二巯基丙磺酸钠对食管癌EC109细胞系和小鼠艾氏腹水癌的作用研究

目的观察二巯基丙磺酸钠(DMPS)对食管癌EC-109细胞和小鼠艾氏腹水癌的作用。方法在体外培养的食管癌EC-109细胞株中,通过MTT实验,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞生长增殖的抑制作用;通过荧光显微镜和细胞凋亡-Hoechst33258染色试剂盒,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。在小鼠艾氏腹水癌中,观察不同浓度的DMPS对小鼠生存期的影响。结果体外实验中,终浓度为8、4、21、mmol/L的DMPS应用24 h和48 h后,对肿瘤细胞的生长增殖有显著地促进作用(P<0.01);应用72 h后,则显著地抑制肿瘤细胞的生长增殖(P<0.01)。终浓度为8、4、2、1 mmol/L的DMPS应用24 h和48 h后,肿瘤细胞凋亡数量无显著改变(P>0.05),但应用72 h后,各浓度组可显著增加肿瘤细胞凋亡数量(P<0.01)。体内实验中,751、50 mg/kg的DMPS腹腔注射,每天1次,连续10 d,可显著地延长小鼠生存时间(P<0.01)。结论DMPS应用72 h后,可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡而显著地抑制体外食管癌EC109细胞系的生长增殖;腹腔注射751、50 mg/kg连续10 d,可延长艾氏腹水癌小鼠的生存时间。     

蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞体外生长的影响

目的:研究抗疟疾药物蒿甲醚(Artemether)对人肺腺癌A549细胞株体外生长的影响,为蒿甲醚治疗肺癌提供实验依据。方法:采用单四唑(MTT)比色法检测蒿甲醚对体外培养的人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用;用细胞计数法绘制细胞生长曲线,计算对数生长期群体倍增时间;用流式细胞术研究蒿甲醚对细胞周期的影响;采用苏木精-伊红(H-E)染色在光镜下观察凋亡细胞的形态学特征。结果:蒿甲醚对A549细胞株的半数抑制浓度(IC50)为1.34 mg/L。A549肺腺癌细胞对数生长期群体倍增时间在蒿甲醚作用后(20.7±0.5)h,对照组为(32.2±0.3)h,两组比较有显著性差异(P<0.01)。A549细胞经蒿甲醚作用后G1期细胞百分比增加(P<0.01),G2或S期细胞减少(P<0.01),凋亡率明显增加(P<0.01)。结论:蒿甲醚对人肺腺癌A549细胞株生长具有显著抑制作用;蒿甲醚的细胞毒作用与其诱导肿瘤细胞凋亡有关。     

丁酸钠对胃癌细胞系生长的抑制作用及其机制

目的:观察丁酸钠(NaB)对体外培养的胃癌细胞系BGC823的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率。结果:不同浓度NaB处理胃癌细胞BGC82324~96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度(P<0.01)及时间(P<0.05)依赖性;1.0,3.0,5.0mmol/L NaB处理72h后,BGC823细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:NaB对胃癌细胞系BGC823具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

CBIQ对肺泡上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究CBIQ对肺泡上皮细胞株A549氧化损伤的保护作用.方法:应用MTT法检测不同浓度CBIQ对正常及过氧化氢(H2O2)损伤的肺泡上皮细胞株A549的保护作用;DNA Ladder检测细胞凋亡;相差显微镜观察Hoechst染色后细胞凋亡形态的变化.结果:H2O2损伤后的A549细胞经不同浓度CBIQ处理后,细胞死亡数明显减少.浓度为1×10-2,1×10-3mmol/L的CBIQ组平均细胞存活率分别为(76.1±0.8)%,(71.3±1.0)%,较损伤组(46.3±0.9)%明显增高(P<0.01);终浓度为100μmol/L H2O2及10μmol/LCBIQ共同干预A549细胞4 h后,可检测到凋亡标志性的DNA梯形带;实验组细胞凋亡率较对照组明显下降(P<0.05).结论:在一定浓度范围内,CBIQ对氧化损伤的A549细胞生长有浓度依赖性的保护作用,并可抑制氧化损伤的A549细胞发生凋亡.     

依地福新抑制Jurkat细胞生长机制的研究

目的 观察依地福新对体外培养的Jurkat细胞的生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制.方法 应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;Annexin V-FITC染色法检测细胞凋亡率.结果 不同浓度依地福新处理Jurkat细胞24-96 h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈现浓度及时间依赖性;1.0 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0μmol/L依地福新处理72 h后,Jurkat细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01).结论 依地福新对Jurkat细胞具有生长抑制作用,其机制与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关.     

北冬虫夏草水提物对人肺腺癌细胞A549的作用

目的探讨北冬虫夏草水提物(CME)对人肺腺癌细胞A549的作用。方法以不同质量浓度的CME处理A549细胞24、48、72 h,CCK8法检测细胞生长抑制率。以0.5 mg/mL CME处理A549细胞(干预组)12、24和48 h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Western blotting检测A549细胞增殖相关蛋白(p-ERK和p-Akt)和凋亡相关蛋白(caspase-3)的表达;以未予CME处理的A549细胞作为对照组。结果 A549细胞生长抑制率随CME质量浓度的升高和处理时间的延长而上升,呈明显的浓度-时间依赖性(P<0.01)。与对照组比较,干预组G2/M期细胞比例明显增加(P<0.01);干预组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01),且与CME处理时间呈显著正相关(r=0.995,P<0.01);干预组p-ERK和p-Akt表达明显低于对照组,且与CME处理时间呈显著负相关(r=-0.881,P<0.01;r=-0.932,P<0.01);干预组caspase-3表达显著高于对照组(P<0.05),且与CME处理时间呈显著正相关(r=0.681,P<0.01)。结论 CME对A54...     

地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/L Aβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达。结果梓醇终浓度1×10-5mol/L和1×10-4mol/L显著提高PC12细胞存活率(P<0.05和P<0.01);1×10-4mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P<0.01)。Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白BaxmRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5mol/L和1×10-4mol/L有降低作用(P<0.05和P<0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P<0.05和P<0.01)。结论地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用。     

同型半胱氨酸诱导人血管平滑肌细胞增殖与凋亡

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响.方法:采用组织贴块法体外培养人VSMC,MTT法检测人VSMC增殖,流式细胞术检测人VSMC凋亡.结果:体外培养的人VSMC在终浓度为100,200,500和1000 μmol/L Hcy的培养液中孵育24 h后的A值均高于对照组(P<0.05),表明Hcy可诱导人VSMC增殖,而且呈浓度依赖性诱导人VSMC增殖(r=0.94,P<0.01).终浓度为200,500和1000 μmol/L Hcy时细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),表明较高浓度的Hcy可以诱导人VSMC凋亡,而且这一效应呈浓度依赖性(r=0.85,P<0.05).结论:Hcy可以诱导VSMC增殖和凋亡.     

天花粉蛋白对A549细胞增殖和细胞凋亡的影响

目的 观察天花粉蛋白对人肺腺癌细胞株A549生长增殖的影响和在体外诱导A549肺腺癌细胞凋亡的效果.方法 应用MTT法检测栝萎中提取的天花粉蛋白对A549细胞生长增殖的影响,DNA Ladder凝胶电泳及流式细胞术检测天花粉蛋白对A549细胞的诱导凋亡作用.结果 经天花粉蛋白处理后A549细胞生长明显受抑,并呈一定的剂量时效依赖性;流式细胞仪直方图出现明显的亚二倍体峰,经TCS(40 μg/ml)处理48 h、72 h后A549细胞的凋亡率分别为(27.00±2.08)%和(39.43±4.92)%,均高于顺铂组(2 μg/ml)(P＜0.01).结论 天花粉蛋白在体外能抑制A549肺腺癌细胞的生长繁殖,并能诱导该细胞发生凋亡.     

MMP-9反义寡核苷酸对肺腺癌细胞及其裸鼠移植瘤治疗的实验研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-9反史寡核苷酸(MMP-9ASODN)对人肺腺癌(A549)细胞及其裸鼠移植瘤治疗的实验研究.方法 MTT法检测MMP-9ASODN转染对A549细胞生长的影响;流式细胞术检测MMP-9ASODN对A549细胞增殖和凋亡比率;采用皮下注射法建立移植瘤裸鼠动物模型,以脂质体包裹的MMP-9ASODN直接移植瘤内注射.观察肿瘤生长情况,计算抑瘤率和生长指数,利用光镜观察对重要脏器的形态学改变. 结果 在一定范围内,MMP-9 ASODN对A549细胞存活率抑制呈浓度和时间依赖性(反义寡核苷酸浓度为600 nmol/L作用48 h时抑制作用最明显);与对照组相比转染MMP-9ASODN的A549细胞凋亡百分比明显升高(P<0.01);MMP-9ASODN能使A549细胞周期阻滞在G_1/G_0期,MMP-9ASODN组肿瘤生长指数为(3.20±0.14).明显低于对照组(6.40±0.33)(P<0.01).MMP-9ASODN组的肿瘤重量为(1.25±0.03).明显低于对照组(2.43±0.04)(P<0.01),MMP-9ASODN组的抑瘤率为(33.41±1.18)%,而且心肝肾组织观察,结构均基本正常,未见有明显的组织损伤改变.结论 MMP-9ASODN能够有效地抑制肺癌A549细-胞的增殖和促进其凋亡;在体内可以显著抑制裸鼠移植瘤的生长,且无明显毒副作用.     

乌司他丁对胃癌细胞c-met基因表达及增殖的影响研究

目的：观察乌司他丁对胃癌细胞c-met基因表达及增殖的影响，为乌司他丁用于胃癌的治疗提供理论依据。方法：取对数生长期人胃癌BGC-823细胞，随机分为空白组、对照组和乌司他丁组。空白组加入RPMI1640培养液3ml，对照组培养液中加入奥沙利铂（L-OHP）至终浓度为1mmol／L（对照1组）和0.5mmol／L（对照2组），乌司他丁组培养液中加入乌司他丁至终浓度为320U/ml（乌司他丁1组）和160U／ml（乌司他丁2组），分别置于培养箱中培养48h。采用RT-PCR检测胃癌细胞c-met mRNA的表达情况；ELISA检测细胞抑制率；活细胞计数计算细胞倍增时间，以评估乌司他丁对胃癌BGC-823细胞增殖的抑制情况。结果：乌司他丁组与空白组及对照组比较，c-met mRNA的表达均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01）；乌司他丁1组与2组间比较，差异有显著性（P〈0.05）。细胞倍增时间及细胞抑制率比较，乌司他丁组与空白组间均有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01），与对照组亦有非常显著性差异（P〈0．01）；乌司他丁1组与2组间比较，也有显著性差异（P〈O．05）。结论：乌司他丁可以明显抑制人胃癌BGC-823细胞原癌基因c-met mRNA的表达；乌司他丁可以明显延长人胃癌细胞的倍增时间，对细胞增殖具有明显的抑制作用，剂量增加，抑制作用越明显。     

开口箭皂甙抑制小鼠S-180肉瘤细胞增殖及实体瘤生长的实验研究

目的 研究开口箭皂甙(STCB)体内外抗S-180肉瘤活性的强度及其作用机制.方法 MTT法检测S-180细胞的增殖程度;制备昆明种小鼠S-180移植实体瘤模型,观察STCB的抑瘤作用;光镜和电镜下观察药物作用后S-180细胞形态及超微结构变化;以不同浓度STCB处理S-180细胞,经碘化丙啶染色后应用流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡情况.结果 STCB体外明显抑制S-180细胞增殖,IC50为34.64μg/ml.经灌胃给药,STCB对荷S-180实体瘤小鼠表现出良好的抑瘤作用,低剂量(0.5 g/kg体质量)时,抑瘤率已超过30%,高剂量(2 g/kg体质量)时,抑制率达到54.86%.电镜观察和FCM检测证明肿瘤细胞凋亡率随STCB浓度增加而增加.STCB的浓度为10和30μg/ml时,S期细胞百分率上升,G2/M期细胞百分率下降;当STCB的浓度达到60μg/ml,G0/G1期细胞百分率下降,G2/M期细胞百分率上升:提示低浓度STCB阻止S-180细胞从S期进入G2期;高浓度时,STCB还干扰S-180细胞的有丝分裂.结论 STCB在体内外对S-180肉瘤细胞均有抑制作用,其作用机制与诱导肿瘤细胞的凋亡和干扰细胞周期有关.     

萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮抑制肺癌A549细胞增殖并诱导其凋亡

目的 探讨新型萘烯丙基三氟甲基苯并环戊酮（XX0335）抑制肺癌细胞系A549增殖并诱导凋亡的分子机制。方法 实验分为4组：对照组（含0.1% DMSO的培养液）、另外3组为不同浓度（6.25、12.5、25 μg/mL）的XX0335（该化合物需DMSO溶解,但工作浓度中DMSO的终浓度均低于0.1%）。通过CCK-8和EdU实验分别测定各组对A549细胞活力及增殖的影响,通过流式细胞术测定上述浓度的XX0335对A549细胞凋亡及周期的影响;通过免疫印迹实验测定不同浓度的XX0335对增殖相关蛋白Akt、mTOR、Akt/mTOR磷酸化水平、凋亡相关蛋白cleaved PARP及细胞周期相关蛋白CyclinD1表达水平的影响;通过裸鼠荷瘤实验探究XX0335对A549增殖的影响,动物实验使用4周龄小鼠共10只,随机均分为2组。将2×106A549细胞植入小鼠左侧腋下,待26 d后瘤体长径长至1 cm时,对照组小鼠注射无菌生理盐水（200 μL）,对实验组注射化合物XX0335（12.5 μg/mL,200 μL）,隔天注射1次,共5次之后取肿瘤观察每组瘤体大小。结果 CCK-8实验表明,A549细胞活力在XX0335的作用下比对照组呈剂量依赖性下降（P<0.01）。EdU实验发现XX0335能显著抑制A549细胞增殖（P<0.001）。流式细胞术检测结果表明,细胞凋亡较对照组呈剂量依赖性上升（P<0.01）,且细胞停滞于G1期。与对照组相比,AKT、mTOR的磷酸化受到了明显抑制,cleaved PARP表达量升高,且CyclinD1的蛋白表达量下降。裸鼠荷瘤实验结果显示注射XX0335后肿瘤体积明显减小（P<0.01）。结论 XX0335抑制了肺癌A549细胞增殖并诱导细胞发生了凋亡,且细胞周期阻滞于G1期,其作用机制可能与抑制Akt/mTOR信号通路有关。     

血管基膜衍生多功能肽选择性抑制人肺癌细胞增殖

目的:观察重组血管基膜衍生多功能肽(Vascular basement membrane derived multifunctional peptide,VBM-DMP)对人肺癌细胞增殖的选择性抑制作用。方法:体外培养人肺癌(A549)细胞、人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB-17),采用MTT比色法测定重组VBMDMP对A549细胞增殖的选择性抑制作用;台盼蓝染色细胞计数法观察重组VBMDMP对A549细胞和KMB-17细胞生长曲线的影响;采用人肺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤模型治疗实验,评价重组VBMDMP治疗人肺癌的有效性。结果:体外实验结果表明重组VBMDMP能选择性抑制人肺癌(A549)细胞的增殖和生长,呈剂量依赖性,而对KMB-17细胞的增殖活性影响小;重组VBMDMP显著抑制人肺癌(A549)细胞裸鼠异种移植瘤的生长,呈剂量依赖性趋势。1 mg/kg和5 mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率分别是42%和74%,瘤重抑制率分别42%和77%,其中5mg/kg重组VBMDMP的肿瘤生长抑制率和瘤重抑制率均高于环磷酰胺(CTX100 mg/kg)、血管生成抑制剂烟曲霉素衍生物TNP-470(20 mg/kg)。结论:重组VBMDMP对人肺癌细胞(A549)的增殖和生长具有显著抑制作用,是一种选择性高,抗肿瘤作用强的新型抗肿瘤基因工程候选药物。     

槲皮素通过STAT3信号通路抑制肺癌A549细胞迁移和侵袭

目的 观察槲皮素通过抑制信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响.方法 体外培养A549细胞,以不同浓度(0、7.5、15、30、60、120μmol/L)槲皮素处理24、48和72 h,采用CCK-8检测槲皮素对A549细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50).A549细胞随机分为4组:分别以0(空白对照组)、15和30μmol/L槲皮素和3μg/ml顺铂(阳性对照组)处理24 h.采用细胞黏附实验、划痕修复实验、Transwell小室体外侵袭实验观察A549细胞黏附、迁移、侵袭能力,Western印迹法检测STAT3、磷酸化信号转导和转录激活因子3(p-STAT3)蛋白表达的变化.结果 槲皮素剂量依赖性地抑制A549细胞增殖.与空白对照组相比,槲皮素显著抑制A549细胞黏附率、迁移率、侵袭细胞数(P<0.05或P<0.01);与空白对照组相比,槲皮素显著降低A549细胞STAT3和p-STAT3蛋白表达(P<0.05或P<0.01).结论 槲皮素具有明显的抑制A549细胞增殖、迁移和侵袭能力的作用,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关.     

阿司匹林对胃癌细胞增殖及血管生成相关因子作用的研究

目的:从抗血管生成的角度研究阿司匹林抗肿瘤作用的机理。方法:采用MTT法检测不同浓度阿司匹林对胃癌细胞增殖的影响;免疫细胞化学法检测阿司匹林对胃癌细胞COX-2、VEGF蛋白表达的影响。结果:①阿斯匹林对胃癌细胞的增殖具有抑制作用,随着作用时间的延长(F=402.062P<0.01),浓度的增加(F=50.141P<0.01),其抑制作用也增加。②当阿司匹林浓度为0 mmol/L、0.1 mmol/L、1.0 mmol/L、8.0 mmol/L时,COX-2蛋白质表达的A值分别为0.675±0.031、0.660±0.023、0.597±0.016、0.578±0.014,与0 mmol/L阿司匹林组相比,阿司匹林浓度为1.0 mmol/L8、.0 mmol/L组可明显抑制COX-2蛋白表达(P<0.05)。③阿司匹林浓度为0 mmol/L0、.1 mmol/L1、.0 mmol/L8、.0 mmol/L时,VEGF蛋白质表达的A值分别为0.480±0.014、0.457±0.027、0.407±0.032、0.363±0.029,与0 mmol/L阿司匹林组相比,阿司匹林浓度为1.0 mmol/L8、.0 mmol/L组可明显抑制VEGF蛋白表达(P<0.05)。结论:阿斯匹林对胃癌细胞增殖具有一定的抑制作用,其作用可能是通过对COX-2和VEGF等血管生成相关因子的抑制起作用。     

S-腺苷蛋氨酸对人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823的影响

目的 观察S-腺苷蛋氨酸(SAM)对体外培养的人胃癌细胞系SGC-7901和BGC-823细胞增殖、细胞周期、凋亡和侵袭力的影响,及对这两种细胞中c-myc 和尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)基因甲基化状态及表达的影响.方法 采用四甲基偶氮唑盐法检测SAM对SGC-7901和BGC-823细胞增殖的影响.应用不同浓度(0、2、4 mmol/L)的SAM处理SGC-7901和BGC-823细胞72 h后,用流式细胞仪检测各组细胞周期和凋亡;Transwell法检测各组细胞侵袭力;分别使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白质印迹法和甲基化特异性PCR(MSP)方法检测各组细胞中c-myc和uPA基因mRNA和蛋白的表达及甲基化状态.结果 0.5～32 mmol/L SAM处理SGC-7901和BGC-823细胞24、48、72 h后,随SAM浓度增大和作用时间延长,细胞增殖受到明显抑制(均P<0.05),生长抑制率也逐渐增大,72 h IC50分别为SGC-7901 5.40 mmol/L、BGC-823 4.01 mmol/L.经过不同浓度(0、2、4 mmol/L)SAM处理SGC-7901和BGC-823细胞72 h后,随SAM浓度增加,G0/G1期细胞比例均逐渐增加,且差异有统计学意义(分别P<0.05和P<0.01),细胞增殖指数明显低(分别P<0.05和P<0.01);与对照组凋亡率(0.33±0.09)比较,SGC-7901 2 mmol/L组(5.79±0.75)和4 mmol/L组(10.19±0.60)均高(均P<0.01);与对照组凋亡率(0.95±0.19)比较,BGC-823 2 mmol/L组(6.23±0.75)和4 mmol/L组(11.82±1.14)均高(均P<0.01).细胞侵袭力均受到明显抑制,差异均有统计学意义(均P<0.01),SGC-7901 2、4 mmol/L组侵袭抑制率分别是51.07%和80.69%,BGC-823 2、4 mmol/L组侵袭抑制率分别是48.57%和84.10%.除了BGC-823细胞的2 mmol/L组c-myc 基因,其余各组细胞c-myc 基因和uPA基因的mRNA表达均明显减弱(分别P<0.05和P<0.01);c-myc基因和uPA基因均恢复甲基化状态.结论 SAM可促进SGC-7901和BGC-823胃癌细胞凋亡,抑制增殖,使细胞在G0/G1期受阻;使细胞侵袭力受到抑制;能够逆转胃癌细胞c-myc基因和uPA基因的低甲基化状态,调控c-myc基因和uPA基因的表达.