鼓阶电刺激后螺旋神经节神经元Na^＋—K^＋—ATP酶和耳蜗传出神…

用０．１～１．０ｍＡ电流刺激卡那霉素致聋豚鼠耳蜗３小时。三个月后，经组织学处理用积分吸光度定量测定螺旋神经节神经元（ＳＧＮ）Ｎａ＾＋－Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶和耳蜗传出纤维乙酰胆碱酯酶（ＡＣｈＥ）。实验结果表明０．１ｍＡ级可增强上述酶的活性；０．４ｍＡ级酶活性无改变；１．０ｍＡ级可显著抑制酶的活性。认为０．１～０．４ｍＡ级电流对豚鼠耳蜗是安全临界域，在人工耳蜗植入电路设计时，有参考意义。     

Na~＋－K~＋－ATP酶活性在豚鼠内淋巴囊的细胞化学定位

Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子主动性跨上皮转运过程中起重要作用。应用对硝基苯酚磷酸（ｐ－ＮＰＰ）为底物的柠檬酸铅一步法Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶电镜细胞化学技术，观察了反映Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶在豚鼠内淋巴囊的超微结构定位分布。结果：在透射电镜下观察，内淋巴囊超薄切片上的Ｋ￣＋－ＮＰＰ酶活性反应产物仅分布于上皮细胞底侧面胞膜的胞浆一侧，向上一直延续至上皮细胞间的紧密连接水平，内淋巴腔面胞膜未见反应产物。提示丰富的Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶活性特征性地分布在内淋巴囊上皮细胞底侧面胞膜，表明Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋－ＡＴＰ酶在内淋巴囊上皮Ｎａ￣＋－Ｋ￣＋离子交换过程中的重要地位。     

实验性膜迷路积水活体Ca~（2＋）浓度与内淋巴电位测定

为了探索Ｍｅｎｉｅｒｅ病发病机理，阻塞豚鼠内淋巴囊造成膜迷路积水模型。对膜迷路积水成功的１７只动物的左耳分别于术后１、２、３个月在耳蜗第三回开窗，用双管离子选择性微电极插入中阶，测Ｃａ￣（２＋）浓度及内淋巴电位（ＥＰ）；１４只豚鼠健耳（右耳）作为对照。结果证明积水后中阶Ｃａ￣（２＋）浓度增高，与对照耳比较差异有显著性，随积水时间延长Ｃａ￣（２＋）浓度逐渐增高，且１、２、３个月之间差异有显著性。对照耳ＥＰ为７２．７８±１．９ｍＶ，积水耳为５５．８２±３．２８ｍＶ，差异有显著性。积水时间越长ＥＰ下降越明显，与Ｃａ￣（２＋）浓度呈负相关，按Ｎｅｒｓｔｉａｎ方程计算电化学梯度的斜率。两者之间差有显著性。对Ｍｅｎｉｅｒｅ病听力下降的原因、Ｃａ￣（２＋）浓度与ＥＰ的关系进行讨论。     

豚鼠膜迷路积水模型耳蜗Ca^2＋ATP酶的变化

目的 了解Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶在耳蜗活动位点及膜迷路积水后耳蜗Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶的变化。方法 选成年健康、Ｐｒｅｙｅｒ反射正常豚鼠１４只，左耳装圆窗电极一阻塞肉淋巴，经声反应阈（ＣＡＰ阀值）证明膜迷路积水形成；右侧为对照耳。用枸橼酸铅细胞组化法测定Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶，在透射电镜下Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶以磷酸铅黑色颗粒显示。结果 对照耳Ｃａ＾２＋－ＡＴＰ酶活动部位在蜗管前庭膜内淋巴侧、内外毛细胞皮     

渗透浓度变化和电刺激诱发离体耳蜗外毛细胞运动的初步观察

观察细胞外环境改变对外毛细胞功能的影响，对揭示神经性耳聋的机理很有意义。用显微机械法分离豚鼠耳蜗外毛细胞，观察到细胞外环境渗透浓度降低（２８０Ｏｓｍｍｏｌ／Ｌ）１ｍｉｎ即可诱发离体外毛细胞短缩３．１４±０．７０％（ｔ检验，以下同，Ｐ＜０．０１），伴直径增加。外环境渗透浓度升高（３２０Ｏｓｍｍｏｌ／Ｌ）５ｍｉｎ可使离体外毛细胞伸长３．３４±１．０９％（Ｐ＜０．０５），伴直径缩小；交变电场（刺激电流Ｉ＜０．１ｍＡ，刺激频率ｆ＝１～１０Ｈｚ）的变化可使外毛细胞产生伸缩运动，在Ｋ￣＋１００ｍｍｏｌ／Ｌ，渗透浓度３２０Ｏｓｍｍｏｌ／Ｌ环境下外毛细胞随交变电场变化而产生的运动幅度，负相时减少４３．１４％（Ｐ＜０．０５），正相时减少４６．１７％（Ｐ＜０．０５）。外环境恢复正常后外毛细胞形状亦可恢复。讨论了外毛细胞的运动机制和生物学基础。     

新生儿畸变产物耳声发射测试

用ＧＳＩ６０ＤＰＯＡＥ仪对２０例（４０耳）新生儿进行畸变产物耳声发射（ＤＯＰＡＥ）测试。结果显示，在ｆ１≤１ｋＨｚ时ＤＯＰＡＥ检出率很低，而当ｆ１位于１．４￣４．０ｋＨｚ时，检出率大于９０％；低频率的ＤＯＰＡＥ辐值较低，在ｆ１位于１．４￣４．０ｋＨｚ范围内幅值较高。提示新生儿低频段ＤＰ易受噪声、刺激声强度、受试者的自身代谢活动、中耳功能及中耳对耳蜗反应的传输功能的影响。因此，在用ＤＰ进行新生儿听力     

双醋酸荧光素－碘化丙啶双染色法鉴别豚鼠外毛细胞活性

为提供一种准确判断单离细胞活性的方法，采用双醋酸荧光素（ＦＤＡ）－碘化丙啶（ＰＩ）双染色，荧光显微镜观察，鉴别了豚鼠耳蜗单个外毛细胞的活性。在激发光下染色后的活细胞显绿色，失活细胞核呈红色。在室温下计数５只豚鼠（１０侧听泡）在断头１、２、３、５和７ｈ后的单离细胞平均存活百分率分别为８５．０％、７８．０％、７０．０％、２３．５％和０。本方法为一种鉴别细胞活性的客观可靠的方法。     

庆大霉素对豚鼠内淋巴囊和血管纹Na~＋－K~＋－ATP酶活性的影响

应用酶细胞化学技术和计算机图像分析，对豚鼠连续肌注庆大霉素（１００ｍｇ·ｋｇ－１／ｄ）２～１５ｄ后内淋巴囊上皮细胞和血管纹边缘细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性变化进行了定量观察。结果发现，与正常对照组相比，用药２ｄ后两类细胞的Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性反应产物没有明显变化，但连续用药５ｄ后二者的产物均明显减少，１０ｄ和１５ｄ仍呈继续轻微减少趋势。表明庆大霉素既可抑制血管纹边缘细胞Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性，降低其分泌功能；同时也能抑制内淋巴囊上皮细胞的该酶活性，减弱其液体重吸收功能。     

三种神经活性物质对离体豚鼠耳蜗外毛细胞内游离钙浓度的影响

目的研究神经活性物质对耳蜗外毛细胞内游离钙离子浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）的影响。方法应用显微荧光测钙技术检测豚鼠耳蜗离体外毛细胞［Ｃａ２＋］ｉ在加入乙酰胆碱、ＡＴＰ、碳酰胆碱之后的变化。结果在含钙的细胞外液中，乙酰胆碱、ＡＴＰ和碳酰胆碱均可引起［Ｃａ２＋］ｉ升高，幅度分别为（０．７４±０．１２９）μｍｏｌ／Ｌ（乙酰胆碱），（０．６５±０．１１）μｍｏｌ／Ｌ（ＡＴＰ），（１．１６±０．２７）μｍｏｌ／Ｌ（碳酰胆碱）；而细胞外液中无钙时，ＡＴＰ仅可引起缓慢而小幅度（０．１８±０．０５）μｍｏｌ／Ｌ的［Ｃａ２＋］ｉ升高。结论同属胆碱能毒蕈碱受体激动剂的乙酰胆碱和碳酰胆碱可作用于受体，打开离子通道，使细胞外Ｃａ２＋进入细胞内，导致外毛细胞［Ｃａ２＋］ｉ升高；细胞外液有Ｃａ２＋时，ＡＴＰ引致的［Ｃａ２＋］ｉ升高，可能是因为引发了内向的Ｃａ２＋流，细胞外液无Ｃａ２＋时，［Ｃａ２＋］ｉ升高则可能源于细胞内钙库的释放。     

豚鼠上橄榄外侧核γ－氨基丁酸阳性神经元向耳蜗和耳蜗核的分支投射

为探讨豚鼠上橄榄外侧核内γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）阳性神经元是否同时支配同侧Ｃｏｒｔｉ器和耳蜗核，采用逆行追踪的方法，将Ｆａｓｔｂｌｕｅ（ＦＢ）和Ｄｉａｍｉｄｉｎｅ黄（ＤＹ）两种不同性质的荧光素分别注入耳蜗鼓阶及同侧耳蜗核，观察上橄榄外侧核内ＧＡＢＡ阳性神经元的分支投射。结果发现，同侧上橄榄外侧核内ＦＢ单标细胞占标记细胞的８０．８％；ＤＹ单标细胞占１２．４％；ＦＢ－ＤＹ双标细胞占６％；ＧＡＢＡ、ＦＢ、ＤＹ三标阳性细胞占０．７％。对侧上橄榄外侧核内ＦＢ、ＤＹ单标细胞均较少，未见双标细胞。结果表明，豚鼠上橄榄外侧核内有ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元向同侧的Ｃｏｒｔｉ器和耳蜗核并行投射，但数量较少，支配Ｃｏｒｔｉ器和耳蜗核的传出神经纤维，分别来自不同的听觉传出神经核团。     

GDNF转基因表达对庆大霉素所致的耳蜗和前庭毒性的影响

神经胶质细胞源性神经营养因子（ｇｌｉａ ｃｅｌｌ ｌｉｎｅ－ｄｅｒｉｖｅｄ ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃ ｆａｃｔｏｒ ＧＤＮＦ）是转化生长因子－β超家族的一个远亲成员,在发育和成熟的耳蜗中均起潜在作用。为了解ＧＤＮＦ转基因表达对庆大霉素所致的耳蜗和前庭毒性的影响,该文作者将３２只豚鼠分为６组：（１）人工外淋巴组（４只）;（２）Ａｄ．ＬａｃＺ组（４只）;（３）庆大霉素组（４只）;（４）Ａｄ．ＬａｃＺ＋庆大霉素组（６只）;（５）Ａｄ．ＧＤＮＦ＋庆大霉素组（救援组,８只）;（６）应用庆大霉素后７天＋Ａｄ．Ｇ…     

ATP对噪声暴露豚鼠耳蜗一氧化氮合酶活性的影响

目的 探讨ＡＴＰ对噪声暴露听力损伤的保护八月作用及对耳蜗一氧化氮合酶活性的影响。方法 制备豚鼠稳态噪声暴露听力损伤模型，应用ＮＡＤＰＨ－ｄ酶组织化学及免疫组化技术ＡＢＣ法，结合听性脑干反应（ＡＢＲ）阈值检测，研究ＡＴＰ对噪声暴露致聋豚鼠耳蜗一氧化氮合酶（ＮＯＳ）及诱生型一氧化氮合酶（ｉＮＯＳ）活性的影响。结果 ＡＴＰ对噪声暴露豚鼠的ＡＢＲ阈移有明显的抑制作用；ＡＴＰ对噪声暴露豚鼠耳蜗ＮＯＳ、ｉＮＯ     

自由基清除剂二甲基亚砜对庆大霉素耳蜗毒性的影响

观察豚鼠同时注射二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）与庆大霉素（ＧＭ）及单独注射ＧＭ等几组动物后，耳蜗听功能、扫描电镜所见及耳蜗和血清中脂质过氧化物（ＬＰＯ）丙二醛（ＭＤＡ）含量的变化。结果表明ＧＭ＋ＤＭＳＯ组动物ＡＰ阈值较ＧＭ组明显降低，ＡＰ（Ｎ＿１）潜伏期ＧＭ组较ＧＭ＋ＤＭＳＯ组显著延长，耳蜗扫描电镜显示ＧＭ＋ＤＭＳＯ组毛细胞受损程度较ＧＭ组明显为轻。耳蜗中ＭＤＡ检测表明，ＧＭ组耳蜗中ＭＤＡ含量较ＧＭ＋ＤＭＳＯ组明显增高（Ｐ＜０．０１）。提示自由基引起耳蜗ＬＰＯ可能是ＧＭ耳毒性机制之一；ＤＭＳＯ可减轻ＧＭ的耳毒性。     

肾上腺素α2受体在豚鼠血管纹的定位定量研究

用竞争蛋白结合分析法及放射自显影法对豚鼠血管纹肾上腺素α２受体进行了定性定位定量测定，结果显示：加入去甲肾上腺素组（Ａ组）中ｃＡＭＰ量仅为１．３８９±０．８５２ｐｍｏｌ／４０μｌ，较对照组（Ｃ组）７．７００８±０．８６７ｐｍｏｌ／４０μ显著低（Ｐ＜０．０５）；先加入育亨宾再加去甲肾上腺素组（Ｂ组）中ｃＡＭＰ量又复回升达６．９５４±０．９６２（Ｐ＜０．０５），但仍较对照组低（Ｐ＜０．０５）。在经３Ｈ－育亨宾孵育的切片中，血管纹中下部银粒数为９６±１４个／视野，呈条带状分布，与血管纹走向一致，血管纹之外的组织银粒散在均匀，银粒数为２８±７／视野。经细胞立体计量法计算，血管纹中α２受体的含量大约为１．２５×１０９个／ｍｍ３。作者认为，豚鼠血管纹边缘细胞存在α２受体，并推想该受体是通过膜受体－ｃＡＭＰ途径影响细胞膜上Ｎａ＋－Ｋ＋－ＡＴＰ酶的活性，从而参与内淋巴的平衡。     

噪声对豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶阳性神经元及其基因表达的影响

为探讨豚鼠耳蜗核一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｎｔｈａｓｅ，ＮＯＳ）神经元在白噪声损伤过程中可能的作用，采用硫辛酰胺脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学方法及半定量多聚酶链反应（ＰＣＲ）技术，研究白噪声暴露后豚鼠耳蜗核ＮＯＳ神经元及ＮＯＳｍＲＮＡ含量的变化以及与听阈的关系。结果表明，噪声暴露后耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元的数量及染色强度明显增加，２周达高峰，３～４周持续高表达，５周有所恢复，但仍高于正常水平。耳蜗核ＮＯＳｍＲＮＡ含量的变化规律与形态学观察结果一致，２周组ＮＯＳｍＲＮＡ含量最高，是正常的５．０２倍。噪声暴露后ＡＢＲ阈移与耳蜗核ＮＯＳｍＲＮＡ含量呈正相关（ｒ＝０．９６５５，Ｐ＜０．０１）。提示耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元可能参与了耳蜗神经损伤修复的调节，ＮＯＳ基因的高表达是噪声性聋发病机制中不可忽视的重要因素之一。     

耳蜗电极的制作

要引导耳蜗电图、必须安置好耳蜗电极。而成品的耳蜗电极、常常不能使操作者快速有效地安置，这与电极盘较大、与电极盘相连的导线太僵硬有关。因此，设计了能推广应用的自制耳蜗电极。现介绍如下：１－修剪一宽０－５ｍｍ，直径约３ｍｍ的银盘一片，其周围上带一厚０－５ｍｍ，长约１ｃｍ的银线并与银盘成８０度锐角；２－取一根长２０ｃｍ，直径０－１ｍｍ的银丝线或铜丝线（后者普通电线内均有），两端分别焊在上述银线的末端及插头上３－用电解法氯化电极银盘，用指甲油绝缘银线或铜丝线；４－从记录电极上并联引出一长３０ｃｍ，直径１…     

在体耳蜗毛细胞电反应记录

为了解耳蜗内、外毛细胞基本电生理特性，建立了经耳蜗外侧壁入路在体记录耳蜗毛细胞电反应的方法，１２０只豚鼠（１２０耳）中成功记录到１８个细胞的胞内反应，对耳蜗第三回内毛细胞（ＩＨＣ）、外毛细胞（ＯＨＣ）的电生理特性进行了观察。ＩＨＣ、ＯＨＣ的静息膜电位均值分别为－３５±８．８３ｍＶ（ｎ＝３）和－７１±７．４４ｍＶ（ｎ＝７）；支持细胞负值更大。毛细胞感受器电位有交流和直流两种成分，交流反应峰－峰均值ＩＨＣ和ＯＨＣ分别为１２．４ｍＶ和５．６ｍＶ，直流成分ＩＨＣ平均为２．１６ｍＶ，ＯＨＣ平均为１．９９ｍＶ。胞内记录失败的常见原因为微电极质量较差和耳蜗外侧壁手术等造成耳蜗功能损伤。     

卡因酸耳蜗毒性的电生理学研究

目的：观察谷氨酸类受体激动剂卡因酸（ＫＡ）对豚鼠耳蜗的毒性作用。方法：健康杂色豚鼠８只，每只动物经圆膜给予６０ｍＭ ＫＡ１μｌ，于用药前及用药后１２ｈ分别检测听神经复合动作电位（ＣＡＰ），耳蜗微音电位（ＣＭ）和畸变产物耳声发射（ＤＰＯＡＥ）之２ｆ２－ｆ２。结果：用药后ＣＡＰ明显下降或消失（Ｐ〈０．００１），而ＣＭ和ＤＰＯＡＥ无明显变化。结论：ＫＡ对初级听觉传入神经末梢具有选择性毒性作用。     

双醋酸荧光素—碘化丙啶双染色法鉴别豚鼠外毛细胞活性

为提供一种准确判断单离细胞活性的方法，采用双醋酸荧光素（ＦＤＡ）－碘化丙啶（ＰＩ）双染色，荧光显微镜观察，鉴别了豚鼠耳蜗单个外毛细胞的活性。在激发光一染色后的活细胞显绿色，失活细胞核呈红色。在室浊下计数 ５只豚鼠（１０侧听泡）在断头１、２、３、５和７ｈ后的单离细胞平均存活百分率分别为８５．０％、７８．０％、７０．０％、２３．５％和０。本方法为一种鉴别细胞活性的客观可靠的方法。     

耳蜗内电位对听神经动作电位的影响

目的旨在探讨听神经动作电位（ＡＰ）与耳蜗内电位（ＥＰ）之间是否存在着一定的对应的关系。方法经豚鼠颈静脉注入速尿与小牛血清白蛋白混合液，同步记录ＥＰ和ＡＰ。ＥＰ由耳蜗基底周引出，ＡＰ以１０５ｄＢｐｅＳＰＬ短声诱发，面神经管电极记录。对ＡＰ百分比振幅与ＥＰ幅值进行相关性分析。结果ＡＰ百分比振幅与ＥＰ幅值呈高度的正相关（ｒ＞０．９），两者为明确的“Ｓ”型对应关系。当ＥＰ值在６０～７０ｍＶ以上时，ＡＰ振幅能保持在８０％以上；当ＥＰ值从６０ｍＶ降至４０ｍＶ，或从３０ｍＶ上升至７０ｍＶ时，ＡＰ振幅变化急剧；当ＥＰ值低于３０ｍＶ时，ＡＰ则趋于消失。结论提示当ＥＰ受有害因素影响而不低于６０～７０ｍＶ时，耳蜗仍能保持一定程度的生理活性