半以上组与暴露一年半以内组差异有统计学意义(P<0.05),两个暴露组与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 As2O3治疗ALP,砷可以到达骨髓并进行缓慢代谢,且在骨髓中的代谢与在血液中基本相同,随着暴露时间间隔的延长砷浓度有下降趋势。     

人参皂苷Rg1对培养大鼠骨髓间充质干细胞增殖影响的机制研究

目的研究人参皂苷Rg1对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖影响的可能机制。方法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为药物干预组、对照组,药物干预组以1×10-6mol.L-1人参皂苷Rg1孵育48h,对照组未加药物常规培养;分别用骨髓CFU-F体外培养法、胸腺嘧啶核苷参入法及MTT法测定大鼠BMSC的增殖情况,同时测定BMSC的GATA转录因子1～3的表达及其与DNA结合活性。结果人参皂苷Rg1刺激后BMSC的GATA1和GATA2 mRNA表达与对照组相比分别上调1.42±0.31(P<0.01)和2.70±0.73(P<0.01)倍,并且人参皂苷Rg1刺激后BMSC的GATA与DNA结合活性明显增高。结论人参皂苷Rg1可促进大鼠BMSC增殖,其机制可能是通过上调GATA1和GATA2的表达以及其与DNA的结合活性来实现。     

超声联合微泡促进骨髓间充质干细胞迁移的实验研究简

目的 探讨体外超声联合微泡对骨髓间充质干细胞迁移的影响,为超声微泡促进干细胞迁移的体内研究提供依据.方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,分为超声联合微泡组、单纯超声组、单纯微泡组及空白对照组.超声探头频率1 MHz,强度1 W/cm2,进行脉冲超声辐射,采用transwell小室培养法,观察超声联合微泡对骨髓间充质干细胞运动的影响.结果 空白对照组、单纯微泡组骨髓间充质干细胞的迁移能力较低,超声联合微泡组与单纯超声组细胞的迁移能力无显著差异（P〉0.05）,但两者比空白对照组、单纯微泡组迁移能力有显著差异（P〈0.01）.结论 超声及超声联合微泡作用能明显增强间充质干细胞的迁移能力.     

骨髓间充质干细胞和骨髓单个核干细胞移植治疗大鼠心肌梗死的对比研究

目的观察髓间充质干细胞（MSCs）和骨髓单个核干细胞（BMMNCs）移植对急性心肌梗死后大鼠左心功能的影响及存活情况,比较两种干细胞移植的优劣性。方法雌性Lewis大鼠45只按随机抽签法分3组：对照组、MSCs组、BMMNCs组。结扎前降支制备心肌梗死模型,MSCs组和BMMNCs组均注射等数量（2×10^6）雄性MSCs和BMMNCs,对照组注射等体积的培养基。4周后超声检测左心功能、左心室前壁厚度,免疫原位杂交检测雄性鉴别基因sry片段的表达。结果MSCs组和BMMNCs组与对照组相比：左心室射血分数分别增加22．57％、24．09％（P=0．000）,MSCs组和BMMNCs组之间比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;左心室前壁厚度增加（2．6±0．5）mm和（2．5±0．3）mm对（1．8±0．4）mm（P=0．000）;免疫原位杂交显示MSCs组与BMMNCs组sry表达阳性,对照组阴性。阳性细胞的数量相比较,BMMNCs组高于MSCs组（66．50±6．59比46．67±4．64,P=0．000）。结论MSCs和BMMNCs移植均能改善大鼠急性心肌梗死后左心功能,减轻左心室重构;移植4周后在受体心肌内存活干细胞数量BMMNCs优于MSCs。     

Autologous bone marrow transplantation for acute leukemia using transplant chemopurified with metabolite of oxazaphosphorines (ASTA Z 7557, INN mafosfamide)

Summary The contamination of autologous marrow with clonogenic tumor cells has been the main argument against ABMT in acute leukemia.In a preclinical study we evaluated an active cyclophosphamide derivative named ASTA Z 7557. We observed that the toxic effect of this drug on CFU-GM growth was dependent on nucleated cell concentration as well as on red blood cell contamination. The potency of the drug was in close relationship with the incubation temperature.The growth of leukemic CFU was inhibited with an ASTA Z dose higher than 30 g/ml. In our system, beyond 40 g/ml more than 95% of committed stem cells are destroyed.Fifteen patients had autotransplant because of AML for 10 patients and because of ALL for 5 patients (4 patients were grafted in relapse and 11 patients in remission).We demonstrated that the marrow take was possible although the inoculum is CFU-GM depleted.Five of the 10 AML patients are alive and remain disease-free at 45 +, 65 +, 190 +, 345+ and 570 + days from ABMT without any maintenance treatment. Four of the 5 ALL patients are alive, three of them in complete remission (404+, 110+, 250+ days).The number of patients reported in this clinical study was relatively small and more cases should be evaluated to be conclusive. Nevertheless the feasibility of chemopurified ABMT was demonstrated.