外源性褪黑素对成年高血压大鼠神经发生的影响及其与学习记忆的关系

目的探讨褪黑素（MT）对成年高血压大鼠脑神经干细胞的影响及其与学习记忆的关系。方法将30只成年健康雄性wistar大鼠随机分为假手术组、肾血管性高血压组及褪黑素治疗组，用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力，并用免疫组织化学方法观察侧脑室室管膜下区（SVZ）和齿状回颗粒下区（SGZ）的BrdU阳性细胞数变化。结果高血压大鼠SVZ和SGZ的BrdU细胞数及学习记忆能力均比假手术组明显下降（P〈0．01），用MT治疗可使上述指标有所逆转至假手术组水平。结论褪黑素可能具有促进高血压大鼠神经干细胞增殖和提高大鼠学习记忆能力的作用。     

1型糖尿病脑病大鼠空间学习记忆与海马齿状回神经干细胞增殖的观察

目的揭示1型糖尿病继发性脑病变(糖尿病脑病)的发生与海马齿状回颗粒下区(SGZ)神经干细胞增殖之间的关系。方法应用链脲佐菌素(溶解于柠檬酸缓冲液中)腹腔注射,将成年雄性Wistar大鼠建立成1型糖尿病脑病模型;将用柠檬酸缓冲液腹腔注射的大鼠或正常大鼠分别作为载体模型组或正常对照组。在建立模型成功后的60d,用Morris水迷宫和5-溴脱氧尿嘧啶(BrdU,一种神经干细胞合成DNA的标记物)免疫组化方法,观察各组大鼠空间学习记忆能力以及SGZ神经干细胞(BrdU阳性细胞)的变化。结果1型糖尿病脑病模型大鼠的逃避潜伏期和游泳距离均较载体模型组或正常对照组大鼠明显延长(P<0.01);而且该脑病组大鼠SGZ的BrdU阳性细胞数也明显低于载体模型组或正常对照组大鼠(P<0.01)。结论个体内长期缺乏胰岛素可导致SGZ神经干细胞增殖出现障碍,从而引发空间学习记忆能力下降,这可能是诱发1型糖尿病脑病的一个因素。     

液化石油气中毒对小鼠齿状回及室管膜下区神经发生的影响

目的:探讨液化石油气急性中毒对小鼠海马齿状回及侧脑室室管膜下区神经发生的影响。方法:选择健康成年昆明小鼠随机分三组,分别为对照组,液化石油气(LPG)高、低剂量中毒组。使用密闭中毒箱行染毒实验。用Morris水迷宫训练测试其空间学习与记忆能力;腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)后通过免疫组织化学方法来显示BrdU阳性细胞。结果:两个中毒组动物的学习记忆能力均弱于对照组(P<0.01),齿状回和室管膜下区内BrdU阳性细胞数目也低于对照组(P<0.01)。结论:液化石油气急性中毒通过抑制齿状回和室管膜下区的神经发生,影响小鼠的学习记忆能力和脑损伤后修复。     

去松果体后成年大鼠学习记忆及侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的变化

目的观察松果体切除对学习记忆及侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法将30只成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为非手术、假手术及去松果体组,每组大鼠10只。在建立动物模型16d后,连续5d测定大鼠在Morris水迷宫的学习记忆能力,继之用免疫组织化学方法观察SVZ的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的变化。结果去松果体组大鼠在Morris水迷宫泳游的逃避潜伏期及在原平台象限游泳距离的百分比均较非手术组或假手术组大鼠的明显延长或减少(P<0.01)。去松果体大鼠SVZ的PCNA阳性细胞数也明显低于非手术组或假手术组大鼠(P<0.01)。结论本研究首次观察到,去松果体使体内褪黑素减少,可导致学习记忆功能及SVZ神经干细胞增殖能力出现相似的明显下降趋势,说明褪黑素是确保学习记忆及神经发生得以正常进行的重要激素之一;提示褪黑素可能直接通过作用于神经干细胞上的相应受体以及间接通过提高基底前脑胆碱能系统功能来促进神经干细胞增殖,进而提高嗅觉记忆功能。     

去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下层神经干细胞增殖的影响

目的:研究去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subependymal ventricular zone,SVZ)干细胞增殖的影响。方法:成年大鼠随机分为正常组和模型组,通过免疫组织化学的方法检测去大脑皮质血管后成年大鼠侧脑室前角、中央部、下角室管膜下BrdU标记细胞。结果:去皮质血管后大鼠侧脑室各部SVZ的BrdU阳性细胞的数目明显增多,去大脑皮质血管15d、30d大鼠侧脑室各部外侧壁和前角上壁SVZ的BrdU阳性细胞核计数均明显多于正常组。结论:去大脑皮质血管损伤可诱导大鼠脑内侧脑室室管膜下细胞的增殖。     

~(60)Co-γ射线照射对小鼠SVZ神经干细胞增殖的影响

目的:探讨60Co-γ射线照射对成体小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:28只昆明小鼠随机分成4组,每组7只,分别以0 Gy、5 Gy(小剂量)、15 Gy(中剂量)、30 Gy(大剂量)剂量进行照射,于照射后1周观察侧脑室室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)阳性细胞形态和数目。结果:照射后1周,各照射组SVZ的BrdU阳性细胞形态与对照组无差别,呈圆形、椭圆形以及梭形等;15 Gy、30 Gy照射组SVZ的BrdU阳性细胞数明显降低(P<0.01),5 Gy照射组SVZ的BrdU阳性细胞数无差别(P>0.05)。结论:大中剂量60Co-γ照射会抑制SVZ神经干细胞的增殖分裂能力。     

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠室管膜下区神经干细胞的作用

目的：探讨人参皂苷Rg1促进帕金森病模型小鼠原住神经干细胞增殖分化的作用。方法：C57BL／6小鼠随机分成正常组、模型组和人参皂苷Rg1治疗组。采用MPTP腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,利用免疫组化单标和双标技术观察人参皂苷Rg1对小鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖分化的影响。结果：人参皂苷Rg1治疗5d,侧脑室室管膜下区的5-溴脱氧尿苷（BrdU）、神经上皮干细胞蛋白（Nestin）阳性细胞较模型组明显增多,并可见大量从背外侧角沿胼胝体排列的BrdU、Nestin阳性细胞;人参皂苷Rg1治疗20d,BrdU／Nestin双标细胞的数量较模型组明显增多。结论：人参皂苷Rg1可促进帕金森病模型小鼠脑内神经干细胞的增殖和迁移。     

NDRG2对成年大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的影响

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠20只,随机分为对照组(n=10)、实验组(n=10)两组。实验组给予侧脑室注射过表达NDRG2的腺病毒,对照组给予侧脑室注射腺病毒空载体。采用Brd U免疫荧光染色法检测细胞增殖情况,Tunel染色检测细胞凋亡情况。结果:Brd U染色结果显示:实验组大鼠侧脑室室管膜下区Brd U阳性细胞显著少于对照组(P0.05);Tunel染色提示:两组大鼠侧脑室室管膜下区凋亡的细胞数未见明显差异(P0.05)。结论:上调NDRG2在成年大鼠脑内的表达,会抑制其侧脑室室管膜下区神经干细胞的增殖,但不影响其细胞的存活。     

Ⅰ型糖尿病脑病模型大鼠空间学习记忆以及海马齿状回细胞凋亡和Bax与Bcl-2蛋白表达的变化

目的探讨1型糖尿病脑病海马齿状回细胞凋亡、Bax与Bcl-2蛋白表达、空间学习记忆之间的相互关系。方法通过腹腔注射链脲佐菌素(溶于柠檬酸缓冲液)建立1型糖尿病脑病模型大鼠,通过腹腔注射柠檬酸缓冲液建立载体模型大鼠。应用Morris水迷宫、TUNEL技术、Bax与Bcl-2免疫组化方法,观察各组大鼠海马齿状回颗粒下区(SGZ)、颗粒细胞层(GCL)的Bax、Bcl-2、TUNEL阳性细胞和空间学习记忆的变化。结果糖尿病脑病组大鼠的SGZ、GCL的Bax阳性细胞数、TUNEL阳性细胞数、水迷宫的逃避潜伏期和游泳距离均明显高于载体模型组或正常对照组大鼠的对应指标(P<0.01);而糖尿病脑病组大鼠的Bcl-2阳性细胞数则明显低于载体模型组或正常对照组大鼠(P<0.01),但以上各组3类阳性细胞的形态和分布却均无明显差异。结论体内长期缺乏胰岛素可打破凋亡基因Bax与抗凋亡基因Bcl-2的蛋白表达水平之间原有的正常动态平衡状态,致使海马齿状回的细胞倾向于多发生细胞凋亡事件,这可能是引发1型糖尿病脑病神经发生障碍及空间学习记忆异常的一个因素。     

脑缺血大鼠大脑皮层和室管膜下区细胞增殖及巢蛋白表达

目的:探讨脑缺血损伤对大鼠脑皮层和室管膜下区细胞增殖及巢蛋白表达的影响。方法:采用大鼠局灶性脑缺血模型,观察大脑皮层和室管膜下区的细胞增殖及巢蛋白阳性细胞表达。结果:脑缺血大鼠室管膜下区细胞增殖明显增加,巢蛋白阳性细胞表达也显著增加;大脑皮层细胞增殖无明显改变,但巢蛋白阳性细胞表达则明显增加。结论:脑缺血损伤可激活室管膜下区与大脑皮层神经干细胞。提示脑缺血大鼠室管膜下区与大脑皮层的神经干细胞可能参与脑缺血损伤的神经修复过程。     

胰岛素与尼莫地平对大鼠基底前脑胆碱能神经元及空间学习记忆的影响

目的探讨胰岛素与尼莫地平对基底前脑胆碱能神经元与学习记忆在1型糖尿病脑病发生中的影响。方法将成年雄性Wistar大鼠随机分成糖尿病组、干预组、载体组及正常对照组。用链脲佐菌素成功建立成1型糖尿病模型12周后,对干预组大鼠每日皮下注射长效胰岛素(3 IU)、腹腔注射尼莫地平(20 mg/kg),连续用药6周,在相同条件下对载体组大鼠注射等体积的无药物液体,但对糖尿病组或正常对照组大鼠未进行任何处理。应用Morris水迷宫及胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫组化方法,分别测定各组大鼠的空间学习记忆能力及基底前脑胆碱能神经元的变化。结果糖尿病组大鼠内侧隔核、斜角带核垂直支、斜角带核水平支的ChAT阳性神经元数均明显减少(P<0.05),空间学习记忆能力也明显下降(P<0.05);干预组大鼠以上三个核团的ChAT阳性神经元数与学习记忆能力均明显大于糖尿病组大鼠(P<0.05),但干预组的各项指标仍然明显低于载体组大鼠或正常对照组大鼠(P<0.05)。结论在糖尿病的长期自然发展过程中,若不进行治疗则可累及到基底前脑胆碱能神经元,导致学习记忆障碍,这可能是引发1型糖尿病脑病的一个负性因素;此时联合应用胰岛素与尼莫地平仍可有效遏制该脑病向纵深发展的恶性势头。     

APP/PS1转基因小鼠发育过程中神经细胞增殖变化

目的:探讨β-淀粉样前体蛋白基因(β-amyloid precusor protein,APP)和突变早老素1基因(presinilin,PS1)转基因小鼠(APP/PS1)发育过程中齿状回神经细胞增殖规律。方法:取不同发育时间(P14、P30、P180、P360)APP/PS1转基因模型鼠与同时间点对照鼠,用二等分Y型迷宫箱测试小鼠学习记忆能力,BrdU免疫细胞化学观察齿状回内神经细胞增殖变化。结果:随着小鼠的生长发育,BrdU阳性细胞密度逐渐降低,在P360时间点,模型组齿状回BrdU阳性细胞密度比对照组低(P<0.05);其空间识别以及记忆能力明显低于对照组(P<0.01)。结论:发育中的APP/PS1转基因小鼠齿状回内神经细胞增殖减少可能与阿尔茨海默病的学习、记忆能力下降有关。     

NSCs移植对AD鼠基底前脑胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

目的:探讨神经干细胞(NSCs)移植对侧脑室注射192-IgG-saporin致老年性痴呆(AD)动物模型的治疗作用。方法:24只SD大鼠随机分为正常组,模型组和移植组,每组8只。左侧侧脑室注射192-IgG-saporin5μ(l0.5μg/μl),建立AD动物模型,基底前脑行NSCs移植,Y-迷宫行为检测,NADPH-d组织化学法染色,结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑NOS阳性神经元数目和形态学参数的变化。结果:侧脑室注射192-IgG-saporin1个月,损伤侧基底前脑内侧隔核(MS)和斜角带垂直支(VDB)一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数明显减少,分别减少到正常组的22.43%和28.36%(与正常组相比P<0.01)。移植组NOS阳性神经元数恢复到正常组的70.22%和74.88%(与模型组相比P<0.01)。细胞形态学参数提示,移植组NOS阳性神经元中含有大小不等的未成熟细胞。大鼠的学习记忆能力与基底前脑NOS阳性细胞数呈正相关。结论:NSCs移植对注射192-IgG-saporin致AD鼠基底前脑胆碱能神经元有明显补充和保护作用,可改善大鼠的学习记忆能力。     

局灶性脑缺血后老年大鼠室管膜下区和颗粒下层细胞增殖与分化的实验研究

目的观察老年大鼠局灶性脑缺血后室管膜下区（SVZ）和颗粒下层（SGZ）神经干细胞的增殖与分化.方法取老年大鼠制作大脑中动脉梗塞模型.用5-溴脱氧尿核苷（BrdU）脉冲标记结合免疫组织化学单标记技术,观察正常组、假手术组、脑缺血后3、7、14、21、28 d组SVZ和SGZ区BrdU阳性细胞的变化;用BrdU累积标记结合免疫组织化学双标技术,观察脑缺血14 d后SVZ和SGZ区BrdU/NeuN和BrdU/GFAP双标阳性细胞的数量.结果在正常组、假手术组及各脑缺血组大鼠的双侧SVZ和SGZ均可观察到BrdU阳性细胞.与正常组和假手术组相比,脑缺血后SVZ和SGZ区BrdU阳性细胞明显增加.缺血组SVZ区BrdU阳性细胞在脑缺血后7 d时达到高峰,28 d时仍高于正常水平;SGZ区BrdU阳性细胞在脑缺血后14 d时达到高峰,28 d时仍高于正常水平.通过BrdU累积标记和免疫组织化学双标发现：脑缺血14 d后,老年大鼠SVZ区有部分细胞显示BrdU/NeuN（0.98%）或BrdU/GFAP（12.56%）双标阳性,而SGZ区未见双标细胞.结论局灶性脑缺血可激活老年大鼠室管膜下区和颗粒下层的神经干细胞明显增殖,并且室管膜下区有部分增殖细胞可分化为神经元或神经胶质.     

BDNF和神经干细胞联用对老年痴呆鼠基底前脑 胆碱能神经元和学习记忆能力的影响

探讨脑源性神经营养因子(BDNF)和神经干细胞(NSCs)联合应用对老年痴呆大鼠基底前脑胆碱能神经元及大鼠学习记忆能力的影响。利用无血清培养技术获得新生SD鼠的海马NSCs,行BrdU标记。切断SD大鼠左侧穹隆海马伞,基底前脑注射NSCs,同时侧脑室注射BDNF,2周后行nestin和BrdU/NF、BrdU/GFAP免疫荧光双标染色,4周后行Y迷宫测试,免疫组化结合图像分析技术观察各组大鼠基底前脑神经营养因子受体(NGFR)阳性神经元数目变化。结果发现,移植后NSCs能够在宿主体内存活且分化成神经元和胶质细胞;免疫组化结果显示损伤组大鼠胆碱能神经元数在内侧隔阂(MS)和斜角带(VDB)分别减少64.3%和49.3%,较正常组明显下降(P<0.01);移植组神经元数下降34.1%和27.6%较损伤组有改善(P<0.05),但与正常组比较有显著性差异(P<0.05);联合组神经元数减少15.1%和18.6%,与正常组无显著性差异(P>0.05)。Y迷宫测试结果显示,大鼠的学习记忆能力与基底前脑NGFR阳性细胞数呈正相关。提示,BDNF和NSCs移植的联用较单独使用NSCs或BDNF更好地改善老年痴呆大鼠的学习记忆能力。     

NDRG2在脑缺血再灌注大鼠室管膜下区的表达研究

目的:探讨ndrg2基因在大鼠脑缺血再灌注后于侧脑室室管膜下区的表达,并探索其规律。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠,利用大脑中动脉栓塞法造成短暂性脑缺血(MCAO),缺血后2 h再灌注,制备损伤模型。分为假手术组(n=6)、缺血后4 h(n=8)、12 h(n=8)和24 h(n=8)四组。假手术组除不用线栓阻塞大脑中动脉外,其余与缺血组相同。采用原位杂交和Western blot方法观察,MCAO后不同时间点NDRG2在大鼠脑内的表达特点。结果:原位杂交结果显示:NDRG2 mRNA集中表达于侧脑室室管膜下区,阳性细胞呈蓝紫色表达于细胞质,细胞核未见表达。脑缺血再灌注后NDRG2阳性细胞数随时间延长而增多,各缺血组(4 h、12 h和24 h)与假手术组相比均具有统计学差异(P<0.05),其中缺血24 h组的阳性细胞数最多;Western blot结果与原位杂交结果一致:各缺血组NDRG2蛋白表达水平随着缺血再灌注时间而增加,与假手术组相比具有统计学差异(P<0.05)。结论:NDRG2集中表达于大鼠侧脑室室管膜下区;脑缺血再灌注可以诱导该区内NDRG2表达的明显增高。     

全脑照射后对小鼠血脑屏障通透性和室管膜下区细胞增殖的影响

目的:探讨60Co-γ射线(Gy)全脑照射后对小鼠血脑屏障通透性和室管膜下区神经干细胞增殖的影响。方法:112只健康小鼠随机分成0 Gy组(对照组),5 Gy照射组(小剂量照射组),15 Gy照射组(中等剂量照射组)和30 Gy照射组(大剂量照射组),每组28只。各组随机取出7只分别于照射后1周和4周测定各组小鼠脑组织伊文思蓝的含量,7只观察室管膜下区的BrdU+细胞形态和数量。结果:(1)照射后1周,15 Gy组和30Gy组脑组织伊文思蓝含量明显升高(P<0.05),室管膜下区的BrdU+细胞数明显降低(P<0.05);(2)照射后4周,15 Gy剂量照射组脑组织伊文思蓝含量和室管膜下区的BrdU+细胞数均恢复到对照组水平(P>0.05),而30Gy剂量照射组脑组织伊文思蓝含量仍明显升高(P<0.05),BrdU+细胞数也未见恢复(P<0.05)。结论:全脑照射后血脑屏障破坏可能对室管膜下区的细胞增殖有进一步抑制作用。     

慢性复合应激对大鼠学习和记忆功能及齿状回神经前体细胞增殖的影响

为研究慢性复合应激对成年雄性大鼠学习和记忆功能及齿状回(DG)神经前体细胞增殖的影响,将成年雄性Wistar大鼠随机分为对照组和应激组,应激组动物每天交替暴露于复合应激原中,持续6周。应激结束后,用Morris水迷宫测试大鼠空间学习记忆成绩。同时,采用BrdU标记分裂细胞方法,观察比较各组大鼠DG内BrdU阳性细胞数的变化和差异。结果显示:应激组动物的学习与记忆成绩均优于对照组(P<0.05);与对照组相比,应激组大鼠DG内BrdU阳性细胞数量显著增加(P<0.05)。上述结果表明:慢性复合应激导致大鼠的学习与记忆能力加强,DG内BrdU阳性细胞增多,提示神经细胞数量增加可能是应激所引起的大鼠学习记忆能力增强的原因之一。     

低氧诱导因子-1α基因促进大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞的增殖和分化

目的观察低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因对大鼠局灶性脑缺血后内源性神经干细胞(NSCs)增殖和分化的影响,并探讨HIF-1α对内源性NSCs增殖分化的作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,分为假手术组(sham)、生理盐水组(NS)、腺病毒空载体组(AD)及携带HIF-1α基因的重组腺病毒组(Ad-HIF-1α)。分别将NS、AD和Ad-HIF-lα注射到模型鼠缺血侧侧脑室,观察4组大鼠神经功能缺失评分;免疫组织化学法观察4组大鼠局灶性脑缺血后缺血灶周围促红细胞生成素(EPO)的表达;免疫荧光法计数再灌注不同时间点室管膜下区(SVZ)BrdU阳性细胞(3d、7d、14d、21d、28d)和皮层BrdU/NF200、BrdU/GFAP(28d)阳性双标细胞。结果Ad-HIF-lα组神经功能缺失评分与AD组和NS组比较,结果有统计学差异;EPO表达增强;Ad-HIF-lα组BrdU标记细胞数明显增加;新生细胞分化结果显示,28d时Ad-HIF-lα组BrdU/NF200(47.74±13.52)%、BrdU/GFAP(67.83±20.75)%,与其他组相比均有显著性差异(P<0.05)。结论低氧诱导因子-1α基因可促进大鼠局灶性脑缺血后内源性NSCs的增殖与分化,从而促进神经功能的恢复。     

神经发生对小鼠学习记忆能力的影响

本研究探讨神经发生对学习记忆能力的影响。选择健康成年昆明小鼠随机分7组,分别为生理盐水对照组,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)高、中、低剂量组,甲氨喋呤(MTX)高、中、低剂量组。使用脑立体定位仪行侧脑室埋管手术及侧脑室微量注射。用Morris水迷宫训练测试其空间学习与记忆能力;腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)后通过免疫组织化学方法来显示Br-dU阳性细胞。结果表明,aFGF各剂量组学习记忆能力均强于生理盐水对照组;MTX高剂量组学习记忆能力显著低于生理盐水对照组。免疫组织化学结果显示aFGF各剂量组齿状回内BrdU阳性细胞数目显著高于对照组;而MTX高剂量组齿状回BrdU阳性细胞较之显著减少。结果提示,aFGF和MTX可能通过促进或抑制齿状回的神经发生,从而影响小鼠的学习与记忆能力。