CD161~+调节性T细胞降低风湿性心脏病大鼠瓣膜损伤的作用及机制

目的探讨CD161~+调节性T细胞(Treg)降低风湿性心脏病大鼠瓣膜损伤的作用及机制。方法流式细胞术分选CD161~-和CD161~+ Treg并进行培养, ELISA检测Treg培养上清液白细胞介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的含量; A组溶血性链球菌悬液与Freund完全佐剂混合后建立风湿性心脏病大鼠模型,分为对照组、 CD161~- Treg组、 CD161~+ Treg组。处理1周后,收集大鼠的心脏血和二尖瓣瓣膜。流式细胞术检测心脏血单个核细胞滤泡辅助性T(Tfh)细胞、 B细胞和浆细胞比例, HE染色检测瓣膜组织病理变化,免疫组织化学染色法检测瓣膜组织中B细胞和浆细胞数目, ELISA检测血清IL-21水平。结果 CD161~+ Treg分泌IL-10和TGF-β的能力显著高于CD161~-Treg。与注射CD161~- Treg的大鼠相比,注射CD161~+Treg能够显著降低瓣膜组织损伤,减少瓣膜组织B细胞和浆细胞的比例;且CD161~+Treg注射能够减少大鼠血液中Tfh细胞、 B细胞和浆细胞的比例,血清中IL-21含量降低。结论 CD161~+Treg通过抑制Tfh细胞和B细胞增殖分化,降低风湿性心脏病的瓣膜损伤。     

HMGB1通过TLR4促进心肌缺血损伤并调节脾脏CD4~+、CD8~+T细胞和Th17细胞比例

目的探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)通过Toll样受体4 (TLR4)调控心肌缺血损伤及对脾脏组织CD4~+T细胞、CD8~+T细胞及Th17细胞亚群的影响。方法 C57BL/6野生型小鼠(WT)和TLR4基因敲除(TLR4-/-)小鼠各30只,随机分为对照组、异丙肾上腺素诱导心肌缺血(ISO)组和ISO联合重组HMGB1(r HMGB1)组。采用心脏超声检查小鼠心功能,应用HE染色和天狼星红染色观察心肌组织病理学变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌细胞凋亡指数,流式细胞术检测脾脏组织中CD4~+T细胞、CD8~+T细胞和Th17细胞亚群的比例。结果与对照组相比,ISO组小鼠诱发心脏功能损害、心肌组织坏死和纤维化、心肌细胞凋亡,脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例升高;与ISO组小鼠相比,ISO联合r HMGB1组心脏功能损害、心肌组织坏死和纤维化、心肌细胞凋亡状况均加重,脾脏组织中CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例更高;与ISO联合r HMGB1组野生型小鼠相比,ISO联合r HMGB1组TLR4-/-小鼠心脏功能损害、心肌组织坏死和纤维化和心肌细胞凋亡减轻,脾脏组织CD4~+T淋巴细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例显著降低。结论 HMGB1通过TLR4诱发心肌缺血时心肌组织损伤,并上调脾脏组织CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+T细胞比值和Th17细胞比例,从而可能促进心肌组织炎症损伤。     

转录因子HELIOS在系统性红斑狼疮患者外周血调节性T细胞亚群中表达格局分析

Treg细胞在系统性红斑狼疮(SLE)发生发展中具有重要作用,而转录因子HELIOS在Treg细胞发挥免疫抑制功能方面发挥关键作用。本研究应用流式细胞术分析HELIOS在SLE患者外周血中CD4~+Treg细胞亚群中的表达格局,有助于揭示SLE的发病机制。结果显示,与健康对照相比,SLE患者外周血CD4~+T细胞中CD25~+Foxp3~+Treg细胞比例显著下降;在CD4~+CD25~+T细胞中,表型为CD39-CD45RA~+Treg细胞(幼稚型Treg细胞)比例显著升高,表型为CD39~+CD45RA-Treg细胞(效应型Treg细胞)比例显著下降,而表型为CD39-CD45RA-T细胞(非Treg细胞)比例不变;在Treg细胞中发挥重要免疫调节作用的转录因子HELIOS,在幼稚型Treg和效应型Treg细胞中比例均显著下降,提示CD4~+Treg细胞亚群比例失衡及其HELIOS表达下调可能在SLE发病机制中发挥重要作用。     

乙肝病毒感染者外周血中CD4~+Foxp3~+T细胞亚群的表达及临床意义

目的研究外周血中3个CD4~+Foxp3~+T细胞亚群在乙肝病毒感染者外周血中频率及其可能的临床意义。方法分离来自无症状携带者(AsC)、慢性乙型肝炎患者(CHB)以及健康对照(Health)的外周血单个核细胞(PBMC),用流式细胞术分析PBMC中3个CD4~+Foxp3~+T细胞亚群占CD4~+T细胞的比例,并分析其与临床参数间的相关性,同时将CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg作对比分析。结果CD4~+CD45RA~+Foxp3~(lo)(静息态Treg)频率在各实验组间无显著差别;CD4~+CD45RA~-Foxp3~(lo)(非Treg)频率在CHB组和AsC组间无明显差别,但两组相对Health组明显升高;CHB组CD4~+CD45RA~-Foxp3~(hi)(活动态Treg)明显高于AsC组和Health组。在CHB和AsC病例中活动态Treg与HBV病毒载量,HBeAg状态均无显著相关性。在CHB病例中活动态Treg与ALT水平不相关。结论相当比例的不具抑制功能的Foxp3~+T细胞可能混杂在CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的分析中,因此活动态Treg比CD4~+CD25~...     

鸢尾素irisin对病毒性心肌炎小鼠的免疫调节作用

目的通过体内外实验研究鸢尾素irisin对病毒性心肌炎小鼠的保护作用及其免疫调节作用。方法体外分离培养乳鼠心肌细胞,并经柯萨奇B3病毒(CVB3)感染诱导心肌细胞凋亡,利用流式细胞术检测各组心肌细胞经10、50、100μg/L的irisin作用后细胞凋亡情况。构建CVB3接种感染Balb/c小鼠的体内病毒性心肌炎模型,并分成空白对照组、模型组和10、50、100μg/kg irisin蛋白治疗处理的irisin作用组,利用流式细胞术检测各组小鼠外周血中相关免疫细胞(NK、CD4~+T、CD8~+T、CD4~+/CD8~+)和淋巴细胞中Treg和Th17细胞比例变化;ELISA方法检测各组小鼠心肌组织中炎性相关细胞因子水平的变化。结果与对照组相比,模型组心肌细胞凋亡率显著上升,而各低、中、高浓度irisin作用组心肌细胞凋亡率逐渐下降(P0.05);与对照组相比,模型组小鼠的NK、CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值均显著下降(均P0.05),CD8~+T、Treg、Th17细胞比例和相关炎性细胞因子水平则均显著上升(均P0.05);经过不同浓度irisin治疗作用后,各组病毒性心肌炎小鼠的NK、CD4~+T细胞比例、CD4~+/CD8~+比值逐渐上升,且CD8~+T、Treg、Th17细胞比例和相关炎性细胞因子水平均逐渐下降(均P0.05)。结论鸢尾素irisin能够抑制CVB3病毒诱导的病毒性心肌炎心肌细胞凋亡,并可通过调控Treg/Th17细胞比例来改善病毒性心肌炎机体的免疫反应。     

子宫内膜异位症患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化

观察子宫内膜异位症患者外周血单个核细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的数量变化,初步探讨其意义。采用流式细胞术检测20例健康对照者(对照组)及46例子宫内膜异位症患者(疾病组临床r-AFS分期:Ⅰ～Ⅱ期26例,Ⅲ～Ⅳ期20例)外周血单个核细胞(PBMC)中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数目,并计算CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞占CD4~+T淋巴细胞的百分率;分析不同分期子宫内膜异位症患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化。结果显示,与健康对照组相比,疾病组PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T淋巴细胞的百分率及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg绝对数均明显升高(P<0.01,P<0.05);疾病组中,Ⅲ～Ⅳ期的PBMC中CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg占CD4~+T淋巴细胞的百分比及CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg绝对值较Ⅰ～Ⅱ期均明显升高(P<0.01,P<0.05)。提示子宫内膜异位症患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞数目和比例增多,可能存在自身免疫调节功能的紊乱,且与病程发展紧密相关。     

非小细胞肺癌患者的肿瘤转移与肿瘤浸润的CD8~+T细胞数量负相关

目的分析非小细胞肺癌(NSCLC)患者原位肿瘤中浸润T细胞数量与临床转移及患者临床预后的关系。方法选取肺癌组织共140例(其中发生转移的43例),采用免疫组织化学染色法检测肿瘤组织中CD4~+ T细胞和CD8~+ T细胞在肿瘤组织的浸润情况,对比未转移和转移患者肿瘤组织CD4~+T细胞和CD8~+ T细胞的浸润数量,采用生存分析对比不同CD4~+ T细胞和CD8~+ T细胞浸润数量对患者临床预后的影响。结果两组患者肿瘤组织CD4~+ T细胞比例差异不大,转移组患者肿瘤组织CD8~+ T细胞数量显著低于转移组,且未转移组CD8/CD4比例显著高于转移组, CD8~+ T细胞数量多和CD8/CD4比例高的患者总体生存率显著优于CD8~+ T细胞数量少和CD8/CD4比例低的患者。结论出现转移的NSCLC患者肿瘤组织CD8~+ T细胞浸润数量、 CD8/CD4比例均显著下降,与NSCLC转移患者预后差密切相关。     

CD200 与CD4+ CD25+ CD127low Treg 在强直性脊柱炎中的意义

目的:研究强直性脊柱炎(AS)患者外周血淋巴细胞中CD200的表达水平,分析CD200及Treg与IL-6、SAA的相关性,探讨CD200与AS免疫功能的关系以及诊断效能,为辅助AS的诊断、免疫评估提供帮助。方法:从74例AS患者和50例健康志愿者中收集外周血。流式细胞术检测淋巴细胞亚群、Treg的百分率及CD200的表达率,并用ELISA法检测血清中CD200的浓度,上转发光法测定IL-6的浓度,胶乳免疫比浊法测定SAA的浓度。结果:与对照组相比,AS活动组CD4~+T细胞、CD19~+B细胞的百分率均增高(P0.05),CD8~+T细胞、Treg的百分率均减低(P0.05),CD3~+T细胞的百分率无明显差异;稳定组CD4~+T细胞、CD8~+T细胞、CD19~+B细胞、Treg的百分率与对照组均无显著差异。与对照组比较,活动组(CD3~+、CD4~+、CD8~+)T细胞中CD200的表达率和血清中CD200的浓度以及稳定组(CD3~+、CD4~+)T细胞中CD200的表达率和血清中CD200的浓度均减低(P0.05);而稳定组CD8~+T细胞、CD19~+B细胞中CD200的表达率及活动组CD19~+B细胞中CD200的表达率无显著差异。与对照组比较,活动组血清中IL-6、SAA的浓度明显升高(P0.05);而稳定组IL-6的浓度轻度升高(P0.05),SAA的浓度无差异。活动组CD3~+T淋巴细胞中CD200的表达率与Treg呈正相关,与IL-6呈负相关,但与SAA不相关;Treg的百分率与IL-6负相关,与SAA不相关。CD200对AS的诊断优于Treg、SAA,而与IL-6的诊断效能相当。结论:AS活动期患者存在淋巴细胞亚群紊乱,CD200和Treg的表达率降低,两者可能参与了AS的发病,为辅助AS的诊断和免疫功能的判断提供理论依据。     

脂多糖诱导孤独症样大鼠的肠道通透性及肠道黏膜免疫系统的变化

目的探讨孕期LPS诱导的孤独症大鼠肠黏膜通透性及肠道区域免疫相关细胞比例的变化。方法 SD大鼠妊娠第9.5天时,腹腔注射脂多糖(lipopolysac-charide,LPS)构建LPS诱导的子代孤独症大鼠模型。生后第7、14、21、28、35天监测仔鼠的体质量。三箱社交实验、旷场实验、嗅觉适应/去适应实验、水迷宫实验检测子代大鼠孤独症样行为。ELISA检测子代大鼠血清DAO、zonulin、IL-6、IL-10、TNF-α、IFN-γ的含量;流式细胞仪检测脾、肠系膜淋巴结(MLN)、Peyer’s结(PP结)中B细胞、树突状细胞(DCs)、Treg细胞、T细胞、肠上皮间淋巴细胞(IELs)及肠道黏膜固有层淋巴细胞(LPLs)的比例。结果 LPS处理组子代大鼠可出现社会交互障碍、交流障碍、在陌生环境中的自主探索行为减少、空间学习记忆功能降低等孤独症相关的行为改变。LPS组的仔鼠血清DAO(P0.01)、zonulin(P0.05)含量较未处理组显著升高。同时发现LPS组仔鼠脾脏、MLN中的Treg细胞比例较未处理组显著减少(P0.05)。在MLN及PP结中,LPS组仔鼠的B细胞、树突状细胞、T细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞比例显著升高(P0.05)。而LPS组仔鼠脾脏中的B细胞、树突状细胞、T淋巴细胞、CD4~+T细胞、CD8~+T细胞的比例却与未处理组无显著差异。LPS组仔鼠IELs中的CD8~+TCRγδ~+T细胞的比例较未处理组明显升高(P0.05),而LPLs中的CD4~+TCRαβ~+T细胞、CD8~+TCRαβ~+T细胞的比例却显著降低(P0.05)。LPS组仔鼠血清中的细胞因子IL-6、TNF-α、IFN-γ较PBS组增高,而IL-10较PBS组降低。结论孕期LPS诱导可导致大鼠孤独症样行为,同时引起肠道通透性增加,肠黏膜集合淋巴组织(MLN、PP结)淋巴细胞比例增加,IELs比例升高,而LPLs中的T细胞比例降低,分泌促炎因子的T细胞功能增强,CD25~+Foxp3~+Treg细胞的抗炎功能被抑制。提示LPS诱导的孤独症模型大鼠可能会同时伴有肠道黏膜免疫异常应答现象。     

风湿性心脏病患者瓣膜组织自身抗原变化与IL-10、TGF-β1血清浓度变化之间的关系

目的:探讨风湿性心脏病(RHD)患者瓣膜组织自身抗原细胞变化及外周血指标细胞的检测结果与IL-10、TGF-β1血清浓度间的关系。方法:对63例RHD患者和63例健康志愿者清晨空腹采集抗凝外周静脉血,应用流式细胞检测法对CD4+、CD25+、调节性T细胞的标志性分子(Foxp3 Treg)的比例进行检测,ELISA检测IL-10、TGF-β1的浓度;构建风湿性心脏病基因表达文库筛选相应抗原。结果:自身抗原RHDAG1与对照组间具有明显的差异,RHD患者血清Treg比例低于对照组样本中的相关数据,IL-10、TGF-β1血清浓度的比较具有差异性,组间比较具有统计学差异。结论:自身抗原RHDAG1的表达对RHD的进展有一定作用,对外周血相关指标的浓度及Treg细胞变化的检测对RHD的诊断具有一定的临床意义。     

红景天乙醇提取物调节Lewis肺癌荷瘤小鼠肿瘤浸润T细胞数量并增强抗肿瘤免疫效应

目的探讨藏药红景天(RRL)的抗肿瘤免疫功能。方法将Lewis肺癌荷瘤小鼠随机分为生理盐水组、 500 mg/kg RRL乙醇提取物处理组和10 mg/kg环磷酰胺(CTX)处理组,处理10 d。计算小鼠生存率和肿瘤生长抑制率;流式细胞术检测肿瘤浸润的CD4~+T、 CD8~+ T细胞数量及FOXP3~+调节性T细胞(Treg)占CD4~+CD25~+Treg的比例; ELISA检测荷瘤小鼠血清中白细胞介素2 (IL-2)和γ干扰素(IFN-γ)水平,乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测脾细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性。结果 RRL乙醇提取物处理的Lewis荷瘤小鼠生存率显著提高,肿瘤生长受到抑制,肿瘤浸润的CD4~+T细胞和CD8~+T细胞数量增加, FOXP3~+ Treg占CD4~+CD25~+Treg的比例降低。荷瘤小鼠血清IFN-γ和IL-2水平提高,脾脏CTL的杀伤能力增强。结论 RRL乙醇提取物通过调节免疫细胞数量和功能增强抗肿瘤免疫效果。     

Neuropilin-1+T细胞与CD4+CD25+调节性T细胞的比较

目的:分析Neuropilin-1 T细胞(Nrp-1 T细胞)与经典CD4 CD25 调节性T细胞(Treg)的关系并比较二者的免疫调节作用。方法:流式细胞术分析BALB/c小鼠脾脏T细胞上Nrp-1与CD4、CD25的表达关系并分选Nrp-1 T细胞及CD4 CD25 Treg,通过B16-F10-luc-G5黑色素肿瘤细胞体外培养实验并利用萤光成像系统,观察比较两种细胞对NK细胞杀伤B16-F10-luc-G5黑色素瘤细胞的影响。结果:CD4 CD25 Treg中表达Nrp-1的比例为(27.28±1.17)%,明显高于CD4 CD25-T细胞的(1.63±0.08)%(P<0.01);在体外实验中,Nrp-1 T细胞与CD4 CD25 Treg均能抑制NK细胞杀伤B16-F10-luc-G5黑色素瘤细胞,Nrp-1 T细胞组的肿瘤细胞数目在6、24、48、72h分别为984±15、1015±14、1261±21、1323±38,高于CD4 CD25 Treg组的931±4、983±8、1201±18、1256±18,两组肿瘤细胞数目在各时间点均有统计学意义(P<0.01)。结论:经典CD4 CD25 Treg中表达Nrp-1的细胞比例较高,Nrp-1 T细胞有负性免疫调节作用,抑制功能比CD4 CD25 Treg更强,可以作为一类新的Treg亚群。     

丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞与淋巴细胞亚群分布的影响

目的探讨丙种球蛋白输注对川崎病患儿外周血CD4~+CD25~+调节T细胞(Treg)与淋巴细胞亚群分布的影响及临床意义。方法流式细胞术检测40例川崎病患儿和30例体检健康儿童外周血中CD4~+CD25~+Treg细胞的表达水平以及108例川崎病患儿和41例体检健康儿童外周血中淋巴细胞亚群分布。ELISA法检测川崎病患儿血浆中TGF-β1浓度。108例川崎病患儿中有30例收集到对应的丙种球蛋白(IVIG)治疗后全血,流式细胞术检测CD4~+CD25~+Treg、TGF-β1及淋巴细胞亚群在川崎病患儿丙种球蛋白(IVIG)治疗前后表达水平的差异。结果与健康体检组相比,川崎病患儿CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显降低,外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显降低,CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显增高,差异均有统计学意义(均P0.01)。与IVIG治疗前相比,川崎病患儿IVIG治疗后外周血CD4~+CD25~+Treg细胞及血浆TGF-β1的表达水平明显增高(均P0.05),外周血CD3+、CD8~+T细胞及NK细胞的表达水平明显增高(均P0.05),CD4~+T细胞、B细胞及CD4~+/CD8~+水平明显降低(均P0.05)。治疗后患儿外周血CD4~+CD25~+Treg水平、血浆TGF-β1浓度及淋巴细胞亚群表达水平与健康对照相比无差异(P0.05)。结论 Treg细胞与淋巴细胞比例失常是导致儿童川崎病免疫紊乱的重要原因。检测CD4~+CD25~+调节T细胞及淋巴细胞亚群分布对评估川崎病患儿的细胞免疫状况,辅助诊断和指导治疗具有重要的临床价值。     

MRL/lpr小鼠中CD4~+CD25~+调节性T细胞对B细胞影响的研究

目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)对B淋巴细胞的影响。方法磁珠分选法选出MRL/lpr小鼠及Balb/c小鼠脾脏中的Treg与效应性T细胞(Teff细胞),以尼龙毛柱法分离B细胞;用2种小鼠的Treg细胞分别与MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞(加或不加Teff细胞)组成共培养体系,5 d后用酶联免疫吸附法检测上清液中IgA及IgG的水平,计算抑制率;将两种小鼠的Treg细胞注入MRL/lpr小鼠,对照组注入生理盐水,3周后流式细胞法检测小鼠脾脏中CD19+CD27++浆细胞含量。结果两种小鼠Treg细胞对B细胞分泌IgA及IgG均有直接抑制作用,与Teff细胞共培养也能对B细胞IgA及IgG的分泌起抑制作用(总抑制作用),两种小鼠Treg细胞的直接抑制率无显著性差异,总抑制率均大于直接抑制率,且MRL/lpr小鼠的Treg细胞总抑制率显著降低;输注同系Treg细胞的MRL/lpr小鼠,3周后浆细胞的含量显著低于对照组及输入Balb/c小鼠Treg细胞组。结论 Treg细胞可直接或间接抑制MRL/lpr小鼠的B细胞分泌IgA和IgG,MRL/lpr小鼠体内Treg细胞对B细胞的抑制力低于正常对照。输注同系Treg细胞可减少MRL/lpr小鼠浆细胞的生成。     

雷帕霉素对人CD4~+CD25~+调节性T细胞体外扩增的影响

探讨有效的体外扩增人CD4~+CD25~+调节性T细胞(Treg)的方法以及雷帕霉素(rapamycin,RAPA)对人CD4~+CD25~+Treg细胞体外扩增的影响。采用免疫磁珠分离人外周血的CD4~+CD25~+Treg,并将实验分为3组:第1组在CD4~+CD25~+Treg培养体系中加入200 U/ml IL-2和包被CD3/CD28单克隆抗体的磁珠;第2组培养体系中除加入100 nmol/LRAPA以外,其余与第1组相同;第3组是CD4~+CD25~+Treg培养第12天后,将细胞进一步分选获取CD4~+CD25~+CD127~- Treg再继续培养,培养体系与第2组相同。实验结果显示,加RAPA培养的CD4~+CD25~+Treg细胞扩增效率比不加RAPA的低,但细胞的纯度明显提高(92%vs 65%)。而加RAPA培养的第2、3组CD4~+CD25~+Treg细胞在纯度上没有明显的差异。加RAPA培养的CD4~+CD25~+Treg细胞扩增后保持其无能状态。体外抑制实验显示体外扩增的CD4~+CD25~+Treg细胞对CD4~+效应T细胞增殖均有明显的抑制作用,而且加RAPA扩增的Treg细胞表现出更强的抑制功能。另外,与第1组体外扩增的Treg细胞相比,加RAPA扩增的Treg细胞表达低水平的IL-2和IFN-γ。实验证明雷帕霉素抑制了CD4~+ CD25~+Treg细胞中混杂的CD4~+效应T细胞的扩增,使用雷帕霉素可以提高体外扩增CD4~+CD25~+Treg细胞的纯度及其免疫抑制功能。     

IL-10~+B细胞对儿童过敏性紫癜Th17/Treg免疫平衡紊乱的影响

目的探讨IL-10~+B细胞(B10)水平及功能异常可能通过影响Th17/Treg的免疫平衡,参与过敏性紫癜(HenochSch(o|¨)nlein purpura,HSP)的发生发展。方法选取HSP患儿和健康体检儿童共58例,HSP患儿根据肾脏累及情况分为3组:无肾脏累及组15例(A组)、纯血尿组12例(B组)、蛋白尿组15例(C组);另设正常对照组16例。采用流式细胞术检测患儿外周血中Th17细胞、Treg细胞、CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞和CD19~+CD24~(hi)CD27~+B细胞的百分比,以及B10细胞及其亚类(CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞和CD19~+CD24~(hi)CD27~+B细胞)的IL-10的表达水平。结果与对照组相比,B、C组中Th17细胞的比例和Th17/Treg的比值逐渐升高2,Treg细胞和CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞的比例以及总的B10细胞、CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞和CD19~+CD24~(hi)CD27~+B细胞分泌IL-10的水平逐渐降低,且均有统计学差异(P0.05);而CD19~+CD24~(hi)CD27~+B细胞只在C组中显著降低(P0.05);HSP患儿B10细胞、CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞和CD19~+CD24~(hi)CD24~(hi)B细胞与Th17细胞以及Th17/Treg的比值呈显著负相关(P0.05),B10细胞和CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞与Treg细胞呈显著正相关(P0.05)。结论 B10细胞参与HSP的发生发展可能与其分泌IL-10的能力降低,从而对Th17/Treg免疫平衡的调节障碍有关。且相较于CD19~+CD24~(hi)CD27~+B细胞,CD19~+CD24~(hi)CD38~(hi)B细胞亚群可能是预测HSP发生发展以及肾脏累及严重程度的相对敏感指标。     

急性髓系白血病患者外周血CD4+CD25highFOXP3+调节性T细胞变化及临床意义

目的:观察急性髓系白血病(Acute myelogenous leukemia,AML)患者外周血中调节性T细胞(Regulatory T cells,Treg细胞)的变化,探讨其在AML发病中的作用及临床意义.方法:应用流式细胞术检测31例初诊AML患者(初诊组)、23例经化疗取得完全缓解患者(CR组)及20例健康人群(对照组)外周血CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞、CD4+FOXP3+ T细胞占CD4+细胞的比例,同时还分析了外周血CD4+/CD8+比值、NK细胞及血清乳酸脱清酶(LDH)水平.结果:与对照组相比较,AML患者初诊组及CR组外周血CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞和CD4+FOXP3+ T细胞均升高(P＜0.01).与初诊组相比较,CR组CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞无显著降低(P＞0.05),CD4+FOXP3+T细胞明显下降(P＜0.01).CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞的升降与CD4+FOXP3+T细胞呈正相关(r=0.86;P＜0.01).CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞及CD4+FOXP3+ T细胞比例与CD4+/CD8+比值呈负相关(r分别为-0.54、-0.52;P＜0.01)、与NK细胞比例呈负相关(r分别为-0.41、-0.43;P＜0.05),而与LDH水平呈正相关(r分别为0.51、0.57;P＜0.05).结论:CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞增多可能是AML患者免疫功能受抑的重要原因之一,其变化对于AML的预后判断有一定的意义.CD4+FOXP3+ T细胞的作用类似于CD4+CD25highFOXP3+ Treg细胞,其在AML疗效评价方面可能更有价值.     

人CD4+ CD25- CD45RA+ T 细胞和CD4+ CD25- T 细胞诱导获得iTreg 细胞的方法学研究

目的:分析比较CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞和CD4~+CD25~-T细胞在普通/炎性(加入IL-1β和IL-6)条件下,由TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激诱导生成i Treg细胞的效率,并对比各组i Treg细胞相关蛋白和细胞因子表达水平变化及其免疫抑制能力的差异。方法:通过Ficoll细胞分离液分离出淋巴细胞,利用MACS分选机,结合CD4阴选磁珠筛出CD4阳性的T细胞,最后再提取其中CD45RA~+和CD25~-T细胞。体外实验中,在普通/炎性条件下诱导i Treg生成,3、6 d通过流式观察各组i Treg细胞的诱导情况及相关分子的表达变化趋势。体内实验分为:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞诱导的i Treg组、CD4~+CD25~-T细胞诱导的i Treg组和空白对照组,通过观察i Treg对GVHD小鼠模型的免疫调节,分析其免疫抑制能力的差异。结果:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组和CD4~+CD25~-T细胞组普通条件下i Treg产率分别为(96. 00±0. 21)%和(60. 23±0. 50)%,炎性环境下为(81. 97±1. 29)%和(56. 80±0. 43)%,前者都显著高于后者(P0. 001)。各组i Treg细胞中CTLA-4、TGF-β和IL-10的表达未见明显差异,而炎性因子IL-2、IL-17前者均低于后者(P0. 001),前者IFN-γ也低于后者(P0. 05)。体内实验表明i Treg均具有免疫调节能力,但CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组诱导的i Treg能力强于后者。结论:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组和CD4~+CD25~-T细胞组都可以成功诱导i Treg细胞,但是前者在普通和炎性微环境下诱导效率高于后者,免疫调节能力也优于后者。     

FOXP3基因对ApoE-knockout小鼠动脉粥样硬化的影响

目的:研究FOXP3对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响。方法:构建FOXP3-siRNA慢病毒载体,免疫磁珠分选Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞。利用Westernblot方法对构建的载体进行功能性研究。实验动物分为阴性对照组、阳性对照组、FOXP3-siRNA慢病毒注射组和Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞注射组。比较各组小鼠的斑块面积和不同组织Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞的数目和功能;利用ELISA法检测各组脾细胞炎性因子浓度;利用RT-PCR和Westernblot分析不同组织中FOXP3转录水平和Foxp3蛋白表达水平。结果:与对照组和Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞注射组比较,FOXP3-siRNA慢病毒注射组小鼠斑块面积明显增加(P<0.05);Foxp3+ CD4+ CD25+Treg细胞的数目显著减少(P<0.05),功能下降;Foxp3蛋白表达和FOXP3转录水平降低(P<0.05)。与对照组和FOXP3-siRNA慢病毒注射组比较,输注Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞组斑块面积显著减小(P<0.01);Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞的数目显著增加(P<0.01),功能增强;Foxp3蛋白表达和FOXP3转录水平增高(P<0.01)。结论:FOXP3可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用。     

NF-κB寡核苷酸对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达影响的研究

为探讨NF-κB寡核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对CIA大鼠Th17/Treg平衡及细胞因子表达的影响,建立Ⅱ型胶原诱导大鼠关节炎模型,将NF-κB ODN注射到大鼠右后踝关节腔内,并设对照组、模型组和实验组。42d后用流式细胞仪检测各组大鼠脾脏Th17、Treg百分率、凋亡率;qRT-PCR检测IL-17、TGF-β和IL-6mRNA表达;用ELISA检测血清和关节液IL-17、TGF-β、IL-6含量。结果显示实验组大鼠脾脏Th17占CD4~+T细胞比例及IL-17和IL-6mRNA表达、血清和关节液中IL-17和IL-6的水平均低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Th17凋亡百分率低于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg占CD4~+T细胞比例及TGF-βmRNA表达、血清和关节液中TGF-β的水平均高于模型组,差别有统计学意义(P0.05);实验组大鼠脾脏Treg凋亡百分率与模型组相比明显降低,差别有统计学意义(P0.05)。由此可知,NF-κB ODN调节CD4~+T细胞Th17、Treg之间细胞平衡及相关细胞因子的分泌,对CIA有较好的治疗作用。