齐墩果酸对白血病HL-60细胞PI3K、Akt表达的影响

目的研究齐墩果酸(Oleanic acid,OA)对人白血病HL-60细胞PI3K、Akt表达的影响。方法 OA作用HL-60细胞后,采用透射电镜观察细胞形态,RT-PCR法检测HL-60细胞PI3K、Akt的mRNA表达。结果 OA作用于HL-60细胞后,细胞形态改变明显,出现凋亡小体,且PI3K、Akt的mRNA表达下调(P<0.01)。结论 OA可抑制HL-60细胞增殖,这可能与其下调HL-60细胞中PI3K、Akt的表达有关。     

白杨素对人白血病细胞柔红霉素化疗敏感性及PI3K/Akt通路的影响

摘要：目的:研究白杨素联合柔红霉素诱导体外培养的急性粒细胞性白血病细胞株（HL-60）的细胞凋亡作用,通过其对磷酸肌醇-3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路的活化,增加HL-60对柔红霉素的敏感性。方法:用MTT法测定对照组、白杨素组(20μmol·L-1)、柔红霉素组(0.5μg·ml-1)和白杨素(20μmol·L-1)+柔红霉素(0.5μg·ml-1)组对HL-60细胞的抑制率,观察各组HL-60细胞形态变化,并用吖啶橙和溴化乙锭（AO/EB）双荧光法观察细胞凋亡情况;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测白杨素与柔红霉素联用对HL-60细胞PI3K相关基因S期激酶相关蛋白2（Skp-2）、抑癌基因P27、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）和Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响;用蛋白质免疫印迹法（Western Blotting）方法检测白杨素与柔红霉素联用对HL-60细胞PI3K相关蛋白Skp-2、P27、Bcl-2和Bax表达的影响。结果:白杨素与柔红霉素联用能显著增强HL60对柔红霉素的化疗名感性,降低HL60细胞存活率,增加细胞凋亡,下调Skp-2、Bcl-2 mRNA及蛋白表达,上调P27 mRNA及蛋白表达,与单药组比较差异有统计学意义（P<0.05）;而Bax mRNA及蛋白表达变化不明显（P>0.05）。结论:白杨素可以有效靶向诱导HL-60肿瘤细胞凋亡,并通过PI3K/Akt信号通路增加HL-60对柔红霉素的化疗敏感性。     

缺氧-复氧损伤大鼠心肌微血管内皮细胞PI3K、Akt、HIF-1α mRNA的表达

目的观察缺氧-复氧(H-R)损伤对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)PI3K、Akt和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)mRNA表达的影响。方法培养SD大鼠MMECs,以1×106/ml的密度接种于96孔板(100μl/孔)或直径6 cm培养皿(2 ml/皿),随机分为H-R组(缺氧2 h,复氧2 h)和正常对照组(N组)。Hoechst染色荧光显微镜覌察凋亡细胞形态,Annexin V-FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测PI3K、Akt、和HIF-1αmRNA转录水平。结果与N组比较,H-R组可见大量细胞坏死、脱落,MMECs活力降低,细胞凋亡率升高,HIF-1α、PI3K、Akt mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01)。结论 H-R促使细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调Akt和HIF-1αmRNA的表达,是MMECs H-R损伤机制之一。     

缺氧-复氧损伤大鼠心肌微血管内皮细胞PI3K、Akt、HIF-1a mRNA的表达

目的 观察缺氧-复氧(H-R)损伤对大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs) PI3K、Akt和缺氧诱导因子-la(HIF-la) mRNA表达的影响.方法 培养SD大鼠MMECs,以1×10<'6>/ml的密度接种于96孔板(100 μl/孔)或直径6 cm培养皿(2ml/皿),随机分为H-R组(缺氧2h,复氧2 h)和正常对照组(N组).Hoechst染色荧光显微镜观察凋亡细胞形态,Annexin V-FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率,MTT法测定细胞活力,RT-PCR检测PI3K、Akt、和HIF-la mRNA转录水平.结果 与N组比较,H-R组可见大量细胞坏死、脱落,MMECs活力降低,细胞凋亡率升高,HIF-la、P13K、Akt mRNA表达上调(P<0.05或P<0.01).结论 H-R促使细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调Akt和HIF-la mRNA的表达,是MMECs H-R损伤机制之一.     

血竭醇提物对大鼠穿支皮瓣模型存活及PI3K/Akt/eNOS通路的影响

目的:研究血竭醇提物对大鼠穿支皮瓣模型存活及PI3K/Akt/eNOS通路的影响。方法:采用只保留穿支血管切断其他血管的方法复制大鼠穿支皮瓣模型,造模成功后,将大鼠分为模型组(外敷,生理盐水)和血竭醇提取物(EESD,血竭素含量为75.08mg/g)组(外敷,0.21 g/cm~2),每组10只,连续敷药7 d,每天1次。敷药7 d后测定各组大鼠穿支皮瓣存活率、皮瓣微血管密度。将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)缺氧缺糖16 h后复氧复糖复制HUVEC缺氧缺糖/复氧复糖细胞模型,造模成功后,将细胞分为正常组、模型组和血竭素高、中、低浓度组(2.5、1.0、0.5μg/m L),于复氧复糖培养24 h后,采用显微镜观察各组细胞的形态,采用MTT法和比色法分别测定各组细胞的活性和细胞中一氧化氮(NO)的含量,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和Western blot法检测丝氨酸/苏氨酸激酶(Akt)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达水平,PI3K蛋白的表达以及Akt、eNOS蛋白的磷酸化程度。结果:在大鼠实验中,与模型组比较,EESD组大鼠穿支皮瓣存活率、微血管密度均显著增加(P<0.01)。在细胞试验中,与正常组比较,模型组HUVEC细胞存活率、NO含量,PI3K、Akt、eNOS mRNA的表达水平,PI3K蛋白的表达以及Akt、eNOS蛋白的磷酸化程度均显著降低(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,血竭素高、中、低浓度组HUVEC细胞的存活率、NO含量,PI3K、Akt、eNOS m RNA的表达水平,PI3K蛋白的表达以及Akt、eNOS蛋白的磷酸化程度均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:EESD可提高大鼠穿支皮瓣模型的存活率,其机制可能与激活PI3K/Akt/eNOS通路保护内皮细胞有关。     

注射用核糖核酸Ⅱ通过活性氧介导的PI3K/Akt信号通路诱导人白血病细胞KG1a凋亡

目的研究注射用核糖核酸Ⅱ诱导人急性骨髓白血病细胞系KG1a细胞凋亡与PI3K/Akt信号通路和活性氧(ROS)的关系。方法流式细胞术(FCM)检测细胞周期和细胞内的ROS水平;免疫印迹法(Western blot)检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白p-PI3K、p-Akt、p-MDM2、p21和周期相关蛋白cyclin D1、CDK4的表达;加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)后,检测p-PI3K、p-Akt和p53蛋白表达变化。结果 FCM结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ可将KG1a细胞阻滞在G0/G1期,且ROS介导了细胞周期的阻滞; FCM检测ROS结果显示,KG1a细胞内ROS水平均随药物浓度增加而升高; Western blot结果显示,注射用核糖核酸Ⅱ下调pPI3K、p-Akt、p-MDM2和cyclin D1、CDK4的表达,上调p21的表达;与仅用注射用核糖核酸Ⅱ相比,经NAC预处理后再使用注射用核糖核酸Ⅱ,明显上调了磷酸化PI3K和Akt的表达,下调了p53的表达。结论注射用核糖核酸Ⅱ通过ROS介导的PI3K/Akt信号通路,诱导人急性骨髓白血病细胞系KG1a细胞凋亡。     

蛇床子素通过PI3K/Akt通路诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡

目的探讨蛇床子素(osthole或osthol)能否通过PI3K/Akt通路诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。方法体外培养外阴鳞癌SW962细胞,加入不同浓度蛇床子素,MTT法检测细胞存活情况,DAPI染色观察细胞形态学变化;流式细胞术检测SW962细胞凋亡情况; Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、PI3K和p-Akt蛋白表达,及蛇床子素和IGF-1共作用下PI3K/Akt通路蛋白的变化。结果 MTT结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性地抑制SW962细胞增殖;DAPI染色和流式细胞术结果显示,蛇床子素呈浓度依赖性诱导细胞凋亡。Western blot结果显示,蛇床子素能上调Bax和cleaved caspase-3蛋白表达,下调PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达。IGF-1诱导PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表达增加,蛇床子素逆转IGF-1作用,3种蛋白表达下调。结论蛇床子素通过抑制PI3K/Akt通路,诱导外阴鳞癌SW962细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

槲皮素通过调控PI3K/Akt信号通路对血管内皮祖细胞发挥保护作用

目的探讨槲皮素(quercetin,Que)对氧化应激情况下血管内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)的保护作用及其作用机制。方法分离并诱导分化人脐血EPCs,随机分为对照组;过氧化氢(H_2O_2)组:加入500μmol·L~(-1)的H_2O_2,建立氧化应激损伤EPCs模型;Que干预组:先分别加入浓度为60、90μmol·L~(-1)的Que预处理30 min后,再加500μmol·L~(-1) H_2O_2共同培养,培养12、24、48 h后,WST-1法观察EPCs增殖情况;Western blot检测Akt、磷酸化Akt的表达水平;实时荧光RT-PCR法检测PI3K、Akt3 mRNA的表达水平。结果与空白对照组对比,经过H_2O_2处理的EPCs增殖能力明显降低,且EPCs的Akt蛋白表达明显下降,PI3K、AKT3 mRNA明显下降(P<0.01,P<0.05)。加入60、90μmol·L~(-1) Que处理12、24、48 h后,损伤的EPCs细胞增殖能力明显增加,与模型组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。同时明显升高EPCs磷酸化Akt的蛋白表达(P<0.05),以及PI3K、AKT3 mRNA表达(P<0.01)。结论槲皮素对H_2O_2诱导血管EPCs氧化应激损伤起到修复作用,其作用机制可能是通过激活PI3K/Akt信号通路,减少氧化应激对脑血管病灶的影响,促进脑血管EPCs增殖和分化。     

当归补血汤含药血清对内皮祖细胞功能及其PI3K/Akt通路影响的研究

目的 研究当归补血汤含药血清对人内皮祖细胞(EPCs)功能及其PI3K/Akt通路的影响.方法 体外培养并鉴定人外周血EPCs,制备当归补血汤含药血清,对EPCs进行不同血清或PI3K抑制剂的干预,检测EPCs的增殖、黏附、迁移、成小管功能及NO分泌量,RT-PCR检测eNOS mRNA的表达,Western blot检测Akt蛋白的表达.结果 与对照组比较,当归补血汤含药血清能促进EPCs的增殖、黏附、迁移及成小管功能(P＜0.05),促进EPCs分泌NO,上调细胞eNOS mRNA、总Akt和磷酸化Akt蛋白的表达,但这些作用均在PI3K抑制剂处理后明显减弱(P＜0.05).结论 当归补血汤可能通过PI3K/Akt通路调节EPCs的功能.     

二烯丙基二硫下调DJ-1抑制人白血病HL-60细胞增殖及诱导分化

目的研究二烯丙基二硫(DADS)通过下调DJ-1对人白血病细胞系HL-60增殖抑制及诱导分化的影响。方法通过细胞形态法观察细胞分化;Western blot及免疫细胞化学检测DADS对HL-60细胞DJ-1表达的影响;针对DJ-1mRNA序列设计合成siRNA转染人白血病细胞HL-60,Western blot检测基因干扰效果;利用MTT法及间接免疫荧光检测DADS及DJ-1沉默对HL-60细胞的生长及细胞分化的影响。结果 DADS可以诱导HL-60细胞向成熟粒细胞系样分化。DADS呈时间依赖性抑制DJ-1的表达(P<0.05),DJ-1干扰组细胞生长减慢(P<0.05),与DADS共同作用后可诱导HL-60细胞分化。检测细胞生长情况发现干扰组细胞生长减慢(P<0.05)。结论 DADS通过下调DJ-1抑制细胞增殖并诱导HL-60细胞分化;干扰DJ-1基因可以增强DADS对HL-60细胞的增殖抑制诱导分化作用。     

2-甲氧基雌二醇对CEM细胞增殖的影响及其机制研究

目的研究2-甲氧基雌二醇(2-ME2)对人白血病细胞系CEM细胞的作用及其分子机制。方法采用MTT法检测不同浓度2-ME2处理CEM细胞48 h后细胞的增殖活性;2μmol.L-1 2-ME2处理CEM细胞0、24、48和72 h,采用RT-PCR法检测VEGF和hTERT mRNA的表达情况,Westernblot法检测Akt和p-Akt蛋白表达变化。结果不同浓度2-ME2能够有效抑制CEM细胞增殖,并呈量效关系,2μmol.L-1 2-ME2处理CEM细胞24、48和72 h可降低CEM细胞中的VEGF和hTERT mRNA表达,并降低Akt蛋白磷酸化水平,而总Akt蛋白表达无变化。结论 2-ME2能够有效抑制CEM细胞增殖,其可能作用机制与下调hTERT和部分通过下调VEGF mRNA表达,阻断PI3K/Akt信号通路转导有关。     

原花青素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨原花青素对IL-1β诱导的软骨细胞凋亡的影响及其可能机制.方法 分别用原花青素0、10、20、40、60、100μmol/L干预软骨细胞48 h,采用CCK-8法检测原花青索对软骨细胞活性的影响.将软骨细胞分为IL-1β处理组(A组)、IL-1β+原花青素处理组(B组)和空白对照组(C组),采用RT-PCR和Western blot法分别检测软骨细胞中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、Akt、Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA和蛋白表达,Hoechst/碘化丙啶染色检测软骨细胞凋亡,并观察乳酸脱氢酶(LDH)释放情况.结果 原花青素浓度为40μmol/L时,软骨细胞活性达峰值(P＜0.01).与C组相比,A组软骨细胞LDH释放量、细胞凋亡以及Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均增加(P＜0.01),PI3K、Akt和Bcl-2 mRNA和蛋白表达降低(P＜0.01);而B组加入原花青素处理后能逆转上述各指标的变化过程(P＜0.05或P＜0.01).结论 原花青素可以抑制IL-1β诱导的软骨细胞凋亡;其保护机制可能与激活PI3K/Akt通路、上调Bcl-2以及下调Bax和Caspase-3的表达有关.     

大蒜素对白血病细胞增殖和凋亡的影响

目的通过观察中药大蒜素(allicin)对人髓系白血病细胞株HL-60增殖、凋亡及bcl-2mRNA表达的影响,探讨大蒜素的作用机制。方法采用MTT法绘制细胞生长曲线;TdT酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)分析凋亡细胞;RT-PCR法检测大蒜素作用后不同时间段bcl-2mRNA表达水平的变化。结果大蒜素对HL-60细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性,并能抑制HL-60细胞集落形成。较低浓度大蒜素即可抑制HL-60细胞增殖。作用24hTUNEL法检测到凋亡细胞;细胞凋亡率呈药物浓度依赖性且使bcl-2/bax下调。大蒜素作用HL-60细胞后,bcl-2mRNA表达水平有不同程度下调,并呈剂量依赖性。结论大蒜素能够有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡;bcl-2表达水平下调可能参与了该过程。     

CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞体外增殖、分化作用的研究

目的探讨CD44抗体HI44a对急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、分化的作用机制。方法以急性髓系白血病细胞株HL-60为研究对象,以ATRA为阳性对照,以同型抗体IgG2a为阴性对照,以HI44a作为实验组,应用台盼蓝拒染法检测HI44a对HL-60细胞增殖的影响,瑞氏染色法及流式细胞学检测HI44a对HL-60细胞分化的影响,RT-PCR方法检测HI44a处理HL-60细胞前后TGFβ1和TGFβR1基因表达变化,应用荧光定量RT-PCR法检测HI44a处理HL-60细胞前后髓系分化相关的细胞因子及受体信号通路(GM-CSFRα、OPN)基因表达变化,以及DNA序列分析法检测HI44a处理HL-60细胞前后OPN异构体表达改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测实验组与对照组培养上清液的OPN水平。结果经HI44a作用后,HL-60细胞增殖受抑;细胞形态变化表现为体积变大,核固缩,核浆比例降低,核仁减少,出现核分叶等特征;细胞表面分化抗原CD15表达上调;HL-60细胞的GM-CSFRα及TGFβ1 mRNA表达水平增高,而OPN mRNA表达水平降低,TGFβR1 mR-NA表达水平无变化;OPN序列分析结果表明HI44a作用后OPN的3种异构体的组成发生改变,HI44a处理后的OPN水平明显下降。结论 CD44抗体HI44a通过上调GM-CSFRα、TGFβ1及下调OPN mRNA表达水平,减少OPN的分泌,抑制HL-60细胞增殖,诱导细胞分化。     

CD44单抗A3D8对NB4细胞IL-3Rα及其下游信号通路的调节

目的探讨CD44单抗A3D8对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞IL-3Rα及其下游PI3K/Akt信号通路的调节。方法以NB4细胞为研究对象,以同型抗体IgG1为阴性对照,以A3D8为实验组,A3D8诱导NB4细胞分化凋亡过程中,real-time RT-PCR方法检测IL-3Rα基因转录水平,运用Western blot法检测IL-3Rα及下游PI3K/Akt信号通路中重要信号分子,随后将PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002与A3D8联合,观察二者联合对NB4细胞PI3K/Akt信号通路的影响。结果 A3D8诱导NB4细胞分化凋亡过程,可明显下调NB4细胞中IL-3RαmRNA和蛋白表达水平,抑制PI3K/Akt信号通路;LY294002可增强A3D8对NB4细胞增殖和凋亡的抑制作用,并可进一步抑制PI3K/Akt信号通路。结论 A3D8可抑制NB4细胞IL-3Rα的转录水平和蛋白表达水平,并抑制其下游PI3K/Akt信号通路。     

4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯通过PTEN/PI3K/Akt抑制YAC-1细胞增殖和诱导其分化

目的研究新型维甲酸衍生物4-氨基-2-三氟甲基苯基维甲酸酯(4-amino-2-trifluoromethyl-phenyl retinate,ATPR)对鼠淋巴瘤YAC-1细胞增殖和分化的作用及其可能机制。方法不同浓度的ATPR作用鼠淋巴瘤YAC-1细胞后,MTT检测细胞生长抑制率;LDH法检测细胞毒性;瑞氏-吉姆萨染色法检测细胞形态;NBT检测细胞分化阳性率;RT-PCR和Western blot法检测维甲酸受体mRNA和蛋白表达变化;Western blot法检测PTEN/PI3K/Akt和cyclinD的蛋白表达。结果 ATPR(10-5、10-6、10-7、10-8、10-9mol·L-1)用药后72 h明显抑制YAC-1细胞增殖,其抑制作用随浓度和时间增加而逐渐增强;随着药物浓度升高,ATPR对YAC-1细胞毒性增强;ATPR(10-5¹0-9mol·L-1)作用72 h后可诱导YAC-1细胞形态呈现高分化趋势,且NBT阳性率升高;ATPR(10-5mol·L-1)体外用药72 h可诱导RARα的mRNA和蛋白表达升高,但RARβ和RARγ表达无明显变化;而且可诱导PTEN表达升高并下调p-Akt和cyclinD的蛋白表达。结论 ATPR可明显抑制YAC-1细胞增殖并诱导其分化,其机制可能是与RARα结合后参与调节PTEN/PI3K/Akt信号通路,从而抑制cyclinD的过表达。     

补骨脂素对绝经后大鼠骨质疏松及PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的:研究补骨脂素对绝经后大鼠骨质疏松及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法:将60只健康雌性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性对照组(0.09 mg/kg雌二醇)和补骨脂素低、中、高剂量组(22、44、88 mg/kg),每组10只。除正常组外,其余各组大鼠均采用卵巢摘除去势法建立绝经后骨质疏松模型。术后正常饲养2个月,正常组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水,各药物组大鼠灌胃相应药液;灌胃体积均为0.005 mL/g,每天1次,连续98天。末次给药24 h后,测定大鼠右侧下肢股骨和椎骨的骨密度,血清中钙离子、骨钙素、Ⅰ型前胶原N端前肽(P1NP)含量和骨形态发生蛋白2(BMP2)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,以及股骨组织中PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠股骨和椎骨的骨密度以及血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量和BMP2、VEGF水平均显著降低,PI3K、Akt、mTOR mRNA及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,补骨脂素中、高剂量组和阳性对照组大鼠股骨和椎骨的骨密度以及血清中钙离子、骨钙素、P1NP含量和BMP2(补骨脂素中剂量组除外)、VEGF(补骨脂素中剂量组除外)水平均显著升高,各药物组PI3K、Akt、m TOR mRNA(补骨脂素低剂量组除外)及蛋白表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),且高剂量组股骨骨密度和钙离子、BMP2水平以及PI3K蛋白表达水平均显著高于阳性对照组(P<0.05),mTOR mRNA表达水平显著低于阳性对照组(P<0.05)。结论:补骨脂素可改善绝经后大鼠的骨质疏松,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

PI3K信号通路在LPS诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)信号通路在脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞表达可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)中的作用。方法培养小鼠巨噬细胞株RAW264.7,采用相同浓度的LPS在不同时间诱导RAW264.7细胞,应用Western blot法分别检测PI3K蛋白表达水平,RT-PCR法检测PI3K mRNA表达水平,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养血清中sTREM-1表达水平。用不同浓度PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,观察上述指标变化。结果 LPS可时间依赖性地诱导RAW264.7细胞PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达;LY294002可浓度依赖性地抑制PI3K蛋白、PI3K mRNA的表达;LY294002阻断PI3K信号转导通路后,LPS对sTREM-1表达的诱导作用受到显著抑制,并且具有剂量依赖性。结论 LPS通过PI3K信号通路诱导RAW264.7细胞表达sTREM-1。     

PI3K/Akt信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡中的意义

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶/Akt (PI3K/Akt)信号途径在二氮嗪抑制缺氧-复氧(H-R)大鼠心肌微血管内皮细胞(MMECs)凋亡中的意义.方法 将培养的SD大鼠MMECs随机分为正常对照组(C组)、缺氧-复氧组(H-R组,缺氧2h复氧2 h)、二氮嗪+缺氧-复氧组(DZ组,二氮嗪100 μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h)、PI3K特异性阻滞剂LY294002+二氮嗪+缺氧-复氧组(LY294002组,LY294002 100 μmol/L预处理2 h+二氮嗪100μmol/L预处理2 h+缺氧2h复氧2 h).Hoechst染色观察凋亡细胞结构,Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡率,RT-PCR和Western blot分别检测Akt的mRNA和蛋白表达水平.结果 与C组比较,H-R组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率降低,Akt mRNA和蛋白表达增加(P＜0.05或P＜0.01);与DZ组比较,LY294002组细胞凋亡率升高,Akt mRNA和蛋白表达减少(P＜0.01).结论 H-R损伤引起MMECs凋亡.线粒体三磷酸腺苷敏感性钾通道(mito-KATP)开放后通过PI3K/Akt信号途径能部分抑制该作用.     

鱼腥草总黄酮调控PI3K/Akt信号通路诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的实验研究

目的：探讨鱼腥草总黄酮调控磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）信号通路对人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡的诱导作用。方法：取对数期MCF-7细胞,随机分为4组（5个复孔）,低、中、高剂量组分别用3,6,9 g·L^-1鱼腥草总黄酮处理,对照组用磷酸盐缓冲液（PBS）处理。干预48 h后进行细胞形态学观察;对比干预12,24,48 h时的细胞凋亡率;对比干预48 h时PI3K、Akt、B淋巴细胞瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA和PI3K、Akt、磷酸化Akt（pAkt）、Bcl-2、Bax蛋白相对表达量。结果：Hoechst 33258染色结果显示,干预后3剂量组部分细胞体积缩小、染色质浓缩,出现凋亡小体,且中剂量组凋亡现象最为明显;细胞凋亡率、Bax mRNA和蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最高、高剂量组其次、低剂量组其稍低、对照组最低,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;细胞凋亡率组内比较,对照组随时间的延长变化不显著（P>0.05）,3剂量组均随时间的延长显著增加（P<0.05）;PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白相对表达量组间比较,中剂量组最低、高剂量组其次、低剂量组稍高、对照组最高,且每2组间比较差异均有显著性（P<0.05）;Akt mRNA和蛋白相对表达量组间比较差异均不显著（P>0.05）。结论：鱼腥草总黄酮可促进人乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡,其中浓度为6 g·L^-1时促凋亡作用最强,推测是通过下调PI3K、Bcl-2 mRNA和PI3K、pAkt、Bcl-2蛋白表达,上调Bax mRNA和蛋白的表达,与PI3K/Akt信号通路有关。